FIZIOLOGIE BACTERIAN

OCTOMBRIE 2017

U.M.F. Carol Davila

Disciplina Microbiologie II - Cantacuzino
Definitia FIZIOLOGIEI

tiin care se ocup cu studiul funciilor

organismului viu

din grecete, physis = natur i logos = cuvnt, tiin.

 Fiziologie bacteriana

1. Compoziia chimic a celulei baceriene

2. Nutriia si respiratia bacterian
3. Metabolismul bacterian
4. Creterea, multiplicarea i moartea bacteriilor. -
Curba creterii microbiene.
- Factorii care influeneaz creterea bacterian.
- Cultivarea bacteriilor. Condiii de cultivare.
- Aplicatii
 Functions must be understood in term of
structures, structures must be understood in
term of chemistry
George Emil Palade
1912 2008
Romanian-American cell biologist

In 1974 he was awarded the Nobel Prize in Physiology and Medicine, together with Albert
Claude and Christian de Duve. The prize was granted for his innovations in electron microscopy
and cell fractionation which together laid the foundations of modern molecular cell biology,[3] the
most notable discovery being the ribosomes of the endoplasmic reticulum which he first
described in 1955
https://en.wikipedia.org/wiki/George_Emil_Palade
1. Compozitia chimic a celulei
bacteriene elemente constitutive

Apa

Substantele minerale

Substantele organice
 Apa
75 - 85% din greutatea umeda in celulele vegetative;
40% spori
< 3% in suspensii liofilizate (forma de conservare)
Forme:
- Apa libera
- Apa legata fizico-chimic de diferite structuri
Rol:
- mediu de dispersie si transport, mediul n care se
desfasoara reactiile metabolice
- reactiv
- produs final al unor reactii oxidative
 Substantele minerale
elemente de baz: H, C, O, N, P, S
- rol structural i energetic

elemente <1%, sub form ionizant: K, Mg, Na, Cl, Ca

- rol funcional (procese de activare enzimatic, permeabilizare a
membranei)

oligoelemente: Mn, Fe, Co, Cu, aflate n cantiti foarte reduse

intr n structura unor coenzime, necesare desfurrii
metabolismului
 Substantele minerale
Regleaza presiunea osmotica
Favorizeaza schimburile cu mediul
Reglare pH*
Potential redox**
Pot stimula cresterea si metabolismul bacterian
(ex. Fierul stimuleaza producerea toxinei
difterice)
* pH = presiunea partiala a ionilor de hidrogen (H+), indice care permite
exprimarea concentratiei H+ continuti intr-o solutie
** Masoara tendinta unei solutii fie de a castiga (REDUCERE), fie de a pierde
electroni (OXIDARE)
 Substantele organice

Glucide
Lipide
Proteine
Enzime
Pigmenti
Substante antibiotice
Vitamine
 Glucide

Simple: in metabolismul intermediar

Complexe: in structura perete celular, capsula

Glucide - Importanta in diagnostic
Valoare taxonomica - teste care pot stabili capacitatea
unei bacterii de a metaboliza un anumit zahar
Auxanograma, zimograma
 Lipide
10% din greutatea uscata bacterii obisnuite, 40%
Mycobacterii
Libere sau combinate cu alte molecule
Lipide structurale: membrana, perete, mezozom

Ex. - Acidul mycolic - Mycobacterii

- Ceruri (acizi grasi + alcooli monovalenti superiori)
Mycobacterii, Nocardia ex. ceara D: Hipersensibilitate tip IV
- Fosfolipide: difosfatidil glicerol Treponema pallidum
- Lipidul A din LPZ peretelui bacteriilor Gram negative
Perete bacterian la Mycobacterii

1: Lipid extern
2: Acid mycolic
3: Polizaharid
(Arabinogalactan)
4: Peptidoglican
5: Membrana plasmatica
6: Lipoarabinomanan (LAM)
7: Fosfatidilinositolmanozid
8: Perete bacterian
 Proteinele

Simple: in metabolismul intermediar

Complexe, functii specializate:
Mucoproteine: mucopolizaharizi de grup la Str.
pneumoniae
Cromoproteine: catalaze, peroxidaze, citocromi

(lant respirator la nivelul membranei celulare)

Nucleoproteine: acizi nucleici
 Enzime

Extracelulare: hidrolaze etc.

