Fenomene de transport prin membrana celular

1. Structura membranei celulare 2. Clasificarea modalitilor de transport membranar 3. Transportul pasiv Difuzie Difuzie facilitat Difuzia prin canale ionice i pori 4. Transportul activ Transportul activ primar Transportul activ secundar 5. Receptori i traductori de informaie n membranele biologice Definiia receptorului Etapele semnalizrii intercelulare Clasificarea semnalelor Tipuri de receptori membranari, exemple

1. Structura membranei celulare

Membrana (7,5 nm) este un ansamblu de structuri supramoleculare aflat la periferia celulei (sau a organitelor celulare) care separ mediul intern de cel extern (celular de interstiial) i care ndeplinete diferite funcii legate n special de procese metabolice fundamentale. Membranele vii au proprietile de semipermeabilitate i selectivitate. Datorit acestor proprieti, membrana celular nu reprezint o simpl barier care separ 2 medii cu proprieti diferite, ci o structur activ care asigur: - transportul unor molecule, ioni, macromolecule, complexe supramoleculare, dintr-o parte n alta a ei; - traducere i transfer de informaie adus de diferii stimuli (mecanici, electrici, electromagnetici, chimici, termici etc.) prin receptorii specifici pe care i conine; - interconversia diferitelor forme de energie, prin enzimele sau complexele enzimatice pe care le conine. Actualmente se accept c, n general, structura membranei celulare este cea descris de modelul mozaicului fluid proteolipidic al lui Nicholson i Singer (1972). Conform acesui model, membrana este format dintr-un bistrat lipidic, n care sunt inserate proteine i glicoproteine (figura, figura).

Bistratul lipidic este constituit n special din fosfolipide (fosfatidilcolin, fosfatidilserin,

fosfatidilinositol etc.) dar sunt prezente i glicolipide i colesterol. Moleculele lipidice sunt amfifile. Ele au un cap polar (extremitate polar) i o extremitate hidrofob (dou lanuri de hidrocarburi - cozi hidrofobe)(figura). Moleculele de acest tip se organizeaz spontan, pe baza principiului de minimizare a energiei poteniale, astfel nct cozile lor hidrofobe s evite contactul cu apa. Ele realizeaz: - structuri micelare (figura, figura) - bistraturi (vezicule membranare sau membrane plane)(figura) n acest fel, ntre cozile hidrofobe iau natere legturi hidrofobe, iar capetele polare sunt expuse mediului apos. Bistratul lipidic este o structur dinamic, prezentnd fluiditate: moleculele lipidice execut micri de translaie i rotaie. De exemplu: - translaie n stratul n care se afl (difuzie lateral) - rotaie n jurul propriei axe

- basculare dintr-un monostrat n cellalt - flexie (ndoire) (figura)

Proteinele membranare , n funcie de modul n care se nsereaz n membrane sunt:

a) - proteine intrinseci (integrale) - traverseaz membrana celular o dat (glicoforina) sau de mai multe ori (exemplu - proteinele transportoare, pompe ionice constituite din mai multe helixuri) b) - proteine extrinseci (periferice) - ptrund n membran pe o anumit distan, pe una din cele dou fee, sau sunt ataate la suprafaa membranei (receptorii membranari, proteine cu rol imunologic etc.) i proteinele prezint micri de difuzie lateral (http://bio.winona.msus.edu/berg) i rotaie, ntr-un mod mai restrictiv (depinznd de interaciunile cu alte proteine). Membrana se sprijin pe un citoschelet alctuit din proteine fibrilare (exemplu: spectrina, anchirina i actina fibrilar - n hematii)(figura).

Membranele artificiale (model) - permit studiul unor procese membranare. Dintre acestea fac parte
lipozomii i bistratele lipidice, BLM (figura) sau SSM (figura).

2. Clasificarea modalitilor de transport membranar

1. Macrotransport (endocitoza, transcitoza, exocitoza) (http://bio.winona.msus.edu/berg) (figura, Alberts et al., The Cell): - fagocitoza - pinocitoza

2. Microtransport (Alberts et al., The Cell) - pasiv - activ

Fagocitoza - proces n care celula nglobeaz particule de substan solid, nvelite n

pseudopode (prelungiri citoplasmatice) care fuzioneaz n spatele lor.

