SPECIILE REACTIVE ALE OXIGENULUI ȘI CANCERUL COLORECTAL

Autori: Corciu Costinela, Cristescu Camelia, Dima Teodor-Claudiu, Enache Mihai-Alexandru

Abstract

Several agents used for treatment of colon and other cancers induce reactive oxygen species (ROS) and
this plays an important role in their anticancer activities. In addition to the well-known proapoptotic
effects of ROS inducers, these compounds also decrease expression of specificity protein (Sp)
transcription factors Sp1, Sp3 and Sp4 and several pro-oncogenic. Sp-regulated genes are important for
cancer cell proliferation, survival and metastasis. The mechanism of these responses involve ROS-
dependent downregulation of microRNA-27a (miR-27a) or miR-20a (and paralogs) and induction of
two Sp-repressors, ZBTB10 and ZBTB4 respectively. This pathway significantly contributes to the
anticancer activity of ROS inducers and should be considered in development of drug combinations for
cancer chemotherapy.

Keywords: Colon cancer, reactive oxygen Species, antioxidants, specificity transcription factors,
targeted therapy, microRNA

1. Introducere

1.1 Cancerul colorectal

În ciuda progreselor în medicină care au facut posibilă o mai bună înțelegere a mecanismelor de
dezvoltare ca cancerului, cauzele apariției cancerului colorectal nu sunt perfect cunoscute. Carcinomul
colorectal se referă la cancerul intestinal al colonului și al rectului. Cancerul intestinal este al treilea cel
mai frecvent tip de cancer și afectează în primul rând persoanele de 50 de ani și peste această vârstă.
Cancerul de colon apare cel mai adesea la nivelul mucoasei și se întinde apoi la celelalte straturi ale
colonului ajungând să le depășească și să invadeze organe vecine din abdomen.[4]
Mișcările intestinale modificate și sângele din scaun sunt cele mai frecvente simptome ale cancerului
intestinal. Acesta este tratat chirurgical, prin chimioterapie și radioterapie.
Majoritatea cancerelor par a fi rezultatul unui set complex de factori, cum ar fi ereditatea, stilul de viață
sau expunerea la substante care cauzează cancer (cunoscute sub numele de cancerigene). Orice situație
sau substanță care crește riscul de apariție a cancerului se numește un factor de risc, în cazul de față
fiind reprezantați de vârstă, stilul de viață, prezența polipilor, istoricul personal și heredocolateral,
polipoza adenomatoasă familială sau afecțiuni inflamatorii.
1.2 Simptome în cancerul colorectal

Suspiciunea de cancer colorectal poate apărea în diferite situații dar mai ales când pacientul prezintă
anumite afecțiuni și simptome. Cancerul colorectal poate fi detectat în cadrul unei examinari de
screening.

Principalele simptome ale unei tumori colorectale în stadiul incipent sunt de obicei vagi. În plus, aceste
simptome apar adesea în contextul altor boli nemaligne, nefiind specifice cancerului colorectal. În faza
incipientă majoritatea cancerelor colorectale nu provoacă dureri sau simptome.

Semnele cancerului colorectal includ prezența sângelui în materiile fecale, acestea având caracter de
rectoragie sau de melena. Sângerările pot fi uneori microscopice, iar acestea pot induce apariția anemiei
feriprive. Aceste semne pot fi insoțite de modificări de formă sau consistență a scaunului, balonări
abdominale, astenie și fatigabilitate și scădere ponderală, iar acestea pot cotura tabloul clinic.

1.3 Diagnosticul

Prezența îndelungată și asociată a semnelor și simptomelor de mai sus, ghidează diagnosticul spre
afecțiunea de bază. Diagnosticul de certitudine se pune în urma examenelor clinice și paraclinice:
colonoscopia, investigații radiologice precum CT sau clisma baritată cu dublu contrast și investigații de
laborator precum markerii tumorali și antigenul carcinoembrionar (CEA). Acestora li se adaugă
examinarea histopatologică, stadializată în care medicul stabilește în ce măsură tumora colorectala a
invadat alte organe alăturate sau a metastazat. (Tabel 1.1)

Diagnosticul tumorii primitive se stabilește în urma urmatoarelor examene paraclinice:

 Tușeul rectal, ce permite diagnosticul tumorilor rectale.

