Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
6
1.1. SĂNĂTATEA ŞI SECURITATEA ÎN MUNCĂ
8
În cazul substanţelor necunoscute se va proceda la identificarea
acestora, sau la distrugere. Se va evita cu desăvârşire controlul
organoleptic (gustativ, olfactiv).
9
aşează pe reagenţar (raftul destinat reactivilor în laborator) aproape
de mesa de laborator la care se va lucra.
reagenţii necesari lucrărilor experimentale se păstrează în sticle
speciale cu dop rodat (şlefuit), iar în cazul soluţiilor alcaline cu dop
de cauciuc. Reagenţii sensibili la lumină se păstrează în sticle de
laborator brune şi la întuneric. În timpul activităţii din laborator dacă
se folosesc mai mulţi reactivi trebuie să avem în vedere închiderea
sticlelor imediat după utilizare cu dopul propriu (a nu se schimba
dopurile sticlelor de substanţă sau reactivi). În timpul lucrărilor
dopul sticlelor de reactivi se va aşeza pe masa de laborator cu partea
care vine în contact indirect cu substanţa, pentru a proteja
suprafeţele de lucru.
transvazarea reagenţilor din sticle se face pe
partea opusă etichetei, astfel încât eticheta să nu
se degradeze prin prelingerea conţinutului din
sticlă. În cazul deversării accidentale a unui
reagent acesta trebuie imediat îndepărtat şi locul
respectiv curăţat (dacă este necesar neutralizat)
pentru a nu rămâne urme de substanţe chimice.
După întrebuinţare sticlele cu substanţe se aşează pe reagenţar la
locul în care au fost găsite la începerea activităţii.
substanţele solide din sticlele originale se scot doar cu spatule sau
instrumente curate. Reagenţii aflaţi în soluţie se transvazează cu
ajutorul pipetelor curate sau prin turnare. Se are în vedere ca odată
ce aceştia au fost transvazaţi în alte recipiente sau sticle de reactivi
să nu mai fie reintroduşi în sticla originală. Astfel se evită
contaminarea şi denaturarea compoziţiei substanţei sau reactivului
original.
pipetele curate se aşează pe stative speciale verticale cu vârful în jos,
iar cel folosite vor fi colectate în locuri şi recipiente speciale.
10
1.4. NORME PRIVIND MANIPULAREA ŞI UTILIZAREA
APARATURII DIN LABORATORUL DE CHIMIE ŞI BIOCHIMIE
11
Nu se va trage de cabluri, nu se vor folosi prize şi ştechere defecte
pentru a nu produce scurt circuite, incendii sau chiar electrocutări.
12
În cursul manipulării sau a operaţiunilor cu produse biologice nu se
consumă alimente băuturi şi nu se fumează (măsuri valabile şi în cursul
lucrărilor cu substanţe toxice).
După operaţiunile cu produse biologice se vor curăţi mesele de lucru, se
vor dezinfecta cu soluţii special destinate în acest scop şi se vor spăla
bine mâinile.
13
Se va evita blocarea spaţiilor de acces şi de lucru, a uşilor şi ferestrelor
cu mobilier, aparatură, ghivece de flori, panouri, afişe, ş.a.
Este interzis fumatul şi accesul cu materiale inflamabile în laborator.
Lucrările cu produse inflamabile se vor executa sub nişe cu ventilaţie
bună, spre a se evita formarea unor amestecuri explozive şi degajarea
vaporilor de substanţe toxice în laborator.
Buteliile sau tuburile cu gaze comprimate nu vor fi aşezate lângă surse
de căldură sau lângă calorifer.
Becurile de gaze nu se ţin aprinse decât pe durata utilizării pentru
lucrarea de laborator. Starea robinetelor de gaz se verifică periodic prin
pensulare cu soluţie de săpun.
Se va evita montarea instalaţiilor de laborator improvizate sau din
materiale care pot reacţiona cu substanţe utilizate, generând astfel
produse explozive.
În cazul deversării accidentale a unor lichide combustibile sau volatile în
incinta laboratorului se va proceda la: stingerea becurilor de gaz şi
întreruperea surselor electrice; închiderea uşilor şi deschiderea
ferestrelor; ştergerea cu cârpe a suprafeţelor pe care se află lichidul
vărsat; reluarea activităţii după eliminarea completă a gazelor.
După începerea activităţii de laborator se va proceda la: deconectarea
instalaţiilor electrice de la tensiune (exceptând frigiderele şi termostatele
destinate păstrării diferitelor materiale de laborator); se verifică
închiderea robinetelor de la reţeaua de distribuţie a gazelor; se curăţă
locul de muncă de resturile de materiale inflamabile; se sting becurile de
iluminat.
În cazul declanşării unui incendiu se va proceda la localizarea şi stingerea
acestuia de către echipa desemnată în acest scop din personalul laboratorului
ajutat de persoanele prezente în laborator. Echipa desemnată pentru
intervenţii, formată din personalul laboratorului, va acţiona în conformitate
cu sarcinile pe care le are, în vederea alarmării, localizării şi stingerii
focului.
14
Pentru stingerea focului produs de substanţe inflamabile se va acţiona cu
extinctoare şi se va acoperi suprafaţa incendiată cu nisip. Se va evita
utilizarea apei deoarece prin disociere termină a acesteia se formează
oxigen şi hidrogen (gaze combustibile).
Acţiunile se vor desfăşura dinamic, urmărindu-se circumscrierea locului
incendiului şi stingerea acestuia. În cazul în care se constată că incendiul
se propagă şi riscul de extindere sau de explozie este mare, se va lua
legătura imediată cu serviciile de intervenţie ale unităţilor de pompieri
prin apelarea telefonică a serviciului de urgenţe 112.
16
execută sub nişe. În cursul acestor timpi operatori ventilatorul nişei este
pus în funcţiune.
În cazul prelevării şi dozării lichidelor caustice sau otrăvitoare, pipetarea
se face prin folosirea unei pompe aspiratoare, sau a unei pare de cauciuc
la pipetă. În laboratoarele de analize de chimie şi biochimie clinică se
utilizează pipete automate.
Din considerente de igienă şi securitate personală este interzisă utilizarea
18
19
CAPITOLUL II
21
gri – conţine fluorură sau oxalat; fluorura acţionează pentru
inactivarea enzimelor asupra substratelor astfel că acestea din
urmă nu vor fi consumate în urma stocării probelor
albastru deschis – conţine citrat şi se utilizează pentru
determinări ce necesită o coagulare ulterioară.
albastru închis – conţine heparinat de sodiu dar poate conţine
şi EDTA ca aditiv – se utilizează pentru analiza
microelementelor din sânge
roz – similar cu vacutainerele mov, conţin EDTA şi sunt
utilizate pentru stocarea sângelui
roşu (sticlă) – nu conţin aditivi şi se utilizează în special
pentru determinarea parametrilor biochimici serici, teste
serologice, dar şi determinarea anticorpilor şi a prezenţei unor
medicamente
galben – conţin ACD (acid- citrat- dextroză) şi se utilizează
pentru studii de fenotip, teste de paternitate, etc. ( "BD
Vacutainer® Venous Blood Collection - Tube Guide", 2007-
05-30)
Eprubetele pentru recoltare se vor alege în funcţie de parametrii care
vor fi determinaţi.
Coagularea sângelui este un proces fizico-chimic complex, care se
datorează unui număr relativ mare de factori: în momentul unei hemoragii
se produce activarea unei enzime numită protrombina sau trombogen
(inactivă în sângele circulant), care produce coagularea.
