Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Biologia Virusurilor 10 PDF
Biologia Virusurilor 10 PDF
Biologia Virusurilor 10 PDF
2010
1.
2.
BIOLOGIA VIRUSURILOR.
DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL VIROZELOR.
3.
4.
5.
6.
7.
Particularitile virusurilor
Reprezint structuri acelulare cu potenial
infecios
Dimensiuni de rangul nm (20-400 nm)
Genomul viral este constituit dintr-un singur tip de
AN (ADN sau ARN)
Sunt lipsite de metabolism propriu, fiind parazii
obligai intracelulari
Nu cresc i nu se divid, se reproduc n celule vii
Nu pot fi cultivate pe medii artificiale
Rezisten natural la antibiotice
CLASIFICAREA VIRUSURILOR
Ordin (-virales)
Familie (-viridae)
Subfamilie (-virinae)
Gen (-virus)
Specie (Virusul gripal,
poliomielitic, al hepatitei B,
etc)
12.11.2010
12.11.2010
12.11.2010
REPRODUCEREA VIRUSURILOR
I ADSORBIA virusului la celula-gazd prin intermediul
receptorilor specifici (tropism)
II PENETRAREA virusului n celul
a)
Pinocitoz (viropexis)
b)
Fuziunea membranelor
c)
Translocare
d)
Injectarea AN n citoplasm (bacteriofagii)
III DECAPSIDAREA ( cu enzime celulare). Din acest
moment urmeaz faza de eclips.
12.11.2010
12.11.2010
Genome
RETROVIRUSES
Genome
RNA +
RNA-dependent RNA
polymerase
(=transcriptase) in virion
Yes
Infectivity of
RNA
Noninfectious
Reverse
transcription
RNA-dependent
RNA polymerase
(=transcriptase)
in virion
Infectivity of
RNA
Initial event in
cell
RNA +
No
Infectious
Translation
RNA -
Yes
Non-infectious
Transcription
RNAd.c.
Yes
Non-infectious
Transcription
12.11.2010
12.11.2010
CULTIVAREA VIRUSURILOR
Virusurile sunt cultivate pentru:
Stabilirea diagnosticului etiologic
Testarea infeciozitii virusurilor
Testarea preparatelor antivirale
Producerea vaccinurilor
SISTEME DE CULTIVARE
1. Culturi de celule
2. Ou embrionat de gin
3. Animale de laborator
12.11.2010
Inocularea CC
- Se aleg tuburi cu monostrat bine format
- Se nltur mediul de cretere, se spal cu
sol. Hanks
- Se inoculeaz 0,1 0,2 ml de prelevat
- Peste 30-60 min n tuburi se toarn cte
1 ml mediu de ntreinere
- Se ntroduc n termostat la temperatura
adecvat 3 - 4 zile
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL VIROZELOR
Indicaii:
- Boli cu msuri terapeutice sau profilactice speciale
(SIDA, hepatite, rubeola, etc)
- Elucidarea etiologiei virale a unor izbucniri
epidemice (meningite, gastro-enterite, pneumonii,
etc)
- Supravegherea epidemiologic
Prelevate: LCR, snge, exsudate, secreii nazale, rinofaringiene, mase fecale, urin, coninutul veziculelor
i ulceraiilor cutaneo-mucoase, bioptate, etc.
12.11.2010
EXAMENUL VIRUSOSCOPIC
1.
2.
3.
4.
10
12.11.2010
EXAMENUL VIRUSOLOGIC
Prelucrarea prealabil a prelevatelor:
- Omogenizarea (dup necesitate)
- nlturarea elementelor celulare, inclusiv
bacteriene (centrifugare, ultrafiltrare)
- Tratarea cu antibiotice pentru prevenirea
creterii bacteriilor i fungilor contaminani
(penicilin - 500 UA/ml, streptomicin
500 UA/ml, nistatin - 20 UA/ml)
Indicarea virusului
1.
n culturi de celule
ECP (efect citopatic) modificri
degenerative i distrugere celular, rezultat
al multiplicrii virale (rotunjire sau retracie
celular, citoliz, apariia vacuolelor sau
granulelor n citoplasm, picnoza nucleului,
fuziunea membranelor, etc). ECP poate fi
studiat la microscopul optic pe celule
necolorate sau colorate cu hematoxilineozin, Giemsa, fluorocrom.
