Determinarea Eficacitatii Substantelor Dezinfectante

Dezinfectantele folosite n spitale i laboratoare trebuie s fie testate periodic pentru a stabili eficacitatea acestora. Anumite dezinfectante pot pierde calitatea, asa ca eficacitatea lor trebuie s fie testata. n timp ce anumite metode ajuta n selectarea dilutiei corecte de dezinfectant pentru uz, altele testeaza eficacitatea dezinfectantului deja n uz. Unele metode compara performana dezinfetantului cu cea a fenolui in timp ce celelalte metode pur i simplu constata daca dezinfectantul este eficace sau nu. Exist mai multe metode de testare a dezinfectanilor, cu propriile avantaje i dezavantaje. Validarea procesului de dezinfecie este definit ca "stabilirea dovezii documentate c un proces de dezinfectie va elimina n mod constant sau inactiva ageni patogeni cunoscui sau posibil de la obiecte nensufleite." Robert Koch a descris un test dezinfectant in articolul Uber Desinfektion, n 1881. Un fir de mtase a fost contaminat prin scufundare ntr-o cultur lichid de Bacillus anthracis. Dup uscare, firul contaminat a fost cufundat n mai multe soluii dezinfectante pentru un anumit timp de expunere. Firul a fost apoi pus ntr-o fiertura nutritiva i nici o cretere dup incubare nu a indicat activitatea dezinfectantului. El a concluzionat din comparaiile facute ca soluiia dezinfectanta clorura de mercur a fost dezinfectantul cel mai activ. Rezultatele au fost eronate pentru ca reziduurile dezinfectante au fost, de asemenea, reportate n mediu subcultura. Problema a fost depasita de Geppert n 1890 prin neutralizarea dezinfectant la sfritul perioadei de expunere. Testele transport(sau purtator) : Aceste teste sunt cele mai vechi teste . Testul descris de Robert Koch a fost un test de purttor. In aceste teste , cum ar fi un purttor de mtase sau un penicylinder ( un betisor) este contaminat prin scufundare ntr -o cultur lichid din proba organica . Purttorul este apoi uscat i este adus n contact cu dezinfectant pentru un anumit timp de expunere . Dup expunere , acesta este cultivat ntr -o fiertura nutritiva ; nici o cretere indic activitatea dezinfectantului testat ntruct creterea indic un inconvenient . Prin nmulirea numrului de concentraii de testare ale dezinfectantlui i de contact , se obine relaia concentraie-timp ale dezinfectantului . Exemplu de test de transport este primul test de utilizare-diluare a Asociatiei Americane a Chimitilor ( AOAC , 1990). Limitarea testelor purttoare sunt : a)numrul de bacterii uscate pe un purttor este greu de a standardizat i b )supravieuirea bacteriilor pe purttor n timpul uscrii nu este constant . Testul AOAC , testul de utilizare-diluare este un test de transport. Organismele utilizate sunt Salmonella cholerasuis , S. aureus i P. aeruginosa . Transportatorii ( cilindrii din oel inoxidabil ) sunt meticulos curai , sterilizati prin autoclavare si ntr-o soluie de aspargine , se rcete i se inoculeaz cu un organism de test prin cufundarea ntr- una din suspensiile de cultur . Cilindrii sunt uscati pe filtru de hrtie, se usuc la 37 grade C timp de 40 min, expuse la utilizarea-diluarea dezinfectantui timp de 10 minute , pentru a evalua supravieuirea bacteriilor . Un singur test implic evaluarea a 60 transportatorii inoculati ( un organism ) fa de o prob de produs . n plus fa de cei 60 de transportatori , 6 transportatori sunt necesari pentru a estima ncrctura bacteriana de