 Rectosigmoidoscopia: identifică peste 50% din tumorile colorectale.
 Irigografia cu dublu contrast explorează în totalitate colonul, dar din cauza sensibilității reduse
comparativ cu cea a colonoscopiei, este utilizată din ce in ce mai puțin.
 Colonoscopia totală cu prelevarea de biopsii este metoda esențială de diagnostic a CCR.
 Colonoscopia virtuală și administrarea capsulei endoscopice sunt metode noi, care sunt din ce în
ce mai frecvent utilizate pentru diagnosticul CCR, principalul neajuns fiind imposibilitatea
prelevării de biopsii și necesitatea efectuării colonoscopiei convenționale în cazul decelării unor
formațiuni colorectale.

Stadializarea se face conform clasificării Dukes sau a sistemului TNM.

 Tomografia computerizată
 RMN
 ecoendoscopia și imunoscintigrafia cu anticorpi monoclonali sunt principalele metode utilizate
pentru stadializarea CCR.
Stadiu Definiție Categorie
Carcinom in situ: o tumoră malignă limitată la nivelul
Stadiul 0 mucoasei și care nu invadează submucoasa

Tumora invadează submucoasa sau stratul muscular

Stadiul I
Tumora invadează stratul muscular până în subseroasă
Stadiul IIA sau pănă în țesuturile învecinate din spațiul
intraperitoneal
Tumora penetrează peritoneul visceral și invadează
Stadiul IIB direct organe sau structuri din spatiul intraperitoneal

Tumora a produs metastaze în ganglionii limfatici Cancer

regionali. Stadiul III este subîmpărțit în funcție de colorectal
gradul de invazie: localizat
 Stadiul III A: tumora invadează submucoasa
Stadiul III sau stratul muscular și s-a raspandit la 1-3
ganglioni limfatici regionali

 Stadiul III B: tumora invadează subseroasa,

peritoneul visceral sau organe învecinate și s-a
răspândit la 1-3 ganglioni limfatici regionali

 Stadiul III C: tumora s-a raspândit la 4 sau mai

mulți ganglioni regionali

Cancer
Stadiul IV Tumora a metastazat în organe îndepartate. colorectal
avansat

Tabel 1.1 Stadializarea evoluției cancerului colorectal.

3. Specii reactive ale oxigenului (ROS)

ROS reprezintă un grup de derivați de oxigen, produs de reducerea parțială a oxigenului. În funcție de
zona de sinteză și de mediul înconjurător, moleculele ROS produse pot interacționa între ele și cu
diverse alte molecule. Anumite molecule ROS - H2O2, sunt relativ stabile și pot difuza în interiorul și
între celule.
Alte reacții produse cum ar fi: radicalii O2 sau hidroxil (OH) au o singură legătură electron, care
limitează difuzia lor prin membranele celulare.[3] Acești radicali liberi sunt relativ instabili și foarte
reactivi, ceea ce reiese din potențialele lor caracteristici nocive. Una dintre cele mai bune reacții
caracterizate de O2 - este reacția cu oxidul nitric (NO) derivat din NO sintetaze (NOS). Peroxinitritul
ulterior format (ONOO) oxidează tetrahidrobiopterina, cofactorul sintetazei oxidului ntric endotelial.
Prin urmare, NOS este decuplat de această enzimă, ceea ce favorizează producția de O2.[5] În reacția
lui Haber-Weiss, catalizate de tranziția ionilor metalici liberi, H2O2 și O2 sunt reduse la OH care are
cel mai mare potențial oxidativ. (Fig. 1.1)

Fig. 1.1 Surse de specii reactive de oxigen și conversia lor

4. Tratamentul cancerului colorectal și ROS

Fenomenul de generare a ROS prin administrarea de medicamente în medierea inducerii apoptozei a

fost studiat și analizat extensiv pentru a crea strategii eficiente pentru chimioterapia cancerului. Câteva
studii au investigat efectele atât ale agenților naturali cât și de sinteză care să acționeze împotriva
cancerului colorectal. Aceste studii au arătat că mulți dintre acești compuși au efect de inducere a ROS
și chiar dacă nu se poate afirma cu certitudine, această cale poate reprezenta mecanismul predominant
de acțiune al câtorva medicamente folosite în chimioterapia cancerului.[9] Efectele antioxidanților în
atenuarea răspunsului diverselor medicamente chimioterapice reprezintă o dovadă a rolului ROS în
medierea activității acestor medicamente.
Proprietățile anti-carcionogene ale curcuminei, ingredientul activ al condimentului indian, turmeric,
precum și rolul acestei substanțe în inhibiția multiplicării celulare mediată de ROS au fost investigate
în detaliu și demonstrate în câteva studii.