2. Formarea plajelor
Reprezint focare de celule alterate n
monostratul celular acoperit cu agar.
Numrarea plajelor permite cuantificarea
virusului infectant.
3. Incluziuni virale
Reprezint acumulri paracristaline de
virioni sau de componente virale n locul
de replicare i asamblare a virusurilor
(citoplasm, nucleu). Coloraia Giemsa,
hem-eozin, fluorocrom.
Localizarea, forma i afinitatea tinctorial
(bazofile, acidofile) sunt particulariti
diagnostice pentru unele viroze.
11
12.11.2010
12
12.11.2010
6. Proba culorii
- Metabolismul celular neafectat virajul culorii
mediului din rou n galben (pH acid)
- Metabolismul celular inhibat culoarea
mediului nu se modific
7. Interferena
Ex.: V.rubeolic nu produce ECP, dar determin
fenomenul de interferen. Pentru detectarea
V.rubeolei se infecteaz CC cu virus
citopatogen. Lipsa multiplicrii acestui virus
confirm prezena V.rubeolic
1.
2.
-
Identificarea virusurilor
Determinarea genului, speciei i serotipului de virus prin
stabilirea structurii antigenice.
Se efectueaz cu ajutorul serurilor imune specifice
antivirale n diferite reacii serologice:
- RN
- RLA
- RIHA/RIHAd
- RFC
- RIF
- RIE (ELISA)
- ARI, etc
13
12.11.2010
DIAGNOSTICUL SEROLOGIC
Esena: depistarea Ac sintetizai de gazd n
rspuns la o infecie viral.
Dup o primo-infecie are loc inducerea
formrii Ac, iar dup o reinfecie sau
reactivare titrul Ac crete n dinamic.
n serodiagnosticul virozelor este obligator de a
examina 2 probe de ser de la bolnav (seruriperechi): prima prelevat la debutul bolii, a
doua prelevat peste 15 zile.
TERAPIA ANTIVIRAL
Dificulti:
- Toxicitate (imposibil de a distruge virusul fr
afectarea celulei!)
- Apariia mutantelor rezistente
- Activitate asupra virusului n faz de multiplicare
- Costul avansat al tratamentului
Primele preparate antivirale anticanceroase.
Preparatele antivirale contemporane:
- Nu manifest activitate virucid, doar inhib
reproducerea viral
- Sunt dirijate contra etapelor reproducerii virale
Replicarea
Mecanismul blocheaz activitatea enzimelor virale de
reproducere (transcriptaze, polimeraze, replicaze)
Avantaj nu influeneaz componentele celulei-gazd
1.
Analogi nucleozidici
Se disting de nucleozidele naturale prin modificarea
componentului glucidic sau a bazei purinice sau
pirimidinice. Blocheaz elongarea catenei de ADN n
curs de formare.
Antiherpetice (aciclovir, ganciclovir, penciclovir,
idoxuridin)
Anti-HIV (zidovudin, didanozin, zalcitabin, stavudin,
lamivudin, etc)
Anti-HBV (entecavir, LdT, LdC faz de cercetare)
14
12.11.2010
2. Analogi nucleotidici
- Cidofovir - CMV, HSV
- Adefovir - HIV, HBV, HSV, CMV
- Tenofovir HIV, HBV
3. Analog al pirofosfatului
- Foscarnet HSV, CMV (HIV, HBV -?)
4. Inhibitori nenucleozidici ai RT HIV
(nevirapin, delavirin, efavirenz)
Asamblarea, eliberarea
- Inhibitori ai proteazei HIV (sanquinavir,
ritonavir, indinavir, amprenavir,
lopinavir, nelfinavir, etc) toxicitate,
rezisten
- Inhibitori ai neuraminidazei virusurilor
gripale (zanamivir, oseltamivir). Activ
contra gripei A i B (efect preventiv,
curativ, rezisten rar)
INTERFERONII (IFN)
IFN ansamblu de proteine capabile s
confere celulelor o stare de rezisten la o
infecie viral.
IFN tip 1 (clasic, antiviral):
1. IFN-alfa (leucocitar)
2. IFN-beta (fibroblastic)
Inductori ai IFN 1: virusuri, LPS, ARN bicatenar
IFN-gamma, tip 2, imun, produs de LT activate,
NK. Manifest activitate munomodulatoare
15
12.11.2010
16