VIRUSOLOGIE : ISTORIC SI STRUCTURA DE BAZA Istoric: In raport cu apariia vieii pe pmnt i dovezile indirecte snt dovezi care atest

cunoterea virusului rabiei nc din antichitate (Aristotel i Cornelius Celsius).Variola ar fi fost cunoscut nc din China antic (2500 .e.n.) iar un basorelief egiptean datat 1500 .e.n il reprezinta pe preotul Rahma, o imagine tipic pentru un caz de poliomielit; - dei dovezi despre ce ar fi putut fi variola apar la mumiile egiptene i n documentele strvechi chinezeti, nici V. variolei nici cel al rujeolei nu par a fi fost cunoscute de Hipocrat (460-377). Totui apariia oreillonului i a v. gripei pare a fi localizat n acea perioada, n insula Thosai. - probabil rspndirea lor (variol, grip) n imperiul roman a contribuit la declinul acestuia i se pare c aceleai boli au afectat imperiul Astec i Inca n America de Sud, dup ce a afectat Europa. Primele ncercri de prevenie a bolilor virale dateaz din sec. XI cnd n China s-au inoculat, la copii, lichid obinut din pustulele varioloase. Dei muli copii au murit n urma acestei tentative alii au supraveuiut fiind protejai de afectele devastatoare ale bolii. Mai organizate, i cu un succes mai mare au fost ncerecrile fcute de Lady Mary Worthy Montague, soia ambasadorului Angliei n Turcia; ea a introdus termenul de vaccinare pentru variol in 1721. Unii copii au murit , dar majoritatea au supravieuit. Aceast practic a devenit mai rspndit din 1740 cnd copiii casei regale a Angliei au fost vaccinai cu succes. Dup moartea lui Louis ap XV -lea de variol n 1774, tratamentul cu pustule varioloase a fost acceptat n |Frana, iar n SUA, George Washington a instituit un program de inoculare al soldailor (1776). In 1778, cu 100 de ani naintea descoperirii naturii vlor, Edward Jenner a fcut o observaie de o mare importan: el a obsevat c persoanele care au fcut boala lptarilor fac o form medie de variol fiind protejai fa de apariia leziunilor destructive. Aceste observaii au dus la vaccinarea cu v. cowpox obinut din lichidul pustulelor determinate de acest virus: vaccinaii prezentau simptome medii nefcnd ulterior variol. Alte boli virale au aprut la diferite intervale de timp n diferite regiuni geografice. Ex: v. poliomielitei a devenit endemic la nceputl sec. al XII-lea. Ultimul v. ce evolueaz endemic, devastator este HIV.

DESCOPERIREA VIRUSURILOR In 1892 , Ivanovski a domonstrat c mozaicul tutunului este determinat de un agent patogen invizibil la microscop, ce poate trece prin filtrele bacteriologice putnd fi transmis de la o plant bolnav la una sntoas dac se utilizeaz filtratul acelular obinut din trituratul de frunze cu leziuni. (anterior, Crave, n 1720 a demonstrat posibilita-tea transmiterii mozaicului panaat al lalelor prin gref la o plant sntoas
1