Un studiu care a cercetat efectele împotriva cancerului ale curcuminoidelor pe liniile celulare ale
colonului HT-29 și SW480 și pe fibroblaștii CCD-18Co au demonstrat inhibiția creșterii celulelor HT-
29 și SW480 și activitatea îmbunătățită a agentului chimioterapic 5-fluorouracil. Aceste efecte s-au
datorat scăderii nivelelor genei multi-drog rezistente 1 (MDR1) și medierii de către ROS a represiei
proteinelor Sp – factorii transcripției MDR1.

Un alt studiu a evidențiat inhibiția produsă de curcumină asupra proliferării celulelor HCT-15 în
cancerul de colon și inducerea apoptozei care a fost acompaniată de generarea de ROS.[6]
Ingredientele active ale extractului de sâmburi de struguri cum sunt epigalocatechina și procianidele au
inhibat de asemenea creșterea celulelor tumorale în diferite cancere și s-a constatat efectul citoprotector
asupra celulelor umane normale ale mucoasei gastrice.
Un alt studiu a arătat efectul sinergetic între epigalocatechin-3-galat și vitexin-2-O-xylozid și 4-
methilsulfanil-3-butenil-izotiocianat care au inhibat creșterea celulelor LoVo și CaCo-2 din cancerul de
colon. Acest răspuns a fost însoțit și de creșterea nivelelor ROS, blocarea fazei G0/G1 a ciclului celular
și inducerea apoptozei.
Acizii grași derivați cum sunt acidul linoleic conjugat și 6 iodo-δ-lactona, un derivat iodinat al acidului
arahidonic au indus apoptoza celulelor SW480 and HCT116 and HT29, celule din cancerul de colon.

Compus Linii celulare Mecanism de acțiune

Acidul betulinic RKO ROS , MMP, axa miR27a-ZBTB10
ROS, MMP, miR27a-ZBTB10/miR20a-miR- 17-
Curcumina SW480, RKO
5p-ZBTB4
ROS, MMP, miR27a-ZBTB10/miR20a-miR- 17-
RL197 SW480, RKO
5p-ZBTB4
GT-094 SW480, RKO ROS and loss of MMP, axa miR27a-ZBTB10
Acid ascorbic RKO, SW480 ROS
ExtractEmilia
HCT116 ROS, reglarea ATM, p53, Fas, caspazele 3,8,9
sonchifolia
Emodin LS1034 ROS, Ca2+, activarea caspazelor 9 și3
Quercetin LoVo ROS, blocarea ciclului celular (S)
HCT116, Caco2, ROS, blocarea ciclului celular (G1/S), activarea
Patulin
SW620 caspazei 3, reglarea ATF3
Resveratrol HT-29, COLO 201 ROS, activarea caspazelor 8 și 3, creșterea LC3-II
Capsazepina HCT116 ROS, TRAIL, JNK, CHOP, DR5
Compus Linii celulare Mecanism de acțiune
Laminarin LoVo ROS, Ca2+, activarea caspaszelor 9 și 3
ROS, blocarea ciclului celular (G1), activarea
LS-1 HT-29
caspaszelor 3,8,9
(5Z)-7-oxozeaenol HT-29 ROS, inhibiția NF-kB, activarea caspaszelor 3 și 7
Extract Pulasan HT-29, HCT116 ROS, creșterea Bax, activarea caspaszelor 3,7 și 9
Acid cafeic HCT116 ROS, blocarea ciclului celular (G1)
ROS, blocarea ciclului celular (G2/M), Bax,
ExtractLuffa echinata HT-29
acumularea caspazei 3
Celule Immorto-
Berberina ROS, catepsina B, PARP, AIF - activativare
Min
ROS, blocarea ciclului celular (G2/M), ATM -
Bortezomib
activare

Salinomicin RKO, SW620 ROS, caspaze 3,7 (RKO), LC3 (SW620)

7-piperazinethylchrysin HCT116 ROS, p53, Bax, activare caspaze 3, 9

Di-spiropyrrolizidino ROS, blocarea ciclului celular (G1), Bax, p53,
HCT116
oxindole derivatives activare caspaze 3 și 9
ROS, blocarea ciclului celular (G2/M), MAP2K3/6
WYCO2-9 HCT116
MAPK14 – activare

Sanguinarina HCT116 ROS, activare caspaze 3,8 și 9 și Egr-1

Tabelul 4.1. Agenți împotriva cancerului de colon, inductoari ai ROS și alte mecanisme de acțiune.

