STUDIA UNIVERSITATIS MOLDAVIAE

Revist tiinific a Universitii de Stat din Moldova, 2013, nr.1(61)

UTILIZAREA METODEI DE CULTIVARE SEMICONTINU

A ALGEI ANABAENOPSIS SP. PE MEDIUL NUTRITIV Z-8

Galina DOBROJAN, Irina STRATULAT, Sergiu DOBROJAN

Universitatea de Stat a Moldovei

Cultivarea algei Anabaenopsis sp. pe mediul nutritiv Z-8 dup metoda semicontinu este mai eficient, realizndu-
se mai rapid desfurarea fazei exponeniale de cretere. Cea mai eficient extragere i substituire a mediului nutritiv s-a
dovedit a fi cea de 50%, care contribuie la obinerea a 9,30,850 g/l de biomas algal la a 9-a zi. Cele mai nalte valori
ale vitezei specifice de cretere a biomasei algei Anabaenopsis sp. se atest n loturile cu extragerea i substituirea a
50% din mediul nutritiv atingnd 0,9990,049 zile -1, iar cele mai mici n loturile cu extragerea i substituirea a 75%
0,5670,02 zile-1. pH-ul mediului nutritiv optim este situat ntre 9,543 i 10,646.
Cuvinte-cheie: cultivare semicontinu, productivitate algal, vitez de cretere, vitez de scurgere, coeficient de
diluare.

USING THE SEMICONTINUOUS METHOD OF CULTIVATION

FOR ALGAE ANABAENOPSIS SP. ON NUTRITIVE MEDIUM Z-8
Growing the algae Anabaenopsis sp. on nutritive medium Z-8 after semi-continuous method of cultivation is more
efficient, achieving more quickly the exponential phase of growth. The most efficient extraction and substitution of
nutritive medium has proved to be the 50%, which contributes to obtain 9.30.850 g/l of algal biomass at the 9th day.
The highest values of specific growth rate of algal biomass Anabaenopsis sp. are attested in lots with the extraction and
substitution of 50% and touching 0.999 0.049 days -1, and the lowest values in the 75%0.5670.02 days-1. The
optimum pH of nutritive medium is situated between 9.543 to 10.646.
Keywords: semi-continuous cultivation, algal productivity, growth rate, rate of flow, the dilution factor.

Introducere
Una dintre cele mai importante caracteristici ale algelor este posibilitatea de reproducere rapid. Aceast
proprietate se utilizeaz la obinerea biomasei algale, care este ntrebuinat n alimentaia uman i animal,
farmaceutic, protecia mediului (epurarea apelor reziduale, fixarea CO2 ), n agricultur etc. Pentru obinerea
biomasei algale ntrebuinate n vaste domenii i scopuri, algele trebuie cultivate. La ora actual se cunosc
mai multe metode de cultivare a algelor, cum ar fi: periodic, continu, semicontinu etc. Metodele periodice,
clasice, de cultivare a algelor, nu permit utilizarea total a potenialului de reproducere [7]. Pentru ridicarea
intensitii reproducerii algelor se consider mai eficient metoda de cultivare continu. Primul model de
cultivare continu a fost iniiat de ctre A.Novick i L.Szilard [5], J.Monod [3]. Acest tip de cultivare
prevede excluderea unui anumit volum de mediu i a unei cantiti de biomas i nlocuirea lor, astfel nct
procesul s se desfoare continuu. ncepnd cu a doua jumtate a secolului trecut, aceast metod a cptat
o mare popularitate n lume, fiind descris i n lucrrile savanilor sovietici I.D. Ierusalimski, I.Malec etc.
Cu toate c sistemele continue permit obinerea produselor omogene, ele de multe ori sunt ineficiente din
punct de vedere economic sau tehnic [1]. Cultivarea semicontinu prezint un sistem mai viabil, deoarece
periodic o parte din mediul de cultur este eliminat, iar restul este utilizat ca punct de plecare pentru
continuarea culturii, asigurndu-se astfel o cantitate de inocul mare la momentul adaosului mediului nou.
Utilizarea metodei semicontinue la cultivarea algei Spirulina platensis, cu extragerea a 50% din mediul
nutritiv Zaruc, s-a dovedit a fi mai eficient i permite obinerea unei cantiti mai nalte de biomas (42,3 mg/l/zi)
i o majorare a vitezei specifice de cretere de 4 ori [6].
n experimentele anterior efectuate de noi a fost studiat procesul de cretere a algei Anabaenopsis sp. pe
mediul Z-8 la cultivarea dup metoda periodic. Cultivarea dup aceast metod asigur obinerea, la a 15-a
zi, a 4,520,21 g/l de biomas algal, iar viteza de cretere, caracteristic fazei exponeniale, era situat ntre
0,0270,001-0, 0440,002 zile-1.
Pornind de la aceasta, ne-am propus drept scop s eficientizm procesul de obinere a biomasei algale prin
cultivarea algei Anabaenopsis sp. pe mediul nutritiv Z-8 conform metodei de cultivare semicontinu.