Protrombina inactivă se transformă în trombină activă sub influenţa
ionilor de calciu. Trombina acţionează asupra fibrinogenului şi îl transformă
în fibrină insolubilă. În interiorul vaselor sangvine, sângele nu coagulează
deoarece nu se produce trombina, activarea protrombinei fiind inhibată de
antitrombina. În momentul unei răniri, din ţesuturile lezate şi din plachetele
sanguine, se eliberează trombochinaza care se combină cu antitrombina.
Schematic procesul are loc în felul următor:
22
Protrombina + Trombochinaza + Calciu = Trombina
Trombina +Fibrinogen =Fibrina
În procesul coagulării sângele formează un cheag care apoi se retractă
punând în libertate un lichid gălbui care este serul. Acest fenomen poartă
numele de sinereză. Cheagul este format dintr-o reţea de fibrile care conţin
eritrocite, leucocite şi trombocite. Fibrilele sunt formate din fibrina rezultată
prin trecerea fibrinogenului din plasmă, din stare solubilă (hidrosol) în stare
insolubilă (hidrogel).
Plasma conţine fibrinogen şi poate coagula cu formarea de cheag de
fibrină. Prin centrifugare sângele tratat cu anticoagulant, depune elementele
figurate, iar soluţia obţinută este plasma.
Anticoagulanţii sunt substanţe care împiedică coagularea sângelui,
prin intervenţia acestora, într-o fază sau alta a procesului de coagulare.
Astfel, pentru inactivarea trombochinazei se poate întrebuinţa hirudina,
heparina sau germanina.
Pentru precipitarea ionilor de calciu se utilizează oxalatul de potasiu,
fluorura de sodiu sau citratul de sodiu.
Pentru împiedicarea coagulării fibrinogenului se folosesc bile de sticlă
care se agită în recipientul de recoltare.
Anticoagulantul folosit diferă după tipul analizei care se execută.
EDTA-ul (sarea disodică a acidului etilen diaminotetraacetic)
complexează ionii de calciu. În acest sens în eprubeta de recoltare şi
colectare a sângelui se utilizează 1mg EDTA/ 1cm3 sânge recoltat. Se
utilizează în special pentru determinarea hemogramei.
Fluorura de sodiu se foloseşte mai ales la recoltarea sângelui pentru
determinarea glicemiei şi a ureei utilizându-se în proporţie de 10 mg pentru
1cm3 sânge. Fluorura de sodiu precipită calciul şi inhibă formarea de
leucocite, blochează atât coagularea cât şi glicoliza.
23
Oxalatul de potasiu se foloseşte la recoltarea sângelui pentru
măsurarea pH-ului, rezervei alcaline şi dozarea clorului plasmatic şi
globular, în proporţie de 20mg la 10cm3 de sânge.
Oxalatul de potasiu se purifică prin recristalizare. Sarea recristalizată
se pulverizează bine şi se prepară o soluţie 20% care se neutralizează la
pH=7,4+0,2 cu soluţie de hidroxid de potasiu sau acid oxalic în prezenţa
roşului de fenol 0,02 % ca indicator.
Din această soluţie neutralizată se introduc 0,1cm3 (20mg) în eprubete
de recoltare şi se evaporă la etuvă la 105-1100C. Oxalatul de potasiu rămas
în eprubetă este suficient pentru a recolta 10cm3 sânge.
Citratul de sodiu: Acţionează în mod similar cu oxalatul de potasiu.
Se utilizează 5mg citrat pentru 1cm3 sânge recoltat, în special pentru
determinarea vitezei de sedimentare a hematiilor (VSH).
Heparina şi hirudina sunt anticoagulanţi ideali pentru că nu
modifică starea fiziologică a sângelui. Se folosesc în cantitate de 75 unităţi /
1cm3 de sânge (0.5cm3 heparină/1cm3 sânge), mai ales la recoltarea sângelui
pentru dozarea constituenţilor anorganici, pentru a nu introduce elemente
minerale care pot modifica repartizarea elementelor anorganice între
elementele figurate şi plasmă. Soluţia de heparină se evaporă la 100° C
direct în eprubetele de recoltare.
Serul sanguin este sângele lipsit de fibrinogen şi de elemente figurate.
Separarea serului. Pentru a obţine 5cm3 ser sunt necesari 10cm3
sânge. În timpul iernii retracţia cheagului este încetinită. Pentru a obţine
serul, sângele se păstrează imediat după recoltare la temperatura de 35-
370C până la formarea cheagului. Partea superioară a cheagului aderă la
pereţii vasului de recoltare, de care se detaşează cu o baghetă de sticlă şi apoi
se introduce în termostat la 370C unde are loc retractarea cheagului şi
separarea unui lichid galben pal care este serul.
După retracţia cheagului se decantează lichidul într-o eprubetă de
centrifugă, ce se echilibrează la balanţă şi apoi se centrifughează timp de 5
minute cu 1500 turaţii/ minut. Centrifuga trebuie pornită încetul cu încetul
24
pentru a evita hemoliza hematiilor (care însoţesc inevitabil serul) atunci când
viteza de centrifugare este prea mare, cât şi pentru a evita uzura centrifugii.
Serul obţinut trebuie să fie galben pal, suspensia de hematii
nehemolizate prin centrifugare se depune. În anumite condiţii aspectul
serului este diferit şi anume:
Opalescent - în cazul când conţine particule de grăsime provenite
în mod normal într-un regim prea bogat în grăsimi. Opalescenţa apare în
cazuri patologice şi nefroza lipoidică. În acest caz serul se poate clarifica
prin agitare cu un amestec de alcool şi eter.
Culoarea galben-brună se poate datora în mod normal unei
alimentaţii vegetariene, fiind însoţită şi de o pigmentare a tegumentelor, iar
în stare patologică această culoare indică faptul că serul conţine exces de
bilirubină. La aer, serul primeşte o culoare verzuie datorită faptului că
bilirubina se transformă în biliverdină.
Culoarea roz până la roşu intens se datorează hemolizei. Hemoliza
serului se produce de obicei dintr-o greşeală de tehnică de recoltare a
sângelui (folosirea umedă a acului seringii şi vaselor de recoltare).
Presiunea osmotică a plasmei prin diluare devine mai mică decât a
eritrocitelor, acestea absorb apa, devin turgescente şi eliberează
hemoglobina, fenomen cunoscut sub denumirea de hemoliză.
Separarea plasmei. Se introduce într-o eprubetă cantitatea indicată
mai sus din anticoagulantul ales, potrivit cu scopul analizei ce se
efectuează, se recoltează sângele peste anticoagulant şi se agită timp de 30
secunde. Prin centrifugarea sângelui necoagulabil timp de 5-10 minute la
1500 turaţii/minut se depun elementele figurate pe fundul eprubetei şi se
obţine plasma.
Plasma este un lichid vâscos de culoare galbenă cu reacţie alcalină
având un conţinut de 78-80% proteine. Plasma astfel separată se păstrează
la temperatura de 7-100C timp de 10-12 zile.
25
Pentru împiedicarea coagulării fibrinogenului se folosesc bile de
sticlă, care se agită împreună cu sângele în recipientul de recoltare obţinând
astfel sângele defibrinat.
26
2.2. PRELEVAREA PROBELOR DE URINĂ
27
Prelevarea din bidoane presupune formarea unei probe medii recoltată
randomizat din 10% din bidoanele care constituie lotul.
Din proba medie bine omogenizată se recoltează 500 ml pentru
examen de laborator.
Se recoltează din ambalaje câte 2-3 unităţi din fiecare lot. Probele
recoltate trebuie să ajungă la laborator în maximum 4 ore de la recoltare,
transportul lor făcându-se în condiţii de refrigerare.