iar Mayer - 1886, a demonstrat posibilitatea transmiterii mozaicului tutunului prin frecare la plante sntoase). In 1898, Beijerinck confirm ca acest agent etiologic este filtrabil i descoper c poate fi precipitat cu etanol, pstrndu-i capacitatea infecioas. ; precizeaz si posibilitatea de rezista indeling (2 ani ) in frunzele uscate i difuzibilitatea n agar. Este primul care intuiete caracterul particular al acestui agent infecios, cunoscut astzi ca VMT pe care-l consider c nu este nici mocroorganism, nici toxin i o substan special, solubil, molecular (contagium vivum fluidum) agent cantagios viu, (Infecia nu este produs de microbi, ci de un principiu infecios fluid,- Beijerinck). Faptul c a intuit acest lucru, face ca Beijerinck s fie considerat ntemeietorul virusologie (Lwoff, 1957). Ulterior Rous decoper v. oncogen al ginilor (1911) (sarcomului) Descoperirea bacteriofagilor (Twort, 1915 i DHrelle, 1917) Mller, 1921 : afirm existena unor similariti ntre fagi gene. Schlessinger, 1936: demonstrarea naturii nucleoproteice a fagilor; Bawden i Pirie, 1937: demonstrarea naturii (ARN) a materialului genetic al VMT; Kausche, Pfrankuch, Ruska, 1939: evidenierea VMT prin electronomicroscopie; Cohen, `946: divedete c energia necesar pentru sinteza constituienxilor virali este furnizat de celula gazd; Hershey i Chase, 1952: uriliznd modelul fag-bacterie au deminstrat c numai ADNul fagic ptrunde n celula gazd, replicarea fiind efectuat de celula-gazd, pornind numai de la materialul genetic al acesteia. Lwoff, 1957: face prima ncercare de sintetizare a datelor, dnd denumirea de virion particulei virale mature, a introdus terminologia tiinific a componenilor acestuia i a definit principalele particulariti ale V-lor delimitnd lumea v-lor de cea bacteriilor, preciznd c unele bacterii patogene (Rickettsia) nu snt virusuri. CONCEPTUL DE VIRUS V-le reprezint o categorie specific, diferit de ali ageni infecioi. Mult timp au fost caracterizai prin caractere cum ar fi: filtrabilitatea, dimensiunile f. mici, parazitismul obligator intracelular, inactivare prin cldur) ; aceste criterii nu erau definitorii i deci nediscriminatorii n raport cu aliu ageni infecioi (n special bacteriile). DEFINITII: Lwoff (1957): Vle snt entiti potenial patogene care au o faz infecioas, posed un singur tip de acid nucleic, multiplic sub form de material genetic, nu cresc, nu se divid i snt lipsite de sistem Lippmann Luria (1959): v-le snt elemente de material genetic care pot s determine n celulele n care se reporduc biosinteza unui aparat specific n vederea propriului lor transfer n celule. STRUCTURA VIRUSURILOR
2

Descrierea morfologic a v-lor ca i domensiunile lor se raporteaz ntoutdeauna la VIRION (particula matur , infecioas) definit ca o unitate integrat ca structur si funcie, dotat cu propriteti de infeciozitate Inelegerea naturii v-lor impune diferenierea ntre virus i virion. Virionul este o particul inert, sau aproape inert care reprezint faza extracelular a ciclului infecios al virusului. Virionul conine una sau mai multe molecule de ADN sau ARN care reprezint genimul. Termenul de virus are un sens mai larg: virusurile reprezint toate entitile virus specificate implicate n ciclul infecios. Virusul nu include numai virionul ci i ARNm, proteinele virale care pot s nu fire incluse n virion i altele. Morfologic, se disting: v. n form de cilindru sau bastona: rigid sau flexibil (ex VMT sau fagii filamentoi); form sferic (izometric); form sferoidal: v. gripal, adenovirusuri; form paralepipedic: v. din grupul Pox, v. varicela-zoster; form de obuz sau cartu (Rhabdovirusuri); form de spermatozoid (fagii cu coad). DIMENSIUNI SI TEHNICI DE MASURARE: ntre 20 - 400 nm; Metode: (a) filtrarea prin membrane gradate cu porozitate cunoscut; (b) centrifugarea la viteze nalte permite calcularea dimensiunilor pe baza determinrii ratei la care particulele sedimenteaz la fundul eprubetei.; (c) ME prin : * observare direct (form, aspect strctural); * msurarea virionului prin compararea cu particule de referin (latex).

MODELUL GENERAL DE STRUCTURA Virionii snt alctuii din 2 constituieni principali: (a) GENOMUL VIRAL; (b) CAPSIDA, la care , uneori se adug: (c) INVELISUL EXTERN GENOMUL este o molecul de acid nucleic, ARN sau ADN, NICIODA-TA AMBELE

