Sinteza paralel i screening-ul

activitii anti-malarie ale unei biblioteci

de 4 - aminochinolin

Profesor: Cristina Ott

Masterand: Elena Alexandra Gabriela Trofin

Malaria este o afeciune grav, de natur infecioas specific zonelor tropicale i

subtropicale precum, Africa, Asia de Sud Est, America Central i America de Sud, i care
pune n pericol viaa a sute de mii de pacieni.
Infecia face parte din clasa parazitozelor, boli determinate de parazii, malaria fiind
cauzat de protozorul Plasmodium, transmis prin intermediul unei insecte vector, anume
femela anarului Anopheles. [1]
Pacienii infectai cu malarie acuz n mod repetat febr (acesta fiind cel mai intens
simptom) precum, i alte simptome generale, unele similare gripei, cum ar fi mialgii, artralgii
sau frisoane. n cazurile severe, starea pacientului se poate complica cu tulburri ale funciilor
renale, hepatice, pulmonare, cardiace sau cerebrale, ducnd astfel la moartea acestuia. [2]
Exist cinci specii de Plasmodium care pot determina apariia malariei, mai exact:
falciparum, vivax, ovale, malariae i knowlesi. Identificarea corect a infeciei cu
Plasmodium este foarte important, deoarece tratamentul difer in functie de specie, iar n
cazul Plasmodium falciparum, boala poate fi fatal, mai ales c tratamentul cu clorochin a
devenit ineficient. [4]
Parazitul are doua gazde: gazda primar, narul, i gazda secundar sau definitiv,
omul (sau animalul nepat de nar). La om, malaria are dou faze distincte, exoeritrocitar
i faza eritrocitar. Faza exoeritrocitar implic infectarea hepatocitului i cantonarea
parazitului la acel nivel, n timp ce, faza eritrocitar implic afectarea direct a celulelor
roii. n interiorul eritrocitului, parazitul se multiplic i sparge membranele celulare, intrnd
n alte celule sntoase. [2]
Malaria reprezint o problem foarte grav atunci cnd sunt infectate femeile
nsrcinate, deoarece duce la moartea ftului i, chiar, la moartea mamei, care nu poate fi
tratat cu anumite medicamente. Tratamentul malariei implic doze, determinate n func ie de
2

starea pacientului, de comprimate cu meflochin, clorochin, doxicilin, primachin,

malaron. [1]
Deoarece medicaia curent a malariei a devenit ineficient din cauza rezisten ei la
tratament dezvoltat de ctre Plasmodium, n prezent se caut noi soluii pentru eradicarea
acestei infecii care a afectat peste 214 milioane de oameni n anul 2015, conform studiilor
OMS. [1]
Pe lng eforturile Organizaiei Mondiale a Sntii de a preveni infec iile i de a
informa populaia cu privire la metode de a ndeparta narii din zonele locuite, cercettorii
caut noi compui, fie naturali, fie de sintez, care pot reprezenta un tratament eficient
mpotriva malariei, aici intervenind chimia combinatorial care ofer metode rapide de a
descoperi librrii de compui care au activitate farmacologic.
n ultimii ani, s-a observat faptul c, Plasmodium Falciparum, specia care cauzeaz
cele mai multe decese n rndul bolnavilor de malarie, a devenit rezistent la clorochin, unul
dintre cele mai eficiente antimalarice, astfel nct, se caut compui cu o structur
asemntoare acesteia care pot reprezenta o alternativ cu rezultate vizibile. [1]
Amodiachina i hidroxiclorochina s-au dovedit a fi medicamente alternative eficiente
pentru tratamentul infeciei cu Plasmodium falciparum rezistent la clorochin, ns acestea
sunt mai puin eficiente i mai toxice n comparaie cu clorochina. Studiile legate de rela ia
dintre structura clorochinei i a 4-aminochinolinei continu ntr-un efort de a dezvolta
antimalarice noi i eficiente mpotriva paraziilor cu tulpini rezistente de Plasmodium
falciparum. [4]
Medicamentele de tip chinolinic, n special 4-aminochinolinele, sunt utilizate de
foarte mult timp ca antimalarice. Odat cu dezvoltarea rezistenei la clorochin, cercetrile
pentru obinerea unor noi compui utili au artat faptul c, fie scurtarea, fie creterea catenei
laterale a linker-ului alchilaminei n clorochin duce la compui care au eficien mpotriva