După recoltare, fiecare probă se va individualiza prin etichetare, se
ambalează separat în asa fel încât să nu se deterioreze în timpul
transportului. Probele trebuie transportate la laborator în timp util, în asa fel
încât acestea să îşi păstreze nemodificaţi parametrii de integritate.
Observaţii:
31
32
CAPITOLUL III
Indicatorii
Indicatorii sunt substanţe care adăugate în mediul de reacţie indică
sfârşitul acestei reacţii (vezi anexa 1).
După tipurile de reacţii care stau la baza metodelor titrimetrice,
indicatorii se clasifică în:
indicatori de neutralizare
indicatori de oxido-reducere
indicatori de precipitare
indicatori de complexometrie
În unele cazuri când apariţia unei culori se datoreşte excesului de
reactivi care este el însuşi o substanţă colorată (cum este în cazul titrărilor
cu permanganat de potasiu), adăugarea de indicatori nu mai este necesară.
Indicatorii universali sunt amestecuri de indicatori care virează fiecare
în domenii diferite de pH.
Alegerea indicatorilor în reacţiile de neutralizare se face în aşa fel
încât punctul de echivalenţă al reacţiei să fie inclus în domeniul de viraj al
indicatorului.
35
3.1.2. Aparatura şi ustensilele folosite în analiza chimică
volumetrică
36
Pipete gradate - au formă cilindrică iar volumul pentru care sunt
marcate este împărţit în ml şi zecimi de ml. Au capacităţi între 1 - 25 cm3.
Micropipete - au volumul împărţit în sutimi de cm3 şi au capacităţi de
0,01 - 0,02 cm3.
Pipete automate - funcţionează pe principiul unei pompe de aspiraţie
cu piston, ele fiind calibrate pentru un volum fix sau reglabil.
Pipetele se folosesc la măsurarea precisă a unor volume mici de
lichide. Pentru măsurarea corectă a unui volum de soluţie se procedează
astfel: se introduce vârful pipetei în soluţie şi se aspiră cu gura sau cu para de
cauciuc, până când nivelul lichidului trece puţin peste marcă, apoi se închide
pipeta cu degetul arătător. Se scoate pipeta din lichid, se şterge vârful pipetei
şi apoi ridicând uşor degetul se lasă să se scurgă din lichid până ce meniscul
acestuia este tangent la gradaţia stabilită, apoi se trece în vasul de reacţie
volumul stabilit.
Biuretele sunt tuburi de sticlă gradate, prevăzute la partea inferioară cu
dispozitive pentru oprirea sau reglarea scurgerii lichidului (robinet sau tub de
cauciuc cu clemă Mohr). Biuretele au volume între 10 - 100 cm3, cu gradaţii
de 0,02 cm3 până la 0,2 cm3.
În biochimie se folosesc adesea biurete cu capacitatea de 1 - 5 cm3 şi
gradaţii de 0,01cm3 numite microbiurete. Biuretele se fixează în poziţie
verticală, pe stative de metal, cu ajutorul unor cleme cu mufă sau stative
speciale. Citirea volumelor la biurete, ca de altfel la toate vasele de măsurat
volume, se face privind cu ochiul perpendicular pe biuretă, la înălţimea
coloanei de lichid, pentru evitarea erorii de paralaxă.
Biuretele cu robinet de sticlă se utilizează când se lucrează cu soluţii
de acizi sau oxidanţi, iar cele cu tub de cauciuc şi clemă când se folosesc
hidroxizi alcalini. După folosire biuretele se spală cu apă de la robinet şi
apoi cu apă distilată, iar pentru evitarea depunerii de praf se acoperă partea
superioară cu un pahar mic sau o fiolă de plastic.
37
38
39
3.2. SOLUŢII
Masa atomică este un număr relativ care arată de câte ori masa
atomului unui element este mai mare decât a 12-a parte din masa atomului
de carbon, luată ca unitate şi căreia i-a fost atribuită denumirea de 1 Dalton.
Atomul gram este cantitatea exprimată în grame dintr-un element
chimic, numeric egală cu masa atomică a elementului.
Masa moleculară a unui element chimic sau a unei combinaţii, este
un număr relativ care arată de câte ori masa moleculei acelui element sau
substanţă este mai mare decât a 12-a parte din masa atomului de carbon,
luată ca unitate. Masa moleculară se exprimă, de asemenea, în Daltoni.
Molecula gram (mol) este cantitatea de substanţă exprimată în grame
ce corespunde masei moleculare.
Echivalentul chimic (masă echivalentă) este un număr care arată
câte părţi masă dintr-un element sau compus chimic se combină, înlocuiesc
sau pun în libertate 1,008 părţi de hidrogen sau opt părţi de oxigen.
Echivalentul gram (val) este cantitatea de substanţă exprimată în
grame, care poate să înlocuiască sau să se combine cu 1,008 g hidrogen sau
cu 8 g de oxigen.
Echivalentul gram se calculează astfel:
Elemente: echivalent gram = atom gram/valenţă
Exemple:
Echivalentul gram al atomului de oxigen = 16/ 2 = 8 g O
Echivalentul gram al atomului de carbon = 12,01/4 = 3,0025 g C
Echivalentul gram se calculează diferit în funcţie de substanţa folosită.
În calculul echivalentului gram al substanţelor compuse trebuie să
se ţină seama şi de reacţia chimică la care participă:
Acizi - echivalentul gram = molecula gram a acidului (M) / numărul
de hidrogeni ionizabili.
40
Sau, altfel spus, echivalentul gram (Eg) pentru acizi se calculează ca
fiind raportul dintre masa moleculară a acidului şi numărul de protoni cedaţi
(respectiv numărul de H+ din formula moleculară a acidului).
Exemple:
Echivalentul gram al HCl = 36,465/1 = 36,465 g
Echivalentul gram al H2SO4 = 98,076/2 = 49,038 g
Echivalentul gram al CH3COOH ═ 60,03/1 ═ 60,03 g
M HCl
Eg HCl 36,5
1
M H 2 SO4 98
Eg H 2 SO4 49
2 2
M H 3 PO4 3 15 16 3 66
Eg H 3 PO4 22
3 3 3
M NaOH
Eg NaOH 40
1
41
M Ca (OH ) 2 54
Eg Ca (OH ) 2 27
2 2
M Al(OH )3 13 3 (16 1) 64
Eg Al(OH )3 21,33
3 3 3
M NaCl 23 35,5
Eg NaCl 58,5 Na11Cl11
11 1
M Na 2 SO4 23 2 32 16 4 142
Eg Na 2 SO4 71 Na 21 ( SO4 )12
1 2 1 2 2
M Al 2( SO4 )3 13 2 3 (32 16 4) 26 3 96
Eg Al 2( SO4 )3 52,33
3 2 6 6
42
Exemplu:
2KMn+7O4 +10Fe+2SO4 +8H2SO4 → 2Mn+2SO4 + 5Fe2+3(SO4)3+K2SO4 + 8H2O
M Cu 2 SO4 29 2 32 16 4 154
Eg Cu 2 SO4 77 Cu21 (SO4 )12
1 2 2 2
M CuSO4 29 32 16 4 125
Eg CuSO4 62,5 Cu12 ( SO4 )12
2 1 2 2
43
Soluţia este un amestec lichid omogen, format dintr-o substanţă
dispersată molecular sau ionic, numită solvit şi un mediu de dispersie sau
solvent.
Prepararea soluţiilor
Pentru a prepara soluţiile titrate se utilizează baloanele cotate.
