LUCRAREA PRACTICA NR.

9
Explorarea hemostazei primare.Numrtoarea trombocitelor.
Principiul metodei,
tehnica de numrare i valorile normale. Teste de investigarea a hemostazei primare :
testul fragilitaii capilare, studiul trombocitelor : cantitativ i calitativ.Testul Rumpel
Leed- testul fragilitii capilare

EXPLORAREA HEMOSTAZEI
Hemostaza este un mecanism complex care asigur oprirea efectiv a unei hemoragii
prin interaciunea factorilor vasculari, trombocitari i plasmatici. Factorii vasculari i
trombocitari realizeaz hemostaza primar iar factorii plasmatici hemostaza secundar.
I.
II.
III.
IV.
V.
VI.
VII.
VIII.
IX.
X.
XI.
XII.
XIII.

Factorii sanguini ai coagulrii

- fibrinogenul;
- protrombina;
- tromboplastina tisular (factor tisular);
- ionii de calciu;
- proaccelerina (factor labil);
- neutilizat;
- proconvertina;
- factor antihemofilic A;
- factor antihemofilic B (factor Christmas);
- factorul Stuart-Prower (autoprotrombina III);
- factor antihemofilic C (factorul Rosenthal);
- factorul Hageman (factor de contact);
- factor stabilizant al fibrinei.

Clasic, coagularea poate fi prezentat desfurndu-se pe calea sistemului extrinsec i

intrinsec.

Monomerii de fibrin instabili vor polimeriza prin intervenia factorului XIIIa,

rezultnd astfel o reea de fibrin stabil. Vor fi prinse n ochiurile ei, pe lng masa
trombocitar i hematii rezultnd trombusul rou definitiv.
Urmeaz fibrinoliza realizat sub aciunea plasminei rezultat din plasminogen cu
apariia n circulaie a produilor de degradare ai fibrinei.
Obiectivele explorrii hemostazei
I. Explorarea hemostazei primare
1. Timpul de sngerare
2. Testul fragilitii capilare Rumpel Leed
3. Studiul trombocitelor din punct de vedere cantitativ i calitativ
II. Explorarea hemostazei secundare
1. Teste globale
a. Timpul de coagulare
b. Timpul Howell
c. Timpul consumului de protrombin
d. Trombelastograma
2. Teste care exploreaz calea extrinsec
a. Timpul Quick (timp de protrombin)
b. Metode specifice pentru studiul factorilor izolai se determin activitatea
factorilor V, VII, X, II
3. Teste care exploreaz calea intrinsec
a. Timp de cefalin (timp de tromboplastin parial PTT)
b. Timp de cefalin-caolin (timpul de tromboplastin parial activat APTT)
c. Metode specifice pentru studiul factorilor izolai
III. Explorarea fibrinoformrii
1. Timpul de trombin
2. Dozarea fibrinogenului
3. Studiul factorului XIII
IV. Explorarea fibrinolizei
1. Metode directe
a. Timpul de liz a cheagului euglobulinic
b. Timpul de liz a cheagului la 37oC
2. Metode indirecte
a. Determinarea timpului de trombin
b. Metode imunologice
I. EXPLORAREA HEMOSTAZEI PRIMARE
1. Timpul de sngerare Metoda Duke
Timpul de sngerare ne informeaz asupra calitii capilarului i a funciei plachetare.
PRINCIPIUL METODEI Se determin timpul scurs de la producerea unei lezri tisulare
standard, ntr-o zon bine irigat (lobul urechii, pulpa degetului, la copilul mic clciul)
pn la oprirea hemoragiei.
MATERIALE NECESARE
- port-ac tip Francke cu lanete interanjabile;
- vat, spirt, hrtie de filtru;
- cronometru.

