DIAGNOSTICUL CITOGENETIC

PRIN CARIOTIPARE

Surse de celule pentru cariotip

TEORETIC: Orice

celul cu nucleu
(PRACTIC: cele rezistente la culturi in vitro)

pentru aduli: celulele albe din snge,

celule canceroase
(din mduva osoas / leucemii cromozomul Philadephia / LMC )

celule fetale

Solicitarea cariotipului
Anomalii cromozomiale n istoricul familiei
n caz de infertilitate
La vrste naintate ale prinilor
Pentru nou-nscui cu dismorfisme
Pentru membrii unei populaii expuse la factori
de mediu cu potenial mutagen (radiaii, factori chimici)

Informaii oferite de cariotip

Aberaii numerice
- care afecteaz ntregul set haploid
POLIPLOIDII ( exemplu: 3n = triploidie)
- care afecteaz perechea de cromozomi omologi
ANEUPLOIDII trisomii (cromozom n plus)
monosomii (cromozom n minus)
Aberaii de structur care implic secvene mari de
nucleotide

(deleii, duplicaii, inversii, translocaii, circularizri, situsuri fragile)

Cariotipul fe

METODE INVAZIVE
1. Amniocentez
2. Biopsie de
viloziti corial
3. Snge fetal

MET. NEINVAZIV
Sortarea
celulor fetale
din sngele mate

PRINCIPIUL
DIAGNOSTICULUI PRENATAL

CARIOTIPUL ESTE DETERMINAT N MOMENTUL CONCEPIEI,

MITOZA COPIAZ FIDEL ACEST GENOM N TOATE ESUTURILE,

ATT N ESUTUL FETAL

T I N ESUTURILE EXTRAEMBRIONARE (CORION, AMNION,ETC

AMNIOCENTEZA
1956 identificarea sexului fetal
1967 diagnosticul bolilor genetice n trimestrul al II-lea de sarcin
(hemoglobinopatii: anemia falciform i thalasemia)
Perfecionarea ulterioar a tehnicilor a permis diagnosticul prenatal
al cromozomopatiilor, prin stabilirea cariotipului fetal.

Const n puncionarea
cavitii amniotice
pe cale abdominal,
sub ghidaj ecografic,
cu prelevarea lichidului
amniotic de analizat

AMNIOCENTEZA
- INDICAII

Vrsta mamei peste 35 de ani

Antecedent personal de natere a unui copil cu aneuploidie
Anomalie genetic n antecedentele familiale
Anomalie cromozomial la unul din prini
Semne de apel ecografic
Screening seric n zona de risc crescut
La dorina progenitorilor
La sarcini obinute dup tehnici de procreere asistat
medical: fecundaie in vitro (FIV), injecie intracitoplasmatic
cu sperma partenerului (ICSI)

AMNIOCENTEZA
- CONTRAINDICAII

Vizualizarea, pe traiectul acului de puncie,

a unei mase digestive, a vezicii urinare sau
a unui fibrom
Vizualizarea dificil a cavitii amniotice
(exemplu: obezitate)
Paciente infectate cu virusul HIV, hepatit B
sau C (risc de contaminare fetal)
Infecii de diferite etiologii (dificulti n
efectuarea culturilor, creterea riscului de
avort spontan)

AMNIOCENTEZA
- MOMENT OPTIM DE PRELEVARE
A LICHIDULUI AMNIOTIC

ntre 15 18 sptmni de amenoree

nainte de 13 sptmni (amniocenteza precoce)
EXPUNERE LA AVORTURI
I DEFORMRI ALE MEMBRELOR INFERIOARE
n orice moment al sarcinii, cu riscul de a nu
obine celule n diviziune (dup 26 de sptmni
celulele fetale cresc foarte greu n culturi)

AMNIOCENTEZA
DIMENSIUNEA PROBEI
- la 15 sptmni: 20 ml de lichid,
n 2 probe egale
- la 12 14 sptmni: pn n 10 ml,
n 2 probe egale
TRANSPORT
- n tuburi de centrifug sterile, conice
- la distan: NU SE AMBALEAZ N GHEA!

AMNIOCENTEZA
- RISCURI I COMPLICAII

Eecul punciei rar

uter fibromatos, paciente obeze, operator neexperimentat (20 % din cazuri, anii 80)

Risc de avort spontan i pierdere fetal, consecutive manevrei

moarte fetal in utero sau avort spontan n primele 2 sptmni postpuncie
(pn n 1.7 %); riscul crete la gravidele peste 35 de ani, n cazul punciei
transplacentare, al sngerrilor din primul trimestru de sarcin i al sarcinilor
gemelare)

Risc de metroragii post-puncie, cu continuarea sarcinii

Rnirea ftului
Zgrieturi, hematoame, leziuni oculare sau cerebrale

Pierdere de lichid amniotic risc de pierdere fetal 40%!