Dacă prin cântărirea unei substanţe etalon se prepară o soluţie într-un
balon cotat la 200C şi temperatura de lucru este mai mică decât 200C, soluţia
va fi mai diluată, deoarece la 200C volumul ar fi mai mare; dacă se lucrează
la o temperatură mai ridicată decât 200C, soluţia va fi mai concentrată,
deoarece prin scăderea temperaturii la 200C, volumul soluţiei se va micşora.
Astfel, dacă se lucrează la o temperatură diferită de 200C, trebuie să se facă o
corecţie de volum.
La prepararea unei soluţii se cântăreşte cantitatea de substanţă uscată
sau se introduce un volum de lichid determinat, atunci când substanţa din
care se prepară soluţia este în stare lichidă, se introduce într-un balon cotat şi
se dizolvă substanţa în solventul corespunzător; solventul se adaugă treptat,
agitând conţinutul balonului, până ce semnul circular de pe gâtul balonului
devine tangent la meniscul lichidului; în cazul în care determinarea se face
la o temperatură diferită de 200C este necesară efectuarea corecţiei de volum
în funcţie de temperatura la care se lucrează .
Se omogenizează soluţia prin răsturnarea de câteva ori a
balonului, închis în prealabil cu dopul şlefuit.
44
Concentraţia procentuală - care reprezintă grame de substanţă
dizolvată în 100 cm3 soluţie(%). Soluţiile cu o astfel de concentraţie sunt
soluţii procentuale.
Exemplu : o soluţie de acid oxalic 1 % conţine 1 g de acid oxalic
dizolvat în 100 cm3 soluţie.
Astfel,
100 10
C% 5 g NaCl pur
200
45
Concentraţia de 10% ne spune că dacă în 100g soluţie NaOH avem
dizolvaţe 10g NaOH pur, în 500g soluţie NaOH 10% câte g de NaOH pur
avem, adică:
500 10
x 50 g NaOH pur
100
46
Problemă 1 – concentraţia molară (CM)
Să se calculeze ce concentraţie molară (CM) are un volum de 500ml de
soluţie acid clorhidric (HCl) în care se găsesc 35g HCl pur.
1 cm3 = 1 ml
1 L = 1000 ml = 1000 cm3
1000 x 35
CM = ------------------ = 70g HCl pur
500
1 70
x 1,92 moli HCl pur în 1 L solutie
36,5
47
Problemă 2 – concentraţia molară (CM)
Să se calculeze cantitatea de substanţă necesară preparării a 250cm3
soluţie MgCl2 de concentraţie 0,2M. Explicaţi cum se prepară soluţia.
1 cm3 = 1 ml
1 l = 1000 ml = 1000 cm3
0,25 0,2
x 0,05 moli MgCl2
1
0,05 83
x 4,15 g MgCl2 pur
1
48
după care se păstrează în sticle închise pentru a nu permite contaminarea şi
evaporarea soluţiei.
Volumul de soluţie necesar poate fi însă mai mare sau mai mic decât
1000 cm3.
49
Pentru a calcula cantitatea de substanţă necesară preparării unui
anumit volum de soluţie (v), de o anumită normalitate (N) se înmulţeşte
echivalentul gram, cu normalitatea şi cu volumul ( exprimat în litri):
G=ExNxv
Exemple:
pentru a prepara 300 cm3 de soluţie 0,5 N de H2SO4, se va calcula în
primul rând echivalentul gram al H2SO4 apoi se aplică regula de
mai sus:
N = 0.5
V = 0,300 l
G = 49,04 x 0,3 x 0,5 = 7,256 g
1 cm3 = 1 ml
1 l = 1000 ml = 1000 cm3
0,5 0,2
x 0,1 Eg MgCl2
1
0,1 41,5
x 4,15 g MgCl2 pur
1
51
0,5 0,1
X 0,05 Eg BaCl2
1
M BaCl2 4 35,5 2 75
Eg BaCl2 37,5
valenţa Ba nr atomilor de Ba 2 1 2
0,5 37,5
x 18,75 g BaCl2 pur
1
18,75 4
x 1 g Ba pur
75
? g BaSO4
MBaSO4 = 4 + 32 + 16 x 4 = 100
1 100
x 25 g BaSO4 pur
4
52
În reacţia a 500 ml soluţie BaCl2 0,1N cu H2SO4 se obţine o
cantitate de 25 g BaSO4 pur.
Observaţii:
53
54
3.2.3. Soluţii titrate. Factor şi normalitate
55
carbonatul de calciu şi sulfatul sau carbonatul de magneziu
- în complexometrie.
Întrucât puţine substanţe îndeplinesc aceste condiţii, în practică se
prepară soluţii de normalitate aproximativă, prin cântărirea unei cantităţi de
substanţă apropiată de aceea teoretic necesară. Titrul acestor soluţii se
numeşte titrul real şi se notează Tr .
În acest caz este necesară cunoaşterea factorului de normalitate
pentru trecerea de la un anumit volum, din soluţia de normalitate
aproximativă, la soluţia de normalitate exactă.
Pentru soluţia titrată de normalitate dată a unei substanţe între titrul
teoretic şi titrul real există următoarea relaţie:
Tr
F
Tt
56
V e= Vr xF
F1xV1 =V2xF2
unde:
F1, F2 = factorii de normalitate corespunzători soluţiilor utilizate la
titrare;
V1,V2 = volumele utilizate la titrare.
57
În colţurile de jos se notează diferenţa dintre concentraţia soluţiilor
iniţiale a % şi b % şi concentraţia c %, scăzând cifra cea mai mică din cea
mai mare de-a lungul diagonalelor dreptunghiului.
Diferenţele obţinute reprezintă volume de soluţii, în grame, ce trebuie
amestecate pentru a obţine soluţia de concentraţie dorită.
Exemple :
1. Să se prepară o soluţie de H2SO4 cu densitatea 1,24 de 32,28 % din
două soluţii de H2SO4, una cu densitatea de 1,84 adică 95,6% şi alta cu
densitatea de 1,15 adică 20,91 %.
În rezolvare se aplică regula amestecurilor :
11,37
6,179 parti volum H 2 SO4 95,60 %
1,84
63,32
55,60 parti volum H 2 SO4 20,91 %
1,15
55,060 1000
x 899 ,1 cm 3 H 2 SO4 20,91 %
61,239
Deci: 100,9 cm3 H2SO4 95,6 % + 899,1 cm3 H2SO4 formează 1000
cm3 soluţie 32,28 % H2SO4
59
8,403 1000
x 235 ,8 cm 3 HCl
35,633
Deci, în balonul cotat de 1000 cm3 se introduc 235,8 cm3 HCl 37,23 %
măsuraţi cu cilindrul gradat, se amestecă cu apă deionizată şi se completează
la semn după răcire.
Observaţii:
60
61
62
63
3.3.METODE VOLUMETRICE BAZATE PE REACŢII DE
NEUTRALIZARE
3.3.1. Alcalimetrie
Principiul metodei:
La baza acestei metode stă reacţia de neutralizare între acidul
oxalic şi hidroxidul de sodiu:
COOH COONa
+ 2 NaOH + 2 H2O
COOH COONa
64
Reactivi
Hidroxid de sodiu NaOH p.a.
Acid oxalic H2C2O4 x H2O p.a.