tulpinilor de Plasmodium falciparum rezistente. Din pcate, aceste modificri au venit cu

anumite dezavantaje, printre care modificarea metabolizrii acestor compui i alchilarea
aminei ndepartate care duce la reducerea solubilitii lipidice a compusului. [4]
n schimb, modificrile subtituenilor de la amina ndeprtat cu grupri mai
voluminoase au dus la compui cu eficien in vivo mai ridicat i rezisten ncruci at mai
mic cu clorochina, probabil prin mpiedicarea alchilrii metabolice. [3]
Avnd n vedere aceste informaii, cercettorii au explorat posibilitatea de a aduga
substitueni voluminoi la gruparea amino ndeprtat din catena lateral a unor analogi ai
clorochinei. Scopul acestora este de a sintetiza o noua serie de analogi clorochinici cu o
caten lateral mai scurt i funcionaliti diferite adugate la gruparea alchilamin, deoarece
aceasta se regsete n multiple medicamente, alchilaminele substituite fiind des utilizate n
chimia medical.
Astfel, pentru obinerea unei librrii de compui care au o stabilitate i o eficien
crescute mpotriva tulpinilor de Plasmodium falciparum rezistente, scurtarea catenei laterale
i nlocuirea substituenilor de tip alchil de la amina ndepartat cu grupri voluminoase
reprezint o soluie care poate da rezultate. Pentru a putea fi posibile modificrile aduse
structurii de baz, cercettorii au stabilzat nucleul de 7 - clorochinolin din clorochin
(figura 1). [3]

Figura 1 - Structura librriei 7-cloro-4-aminochinolinei

Un set de poteniali substitueni pentru gruparea amin terminal a fost selectat, pe

baza disponibilitii comerciale a reactivilor aldehidici, i a fost utilizat pentru a popula o
librrie virtual, care a dus la 300000 de compui posibili din punct de vedere teoretic.
Aceast librrie rezultat a fost filtrat pe baza Regulii celor 5 determinate de Lipinski ( un
medicament activ oral nu incalc mai mult dect unul dintre urmtoarele criterii: nu mai mult
de 5 donori de H, nu mai mult de 10 acceptori de H, masa molecular mai mic de 500 Da,
coeficientul de partiie octanol ap mai mic sau egal cu 5 i aria suprafeei polare 140 2 )
[2], majoritatea compuilor aveau masa molecular mai mare dect cea acceptat, astfel nct,
s-a ajuns la un numr de 850 de compui, care aveau drept substitueni la amina nderprtat
97 de aldehide diferite. n urma screening-ului, au fost alei 24 de substitueni aldehidici pe
baza compatibilitii chimice i diversitii structurale. (Figura 2) [3]

Figura 2 Structurile elementelor aldehidice 5{1-24}, elementele din chenare reprezint structurile de baz pentru
R2, n timp ce toate elementele au fost utilizate pentru R1.