Ectocelulare (membrana): permeazele etc.
Intracelulare

Constitutive exista in celula independent de mediu

Inductibile ca raspuns la anumiti compusi din mediu

Spectrul de activitate enzimatica important in

taxonomie
 Pigmentii
Bacteriile cromogene sintetizeaza pigmenti
Localizare pigment clasificare bacterii:
o Cromofore (in citoplasma)
o Paracromofore (in perete sau strat mucos
Staphylococcus)
o Cromopare (difuzibil Pseudomonas
aeruginosa criteriu identificare)
Rol:
o Protectie UV (pigmenti carotenoizi)
o Antibiotic (ex. Piocianina Ps aeruginosa fata de
B. anthracis)
o Enzimatic: proteine transportoare
 Pigmenti bacterieni

Staphylococcus aureus
www.student.ccbcmd.edu

Pseudomonas aeruginosa
www.textbookofbacteriology.net/pseudomonas.html
 Antibiotice

Sintetizate pentru a inhiba alte microorganisme!

Bacteriocine plasmide col (colicine)

Bacitracina (B. licheniformis)
Gramicidina (B. brevis)
Polymixina (B. polymixa)

Utilizari:
- TERAPEUTICA ex. Polimixina E - Colistin
- TAXONOMICA identificare Ex. Bacitracina Streptococcus pyogenes
 Vitamine

Biotina: sintetizata de E. coli, B. subtilis, B. anthracis

Tiamina (B1): E. coli, B. subtilis

Vitamine grup B si K flora bacteriana intestinala

 Factorii de cretere

metabolii eseniali pe care bacteria nu-i poate sintetiza

substane care trebuie incluse n mediul de cultur ex.
factorii X i V pentru Haemophilus influenzae
 2. Nutriia i respiraia bacterian

Nutriia bacterian reprezint totalitatea proceselor

prin care bacteriile i procur din mediul nconjurtor
substanele necesare supravieuirii, creterii i
nmulirii

Respiraia bacterian - modalitatea de a-i produce

energia necesar activitii metabolice

 Sursa de carbon
autotrofe - substane anorganice, CO2
mixotrofe - substane organice ct i CO2
heterotrofe - substane organice

Sursa de energie
fotosintetizante - energia luminoas
chimiosintetizante - reacii de oxido-reducere a
unor substane
o lithotrofe - oxideaz substanele anorganice
o chemoorganotrofe - oxideaz subst.organice
(glucoz, AA, purine, pirimidine, f.de cretere)
Necesitile bacteriilor de interes medical
chimiosintetizante heterotrofe (cu necesiti diferite)

paratrofe sunt dependente de aparatul enzimatic al

celulelor gazd, fiind bacterii cu habitat obligatoriu
intracelular (chlamydii, rickettsii)

auxotrofe pierd capacitatea de a sintetiza un compus

(E.coli - timidina)