Fenolftaleină ( soluţie alcoolică 1%)
Modul de lucru
se pipetează 10 cm3 H2C2O4~ 0,1 n şi se introduc într-o fiolă
conică;
se spală peretele fiolei conice cu apă distilată;
se adaugă 2-3 picături de fenolftaleină;
Calcul:
Ţinând cont de proprietatea soluţiilor de aceeaşi normalitate se poate
scrie:
V NaOH ~ 0,1n cm3 x F NaOH ~ 0,1n = 10 cm3 H2C2O4 x F H2C2O4~ 0.1 n
H2C2O4 este o titrosubstanţă , deci F H2C2O4~ 0.1 n = 1,000
rezultă că :
65
10 cm3 H2C2O4
F NaOH ~ 0,1n =
V NaOH ~ 0,1n cm3
din relaţia F = Tr / Tt rezultă
T real NaOH ~ 0,1n = T teoretic NaOH ~ 0,1n x F NaOH ~ 0,1n
Observaţii:
66
3.3.2. Acidimetria
Principiul metodei:
Metoda se bazează pe reacţia de neutralizare între soluţia de
H2SO4~0,1n şi soluţia de NaOH ~ 0,1n de normalitate cunoscută.
H2SO4 + 2 NaOH = Na2SO4 + H2O
Reactivi
Hidroxid de sodiu NaOH ~ 0,1n cu factor cunoscut
Acid sulfuric H2SO4~0,1 n (într-un balon cotat de 1000 cm3, se introduc
cca. 400 cm3 apă distilată, peste care se adaugă cu atenţie 2,8 cm3 H2SO4
concentrat, cu densitatea = 1,84 g/cm3 măsurat cu cilindrul gradat. Se
agită conţinutul balonului şi se completează la semn cu apă distilată,
după răcire) ;
Indicator Roşu de metil (0,1 g roşu de metil în 100 cm3 apă distilată).
Modul de lucru
se pipetează 10 cm3 soluţie de NaOH ~ 0,1 n cu factor
cunoscut şi se introduc într-o fiolă conică ;
se spală peretele interior al fiolei cu apă distilată, pentru ca
Calcul:
V H2SO4 ~ 0,1 n ml x FH2SO4~ 0,1n = 10 cm3 NaOH ~ 0,1 n x F NaOH ~ 0,1 n
F H2SO4 ~ 0,1 n = 10 cm3 NaOH ~ 0,1 n x F NaOH ~ 0,1n /V H2SO4 ~ 0,1n cm3
Treal H2SO4~ 0,1n = T teoretic H2SO4~ 0,1n x F H2SO4~ 0,1n
Observaţii:
68
3.3.2.2. Dozarea acidului acetic
Principiul metodei:
La baza dozării stă reacţia de neutralizare a acidului acetic cu o bază:
CH3COOH +NaOH = CH3 COONa + H2O
Reactivi
Acid acetic CH3COOH
Fenolftaleină - sol 1%
Hidroxid de sodiu NaOH sol ~0,1N cu Factor cunoscut
Modul de lucru
se pipetează 10 cm3 din soluţia de acid acetic de concentraţie
necunoscută şi se introduce într-o fiolă conică;
se spală peretele interior al fiolei cu puţină apă distilată;
se adaugă 2-3 picături de fenolftaleină;
se titrează cu o soluţie de NaOH ~ 0,1n cu factor cunoscut până la
apariţia culorii roz, persistentă 30 secunde;
se notează cu “a”cm3 Na OH ~ 0,1n utilizaţi la titrare .
Calcul:
Ştiind că 1val NaOH (40g) neutralizează 1 val CH3 COOH (60g) se
poate calcula cantitatea de acid acetic neutralizată de 1 cm3 NaOH~ 0,1n
de normalitate exactă, care conţine o cantitate de NaOH egală cu titrul
teoretic (0,004 g)
40 g NaOH neutralizează …………..60 g CH3COOH
0,004 g NaOH ……………………….X
X = 0,006 g CH3COOH
69
Pentru a calcula câte grame de CH3COOH au fost neutralizate de
volumul de soluţie de NaOH~0,1n utilizat la titrare, este necesar în primul
rând să se calculeze volumul corespunzător de NaOH de normalitate exactă,
prin înmulţire cu factorul de normalitate .
Deci :
a cm3 NaOH ~ 0,1n x F NaOH~ 0,1n reprezintă cm3 de normalitate
exactă.
Dacă 1 cm3 NaOH de normalitate exactă neutralizează 0,006g
CH3COOH, volumul utilizat la titrare va neutraliza
a cm3 NaOH ~ 0,1n x F NaOH ~ 0,1n x 0,006 g CH3COOH
Această cantitate de acid acetic a fost neutralizată dintr-un volum de
10cm soluţie de acid acetic.
3
Observaţii:
70
3.4. METODE VOLUMETRICE BAZATE PE
REACŢII DE OXIDO-REDUCERE
3.4.1. Manganometria
Principiul metodei:
Reacţia care stă la baza determinării, se poate exprima prin ecuaţia :
5 H2C2O4 + 2 KMnO4+ 3H2SO4 = K2SO4 + 2 MnSO4+ 10 CO2 + 8H2O
În reacţia permanganatului de potasiu cu acidul sulfuric este pus în
libertate oxigenul.
2 KMnO4 + 3 H2SO4 = 2 MnSO4 + 3 H2O + 5 O
Acesta va reacţiona cu acidul oxalic conform ecuaţiei:
(Acidul oxalic = HOOC – COOH)
Mn +7 + 5 e- Mn2+ (reducere) / x2
COO-
- 2 e- 2 CO2 (oxidare) / x 5
COO-
Reactivi
Soluţie de permanganat de potasiu – KMnO4 ~ 0,1 n ( se dizolvă 3,2 g
KMnO4 în apă distilată şi se aduce la semn, la un volum de 1000
cm3;după 8-10 zile se filtrează şi se determină factorul)
72
Acid oxalic – H2C2O4 x 2 H2O cristale;
Acid sulfuric – H2SO4 4 n ( 112 cm3 acid sulfuric conc. ; d = 1,84 se
adaugă treptat în cca 400 cm3 apă distilată, iar după răcire se
completează până la 1000 cm3.
Modul de lucru
se pipetează 10 cm3 de acid oxalic 0,1n într-o fiolă conică ;
se spală peretele interior al fiolei cu apă distilată ;
se adaugă 15 cm3 acid sulfuric 4n ;
se încălzeşte conţinutul fiolei la 70 - 800 C
se titrează cu soluţie de KMnO4 ~ 0,1n , până la apariţia coloraţiei slab
roz, persistentă 1 minut ;
se notează cu V volumul de KMnO4 ~ 0,1 n consumat.
Calcul:
10 cm 3 soluţie de H2C2O4 0,1n conţine 0,063 g substanţă. Un
echivalent gram de H2C2H4 (63,034), reacţionează cu un echivalent gram de
KMnO4 (31,606).
Dacă 63,034 g H2C2O4 x H2O ………..31,060 g KMnO4
atunci a g H2C2O4 x H2O ………………V cm3KMnO4 x T real
a x 31,606
T KMnO4 o,1n =
63,034 x V
FKMnO4 = Treal / T teoretic
unde a = grame de acid oxalic cântărite.