Pinocitoza - nvelirea picturilor de lichid i macromoleculelor ntr-un bistrat lipidic i formarea

de vezicule care fuzioneaz (http://bio.winona.msus.edu/berg/ANIMTNS/fusionan.gif) cu membrana celular i prin aceasta pot fi transportate dintr-o parte n cealalt a membranei. Exemple: n terminaiile nervoase i celulele secretorii (exocitoz)(exemplu: diferii

neurotransmitori cum ar fi acetilcolina, glutamatul etc.) - trecerea proteinelor plasmatice din snge n spaiul extravascular - transcitoz prin endoteliul capilar.

3. Transportul pasiv

Transportul pasiv este reprezentat de ctre deplasarea moleculelor i ionilor n sensul gradientului electrochimic sau de presiune - aparent fr consum de energie metabolic. Aparent, deoarece gradientul electrochimic respectiv este rezultatul unor procese anterioare realizate cu consum de energie. Prin transport pasiv sistemul are tendina de a ajunge la echilibru termodinamic. Dac n expresia diferenei de potenial electrochimic notm: c1 = cin, c2 = cex, V1 = Vin, V2 = Vex obinem:

W = W in - W ex = RT ln c in /c ex + zF (V in - V ex)

Dac W > 0 - ionii au tendina de a prsi celula. Dac W < 0 - ionii au tendina de a ptrunde n celul, dac membrana este permeabil pentru acetia. Transportul unei specii ionice nceteaz la echilibru, cnd W = 0:

E = V in - V ex = (RT/zF) ln c ex/c in - ecuaia Nernst

Exist trei modaliti de transport pasiv: difuzia simpl, difuzia facilitat i difuzia prin canale i

pori.

Difuzia simpl
Difuzia simpl (http://bio.winona.msus.edu/berg) se produce prin dizolvarea speciei moleculare transportate n membran (figura) i depinde de raportul dintre solubilitatea substanei respective n bistratul lipidic i solubilitatea ei n ap, deci de coeficientul de partiie . Cum s-a artat, conform legii lui Fick, n cazul membranelor coeficientul de permeabilitate P este P = D/

Difuzia facilitat

n acest caz, difuzia se realizeaz prin utilizarea unor molecule transportoare existente n membran sau introduse artificial n aceasta. Asemenea molecule transportoare au o anumit specificitate, recunoscnd specia molecular sau ionic pe care o transport. Exist transportori pentru glucoz, colin, pentru diferii ioni (n acest caz transportorul se numete ionofor). Transportorii pot distinge speciile levogire de cele dextrogire. Ei acioneaz n sensul gradientului electrochimic. Mecanismul de transport se bazeaz pe proprietatea transportorului de a se putea gsi n dou stari conformaionale T1 i T2 (figura). Molecula transportat (substratul S) se leag pe una din feele membranei (figura). Se produce n urma legrii o modificare conformaional n starea T2 i situsul de legare este expus prii opuse cu scderea afinitii pentru specia respectiv i eliberarea acesteia. Prin eliberare se revine la conformaia iniial i ciclul se repet. De exemplu, un model pentru transportul uniport al glucozei este dat n figur. Procesul se desfoar conform cineticii Michaelis-Menten pentru reaciile enzimatice. Un exemplu de ionofor este antibioticul valinomicin, molecul hidrofob care poate ncorpora ionii de K+, translocndu-i prin membran (i Rb, mai slab). Valinomicina face ca ionii de K+ s ias din celula bacterian, provocndu-i moartea. Un alt ionofor este nigericina care permite un schimb neutru K+, H+.

Difuzia prin canale ionice i pori

Canalele ionice sunt proteine specializate care strbat bistratul i permit trecerea unor
substane care nu sunt liposolubile. Permit trecerea ionilor n ambele sensuri i sunt selective. Porii sunt structuri neselective, conteaz doar diametrul particulei. Specia transportat se leag de proteina canal, formnd un complex enzim-substrat care evolueaz pe baza cineticii Michaelis-Menten. Pentru ca ionul s treac dintr-o parte n cealalt este necesar ca un canal s fie deschis (http://pb010.anes.ucla.edu/rp1.htm). n figur este reprezentat schematic structura unui canal ionic.