prototrofe tulpinile originale din care provin

3. Metabolismul bacterian
Cuprinde totalitatea reaciilor biochimice care au loc n
celula bacterian i n mediu

reacii catabolice metabolizarea substratului

nutritiv cu eliberare de energie

reacii metabolice intermediare - energia rezultat

din reaciile catabolice este nmagazinat n compui
macroergici

reaciile anabolice, prin care celula bacterian i

sintetizez substanele proprii, cu consum energetic
Particularitatile metabolismului bacterian
Unicelular, necompartimentat (lipsa organite)
Plasticitate: adaptare la diferite tipuri de substante
nutritive
Flexibilitate: utilizarea aceluiasi substrat in mai multe
cai distincte, dar intricate
Eficienta maxima
Este foarte intens (viteza reaciilor este mare)
n toate reaciile metabolice intervin catalizatori proteici
specifici enzimele
Produsele intermediare din procesele catabolice pot fi
utilizate direct n calitate de precursori pentru reaciile
anabolice (amfibolism)
 Reaciile catabolice
Parcurg n principiu 4 faze:
descompunerea extracelular a substanelor organice n uniti mai
mici
absorbia substanelor din mediul extern: prin mecanism pasiv sau
activ (fosforilarea glucozei - glucoza -6 fosfat)
pregtirea substanelor pentru oxidare prin reacii de decarboxilare
oxidarea substanelor cu eliberare de energie - respiraia bacterian
Respiraia aeroba - acceptor final de H este O atmosferic
Respiraia anaerob -acceptor final este O prezent ntr -o sare
anorganic.
Fermentaia -acceptor final este o substan organic
 Metabolismul glucidic
Calea Embden Meyerhoff anaeroba; suita reactii:
glucoza 2 piruvati + 2 ATP
Calea hexozomonofosfatului: hexoza pentoza; ac.
nucleici, aa aromatici, vitamine
Calea Entner- Doudouroff furnizeaza rezerve de
precursori, vitamine pt. sinteza ADN si ARN
Calea fosfocetolazei
Ciclul acizilor tricarboxilici:
Acetil-Coa CO2 + H2O
la nivelul membranei citoplasmatice
Metabolismul compusilor simpli
Aminoacizii: Transaminare, dezaminare, decarboxilare
Bazele purinice si pirimidinice: endo si exonucleaza
utilizate ca sursa de C; sinteza atom cu atom
Lipide: glicerol+acizi grasi (lipaze ex. Fosfolipaza C
degradeaza fosfolipidelel din membrana hematiilor)
Degradarea acizilor rasi betaoxidare
Sinteza ac. grasi: AcCoa carboxilaza si acid gras
sintetaza
 Respiraia bacterian
Bacterii strict aerobe se dezvolt numai n prezena O
atmosferic - respiraia aerob (Pseudomonas aeruginosa,
M.tuberculosis, Bacillus)
Bacterii strict anaerobe nu se dezvolt n prezena O
atmosferic - fermentaia n condiii anaerobe (Clostridium,
Bacteroides, Prevotella)
Bacterii facultativ anaerobe -se dezvolt n prezena sau
absena O atmosferic - enterobacteriile
Bacterii anaerobe aerotolerante folosesc numai
fermentaia n prezena aerului atmosferic, fr participarea
oxigenului (Streptococcus pyogenes)
Bacterii microaerofile - n prezena CO2, 6-10%
(Neisseria)
4. CRETEREA I NMULIREA
BACTERIILOR
Rezultat al nutriiei i metabolismului
Creterea volumului celulei, dublarea
materialului nuclear, dezacord mas -volum
Cresterea
Formare de noi constituenti celulari
Sinteza specifica pornind de la substante nutritive
simple a unor compusi noi, care sunt ulterior asamblati
formand copii fidele ale constituentilor celulari
Depinde de:
Informatia genetica

Substantele din mediu (natura, concentratie)

Continua pana intr-un moment critic (raport

volum/suprafata), cand cresterea se intrerupe si apare
multiplicarea
Multiplicarea
Diviziune directa - coordonata de ADN
Scindare celula mama in 2 celule fiice

Prin invaginare membrana (Gram negative) sau formare

sept transversal (Gram pozitive)
Bacili, spirili: plan transversal, perpendicular pe lungime

Unii spirili: longitudinal

Coci: planuri perpendiculare succesive (1,2,3)

Inmugurire: bacterii fotosintetice

Fragmentare: bacterii filamentoase
Segmentare - Tip special de spori: Streptomyces
 Diviziunea binara

fig.cox.miami.edu/.../c7.12.11.fission.jpg
Diviziunea prin inmugurire
(Ex. Candida)

www.mshri.on.ca
4.1 Curba de cretere i multiplicare
a bacteriilor n mediu limitat
Dac se introduce un inocul de celule bacteriene dintr-o cultur
pur ntr -un mediu de cultur proaspt i se incubeaz , bacteriile
vor crete i se vor multiplica -timpul scurs de la o diviziune la alta
=timp de generaie
Aprecierea nr de celule bacteriene la intervale de timp de la
momentul inoculrii -grafic
numr total de germeni (vii i moarte)
numr de celule vii -apreciaz nr bacteriilor capabile s se
multiplice n continuare
Curba de multiplicare a bacteriilor
n mediu limitat
D E
 A. Faza de lag = adaptare la noile
condiii
Durata n funcie de specie, condiii de mediu, de
numrul de celule din inocul (1/2 h i 3-4 h la bacteriile
sporulate)
Numrul bacteriilor este staionar
Metabolismul este intens
Crete volumul bacteriilor
Sensibilitate crescut la antibiotice

B. Faza de accelerare bacteriile

ncep s se nmuleasc
 C. Faza de multiplicare
exponenial
Bacteriile se nmulesc n progresie logaritmic.
T/Nr.b liniar
Este posibil doar in vitro
Durata (n general 2-3 ore n funcie de TG)
Escherichia coli TG 10 minute

Mycobacterium tuberculosis 25 ore

Bacteriile prezint toate caracterele speciei

Sensibilitate mare la antibiotice
Compoziia mediului se schimb
Perioad de ncetinire
 D. Faza staionar
Durata cteva ore
Numrul de bacterii este constant (ele nu se nmulesc,
nu mor)
Sensibilitate sczut la chimioterapice
Modificri ale morfologiei i caracterelor tinctoriale
Produc anumii metabolii secundari cu distribuie
taxonomic foarte riguroas
Antibiotice (Actinomyces)

Colicine (b.piocianic)

Exotoxine (b. difteric, b. tetanic, b.botulinic, etc.)