Observaţii:
73
74
3.4.2. Iodometria
(1) I2 + 2 e - 2 I-
(2) 2I- - 2e- I2
Principiul metodei:
75
Evoluţia reacţiei este în funcţie de pH-ul mediului. În mediul alcalin
reacţia decurge cu formarea de hipoiodit şi iodat şi oxidarea tiosulfatului la
sulfat:
Reactivi
Soluţie de iod ~ 0,1n. Se cântăresc la balanţa analitică 12,692 g iod
resublimat, se introduce în balon cotat 1 dm3. Se dizolvă într-o soluţie
de KI (25g KI în 35 cm3 apă distilată). După dizolvare se completează la
semn cu apă distilată;
Soluţia de tiosulfat de sodiu Na2S2O3 0,1N. Se cântăresc cu precizie
24,82 g de tiosulfat de sodiu, se introduc în balon cotat de 1 dm3. Se
dizolvă în apă distilată şi se completează la semn cu apă distilată
Amidon 0,2%. Se amestecă 2g amidon solubil cu 10 mg HgI2 şi se
adaugă puţină apă distilată amestecând pentru a obţine un amestec
omogen. Se aduce la volum de 1000 cm3 cu apă distilată.
Modul de lucru
se pipetează 10 cm3 soluţie de iod ~ 0,1n (V1) care se diluează cu
aproximativ 50 cm3 apă distilată;
76
se titrează cu soluţie de Na2S2O3 ~ 0,1 n cu factor cunoscut (F2) până la
culoarea galben pai;
se adaugă 1 cm3 soluţie de 0,2% amidon, cu rol de indicator;
se continuă titrarea până când soluţia de culoare albastră se
decolorează
se notează cu V2 volumul soluţiei de tiosulfat de sodiu 0,1n în cm3,
folosit la titrare.
Calcul:
Se aplică proprietatea echivalenţei soluţiilor de aceeaşi normalitate:
V1 x F I2~ 0,1 n = F Na2S2O3~ 0,1n x V2
V2 x F Na2S2O3~ 0,1n
F I2~ 0,1n =
V1
TrI2~ 0,1n = F I2~ 0,1n x Tt = F I2~ 0,1n x 0,012692
Observaţii:
77
78
3.5. METODE VOLUMETRICE BAZATE PE REACŢII
CU FORMARE DE COMPLECŞI
(COMPLEXOMETRIA SAU CHELATOMETRIA)
79
3.5.1. Determinarea titrului şi factorului unei soluţii de complexon III
Principiul metodei:
Stabilirea titrului unei soluţii de complexon se face folosind drept
titrosubstanţe săruri ale unor ioni metalici, cu care complexonul dă un
complexonat stabil. Cele mai utilizate sunt : CaCO3, MgSO4 x 7 H2O, ZnO,
Cu, Zn, Bi etc.
Deoarece în reacţie rezultă ioni de hidrogen, care duc la micşorarea
stabilităţii complexonatului şi poate influenţa asupra culorii indicatorului
prin modificarea pH-ului, titrările se execută în soluţii tampon.
Reacţia de bază este următoarea:
O Me 2+ O
Reactivi
soluţie de complexon III. Se cântăresc 9,34 g N2H2Y x 2 H2O, se
introduc în balon cotat de 1000 cm3, se dizolvă în apă distilată şi se
complectează la semn cu apă distilată;
soluţie de hidroxid de sodiu NaOH 1% ;
soluţie tampon clorură de amoniu şi amoniac – NH4Cl + NH3. Se
cântăresc 70 g NH4Cl, se introduc în balon cotat de 1000 cm3 , se adaugă
80
570 cm3 soluţie NH3 cu d = 0,90 şi se completează la cotă cu apă
distilată;
amestec eriocrom negru T p.a. + NaCl p.a. (în raport 1:500);
se cântăresc 6,162 g sulfat de magneziu heptahidratat MgSO4 x 7 H2O
(înainte de întrebuinţare se păstrează în exicator timp de 24 ore), se
introduc în balon cotat de 1000 cm3, se dizolvă în apă distilată şi se
completează la semn cu apă distilată;
Modul de lucru
se pipetează 10 cm3 soluţie MgSO4 0,05n într-o fiolă conică;
se adaugă soluţia de NaOH până la pH = 7;
se adaugă soluţie tampon NH4Cl + NH3 până la pH = 10, pH -ul se
controlează cu hârtia indicatoare;
se adaugă un vârf de spatulă de amestec eriocrom negru T + NaCl ( în
proporţie de 1:500);
se titrează cu soluţie de complexon III 0,05 n până la virajul culorii de la
roşu la albastru;
se notează volumul soluţiei de complexon III consumat la titrare cu V2.
Calcul:
Având în vedere proprietatea soluţiilor de aceeaşi normalitate putem scrie:
V 2 cm3 x F complexon ~ 0,05n = 10 cm3 MgSO4 0.05n x F MgSO4 0.05n
MgSO4 este o titrosubstanţă , deci F MgSO4 0.05n = 1,000
rezultă că :
10 cm3 MgSO4 0.05n
F complexon ~ 0,05n =
V 2 cm3
din relaţia F = Tr / Tt rezultă
T real complexon ~ 0,05n = T teoretic complexon ~ 0,05n x F complexon ~ 0,05n
81
1 Eg complexon III = 186,2g
T teoretic complexon ~ 0,05n = 186,2 x 0,05 = 0.009325 g/cm3
T real complexon ~ 0,05n = 0,009325g/cm3 x F complexon ~ 0,05n
Observaţii:
82
83
84
CAPITOLUL IV
[H+]
10pH
85
În lichidele biologice pH-ul are valori relativ constante, care pot însă
varia între limite strânse, de exemplu:
în sânge pH = 7,3 - 7,5 media fiind de 7,36
în stomac pH = 1,5- 2,5
în intestin pH= 7,8 - 8,7
În cazuri patologice se pot produce modificări ale valorilor normale
ale pH-ului. Astfel, în sânge scăderea pH-ului sub limitele normale se
numeşte acidoză (în caz de diabet, de acumulare de corpi cetonici sau acid
lactic), iar creşterea pH-ului sanguin peste limitele normale se numeşte
alcaloză.
Determinarea pH-ului se poate face prin două metode: colorimetrice şi
potenţiometrice.
Principiul metodei:
Determinarea pH-ului se bazează pe proprietatea indicatorilor de a-şi
modifica culoarea în funcţie de concentraţia ionilor de hidrogen. Hârtia
indicatoare de pH este impregnată cu diferiţi indicatori (indicatori
universali). Este o metodă colorimetrică.
Hârtia indicatoare de pH se prezintă fie sub forma unor carnete sau
pliante, fie sub forma unor discuri închise într-o cutie de material plastic pe
al cărei capac sunt indicate nuanţele de culori etalon corespunzătoare
diferitelor valori de pH.
86
Modul de lucru
Dintr-o bandă de hârtie indicatoare de pH se taie cu o foarfecă mai
multe porţiuni mici. Cu o pensetă se ia o bandă şi se umectează în soluţia a
cărui pH vrem să-l determinăm. Banda se va colora şi apoi se compară
culoarea benzii cu culoarea de pe scala etalon de culori. Identitatea de
culoare înseamnă identitatea de pH.
Principiul metodei:
Determinarea pH-ului pe cale potenţiometrică este o metodă
electrochimică şi se bazează pe măsurarea diferenţei de potenţial electric
care se stabileşte între doi electrozi introduşi în soluţia de analizat. Unul
dintre electrozi, cel negativ, este electrodul indicator, cel mai utilizat fiind
electrodul de sticlă sau de măsură (figura 2).
87
descărcarea pilei galvanice formată din cei doi electrozi, în timpul
măsurării.
Modul de lucru
Se spală electrozii în paharul Berzelius cu apă distilată şi se clăteşte cu
soluţie tampon de etalonare cu pH cunoscut.
Electrozii se introduc într-o soluţie tampon cu pH cunoscut. Cu un
termometru se măsoară temperatura soluţiei. Butonul compensator de
temperatură se aduce la valoarea temperaturii de lucru.
Se conectează electrodul de calomel la borna (+) şi electrodul de sticlă la
borna (-) a aparatului.