Infecii materno-fetale
Traume materne
lezarea arterei epigastrice, hematom de perete, plag de vezic urinar sau
digestiv

BIOPSIA DE VILOZITI CORIALE

(VILI CORIONICI, TROFOBLATI)
CVS (Chorionic Villus Sampling)
Const n prelevarea,
pe cale transabdominal
sau transcervical,
a vilozitilor coriale
cu aspect caracteristic
de anemone de mare
la examenul cu lupa binocular
Alegerea cii de abord este
funcie de poziia placentei
(transcervical pt. placent jos
inserat sau uter retrovers)

Implantarea

Vilii corionici
(funcie de formare a
placentei)

BIOPSIA DE VILOZITI CORIALE

- CONTRAINDICAII
o Pentru

calea abdominal, contraindicaiile amniocentezei

(obezitate, infecii virale sau bacteriene, cu efect asupra
embrionului sau asupra dezvoltrii celulare n cultur)
o Pentru calea transcervical:
- infecii cervico-vaginale
- sarcina la o pacient purttoare de sterilet
- malformaii uterine
- fibrom uterin
- canal cervical inaccesibil

BIOPSIA DE VILOZITI CORIALE

MOMENT OPTIM DE PRELEVARE

- ntre sptmnile 10 12
DIMENSIUNEA PROBEI
- cel puin 10 g vili (5 30 mg trofoblast)
TRANSPORT
- n mediu heparinat (contaminare cu snge matern),
cu antibiotice (prevenirea infeciei cu flora vaginal)
CARIOTIPUL SE EXECUT DIRECT DIN CELULE
(rezultatul n 2-3 zile)

BIOPSIA DE VILOZITI CORIALE

- RISCURI I LIMITRI

Metroragii
30 % pentru calea transvaginal

Corioamniotita
profilaxie cu antibiotice, preoperator

Ruptura precoce a membranelor (consecina

traumatismului mecanic al corionului)
Avort spontan postmanevr
1 2 % din cazuri, 6% pentru operator debutant; riscul crete cu vrsta
mamei (peste 37 ani) i n sarcinile multiple

Rnirea ftului
Infecii materno-fetale
Traume materne
MOZAICISMUL CROMOZOMIAL ( diferene ntre
cariotipul vilar i cel embrionic)

SNGE FETAL

Se obine prin:
- puncionarea venei ombilicale la nivelul
cordonului ombilical (cordocenteza)
- puncionarea venei intrahepatice

- puncie intracardiac
sub ghidaj ecografic.

DIMENSIUNEA PROBEI: 1 3 ml
MOMENT OPTIM DE PRELEVARE
- dup sptmna a 18 - a

SNGE FETAL
o CONTRAINDICAII
- obezitate matern

- vizualizare dificil a cordonului ombilical

- uter polifibromatos
o RISCURI

- moarte fetal in utero, avort sau natere prematur (1 5 %)

- eecul manevrei
- bradicardie fetal cu retracia cordonului
( 9 % din cazuri, se injecteaz atropin)
- complicaii la locul punciei (hemoragie, tromboz)
- corioamniotit

SORTAREA CELULELOR FETALE DIN

SNGELE MATERN
1957: o femeie insrcinat moare ca urmare a obstruciei unui vas
pulmonar cu celule aparinnd ftului
La 70% din femeile insrcinate, celulele fetale trec de bariera maternofetal i intr n circulaia matern. Prin tehnici citogenetice (cariotip,
colorare cu quinacrin) a fost evideniat cromozomul Y n celulele din
sngele matern.

METOD NEINVAZIV
- anularea riscului de pierdere a sarcinii

SORTAREA CELULELOR FETALE

DIN SNGELE MATERN
FACS
PRINCIPIUL METODEI : separarea celulelor
n funcie de antigenii de suprafa

FACS = Fluorescence-activated cell sorting

Celulele sunt marcate cu anticorpi de suprafa
fluoresceni i apoi separate n baza diferenelor
date de
- intensitatea semnalului fluorescent
- dimensiunea celulelor
- viabilitatea celular

SORTAREA CELULELOR FETALE DIN

SNGELE MATERN
PRINCIPIUL METODEI : separarea celulelor
n funcie de antigenii de suprafa

MACS = Magnetic-activated cell sorting

Amestecul de celule se pune n contact cu
sfere magnetice cu anticorpi ataai pe
suprafa. n baza reaciei antigen-anticorp,
celulele care au antigenii specifici sunt
reinute pe o coloan magnetic, celelalte
trecnd liber prin coloan.