88
 Seria tiine reale i ale naturii
Biologie ISSN 1814-3237

Material i metode
Experimente de cultivare semicontinu a algei Anabaenopsis sp. pe mediul lichid Z-8 [4,2] au fost efec-
tuate n condiii de laborator la temperatura de 28-30oC i la intensitatea luminii de 4000 luci, pe o perioad
de 9 zile. Cultivarea semicontinu a fost realizat prin excluderea a 25%, 50% i 75% din mediul nutritiv
peste un interval de 3 zile i prin nlocuirea cu mediul proaspt pregtit. Alga a fost cultivat n baloane
Erlenmeyer cu volum de 100 ml. n calitate de inocul s-a utilizat alga cultivat pe mediul lichid care se afla
n faza exponenial de cretere. Densitatea culturii inoculate era de 1,3060,017 g/l, deoarece aceast canti-
tate este specific nceputului fazei exponeniale de cretere a algei Anabaenopsis sp. pe mediul dat, fapt sta-
bilit la cultivarea anterioar dup metoda periodic. Pe parcursul experimentelor au fost determinate: coefi-
cientul de diluare (), viteza de scurgere a mediului nutritiv () i viteza specific de cretere a culturii ()
[9]. Productivitatea algal a fost stabilit prin diferena dintre masa filtrelor curate (prin care iniial se trece
apa distilat) i masa filtrelor cu sedimentarea biomasei algale, efectundu-se calculul corespunztor n g/l [8].
Indicele pH-ului a fost determinat la aparatul multifuncional Consort C-944. Calcularea matematic a
rezultatelor obinute a fost efectuat utiliznd programa computerizat Microsoft Office 2007 cu determi-
narea erorii standard (m) i a medei aritmetice (M).
Rezultate i discuii
Pornind de la faptul c alga Anabaenopsis sp. cantitativ ar trebui s se afle n faza exponenial de cre-
tere, excluderea mediului nutritiv ar facilita acumularea biomasei algale, deoarece peste o perioad de 3 zile,
se asigur cu surs nou de substane nutritive, paralel fiind excluse i produsele metabolice eliminate n
mediul nutritiv de ctre alg.

Fig.1. Productivitatea algei Anabaenopsis sp. cultivate

dup metoda semicontinu pe mediul nutritiv Z-8.
Analiza cantitativ a biomasei algei Anabaenopsis sp. cultivate dup metoda semicontinu indic o spo-
rire considerabil a biomasei algale la extragerea a 50% din mediu care la a 9-a zi atingea 9,30,850 g/l, fiind
de 2,05 ori mai mare comparativ cu cultivarea periodic a algei pe o perioad de 15 zile. Rezultate semnifi-
cative se obin la extragerea a 25% din mediul nutritiv, ce permite obinerea a 8,1730,816 g/l de biomas n
decursul a 9 zile, iar extragerea a 75% din mediul nutritiv asigur obinerea a maximum 5,8460,567 g/l n
aceeai perioad. Pe parcursul experimentelor se observ oscilri, manifestate prin descreterea urmat de
creterea cantitativ a biomasei algale.
Pentru evidenierea mai uoar a legitilor biologice, la cultivarea semicontinu a algei Anabaenopsis sp.
pe mediul Z-8, ne-am propus ca rezultatele cantitative ale biomasei s le introducem ntr-un tabel de eviden
(Tab.1).
Tabelul 1
Evidenierea legitii biologice la cultivarea semicontinu a algei Anabaenopsis sp.
pe mediul nutritiv Z-8
Zilele de monitoring Concentraia mediului extras (%)
25 50 75
3 + + +
6 - - -
9 + + +
n total 3 3 3
Not: + creterea biomasei algale; - reducerea biomasei algale.

89
 STUDIA UNIVERSITATIS MOLDAVIAE
Revist tiinific a Universitii de Stat din Moldova, 2013, nr.1(61)

Dup cum observm, la a 3-a zi se atest creterea biomasei algale, ceea ce indic la faptul c s-a iniiat practic
faza exponenial, dac s-ar realiza n continuare cultivarea periodic. ncepnd cu a 3-a zi, a demarat cultivarea
semicontinu, s-a efectuat prima excludere a mediului nutritiv i nlocuirea cu mediul proaspt, ceea ce a condus
la apariia fazei lag, caracteristic metodei periodice; altfel spus, alga s-a acomodat la condiiile noi induse i, ca
rezultat, se reduce biomasa n toate probele examinate. ncepnd cu a 6-a zi, alga era deja acomodat cultivrii date
i aceasta contribuie la cretere accelerat a biomasei algale care s-a nregistrat i la a 9-a zi de cultivare (Tab.1).
Dup cum am menionat, n procesul cultivrii semicontinue se analizeaz modificrile coeficientului de
diluare, ale vitezei de scurgere a mediului i ale vitezei specifice de cretere (Tab.2).
Tabelul 2
Valorile indicilor de cretere la cultivarea semicontinu a algei Anabaenopsis sp.
pe mediul nutritiv Z-8
Perioada Cantitatea de mediu nutritiv extras i substituit
analizat, 25% 50% 75%