Se verifică dacă aparatul este potrivit la tensiunea de alimentare în priza
stabilizatorului.
Se conectează stabilizatorul la reţea şi după 5 minute se aduce
întrerupătorul 1 în poziţia de funcţionare. Becul roşu semnalizator
trebuie să se aprindă.
După 5-10 minute (timpul de încălzire al aparatului), comutatorul se
aduce de pe poziţia de zero pe poziţia de lucru dorită (pe domeniul de
pH de la 0-7 sau de la 7-14).
Acul indicator al instrumentului de măsurat se aduce prin rotirea
butonului de fixare a pH-ului, la pH-ul soluţiei tampon.
Se verifică buna funcţionare a aparatului cu cel puţin o soluţie tampon
etalon. Aparatul trebuie să indice pH-ul soluţiei. În felul acesta aparatul
este gata pentru lucru.
Se introduc electrozii în soluţia a cărui pH vrem să-l determinăm şi se
aduce comutatorul pe poziţia 0-7 pH. Dacă acul se opreşte în acest
interval, pH-ul soluţiei cercetate se găseşte în domeniul acid şi se citeşte
pe scala aparatului. Dacă acul depăşeşte valoarea 7, se mută comutatorul
pe domeniul 7-14 de pH. Se citeşte valoarea căutată pe scala aparatului
care în acest caz se găseşte în domeniul alcalin.
88
Observaţii:
89
Observaţii:
90
4.2. SISTEMELE TAMPON
Modul de lucru
Se iau 9 eprubete curate şi uscate numerotate de la 1 până la 9, şi se
introduce cu ajutorul unei pipete volume de amestec de acid citric 0,1 M şi
acid boric 0,1 M în raport de 1/1(25 ml acid boric 0,1M + 25 ml acid citric
0,1M) şi soluţie de NaOH 0,1 N în cantităţile prevăzute în tabelul nr.1.
Experienţa 1
Una dintre soluţiile sistemului tampon se împarte în 3 fracţiuni. Se
toarnă încă în două eprubete câte 1/3 din conţinutul eprubetei nr.5 care are
pH =7.
Într-una din eprubete se adaugă 2 - 3 picături de HCl 0,1n, iar în alta
2-3 picături de NaOH 0,1n. Se compară nuanţa celor două eprubete cu cea a
eprubetei în care nu s-a introdus nici acid nici bază. Se constată că în nici o
eprubetă culoarea nu s-a modificat ceea ce înseamnă că pH-ul soluţiilor a
rămas constant datorită acţiunii sistemului tampon.
93
Experienţa 2
Se iau 3 eprubete curate şi se introduc în fiecare câte 10cm3 apă
distilată (sau deionizată) şi 6 picături de indicator universal.
În prima eprubetă de introduc 2-3 picături de HCl 0,1n şi în cea de-a
doua eprubetă 2-3 picături de NaOH 0,1n. Se compară culoarea eprubetelor
cu cea de a treia eprubetă în care nu s-a introdus acid sau bază.
Se constată în prima eprubetă virarea culorii indicatorului spre roşu iar
în cea de-a doua culoarea virează spre albastru, ceea ce înseamnă că pH-ul
apei distilate a fost influenţat prin adăugarea de H+ sau de HO-, ca urmare a
absenţei sistemelor de tamponare.
Experienţa 3
Se iau 3 eprubete curate şi uscate şi se introduc în fiecare câte 10 cm3
de apă de robinet şi 6 picături de indicator universal.
Se introduc în prima eprubetă 2-3 picături de HCl 0,1n şi în cea de a
doua eprubetă 2-3 picături de NaOH 0,1n. Se compară culorile primelor
două eprubete cu cea de a treia eprubetă, constatându-se că pH-ul primelor
două eprubete se modifică foarte puţin datorită prezenţei în apa de robinet a
sistemelor tampon datorate acizilor carbonic şi fosforic precum şi a sărurilor
acestora.
Principiul metodei:
Pentru determinarea puterii de tamponare a serului sanguin sau a
urinii este necesar să se determine în prealabil pH-ul acestora. Se adaugă
apoi o cantitate mică de soluţie de HCl 0,1 n şi se determină din nou pH-ul.
94
Raportul dintre numărul de cm3 de acid adăugat şi variaţia pH-ului ce s-a
produs reprezintă puterea de tamponare a lichidului biologic de determinat.
Reactivi
Soluţie de acid citric 0,1M ( 21,014g C6H8O7 x H2O se dizolvă în apă
deionizată fiartă şi se completează la 1 dm3).
Soluţie de acid boric 0,1M ( 6,184 g H3BO3 se dizolvă în apă deionizată
fiartă şi se completează la 1 dm3).
Indicatorul universal. Se dizolvă în 100 cm3 amestec format din 60 cm3
alcool etilic şi 40 cm3 apă deionizată, următoarele cantităţi de indicator
0,02 g roşu de metil, 0,04g albastru de bromtimol, 0,04 g albastru de
timol şi 0,02 g fenolftaleină.
Modul de lucru
Se determină pH-ul serului sanguin sau al urinii cu pH-metrul.
Se introduc într-o eprubetă 2 cm3 ser sanguin sau urină şi se adaugă cu
ajutorul unei pipete 0,2 cm3 de HCl 0,1n. Se determină din nou pH-ul soluţiei
astfel obţinute.
Calcul:
Se calculează diferenţa dintre cele două valori ale pH-ului şi se face
apoi raportul dintre numărul de cm3 de HCl 0,1n adăugaţi şi această
diferenţă.
Exemplu de calcul: considerăm că pH-ul iniţial al urinii alcaline este
egal cu 8, iar după adăugare de HCl 0,1n pH-ul este egal cu 7,8. Diferenţa
dintre cele două determinări este de 0,2. Puterea de tamponare va fi de
0,2/0,2 =1.
95
Sistemele tampon din organismele animale
Sistemele tampon din sânge sunt următoarele:
1) Acidul carbonic - carbonat acid de sodiu în raport 1/20.
-în plasmă H2CO3 : NaHCO3 (bicarbonat de sodiu)
2) Fosfat primar de sodiu - fosfat secundar de sodiu în raport 1/5
-NaH2PO4 : Na2HPO4
3)Proteine plasmatice - Proteinaţi de sodiu
4)Oxihemoglobină - Oxihemoglobinat de potasiu
-în eritrocite (HbO2)H : (HbO2)K
5) Hemoglobină - Hemoglobinat de potasiu
-în eritrocite (Hb)H : (Hb)K
Aproximativ 50% din capacitatea totală de tamponare a sângelui
revine sistemului acid carbonic - bicarbonat, care se formează în cea mai
mare parte din CO2 rezultat din metabolism.
Acidul carbonic rezultă din CO2 sub influenţa enzimei anhidraza
carbonică conform reacţiei:
CO2 + H2O H2CO3 H+ + HCO3-
Logaritmul negativ al primei constante de ionizare a acidului carbonic
este pKa = 6,1 şi conform ecuaţiei lui Henderson - Hasselbach, pH-ul
sângelui va fi dat de relaţia:
HCO3-
pH = pK + lg = 6,1 + log 20 = 7,4
H2CO3
96
În celule, sistemul tampon al fosfaţilor are un rol predominant în
menţinerea pH-ului. Aminoacizii şi proteinele prin caracterul lor amfoter
contribuie, de asemenea, în măsură însemnată la acţiunea de tamponare.