Sporogeneza la bacteriile sporulate

E. Faza de declin
Durata zile
Numrul de bacterii scade constant
(epuizarea substratului nutritiv i
acumularea de metabolii toxici)
Modificri morfologice
Autosterilizare sau sporulare complet

Cultivarea bacteriilor n mediu limitat este

utilizat n laboratoarele de bacteriologie
medical, pentru stabilirea diagnosticului
unei infecii bacteriene.
Cultivarea bacteriilor n laborator

Mediile solide obtinerea de colonii izolate

tehnica poligonului deschis
Colonii izolate
Caractere de cultivabilitate
Creterea i nmulirea bacteriilor n
culturi continui
Cultivarea bacteriilor n sisteme deschise - chemostate
- pentru obinerea unei mase mari celulare
Vaccinuri

Produi bacterieni (exotoxine, enzime, antibiotice,

interferoni, etc) pentru industria alimentar,

farmaceutic, etc.
Cercetare

Mediul este nlocuit n permanen

Bacteriile sunt mereu n faz logaritmic
 nmulirea bacteriilor n organism

Condiiile pe care microorganismele le ntlnesc n

organism le selecteaz pe acelea care cresc n anumite
limite de temperatur, osmolaritate i pH.
dup ptrunderea n organism a unui numr mic de
microbi acetea se pot nmuli rapid i produc o infecie
grav cu evoluie acut (meningita)
Bacteriile cu timp de generaie lung vor produce o
infecie cu evoluie insidioas, cronic (TBC)
nmulirea bacteriilor n organism
n organism, creterea i multiplicarea
bacteriilor este stresat
necesiti nutritive (prin competiie cu flora

normal)
prin mecanismele aprrii antiinfecioase
nmulirea bacteriilor n organism
Pretenii nutritive mai mari la bacteriile cu
habitat exclusiv uman (gonococ) dect la celelalte
(E.coli...)
bacteriile cu habitat extracelular sunt expuse
aciunii anticorpilor, complementului, fagocitozei,
bacteriile ce se nmulesc intracelular sunt
protejate de aciunea acestor factorii i scap
uneori supravegherii imunologice
bacteriile dezvolt mecanisme adaptative care s
ocoleasc barierele ce se opun nmulirii lor
5. INFLUENA FACTORILOR DE MEDIU
ASUPRA NMULIRII BACTERIILOR
Temperatura

Psihrofile - optim la 20C dar i sub aceast

temperatur
Mezofile - optim ntre 20-40C. Sunt cele
patogene deoarece se nmulesc la temperatura
organismului, fiind denumite i bacterii
homeoterme.
Termofile, care se nmulesc optim la peste 45C
temperaturile ridicate distrug bacteriile,
aplicaia practic a acestui aspect fiind
sterilizarea
INFLUENA FACTORILOR DE MEDIU
ASUPRA NMULIRII BACTERIILOR

temperaturile moderat sczute, de +4oC din

frigidere, nu distrug bacteriile dar opresc
nmulirea lor prelungindu-le viabilitatea. Tulpini
criofile!!!
ngheul la temperaturi nu prea mici fa de 0oC
determin cristalizarea apei ce determin leziunea
structurilor membranare a celulelor bacteriene.
Conservarea prin congelare. Temperatura optim
este cea realizat de CO2 (-78C) sau de azotul
lichid (-180C).
 INFLUENA FACTORILOR DE MEDIU
ASUPRA NMULIRII BACTERIILOR
pH 7,2-7,4(excepii:Brucella, v.holeric)
CO2 :0,03% (10% la Neisserii)
Umiditatea
n funcie de specie
Liofilizarea(desicare brusc la -78C)pentru
conservare
Presiunea osmotic
n mediu hiperton -pierd apa - plasmoliza
n mediu hipoton -apa intr n celule - plasmoptiz
exist bacterii halofile -cresc n soluii hipersaline(m.
Chapmann), zaharofile
INFLUENA FACTORILOR DE MEDIU ASUPRA
NMULIRII BACTERIILOR

Ultrasunetele
Presiunea hidrostatic, osmotic
Electricitatea
Radiaiile :
Neionizante (UV -cu efect bactericid)

ionizante -formeaz n celul radicali cu via scurt i

protoni