METODE CROMATOGRAFICE

IUPAC- metoda de separare in care componentii probei se distribuie intre doua

faze: faza stationara (FS) si faza mobila (FM).

- utilizeaza coloane cu pulberi absorbante (carbune activ, oxid de

aluminiu etc. in tuburi inox sau de sticla); prin acestea se scurge
incet solutia componentilor a caror separare se urmareste. Diferitele
substante se absorb in regiuni distincte ale coloanei. Aceste
regiuni pot fi inca si mai mult distantate prin eluarea coloanei cu
un alt dizolvant. Se desorb apoi succesiv substantele absorbite
prin tratare cu solventi potriviti.

Clasificare (natura fazelor, proces):

FM FS Metoda cromatografica
Lichid Lichid CLL Cromatografia de lichide LC
Lichid Solid CLS Cromatografia de lichide
LCGaz Lichid CGL Cromatografia de gaze GC
Gaz Solid CGS Cromatografia de gaze GC

Cromatografie
Plana - pe hartie (PC)
- pe strat subtire (TLC)
Coloana - schimb ionic
- lichid-lichid
- lichid-solid.

- gaz cromatrografia (GC);

- cromatografia de lichide (LC)- (HPLC);
- cromatografia ionica (IC)
- cromatografia de ioni de inalta performanta (HPIC);
- cromatografia pe strat subtire (TLC).
- cromatografia gel-permeation (GPC) -
-et.
 Cromatografie pe hartie (paper cromatography) (ascendenta)

Cromatografia pe strat subtire (TLC) (ascendanta) (descrisa pentru prima data de Izmailov si
Shraiber,1938)
Cromatografie plana - Rf ?
- raportul dintre distanta de migrare a unui component al probei (specia de
analizat) si distanta de migrare a frontului fazei mobile
Cromatografia pe coloana (schimb ionic)

ABORDAREA TEORETICA A MECANISMELOR SEPARARII CROMATOGRAFICE

Metode cromatografice -Istoric

Primele experimentari cromatografice au fost realizate la inceputul secolului (1906)
in mod independent de catre David Day, inginer de mine geolog si de Mihail Tvet,
botanist si fizician-chimist.
Urmatorul pas a fost realizat de Martin si Synge (1941) reusind separarea
aminoacizilor pe o coloana umpluta cu silicagel saturat cu apa, cu faza mobila =
cloroform si alcool n-butilic.
Consden, Gordon si Martin (1944) prin inlocuirea suportului de silicagel cu benzi de
hartie pun bazele cromatografiei pe hartie.

Separarea pe coloana cromatografia a unui amestec format din doi componenti A+B.
 [A]FS [B]FS
RA RB
[A]FM [B]FM

Procesul de separare pe o coloana cromatografica

R A< R B

Mecanismul proceselor de separare cromatografica

Interactii - FS si componentii din FM-
-dipol-dipol (permanant sau de inductie)
- bazate pe legaturi covalente
- bazate pe legaturi de hidrogen
- bazate pe legaturi Wan der Waals
- bazate pe interactii electrostatice
-etc.
Mecanismul de retinere a speciilor chimice-mecnism de sorbtie

1. ADSORBTIA
2. REPARTITIA
3. Schimb ionic
4. Excluziune sterica
5. Bioafinitate specifica

TEHNICI DE LUCRU IN CROMATOGRAFIE

1. ELUTIA
2. DEPLASAREA
3. FRONTALA

Cromatograma
 tr = timp de retentie

Cromatograma unei probe cu trei componenti

timpul de retentie (tr) reprezinta timpul necesar deplasarii analitului de la injectie pana
ajunge la detector;
volumul de retentie (Vr) reprezinta volumul de faza mobila necesar deplasarii analitului
de la punctul sau de injectie la detector;
timpul mort (tm) reprezinta timpul necesar deplasarii solutilor neadsorbiti intre punctul
lor de injectie si detector;
volumul mort (Vm) reprezinta volumul de faza mobila necesar deplasarii unui solut
neadsorbit de la punctul sau de injectie la detector;

CROMATOGRAFIA DE GAZE
FM-gaz inert (azot, hidrogenul, argon)

Coloane cromatografice

- coloane cu umplutura
- coloane capliare
Detectoare cromatografice
- termo-conductometric (catarometru)
- cu ionizare in flacara (FID)
- captura de electroni
 - spectrofotometrici (emisie, UV-VIS, fluorescenta)-cei mai folositi
- electrochimici
- conductometrici
- DAD (Diode Array)

Schema unui cromatograf de gaze Schema unui injector cromatografic

CROMATOGRAFIA DE LICHIDE

Cromatografia de lichide de inalta performanta (HPLC) este o metoda avansata a

cromatografieei de lichide mult utilizata in separarea si determinarea unor componenti din
amestecuri complexe de substante aflate in diferite sisteme chimice sau biologice, in scopul unei
mai bune intelegeri a rolului individual al moleculaleor.
 Configuratie HPLC

Aplicatii analitice

Curba de calibrare

Reprezentarea grafic a funciei de rspuns liniarizat a detectorului