COLORAŢIA GRAM Principiul metodei

Germenii GRAM (+)si GRAM (-) sunt coloraţi neselectiv de violetul de genţiană
(cristalulviolet).Adaugarea de iod formeză un complex de cristal voilet – iod in peretele celular
al bacteriilor.Decolorantul, aflat in componenţa setului, extrage lipidele din peretele celular al
germenilor GRAM (-). În acest fel, creste poroyitatea peretelui, ceea ce permite migraîia
colorantuluiiar bacteriile devin incolore.Germenii GRAM(+) sunt deshidrataţi, producându-se o
reducere a porozitaţii pereteluicelular. Drept urmare, complexul colorant este prins ca într-o
„capcană” şi bacteriile rămân colorate.Recolorarea germenilor GRAM (-) se efectuează cu
fucsină.
Compunerea setului:
Soluţie violet de genţiană 1 x 250 ml
Soluţie Lugol 1 x 250 ml
Soluţie decolorare 2 x 250 ml
Soluţie de fuxină 1 x 250 ml
Prelevarea şi pregatirea probelor pentru analiză
Coloniile bacteriene se recoltează cu o ansă sterilă, se suspendă într-o picătură de apă distilatăşi
se etalează pe lamă.Probele de lichide se întind direct pe lame degresate, cu ajutorul unei pipete
Pasteur.Probele de paste,creme, geluri etc se etalează direct pe lame cu ajutorul unor spatule
sterile.
Fixarea frotiurilor:
Fixarea se efectuează prin trecerea lamei prin flacără, cu atenţie, evitându-se încălzireaexcesivă
care are efecte negative la colorare.
Pregătirea setului pentru lucru:
Soluţia de fucsină se diluează de 10 ori. Pentru aceasta se ia 1 ml.soluţie de fucsină şi seamestecă
cu 9 ml. apă distilată. Soluţia diluată este valabila 12 ore.Pentru lucrul soluţia de decolorare se
transferă în flacoane cu gâtul suficient de larg pentru a permite accesul lamelor.
Tehnica de lucru:
Frotiul fixat se imerseză un minut în soluţia de violet de genţiană şi se spală bine cu apădistilată
Se imersează 2 minute în soluţia de Lugol şi se spală cu apă distilatăSe imersează în soluţia
de decolorare ori de câte ori este necesar, pană ce „norii”de substanţecolorate nu se mai degajă
din părţile groase ale frotiului

Se imersează un minut în soluţia de fucsină diluată şi se spală cu apă distilată Se scurge excesul
de lichid prin pamponare cu hârtie de filtruSe examinează la microscop cu obiectivul de imersie.
Intrepretarea rezultatelor:
Germenii GRAM (+) apar coloraţi in purpuriu-violet, iar cei GRAM (-) se coloreazş
in portocaliu – roz sau roşu.
Erori posibile:
Tratamentul pacienţilor cu medicamente antibacteriene poate face ca germenii GRAM (+)
săapară ca GRAM (-). Rezultatele pot fi afectate şi de folosirea unor culturi bacteriene vechi
saude încălzirea excesivă a frotiului la flacără.