(1) Structura: acidul nucleic, extras i purificat, variaz n limite foarte largi avnd dimensiuni variabile: ntre 1.2-1.8 x 10 6 (paramyxovirusuri) daltoni pn la 200 x 10 6 (la poxvirusuri). Strctural genomul viral se paote prezenta: * ca o molecul unic sau segmentat : ex 2 segmente la arenavirusuri sau 11 seg,. la rotav. * cu segmente izolate sau legate cap la cap prin legturi covalente; * forma ac. nucleic: liniar sau circular; (2) Polaritatea: v. ARN monocatenare pot exista fie ca ARNm (deci cu polaritate +) sau ca ARN cu polaritate (-) V. cu polaritate (+): genomul ARN monocatenar paote servi ca ARN mesager V cu polaritate (-) pentru a servi ca ARNm trebuie sintetizat o caten complementar cu ajutorul unei transcriptaze. (3)Compoziia n baze a genomului este variabil: - la vir. ARN cu baze variaz ntre 36% pentru guanin i cirozin la poxvirusuri pn la 70% la herpesvirusuri (4) Moleculele de legare: unele ADN (ex. poxvirusuri) au legturi ntre cele dou catene (cross-liking) i muli acizi nucleici (ca ceia i picornav.) snt legai covalent. In ansamblu, putem descrie: (a) pentru V. ADN ex 7 tipuri principale de structuri; de interes pentru patologia uman snt v-le cu genom: * monocatenar linear (parvovirusuri); * genom dublu-catenar repetitiv terminal (adenov.); * genom DC, circular, nchis covalent care duce la formarea unei molecule superrsucite (ex. polyomav. sau SV 40); (b) v. ARN pot fi de mai multe tipuri, dar de interes medical snt: * v. cu genom segmentat : myxov - 8 segmente; reov.- 10 seg. La aceste v. materialul genetic La rndul lor v-le cu genom segmentat pot fi de 2 feluri: (a) v-ri la care capsida viral nvelete mai multe segmente de ARN, diferite ca mrime i structur i care snt replicate separat; (b) v. vegetale la care segmentele de ARN nu snt ncapsidate mpreun, ci individual, n mai multe capside. Existena genomului segmentat confer acestor v-ri posibilitatea dobndirii de caractere noi datorit posibilitii de recombinare a segementelor genomice de la v-ri diferite; dup Gibs i Harrison aceast recombinare crete variabilitatea virusurilor, permind apariia de variante noi care nu mai snt recunoscute de anticorpii produi fa de o structur antigenic anterioar. Multe genoame snt ele nsele infecioase: introduse n organismul unei gazde susceptibile, ele conin informaia genetic necesar pentru producerea de noi virusuri.
4

(a) V-le ARN nenvelite, cu polaritate (+) i multe din rndul celor AND (cu excepia poxv.) snt infecioase. (b) Vle ARN dublu catenare i cele monocatenare cu polaritate (-) nu snt infecioase. Pot a fi infectante acele v-ri care au ARN-polimeraze ce pot sintetiza pornind de la genomul parental ARNm. Exist date care atest c ARN virali care snt transcrii la ARNm de polimerazele codificate de v.ri nu au infectivitate, dar snt cercettori care admit????????/// FUNCTIILE GENOMULUI: purttorul informaiei genetice necesar pentru sinteza unui nou virus; se realizeaz prin devierea metabolismului gazdei n direcia sintezei de noi genoame i ai celorlali constituieni ai virionilor progeni; acizii nucleici snt determianii infeciozitii virusului; fr acid nucleic capsida rmas goal nu este infecioas; din punct de vedere al infeciozitii am vzut c snt v-ri cu polaritate (sau genom ) (+) i v-ri cu polaritate (-). genomul viral poate siferi mutati: n timpul replicrii pot apare virioni descendeni diferii de cei parentali; la rndul lor mutanii pot s produc descendeni modificai genetic. CAPSIDA VIRALA Este un perete proteic compus din uniti structurale repetitive, identice sau diferite. Unitatea structural cea mai simpl compus dintr-o unitate proteic se numete PROTOMER. Grupuri de protomere formeaz CAPSOMERUL care este unitatea structural de baz a virusului. Un anumit numr de capsomere (n funcie de mrimea i morfologia virionului) se asambleaz formnd CAPSIDA. Masa molecular a proteinelor capsidei variaz ntre 104 - 105 fiind unic (ca la VMT) sau diferit (ex. SV40 conine 3 proteine, iar poxv. aprox. 30 de proteine structurale diferite). Majoritatea V-lor conin proteine asociate capsidei asociate cu genomul viral alctuind NUCLEOIDUL viral i al crui rol se presupune c ar fi acela de a menine ac. nucleic n form condensat prin interaciunile care se stabilesc ntre cele 2 componente. FUNCTII: capsida proteic specific fiecrui virus n parte protejeaz materialul genetic de degradarea (hidroliza) prin nucleaze; confer rigiditate virionului; confer rezisten la ali factori duntori din mediul extern pstrndu-i infeciozitatea timp mai ndelungat;
5

