Lp.

12 Diagnosticul de laborator al infectiei HIV/SIDA

Obiective:
1. Precizarea etiologiei virale a bolilor cu transmitere sexuală (pentru cele mai frecvente
virusuri).
2. Precizarea etapelor diagnosticului de laborator al infecţiei HIV/SIDA.
3. Descrierea metodelor de diagnostic ale infecţiei HIV/SIDA si a criteriilor de
diferentiere HIV versus SIDA
4. Precizarea metodelor diagnosticului de laborator al infectiei cu VHS si HPV

1. Etiologie:
- HIV
- Herpes simplex tip 2
- HPV
- VHB,VHC

Diagnosticul de laboralor al infecţiei HIV/SIDA

2. Etape de diagnostic :
a) Depistarea infecţiei HIV –teste de triaj
b) Confirmarea infecţiei HIV –teste de confirmare (WB, IF)
c) Stadializarea clinico-epidemiologică a pacientului seropozitiv (numărul
limfocitelor CD4/mmc)
d) Monitorizarea eficienţei terapiei antiretrovirale ( CD4/mmc, ARN/HIV)

3. Diagnosticul direct

!Se vor face precizări legate de structura HIV.

Colectarea şi transportul probelor
-sânge (atât pentru diagnosticul direct cât şi pentru cel indirect)
-LCR, salivă, lacrimi, urină, secreţii vaginale, produse de biopsie (intestin)
Probele se stochează la -20-70º C.

Diagnosticul direct propriu-zis:

-izolarea virusului pe culturi de limfocite – în cercetare
- evidentierea Ag p24 în ser (ELISA)
-evidenţierea ADN proviral în limfocite (PCR)
-evidentierea sau si cuantificarea ARN HIV (RT-PCR)

4. Diagnosticul indirect
a) Teste tip screening
-Teste rapide tip immunodot
Avantaje : sunt rapide, nu necesită personal calificat sau aparatură electronică
Dezavantaje: trebuie confirmate (specificitate redusa)
-Latexaglutinarea
-ELISA- (indirect sau competitiv)

1
Rezultate fals (+) –contaminarea preparatului obţinut pe culturi cu material faţă de care
apar Ac non HIV); posibilitate practic inexistenta (nu se mai obtin antigenele prin
cultivarea HIV pe culturi de limfocite – se obtin prin recombinare)
Rezultate fals (-) – când testul se efectuează înaintea seroconversiei
- la pacienţii imunosupresaţi
- tardiv, în stadiul SIDA

b)Teste de confirmare
-Western Blot –evidenţiază categoria Ac prezenţi
Interpretare : prezenta a cel putin doua benzi

Pozitiv- prezenţa a cel puţin 2 din cele 3 benzi majore: env (gp 160/120,gp 41), +/- gag
(p24) +/- pol (p 55)
Negativ : absenţa benzilor
Indeterminat : benzi prezente, dar nu se întruneşte criteriul de pozitivitate.
Teste imunologice
-nr limfocitelor CD4/mmc – parametru pentru stadializare, prognostic, monitorizarea
terapiei antiretrovirale
N: 500-1400/mmc
Pentru aprecierea eficienţei terapiei se folosesc: nr limfocitelor CD4, evaluarea Ag p24,
nivelul viremiei plasmatice.

Diagnosticul SIDA - infectii cu oportunisti, sarcoame, leucemii, impun demonstrarea

urmatoarelor criterii de laborator:
-dispariţia Ac anti p24
-reapariţia Ag p24
-scăderea CD4 < 200/µL

Diagnosticul de laborator al infecţiei cu VHS tip 2

Produse patologice: lichid din secreţiile veziculare, frotiu cito vaginal,

Diagnostic direct :
- izolarea virusului în culturi de fibroblaşti sau celule epiteliale
- evidenţierea –efect citopatic ( rotunjirea şi balonizarea celulelor, incluzii Cowdry)
- identificarea – reacţii de neutralizare, imunofluorescenta (IF)
Metode rapide : detectarea de antigene virale in proba prin IF sau detectarea genomului
prin PCR

Diagnosticul indirect: nu este util pentru diagnosticul propriu-zis ci pentru studii

seroepidemiologice
Metode: ELISA sau RN, RFC cind se foloseasc criteriile pe doua probe de ser
(seroconversia sau dinamica semnificativă)

2
Diagnosticul de laborator al infecţiei cu HPV

Produs patologic: celule cervicale, biopsie col;

-screening: testul Papanicolau - identificarea celulelor anormale (ASCUS, ASCH, LSIL,
HSIL);
- identificarea prin PCR a tipurilor HPV cu risc oncogen înalt (genotipare tip specifica –
Linear Array Genotyping Test sau detectia simultana a genotipurilor HPV inalt oncogene,
fara diferentierea intre genotipuri – Hybrid Capture II)
- determinarea incarcaturii virale (Real Time PCR) – corelarea încărcăturii virale cu
gradul leziunii intraepiteliale.