Filtrul recunoate un anumit tip de ion i l las s treac n vestibul. Senzorul primete informaia din
exterior, fie din partea unei molecule receptoare, fie direct de la un semnal electric, i, dac informaia este corespunztoare, comand deschiderea porii permind ionului s intre sau s ias din celul, mpins de potenialul su electrochimic. n anumite situaii, accesul ionului este interzis, chiar dac poarta este deschis, datorit interveniei inactivatorului I. Deschiderea i nchiderea canalului sunt rezultatul unei modificri conformaionale care este comandat printr-un mecanism specific. Acesta poate fi ; - electric - modificarea potenialului membranar (ex. canalele de Na+, K+ n membrana axonal); - chimic (ex. acetilcolina, canalul de Na +, Ca++ controlat de GMPc n membrana celulelor fotoreceptoare); - alte mecanisme (de ex. mecanic: canalul de K+ din vrfurile stereocililor celulelor ciliate din organul lui Corti). Cnd canalul este deschis are loc o trecere pasiv, preponderent n sensul gradientului electrochimic. Transportul prin canale poate fi inhibat cu ajutorul unor blocani specifici cum ar fi unele toxine (tetrodotoxina inhib funcionarea canalului de Na+ din membrana axonal, tetraetilamoniul blocheaz canalul de K+). Asemenea blocani specifici permit studierea proprietilor canalelor sau identificarea proteinelor canal.

Deosebiri ntre cele dou tipuri de difuzie (facilitat, canale): - transportorii au o specificitate mai mare (pot distinge ntre speciile levogire i dextrogire - n celul pot ptrunde prin difuzie facilitat numai glucoza dextrogir i aminoacizii levogiri). Pot

transporta mii de ioni/s. - canalele au o vitez mult mai mare de transport al ionilor (milioane sau chiar sute de milioane de ioni/s). Atunci cnd au loc procese care necesit modificri brute ale concentraiei sau compoziiei ionice (de ex. n producerea influxului nervos) canalele ionice sunt mai adecvate pentru transportul speciilor implicate n aceste procese. - transportorii sunt n numr mult mai mare; - transportorii pot participa la transportul activ secundar.

4. Transportul activ

Transportul activ este o form de transport care necesit energie metabolic - cuplare energetic imediat. Se realizeaz n sensul invers gradientului de potenial electrochimic. Se disting dou forme de transport activ: transportul activ primar i transportul activ secundar .

Transportul activ primar

Transportul activ primar se realizeaz cu ajutorul pompelor ionice membranare, structuri proteice transportoare din clasa proteinelor integrale. O pomp ionic este caracterizat prin prezena unui centru activ cu acces alternativ spre partea extracelular i spre cea citoplasmatic. Accesul este modificat ca urmare a unei tranziii conformaionale. Cea mai cunoscut pomp ionic este Na+,K+ATP-aza (figura). Este alctuit din patru subuniti proteice (2 subuniti i 2 subuniti ); subunitatea are activitate ATP-azic. Hidroliza ATP furnizeaz energia care permite translocarea a 3 ioni de Na n exteriorul celulei i a doi ioni de K n interior (http//:bio.winona.msus.edu/berg/ANIMTNS). Este o pomp electrogenic ntruct are ca rezultat un transfer net de o sarcin pozitiv per ciclu n exteriorul celulei. Conform schemei Albers-Post, n esen mecanismul de transport este urmtorul: Enzima n conformaia E1 ia Na+ pe partea citoplasmatic i leag ATP (n prezena Mg ++). ATP este hidrolizat, complexul fosforilat sufer o tranziie conformaional E 1 - E2 n urma creia scade afinitatea pentru Na+ i crete pentru K+. Ionii de Na+ se desprind, se ataeaz ionii de K+. Are loc o

defosforilare i n urma acesteia proteina pierde afinitatea pentru K+. Se desprind ionii de K+ i enzima revine n conformaia iniial E1 (figura). Alte exemple de pompe ionice sunt pompa de H+, K+ din mucoasa gastric, pompa de Ca++ din reticulul sarcoplasmic sau pompa protonic bacteriorodopsina (sub aciunea luminii pompeaz protoni din interiorul n exteriorul celulei).