 poart structurile prin care virionul se ataeaz la receptorii prezeni pe membran celulei gazd printr-un mecanism specific (de felul relaiei enzim-sunstrat) i prin aceast det. spectrul de gazde receptive pentru acel virus; conine determinanii antigenici fa de care gazda vertebrat infectat reacioneaz prin rspuns imun, inclusiv formare de Ac specifici, care n cazul v=lor nenvelite (nude) au rol protector; prin reaciile Ag-Ac, folosind seruri imune cunoscute, se poate face identificarea unui virus pe baza structurii antigenice a capsidei. NUCLEOCAPSIDA La majoritatea v-lor NC poate fi cu simetrie helicala sao icosaedric; unele v-ri au o simetrie complex Simettria helical (SH): se realizeaz prin aezarea unitilor compo-nente n funcie de 2 operaiuni repatate, i anume: rotaia n jurul unui ax cuplat cu o micare de translaie paralel cu acela ax (ca un urub). Capsida este constituit din uniti structurale echivalente (molecule de protein) aezate repetat prontr-o operaie de rotaie de n grade, urmat de o micare de translaie de t nm. Aceste operaii determin dispunerea unitilor proteice astfel c se obine un cilindru cu structur helicoidal. Numrul de subuniti pe tur de spir este determinat de relaia n-360, iar pasul elicei de n X t. V-le cu SH pot avea NC rigid sau flexibil. Aranjamentul rsucit n mod regulat poate fi acoperit de un nveli extern ce le confer rigiditate sau rmne nud, avnd o form f. flexibil (forme filamentoase). V-le din grupul orthomyxovirus (v. gripale) i paramyxovir. (v. paragripale) snt v-ri de form sferic, iar cele din grupul rhabdovirus (v. rabic) care au form de cartu snt principalele v-ri c u SH implicate n patologia uman. V-ri cu simetrie icosaedric: studiile de ME au artat c v-le descrise ca sferice au de fapt un contur hexagonal. Unitile morfologice vizibile la ME (capsomerele) nu snt echivalente cu subunitile chimice de constrcie, ci snt alctuite fiecare din 5 sau 6 subuniti chimice. Ocosaedrul este un poliedru regulat avnd 20 de fee, toate triunghiuri echilaterale, 30 de muchii sau creste i 12 vrfuri (vertexuri). In fiecare vrf se ntlnesc 5 fee ale poliedrului, care prezint cel mai nalt grad de simetrie de tip 5:3:2, avnd: (a) 6 axe de simetrie rotaional

INVELISUL EXTERN SAU PEPLOSUL: exist numai la v=le nvelite i este de natur lipo-glico-proteic; - nveliul este cptat n stadiul final al replicrii n cursul aa-numitei inmugiriri prin arii speciale ale membranei gazdei, n prealabil modificate: n aceste arii speciale, proteinele gazdei au fost nlocuite prin polipeptide sau glicoproteine codificate de genomul viral, denumite PEPLOMERE (prin analogie cu capsomerele) i proemin ca nite epi la suprafaa nveliului extern viral, fiind distribuite uniform. - peplomerele snt implantate ntr-o matrice proteic bilipidic derivat n totalitate din emmbrana celulei gazd, reprezentnd 20-30% din nveliul viral. FUNCTII: unele din aceste proiecii au funcia de ataare la receptorii celulei gazd mijlocind ptrunderea virionului n celul; ex: hemaglutinina v. gripal mmmijlocete ataarea de receptorii de suprafa ai hematiilor i produce aglutinarea lor; altele posed activitate enzimatic: Neuraminidaza cliveaz acidul neuraminic din glicoproteinele celulei gazd lizeaz glicocalixul eucariot favorizeaz penetrarea barierelor epiteliale i tisulare; fiind de natur proteica peplomerele snt imunogene iar; Ac-ii specifici rezultai pot inhiba ataarea la receptorii celulari (neutralizarea infecivitii) la receptorii hematiilor (inhibarea hemaglutinrii); anula activitatea enzimatica (inhibarea neuraminidazei).

IN CONCLUZIE: 1. Virusul este un agent infecios parazit obligator intracelular; 2. V. are un ciclu infecios care include o faz n care agentul este reprezentat de una sau mai multe particule inerte (virionul sau virionii) compuse din una sau mai multe molecule de acid nucleic. de regul, dar nu ntotdeauna acoperit de un nveli alctuit din una sau mai multe proteine, i n unele cazuri, de o membran ce conine lipide i glicoproteine ca i alte substane. 3. Virusul este o entitate care poate fi transmis unui gazde receptive, iniiind alt infecie.
7

4. Informaia genetic a virionului este stocat fie n molecula de ARN fie n cea ADN; n interiorul celulei gazd genomul viral redirecioneaz mecanismul genetic i metabolismul celulei gazd pentru a produce noi virioni.