LP 10

Influena temperaturii i pH-ului asupra activitii enzimatice / 2 ore

Enzimele sunt biocatalizatori de natura proteica, prezente in toate celulele
tesuturilor si organelor. Prezinta caracteristicile unui catalizator si pot actiona in
interiorul organismului sau in extracte, in exteriorul lui. Aceasta proprietate este
importanta deoarece enzimele pot fi dozate, astfel, in laborator.
Activitatea enzimelor este influentata de: temperatura, pH, electroliti,
concentratia enzimei, concentratia substratului, activatori, inhibitori.
Dozarea enzimelor se bazeaza pe determinarea activitatii enzimatice care
reprezinta cantitatea de enzima care transforma 1 mol de substrat intr-un minut si in
conditii standard (temperatura, pH).
Dozarea si interpretarea activitatii enzimelor serice sau plasmatice constituie o
metodologie curenta in medicina cu o deosebita valoare si semnificatie clinica.
Influena temperaturii asupra activitii enzimatice: principiul metodei,
interpretarea rezultatelor.
Enzimele sunt termolabile, incalzite peste o anumita temperatura, se
denatureaza.
Influena temperaturii asupra activitii enzimatice se manifest astfel: o dat
cu creterea temperaturii, crete activitatea enzimatic pn la o valoare maxim.
Temperatura la care activitatea enzimatic este maxim se numete temperatur
optim de aciune. Peste aceast temperatur, activitatea enzimatic ncepe s
scad pn cnd enzima se denatureaz (fiind protein).
Principiul metodei
Amilaza salivar are activitate maxim la 370C, iar prin fierbere enzima se
inactiveaz i nu mai hidrolizeaz amidonul.
Reactivi
Solutie amidon 1% in NaCl 0,3%
Reactiv Fehling I: CuSO4 35g si H2SO4 5ml, a.d. 1000ml
Reactiv Fehling II: NaOH 30% 300ml, tartrat dublu de sodiu si potasiu 150g,
a.d. 1000ml.
In momentul utilizarii se amesteca Fehling I/Fehling II 1/1
Proba saliv diluat cu ap distilat
Tehnica de lucru
In 2 eprubete se pipeteaza:
Reactivi
ep 1
Amidon
4 ml
Saliva
1 ml proaspata
Se agita si se introduc la termostat la 370C, 15 min.
Reactiv Fehling
1 ml
Se fierb pe baie de apa 5 min.

ep 2
4 ml
1 ml fiarta
1 ml

Interpretarea rezultatelor
In eprubeta cu saliv nefiart, amilaza descompune amidonul la maltoz
colorat n rou crmiziu de reactivul Fehling
n eprubeta cu saliv fiart, enzima a fost denaturat, deci nu a mai acionat
asupra amidonului i culoarea amestecului din eprubet a rmas albastr,
caracteristic reactivului Fehling.
Influena pH-ului asupra activitii enzimatice: principiul metodei,
interpretarea rezultatelor.
Viteza reaciilor enzimatice sunt influenate de pH, fiecare enzim avnd un
pH optim de aciune la care activitatea enzimatic este maxim.
Dependenta activitatii enzimelor de pH se manifesta datorita modificarii
structurii si stabilitatii enzimei precum si a gradului de ionizare al enzimei la un
anumit pH.
Principiul metodei
Amilaza salivar are un pH optim (in jur de 7) care se pune n eviden prin
hidroliza amidonului ntr-o gam de pH-uri realizate de sisteme tampon.
Reactivi
Solutii tampon fosfat cu pH 5,8; 6,2; 6,6; 7,0; 7,7; 8,0
Solutie amidon 1% in NaCl 0,3%
Solutie Lugol (iod in iodura de potasiu)
Proba saliv diluat cu ap distilat
Tehnica de lucru
In 6 eprubete se pipeteaza cate 1 ml de solutie tampon cu pH 5,8 8. Se
noteaza eprubetele de la 1 la 6.
Se adauga in fiecare cate 1 ml solutie amidon 1% si cate 1 ml saliva diluata si
se mentin 30 min la 370C la termostat.
Dupa racire, se adauga in fiecare eprubeta cate o picatura solutie Lugol.
Se agita si se observa coloratia aparuta.
Interpretarea rezultatelor
n 6 eprubete cu pH-uri cuprinse ntre 5,8 i 8,0 se urmrete culoarea care a
aprut la aciunea amilazei asupra amidonului.
- pH-ul optim al amilazei se gsete n eprubeta colorat n galben-rocat
unde hidroliza amidonului s-a produs pn la maltoz i maltodextrine;
- eprubetele colorate n albastru indic amidon nehidrolizat amilaza a fost
inactivat;
- eprubetele colorate n violet i brun indic o hidroliz parial pn la
stadiul de dextrine.