Transportul activ secundar

Transportul activ secundar const din ptrunderea speciilor transportate ntr-un compartiment (extracelular sau intracelular) mpotriva gradientului lor electrochimic, prin asocierea cu molecule care se deplaseaz normal conform propriului lor gradient de concentraie. Gradientul este, ns, meninut prin transport activ primar. Transportorul ntlnit n difuzia facilitat poate lega cele dou molecule fie n aceeai stare conformaional (pe aceeai parte) - simport sau co-transport, fie pe cele dou pri, n stri conformaionale diferite - antiport (contra-transport). n simport (http://bio.winona.msus.edu/berg) - enzima leag pe aceeai parte, n conformaia T1, ambele specii i sufer tranziia T1 - T2 numai dup legarea ambelor. Exemplu: glucoza n celulele mucoasei intestinale se asociaz cu Na+ care intr pasiv. Ionii de Na+ sunt eliminai activ prin transport primar, prin hidroliza ATP, iar glucoza rmne. Transportul este electrogenic deoarece are ca rezultat net transportul unei sarcini pozitive dintr-o parte a membranei n cealalt. n antiport (http://bio.winona.msus.edu/berg) proteina transportoare leag n starea T2 un alt ion dect cel care sufer difuzia facilitat, care va fi evacuat n compartimentul n care potenialul lui electrochimic este mai mare. Exemplu: muchiul cardiac - antiport 3 Na+/ 1 Ca++ - electrogenic (sarcina net +1). Asigura concentraia sczut a Ca++ n interior pe seama pomprii active a Na+de ctre Na+,K+- ATP-aza. Un alt exemplu: transportorul de 1 Na+/2 H+ din membrana bacteriei E. coli.

5. Receptori i traductori de informaie n membranele biologice

Definiia receptorului
Receptorii membranari sunt structuri macromoleculare aflate n membrana celular, care au capacitatea de a recunoate o molecul semnal din mediul extracelular, numit mesager prim, i de a interaciona cu ea rapid i reversibil (http://bio.winona.msus.edu/berg/ANIMTNS/Recep.htm). n urma interaciei, celula poate sintetiza o alt molecul semnal mesager secund care declaneaz rspunsul celular specific. Mesagerul secund poate fi, uneori, chiar complexul receptor mesager prim. Dintre moleculele cu rol de mesager prim se pot meniona: mediatorii chimici, hormonii, antigenii, medicamentele, drogurile etc. Mesageri secunzi frecvent ntlnii sunt: acidul adenozin monofosforic ciclic (c-AMP), acidul guanozin monofosforic ciclic (c-GMP), diacil glicerolul (DAG), inozitol trifosfatul (InosP3). Semnalizarea intercelular se realizeaz prin intermediul reelei complexe de receptori membranari i al liganzilor specifici ai acestor receptori, liganzi care reprezint semnalele.

Etapele semnalizrii intercelulare

1. 2. 3. 4. 5. 6.

Sinteza moleculei semnal Eliberarea moleculei semnal Transportul moleculei semnal ctre int Detecia semnalului Rspunsul celular Desprinderea moleculei semnal de receptor

Clasificarea semnalelor
- semnale endocrine,(Alberts et al., Molecular Biology of the Cell, 2002), reprezentate de hormonii produi n glandele endocrine, secretai n snge i distribuii n organism; - semnale paracrine, generate de celule, acioneaz local n vecintate; - semnale de contact, necesit contactul intercelular; - semnale nervoase, se transmit de-a lungul axonilor ctre celulele int; - semnale autocrine (celulele secret molecule semnal care se leag de receptorii proprii).

Clasificarea receptorilor membranari

I. Receptori asociai cu canale ionice (ionotropi) II. Receptori care acioneaz prin intermediul proteinelor G III. Receptori legai de enzime (sunt fie ei nii enzime, fie sunt asociai cu enzime pe care le activeaz). Enzimele respective sunt, n marea lor majoritate, protein kinaze. Receptorii din ultimele dou clase mai sunt numii i receptori metabotropi.

Receptorii ionotropi

Receptorii asociai cu canale ionice au o zon receptoare de care se leag mesagerul prim i o zon efectoare prin care comunic senzorului canalului comanda de deschidere sau nchidere a porii; n urma activrii afecteaz direct activitatea celulei prin deschiderea nemijlocit a unor canale ionice.

Exemplu: receptorul nicotinic de acetilcolin. Prin legarea Ach de subunitile ale receptorului, are
loc o modificare conformaional n urma creia canalul interior format de cele 5 subuniti se deschide i permite trecerea nestingherit a ionilor.