Sinteza compuilor a avut drept strategie generarea rapid a unor serii de compui de
puritate ridicat i reducerea numrului de compui fals-pozitivi. Astfel nct, ca metoda de
obinere s-a utilizat sinteza paralel. Intermediarul comun (3) a fost obinut prin reac ia 4,7
diclorochinolinei cu diaminopropan, cu un randament de 83%. Intermediarul cu amina
primar (3) a fost supus la 2 reacii secveniale de aminare reductiv (reacie de alchilare a
unei amine folosit datorit disponibilitii aldehidelor ca building blocks). Pentru a preveni
obinerea produilor secundari i pentru a face posibil cea de-a doua reacie, s-a utilizat
borohidrura de sodiu cu scopul de a elimina excesul de aldehid, obinndu-se un alcool
primar, iar metanolul a fost folosit drept solvent.
N1-(7-Clorochinolin-4-il)-propan-1,3-diamina a fost obinut prin reac ia 4,7
diclorochinolinei cu diaminopropan prin refluxare timp de 4 ore. Solu ia rezultat a fost
diluat cu clorur de metilen i spalat cu hidroxid de sodiu i soluie salin pentru a se obine
un strat apos, unul organic i un precipitat. Stratul organic a fost uscat n vaacum i extras n
extractor Soxhlet cu clorur de metilen, obinndu-se un precipitat alb. Precipitatul a fost
dizolvat n metanol pentru a obine soluia stoc, din care s-au extras 48 de probe alicote.
Cele 48 de porii au fost tratate n paralel cu aldehidele din setul final, n prima
secvena a reaciei - 5 {1-24}, apoi s-a realizat cea de-a doua secven cu aldehidele din
chenar 5(2) i 5(13), n paralel. Dup procedurile de aminare secvenial, amestecul final a
fost filtrat pentru a elimina srurile anorganice, iar soluiile au fost evaporate n vacuum.
Amestecul brut au fost purificat direct prin HPLC cu faz invers . [3]

Figura 3 Sinteza librriei 4-amino-7-clorochinolinei 1{1-24;2,13}. a) 1,3-diaminopropan, reflux, 2 h, randament 83% ; b) R1CHO
(5{1-24}, 4 eq.), MeOH, rt, 24 h; c) NaBH4 (borohidrura de sodiu) (5 eq.), rt., 1 h; d) R2CHO (5{2,13}, 4 eq.), MeOH, rt, 24

Dup purificarea compuilor finali, s-a msurat activitatea biologic mpotriva

dezvoltrii Plasmodiumului falciparum, in vitro, prin citrometrie n flux (metod de msurare
a caracteristicilor fizice i/sau biochimice ale particulelor (celule, nuclei, organite celulare):
mrimea, granularitatea, cantitatea de ADN sau antigenele de suprafa) [2]. Culturile de
parazii au fost crescute n tuburi Falcon cu mediu de cretere i concentraii egale de
compui din librria obinut i clorochin, n atmosfer regulat timp de 4 zile. Probe alicote
din tuburile Falcon, au fost supuse citrometriei n flux pentru a se determin concentra ia de
eritrocite afectate de parazit. S-a observat faptul c, doar 4 dintre compuii obinuti au
activitate antimalaric, folosindu-se drept etalon clorochina.

Figura 4 Activitatea relativ a librriei 1{2,13;124} mpotriva tulpinii Plasmodium falciparum 3D7 crescute ntr-un
mediu care conine eritrocite umane

Tabel 1 - IC50 (concentraie inhibitorie la 50%) pentru activitatea compuilor mpotriva tulpinilor de 3D7, W2, si Dd2
de Plasmodium Falciparum.

Scopul studiului a fost determinarea unei librrii de deriva i chinolinici care pot fi
folosii mpotriva tulpinilor de Plasmodium falciparum rezistente de clorochin. Rezultatele
obinute din testele de citometrie au artat c 3 dintre compui (1 2,16; 1- 2,21 i 1 - 2,22)
au activitate mpotriva tulpinilor rezistente. [3]

BIBLIOGRAFIE
[1] http://www.who.int/en/
[2] https://en.wikipedia.org/
[3] Madrid, Peter B., et al. "Parallel synthesis and antimalarial screening of a 4aminoquinoline library." Journal of combinatorial chemistry 6.3 (2004): 437-442.
[4] Rajapakse CSK, Lisai M, Deregnaucourt C, Sinou V, Latour C, et al. (2015) Synthesis of
New 4-Aminoquinolines and Evaluation of Their In Vitro Activity against ChloroquineSensitive and Chloroquine-Resistant Plasmodium falciparum. PLoS ONE 10(10): e0140878.
doi: 10.1371/journal.pone.0140878