transport i 6 mai sunt inclusi in plus . Astfel , un total de 72 de purttori plantati sunt necesari pentru a efectua un singur test . Un rezultat care arat nici o cretere n toate zece tuburi confirm rezultatul testului coeficientul de fenol. Dac orice transportator produce cretere ,testul trebuie s fie repetat cu o diluie mic de dezinfectant . Testele suspensie : In aceste teste , o prob de cultur bacterian este imersata n soluie dezinfectant i dup expunere este verificat de subcultura si dac inoculul este ucis sau nu . Testele de suspensie sunt preferate pentru ca bacteriile sunt uniform expuse la dezinfectant . Exist diferite tipuri de teste de suspensie : testele de suspensie calitative ,de testare pentru determinarea a coeficientului de fenol ( Rideal i Walker , 1903) , si testele de suspensie cantitative . Iniial acest lucru a fost fcut n mod calitativ . O bucl de suspensie bacterian a fost adusa n contact cu dezinfectant i din nou o bucl din acest amestec a fost cultivata pentru supravieuirea organismelor . Rezultatele s-au exprimat ca "cretere" sau " nici o cretere " . n metodele cantitative , numrul de supravieuire al organismelor este numrat i comparat cu dimensiunea inoculului original. Testele capacitate: De fiecare dat cnd un instrument murdar este plasat ntr-un container cu dezinfectant, o anumit cantitate de murdrie i bacterii se adaug la soluie. ntr-un test de capacitate, dezinfectantul este testat n mod repetat prin adugri succesive de suspensie bacterian pn capacitatea sa de a ucide a fost epuizat. Testele de capacitate pot simula situaii practice de menaj i de dezinfectare ale instrumentelor . Cel mai cunoscut test de capacitate este testul Kelsey-Sykes (Kelsey i Sykes, 1969). Testul Kelsey - Sykes este un test de provocare triplu , conceput pentru a determina concentraiile de dezinfectant care va fi eficient n condiii curate i murdare . Dezinfectantul este provocat de trei adugri succesive de suspensie bacterian n cursul testului . Durata testului dureaz peste 30 minute pentru a-l efectua . Concentraia de dezinfectant este redusa la jumtate de la adugarea de materie organic , care se cumuleaz la o concentraie final de 0,5 % . n funcie de tipul de dezinfectant , un singur organism de test este selectat dintre S. aureus , P.aeruginosa , P. vulgaris i E. coli . Metoda poate fi efectuat sub " curat " sau " murdar "condiii . Dilutiile dezinfectantantului sunt realizate n ap grea pentru condiii curate i n suspensie de drojdie pentru condiii murdare . Organismul testat singur sau cu drojdie se adaug la 0 , 10 i 20 interval de minute. Timp de contact al dezinfectantului i al organismului de prob este de 8 min . Cele trei seturi de cinci culturi replicate corespunztoare fiecrei provocari sunt incubate la 32 grade C pentru 48 ore, iar creterea este evaluat de turbiditate . Dezinfectantul este evaluat pentru capacitatea sa de a ucide microorganisme sau nu , iar rezultatul este raportat ca o trecere sau un eec i nu ca un coeficient . Seturile care conin dou sau mai multe culturi negative sunt nregistrate ca un rezultat negativ . A treia provocare nu este inclus n criteriul de trecere / esec, dar culturile pozitive servi drept intrinsec controale . Dac nu exist culturi pozitive dupa a treia provocare , o concentraie mai mic de dezinfectant poate fi testata .

Rezultatul specimenelor de test:

Concentration
1.0 1.5 2.0

Inoculum count

Challenge number 1 2 3 +++++ +++++ +++++ ----+ --+++ +++++

------------+

Result Fail Pass Pass

Dezavantajul acestui test este faptul c acesta este destul de complicat. Teste proba practica: Testele practice n condiii reale sunt efectuate dup msurarea relaiei timp - concentraie de dezinfectant ntr- un test cantitativ de suspensie . Obiectivul este acela de a verifica dac diluarea propus este nc adecvat n condiiile n care acesta ar fi utilizat . Cele mai bune teste practice cunoscute sunt testele dezinfecie suprafa . Testele suprafa evalueaza eficacitatea dezinfectantului selectat pe suprafaa aderata de microorganisme . Suprafaa de ncercare ( o pies mic , o lamel microscopic , o bucat de PVC , un disc din oel inoxidabil , etc ) este contaminata cu un inocul standardizat de bacterii de testare i uscata : apoi un volum definit din soluia dezinfectant este distribuita pe suport; dup timpul de expunere dat, numrul de supravieuitori este determinat de impresia pe o plac de contact sau printr-o tehnic de cltire , n care operatorul de transport este cltit ntr -un diluant , i numrul de bacterii se determin n lichidul de cltire . Pentru a determina

moartea spontan a organismelor din cauza uscarii pe suport , o serie de control este inclusa n care dezinfectantul este nlocuit de ap distilat ; din comparaia dintre supravieuitori n aceast serie de control cu seria de teste ,reducerea se determin cantitativ . Exist o diferen esenial ntre un test de purttor i un test de dezinfectant suprafaa: n primul caz, operatorul de transport este scufundat n soluia dezinfectant pe toat durata de expunere, n timp ce n al doilea caz dezinfectantul este aplicat pe suport pentru timpul de aplicare i ulterior transportatorul continu s se usuce n timpul expunerii. Testele de suprafata pot reflecta condiiile de utilizare, cum ar fi timpii de contact, temperatura, utilizarea pe dilutii, i proprietile de suprafa.

Testele dezinfecie suprafa In fiertura nutritiva este pregtita o cultura timp de 24 ore. Un volum de cultur microbiena ( de obicei 0.010mL la 0,020 ml ) este amplasat pe centrul fiecrei suprafee de testare sterile . Acest inoculului poate fi extins pe suprafaa de ncercare steril ntr -un model circular pentru a realiza o acoperire subire , uniforma cu microorganismul de test , dac se dorete . Pentru a msura concentraiile microbiene iniiale , unul sau mai multe netratate , suprafeele de ncercare inoculate sunt recoltate i microorganismele sunt numarate . Suprafeele rmase inoculate sunt tratate cu dezinfectant , fiecare pentru o lungime diferit de timp. Imediat dup ce orele de tratament s-au scurs , suprafeele de testare sunt amplasate ntr-o soluie care neutralizeaza actiunea de dezinfectare a produsului , i microorganisme care au supravietuit tratamentului cu dezinfectant sunt enumerate . Rezultatele studiului timekill sunt tabelate i raportate , de obicei, prin trasarea concentraiei microbiene pe suprafeele de ncercare , ca o funcie a timpului de tratament cu dezinfectant. Biliografie: The testing of disinfectants: Gerald Reybrouck, International Biodeterioration & Biodegradation 41 (1998) 269-272 Joan F.Gardner, Margaret M Peel. 1991. Introduction to sterilization and disinfection control, 2nd edition, Churchill Livingstone