Receptorii care funcioneaz prin intermediul proteinelor G

Receptorii care acioneaz prin intermediul proteinelor G sunt receptori metabotropi care pot determina sinteza mesagerilor secunzi (prin intermediul unei proteine efectoare). Un exemplu ar fi receptorul de epinefrin. Epinefrina (adrenalina), mesagerul prim, se leag de receptorul specific (de zona receptoare a acestuia). n urma acestei legri, n urma unei modificri conformaionale, receptorul devine apt s lege o protein G. Proteina G, alctuit din 3 subuniti notate , i , i care n stare liber leag GDP, sufer la rndul ei o modificare conformaional n urma creia elibereaz GDP i leag GTP la subunitatea . Subunitatea se separ de subunitile i i difuzeaz pna cnd ntlnete un efector (zona efectoare), adenilat ciclaza. Prin legare de efector acesta se activeaz i catalizeaz transformarea ATP din celul n c-AMP (mesager secund); c-AMP declaneaz o serie de reacii enzimatice prin care este activat enzima fosforilaz i aceasta din urm determin transformarea glicogenului n glucoz ce este eliberat din celul (rspunsul celular). Dup activarea efectorului, subunitatea a proteinei G, prin hidroliza GTP devine inactiv i se recombin cu subunitile i , refcnd proteina G. Procesul se poate relua. Alt exemplu: ciclul biochimic al rodopsinei n excitaia vizual. Receptorul pentru lumin, rodopsina, leag n urma fotoactivrii traductina (protein G) i, n mod analog, traductina activeaz o protein efectoare (PDE). PDE convertete c-GMP (mesager secund) n GMP. Prin aceast conversie se nchid canalele de Na i Ca. Celula se hiperpolarizeaz i informaia este transmis creierului pe cile nervoase. Mesagerul secund c-AMP poate activa o serie de protein kinaze care, la rndul lor, determin n ultim instan eliberarea de hormoni, neurotransmitori etc. Ali receptori folosesc drept mesageri secunzi DAG sau InosP3 (IP3)(schema).

De exemplu, anumii receptori leag molecule semnal cum ar fi angiotensina, glucoza, Ach etc i activeaz apoi o protein G care, la rndul ei, activeaz o enzim numit fosfolipaza C. Substratul acestei enzime este reprezentat de fosfolipide, n special fosfatidil inositol 4-5 difosfat (PIP2). Enzima descompune PIP2 in inositol 1,4,5-trifosfat (IP3), eliberat in citosol, i diaciglicerol (DAG) care rmne ataat de bistratul lipidic. IP3 se leag de un receptor specific situat in membrana reticulului endoplasmic, receptor care este un canal de calciu. La legarea IP3 canalul de Ca se deschide. La rndul sau, calciul eliberat poate aciona si el ca mesager secund pentru alte procese celulare. Unul dintre acestea este activarea, mpreun cu DAG, a protein kinazei C- Ca dependente i aceasta poate fosforila diverse proteine. Un alt proces declanat de Ca este activarea calmodulinei care poate apoi interaciona cu alte proteine etc. etc.
Receptori asociai cu enzime

III. Se activeaz o protein kinaz citoplasmatic (schema)(alt schem). Activitatea celulei este influenat n etape: mai nti are loc o modificare metabolic a celulei. Aceasta poate n final s duc la deschiderea sau nchiderea unui canal ionic ori poate modifica o alt activitate a celulei (de exemplu transcripia unei proteine ori alt rspuns celular specific). Exemplu: receptorul de insulin poate activa o tirozin kinaz, se fosforileaz alte proteine i n final se produce rspunsul celular care poate fi creterea permeabilitii pentru glucoz.

-----------Nota: In plus fata de cele indicate in bibliografie, imaginile si animatiile din acest curs (ca si cele din prezentarea din amfiteatru), sunt selectate din multiple surse, criteriul fiind simplitatea si concizia. Carnegie Mellon, Department of Biological Sciences, "Animating Biology": http://telstar.ote.cmu.edu/biology/animation/ Stanford Univ, Sea Urchin Embryology Group: http://www.stanford.edu/group/Urchin/GIFS/ Winona State University, Biology Department, Dr. Steve Berg: http://course1.winona.edu/sberg/Free.htm http://course1.winona.edu/sberg/ANIMTNS/Directry.htm (observatie link-ul vechi: http://bio.winona.msus.edu/berg/ANIMTNS/Directry.htm ) Wikimedia Foundations Inc., http://commons.wikimedia.org Campbell N, Reece J, Biology, 7th Edition, Ed. Pearson, Benjamin, Cummings, ISBN: 9780805371710, 2005 Alberts B, Johnson A, Lewis J, Raff M, Roberts K, Walter P, Molecular Biology of the Cell, Ed. Garland Science, ISBN: 978-0815332183, 2002 Eremia D, Curs de Biofizica Medicala, Ed. UMF Carol Davila, 1993 Daca observati linkuri nefunctionale sau erori / omisiuni, va rugam sa ni le semnalati pentru a le putea corecta.