4. Discuții

Se cunoaște faptul că inhibiția individuală a căilor de multiplicare a celulelor tumorale, de angiogeneză

sau de supraviețuire nu sunt eficiente atâta timp cât celulele canceroase pot funcționa bazându-se pe căi
alternative. Astfel se impune nevoia unor soluții terapeutice care să vizeze simultan căi multiple de
funcționare ale celulelor tumorale.

5. Concluzie

Rezultatele a numeroase studii clinice și a experimentelor in vitro au arătat că mecanismele trapiilor

țintite pentru proliferarea celulelor anormale și pentru creșterea supraviețuirii în cancer sunt complexe
și nu sunt încă pe deplin înțelese.
Agenții împotriva cancerului care induc ROS sunt recunoscuți ca o importantă clasă de medicamente
care inhibă proliferarea celulelor tumorale și care de asemenea cresc rata supraviețuirii în cancere
acestea au fost atribuite, în parte, efectelor directe sau indirecte asupra mitocondriilor.
Descoperirea faptului că ROS produce down-reglarea factorilor de transcripție Sp și a genelor reglate
de aceștia, definește un nou mecanism mediat de ROS care explică eficiența inductorilor acestora și
deschide calea dezvoltării viitoare a unor terapii combinate cu alți agenți anti-cancer pentru obținerea
de medicamente mai țintite și mai eficiente.

6. Rezumat

Anumiți agenți terapeutici folosiți în tratamentul cancerului de colon, dar și al altor tipuri de cancer,
stimulează producția de specii reactive ale oxigenului (ROS), acestea având un rol important în
procesele anticanceroase. Pe lângă bine-cunoscutele efecte proapoptotice ale inductorilor ROS, acești
compuși scad și expresia factorilor de transcripție Sp1, Sp3 și Sp4 și a câtorva prooncogene. Genele
Sp-modulate au rol în proliferarea celulelor canceroase, supraviețuirea acestora și în procesele de
metastază. Mecanismul acestor răspunsuri implică down-reglarea ROS-dependentă a microARN-27a
(miR-27a) sau miR-20a precum și stimularea a doi represori Sp ZBTB10 și ZBTB4. Aceasă cale
contribuie semnificativ la proprietățile anticanceroase ale inductorilor de ROS și merită luată în
considerare în vederea dezvoltării de noi combinații de medicamente pentru tratamentul chimioterapic
al cancerului.

7. Bibliografie

1. Center MM, Jemal A, Ward E. International trends in colorectal cancer incidence rates. Cancer
Epidemiol Biomarkers Prev. 2009;18(6):1688–94.

2. Chen Y, et al. Oxidative stress induces autophagic cell death independent of apoptosis in
transformed and cancer cells. Cell Death Differ. 2008;15(1):171–82.

3. Gupta SC, et al. Upsides and downsides of reactive oxygen species for cancer: the roles of reactive
oxygen species in tumorigenesis, prevention, and therapy. Antioxid Redox
Signal. 2012;16(11):1295–322

4. La Vecchia C, et al. Dietary total antioxidant capacity and colorectal cancer: A large case-control
study in Italy. Int J Cancer. 2013;27(10):28133

5. Pathi SS, et al. GT-094, a NO-NSAID, inhibits colon cancer cell growth by activation of a reactive
oxygen species-microRNA-27a: ZBTB10-specificity protein pathway. Mol Cancer
Res. 2011;9(2):195–202.

6. Shehzad A, et al. Curcumin induces apoptosis in human colorectal carcinoma (HCT-15) cells by
regulating expression of Prp4 and p53. Mol Cells. 2013;16:16.
7. Stevens RG, et al. Body iron stores and the risk of cancer. N Engl J Med. 1988;319(16):1047–52

8. Sun L, et al. Reactive oxygen species mediate Cr(VI)-induced S phase arrest through p53 in human
colon cancer cells. J Environ Pathol Toxicol Oncol. 2012;31(2):95–107.

9. Valeska Helfinger, Katrin Schröder, Redox control in cancer development and progression.
Molecular Aspects of Medicine. 2018;11(2): 89-105.

10. Vaquero EC, et al. Reactive oxygen species produced by NAD(P)H oxidase inhibit apoptosis in
pancreatic cancer cells. J Biol Chem. 2004;279(33):34643–54.