zile Mm Mm Mm Mm Mm Mm Mm Mm Mm
3 1,3330,051 0,1250,005 0,4430,019 20,09 0,2500,01 0,4430,019 40,2 0,3750,018 0,4430,019
6 1,3330,054 0,0830,004 0,0780,004 20,08 0,1660,008 0,0770,003 40,19 0,2500,012 -0,0860,004
9 1,3330,060 0,0830,004 0,8580,041 20,09 0,1660,008 0,9990,049 40,18 0,2500,013 0,5670,02

Rezultatele obinute denot c coeficientul de diluare () rmne practic neschimbat, ceea ce indic la
faptul c extragerea cantitativ a mediului nutritiv este efectuat corect. Viteza de scurgere a mediului este n
descretere. Astfel, se observ c cu ct mai mare este diferena dintre coeficientul de diluare i viteza de
cretere cu att mai nalt este productivitatea algal. Viteza specific de cretere a algei Anabaenopsis sp. se
reduce la a 6-a zi n toate loturile experimentale. Cea mai redus vitez de cretere s-a observat n variantele
cu extragerea a 75% din mediu (-0,0860,004 zile-1), n loturile cu extragerea a 50% i 25% din mediu; vi-
teza de cretere s-a redus, practic, n aceeai msur (0,077-0,078 zile-1). La a 9-a zi valorile vitezei specifice
de cretere au sporit n toate loturile experimentale; cele mai nalte rezultate s-au atestat n proba cu 50%
atingnd 0,9990,049 zile-1, iar cele mai mici n cea de 75% 0,5670,02 zile-1. Valorile pH-ului n toate
probele experimentate au tendina de cretere (Fig.2).

Extragerea a 75%
Extragerea a 50%
Extragerea a 25%

Fig. 2. Modificrile pH-ului mediului nutritiv la cultivarea semicontinu a algei Anabaenopsis sp.
n linii generale, putem constata c valorile pH-ului nu difer n funcie de cantitile mediului nutritiv
extrase, variaiile lui fiind cuprinse ntre 0,06-0,24 uniti, ce pot fi considerate neeseniale.
Concluzii
1. Metoda cultivrii semicontinue a algei Anabaenopsis sp. pe mediul nutritiv Z-8 permite obinerea unei
cantiti mai nalte de biomas ntr-un interval mai redus.
2. Cea mai nalt cantitate de biomas se obine la extragerea i nlocuirea ulterioar a 50% din biomas
peste un interval de 3 zile.
3. Valorile vitezei specifice de cretere sunt mai nalte n proba cu extragerea i nlocuirea ulterioar a
50% din mediul nutritiv, ceea ce indic la faptul c reproducerea celulelor algale este mai intens, iar cele
mai mici s-au atestat n varianta cu extragerea i nlocuirea ulterioar a 75% din mediul nutritiv.
4. Valorile pH-ului mediului nutritiv nu difer n funcie de cantitile de mediu nutritiv extrase.

90
 Seria tiine reale i ale naturii
Biologie ISSN 1814-3237

Bibliografie:
1. DONATI, G., PALUDETTO, R. Batch and Semibatch Catalytic Reactors (from Theory to Practice). In: Catalysis
Today, 1999, vol.52, p.183-195.
2. KOTAI, J. Instructions for preparation of modified nutrients solution Z-8 for algae. In: B-11/69, 1972, p.5.
3. MONOD, J. La technique de culture continue, theorie et applications. In: Annales Institute Pasteur, 1950, no.79, p.390-
410.
4. NIV, A. Estimation of algal growth potential. In: D2-25, 1976, p33.
5. NOVICK, A., SZILARD, L. Experiments with the chemostat on spontaneous mutations of bacteria. In: Proc. Natl. Acad.
Sci., 1950, no.36, p.708-719.
6. REICHERT, C., REINEHR, C., COSTA, J. Semicontinuous cultivation of the cyanobacterium Spirulina platensis in
a closed photobioreactor. In: Brazilian Journal of Chemical Engineering, 2006, vol.23, no.01, p.23-28.
7. , .., , .. - . :
, 1976, 74.
8. , .. . : , 2012, c.728.
9. , .. 2: . B:
, 2005, .67, c.98-110.

Not: Rezultatele au fost obinute n cadrul Proiectului pentru tineri cercettori 12.819.18.11A Elabo-
rarea tehnologiei de cultivare a algei cianofite fixatoare de azot Anabaenopsis sp. pentru obinerea biomasei
de fertilizant biologic.

Prezentat la 12.01.2013

91