TEHNICA DE LUCRU
Dup dezinfectare cu spirt, se incizeaz ferm pielea cu laneta (ce are limea de 1,5
mm i este reglat la o adncime de 3 mm). Se declaneaz concomitent cronometrul. Din 30
n 30 de secunde se absoarbe cu o hrtie de filtru pictura de snge care apare spontan, fr a
apsa pe marginile leziunii.
Se oprete cronometrul cnd hrtia de filtru nu se mai pteaz. Se noteaz timpul scurs
de la neptur pn la ncetarea sngerrii. Se recomand a se repeta proba la cealalt
ureche.
VALORI NORMALE: 2 4 minute. Se consider patologice valorile peste 5 minute.
VARIAII PATOLOGICE
Timpul de sngerare depinde de numrul i calitatea plachetelor, de starea peretelui
vascular ca i de un factor plasmatic (factorul Willebrand).
Persoanele cu un numr sczut de trombocite (sub 100000/mm3) au un timp de
sngerare prelungit. De asemenea, anomaliile capilare prezente la indivizii cu numr normal
de trombocite constituie o cauz a alungirii timpului de sngerare.
n cazul bolii von Willebrand defectul major l reprezint deficiena factorului von
Willebrand, care intervine n hemostaza primar, favoriznd adeziunea trombocitelor la zona
subendotelial a vasului. Ca urmare timpul de sngerare este alungit, dar diagnosticul nu se
limiteaz doar la aceast constatare.
n hemofilie (hemofilie A deficit de factor plasmatic VIII sau hemofilie B deficit
de factor IX) timpul de sngerare este normal.
2. Testul fragilitii capilare (testul Rumpel Leede, testul garoului)
Exploreaz funcia hemostatic a vaselor i trombocitelor.
PRINCIPIUL METODEI Crearea unei staze venoase favorizeaz extravazarea eritrocitelor
prin endoteliul capilar n esutul subcutanat.
TEHNICA DE LUCRU - Se aplic deasupra plicii cotului, la o distan de 3 cm, maneta
unui aparat de tensiune. Se umfl maneta tensiometrului la o presiune ce depete cu 10
mmHg tensiunea arterial diastolic, presiune ce se menineconstant timp de 5 minute, dup
care se scoate manet i se numr peteiile aprute.
INTERPRETAREA REZULTATELOR
a. Test negativ nu apar peteii n zona de sub staz (plica cotului) sau apar cteva (35 peteii); un test negativ indic o rezisten vascular normal.
b. Apariia de peteii: la plica cotului denot o fragilitate uoar (+), pe 1/3 superioar
a antebraului fragilitate medie (++), pn la articulaia pumnului fragilitate crescut (++
+) iar prezena peteiilor i pe faa dorsal a minii denot o fragilitate sever (++++).
Deoarece rezistena i permeabilitatea capilar depind att de integritatea anatomic i
funcional a peretelui capilar ct i de numrul i calitatea trombocitelor, testul Rumpel
Leede va fi pozitiv n: vasculopatii, trombopatii i trombopenii.
3. Studiul trombocitelor din punct de vedere cantitativ i calitativ
a. Numrarea de trombocite
Principiul metodei Const n liza hematiilor cu o soluie hemolizant de EDTA Na 2 (soluie
0,01 g%) care n acelai timp mpiedic aglutinarea trombocitelor.
Materiale necesare
pipet Potain pentru eritrocite

soluie hemolizant de EDTA Na2 (soluie 0,01g%)

hemocitometru Brker-Trck
lamel de sticl
microscop cu obiectiv 10 sau 20
materiale necesare pentru recoltarea sngelui.
TEHNICA DE LUCRU
Se pregtete camera de numrat Brker-Trck
Se recolteaz snge capilar
Se ncarc pipeta cu snge pn la diviziunea 0,5 sau 1 i apoi cu EDTA Na 2 pn la
diviziunea 101 (se realizeaz astfel o diluie de 1/200 sau 1/100).
Se omogenizeaz sngele diluat prin agitarea pipetei cteva minute. Se arunc primele 2-3
picturi.
Se ncarc camera de numrat.
Se ateapt 15 minute sedimentarea elementelor n camera umeda (cutie Petri cptuit cu
hrtie de filtru umed).
Se numr trombocitele din 5 ptrate delimitate de linii triple situate n ptratul central al
camerei ; se face corecia de suprafa, nlime i diluie:
CALCUL Nr. de trombocite/mm3 = N 5 10 200
VALORI NORMALE 150000 400000 celule/mm3
VARIAIILE PATOLOGICE trombocitopeniile sub 50000/mm 3 sunt considerate grave, cu
risc mare de hemoragie; creterea numrului de trombocite peste 400000/mm 3 se numesc
trombocitoze. n prezena unui numr normal de trombocite nu poate fi exclus o diatez
hemoragic de cauz trombocitar, deoarece pot exista modificri calitative plachetare.
b. Aspectul morfologic al trombocitelor
Aspectul morfologic al trombocitelor se urmrete pe frotiul de snge periferic,
recoltat pe un anticoagulant care mpiedic formarea de agregate plachetare, colorat dup
metoda May Grnwald Giemsa. Se urmrete la microscopul optic: colorabilitatea,
dimensiunile, aspectul trombocitelor ca i formarea de agregate.
Normal trombocitele se prezint pe FSP ca agregate de 2 4 pn la 10 15 elemente;
rar trombocitele sunt izolate. n trombocitopenii, cu ct numrul este mai sczut, cu att
trombocitele se ntlnesc mai rar pe cmpul microscopic, izolate i neagragate; n trombopatii,
numrul lor este normal dar elementele rmn izolate neagregate i se constat o anizocitoz.
Studiul calitativ al trombocitelor (teste funcionale)
Studiul calitativ urmrete cele dou mari funcii ale trombocitului:
funcia dinamic (ce se manifest atta timp ct celula este vie) se pune n eviden prin
urmtoarele teste: retracia cheagului, adezivitatea i agregabilitatea plachetar;
funcia tromboplastic a trombocitului se exteriorizeaz dup distrugerea celulei.