Observaţii:
97
Observaţii:
98
4.3.ANALIZA CROMATOGRAFICĂ
4.3.1.Consideraţii generale
99
straturi, numite faze, unul superior I (butanol saturat cu apă) şi altul inferior
II alcătuit din soluţie de acid acetic saturată cu butanol şi formează un sistem
numit developant.
O substanţă dizolvată în acest amestec se va repartiza diferit între cele
două faze în funcţie de caracterul său polar (hidrofil) sau nepolar (lipofil).
Raportul concentraţiilor de echilibru între cele două faze se numeşte
coeficient de repartiţie şi se notează cu .
CI
C II
Se calculează cu formula :
unde: CI = concentraţia în stratul nepolar;
CII= concentraţia în stratul polar
Coeficientul de repartiţie () este o constantă caracteristică pentru
fiecare substanţă în parte, fiind acelaşi într-un sistem de solvenţi dat, la o
anumită temperatură, presiune sau pH.
Pentru o serie de substanţe asemănatoare ca structură chimică,
coeficienţii de repartiţie într-un developant, vor varia în funcţie de raportul
între caracterul lor lipofil şi hidrofil.
Astfel, pentru amestecul de aminoacizi:
COOH COOH COOH COOH
CH 2 NH 2 CH NH 2 CH NH 2 CH NH2
CH 3 CH CH3
CH3
100
Caracterul lipofil creşte de la glicocol spre leucină din cauza creşterii
catenei laterale cu caracter nepolar, iar caracterul hidrofil se accentuează de
la leucină spre glicocol.
Pentru a efectua o separare cromatografică se foloseşte un sistem de
separare format dintr-un material suport (de exemplu o panglică de hârtie
alungită numită cromatogramă şi un sistem developant n-butanol-acid acetic-
apă în raport de 4:1:5) .
Modul de lucru
La circa 3 cm de unul dintre capetele cromatogramei se însemnează
cu creionul o linie orizontală, numită linie de start, în centrul căreia se
aplică cu ajutorul unei micropipete capilare 2-5 l din soluţia amestecului
de substanţe de separat.
101
Camera de cromatografie conţine amestecul developant, iar pe pereţii
laterali se aplică două fâşii de hârtie de filtru îmbibate cu acelaşi developant
pentru a asigura saturarea atmosferei interioare cu vaporii de solvent.
Fig.5 Cromatograme
102
cârligele de susţinere. Atunci se scoate cromatograma din camera de
developare, se însemnează cu un creion (negru de grafit) poziţia frontului
developantului şi se introduce în etuvă pentru uscare.
Revelarea cromatogramei
În cazul cromatografierii aminoacizilor reactivul de revelare este
ninhidrina în soluţia alcoolică.Tratarea se poate face fie prin pulverizarea cu
un pulverizator (spray – vezi figura 6), fie prin scufundarea timp de 20-30
minute a cromatogramei într-o baie cu soluţie de ninhidrină (0,2% în alcool
etilic). După acest interval de timp hârtia se usucă în etuvă timp de 15-30
minute la 60°C. După uscare, pe cromatogramă apar pete (spoturi) colorate
în roz-violaceu de formă simetrică.
Identificarea componenţilor
Raportul dintre distanţa de migrare a aminoacidului şi distanţa de
deplasare a frontului developantului este constant pentru fiecare component
în parte şi se notează cu Rf (factor de retenţie).
103
Valoarea lui Rf se calculează cu formula:
1,4 cm
Spot 1 : R f 0,18
7,7 cm
6,0 cm
Spot 2 : R f 0,78
7,7 cm
4,1 cm
Spot 3 : R f 0,53
7,7 cm
104
Observaţii:
105
Observaţii:
106
CAPITOLUL V
5.1. PROTIDE
Reacţia Biuretului
Principiul metodei:
Reacţia biuretului se datoreşte prezenţei în molecula proteidelor a
legăturilor peptidice -CO - NH -. Reacţia biuretului este pozitivă pentru toate
107
substanţele care au în structură cel puţin 2 legături peptidice. Proteidele
reacţionează cu sărurile de cupru în mediul alcalin, producând o culoare violetă.
Această reacţie se numeşte reacţia biuretului, deoarece biuretul
(substanţa obţinută prin eliminarea unei molecule de amoniac din 2 molecule
de uree) dă şi el această reacţie, prezentând 2 legături peptidice.
NH2
O C
NH
O C
NH2
Biuret
Reactivi
soluţie de proteide (ser, albuş diluat în apă distilată)
sulfat de cupru soluţie 5%
hidroxid de sodiu soluţie 20-30%
Modul de lucru
Se pune într-o eprubetă un cm3 soluţie de cercetat (proteidă), se
adaugă un volum egal cu hidroxid de sodiu 20 - 30% şi apoi 3-5 picături de
sulfat de cupru 5%. Se observă apariţia unei coloraţii albastru violet.
Reacţia ninhidrinei
Principiul metodei:
Aminoacizii, peptidele şi proteidele dau prin tratarea cu o soluţie de
ninhidrină la cald o culoare albastru-violet care se datoreşte grupărilor -
NH2 libere.
108
Reactivi
soluţie de glicocol 1%
soluţie de proteidă
soluţie de ninhidrină 0,1% în alcool etilic
Modul de lucru
Într-o eprubetă se introduc 2 cm3 soluţie de glicocol, iar în alta 2 cm3
soluţie de proteidă (ser, albumină). În ambele eprubete se adaugă 0,5 cm3
soluţie de ninhidrină şi se încălzeşte la fierbere. Se observă apariţia culorii
albastru violet .
Reacţia ninhidrinei este utilizată pentru evidenţierea aminoacizilor
separaţi prin cromatografie pe hârtie.
Reacţia xantoproteică
Principiul metodei:
Reacţia se datoreşte prezenţei în moleculele proteidelor a
aminoacizilor cu nuclee aromatice: fenilalanina, tirozina şi triptofanul.
109
Prin tratarea proteidelor cu acid azotic concentrat la cald se obţine un
precipitat galben datorită nitroderivaţilor formaţi.
Reactivi
soluţie de proteidă
HNO3 conc.
NH4OH diluat
Modul de lucru
se introduce într-o eprubetă 1 cm3 soluţie de proteidă
se adaugă 0,2-0,3 ml HNO3 conc., apare un precipitat alb
se încălzeşte la fierbere, iar precipitatul devine galben
se răceşte eprubeta în curent de apă
se alcalinizează mediul (1ml NH4OH) - se observă apariţia culorii portocalie.
Reacţia Millon
Principiul metodei:
Reacţia se datoreşte aminoacizilor cu structură fenolică - respectiv
tirozinei care, tratată cu azotat mercuric în acid azotic, formează
nitrozoderivaţi - precipitat de culoare roşie - cărămizie
110
Reactivi
soluţie de proteidă
reactiv Millon (se dizolvă o parte mercur metalic în 2 părţi acid azotic conc.,
încălzind amestecul. După dizolvarea mercurului, se adaugă un volum dublu
de apă distilată).
Modul de lucru
într-o eprubetă se introduce 1 cm3 soluţie de proteidă
se adaugă un volum egal de reactiv Millon
se încălzeşte uşor fără a aduce amestecul la fierbere
precipitatul format se strânge, devine spongios şi capătă o culoare roşie -
cărămizie.
Reacţia Sakaguchi
Principiul metodei:
Derivaţii guanidinici (arginina) dau în mediul alcalin, în prezenţa
naftolului şi hipobromitului de sodiu, combinaţii colorate în roşu.
NH NH2
CH2 NH C NH2 OH CH2 NH C O
CH2 CH2
CH2 + CH2
CH NH2 CH NH2
COOH H COOH
arginina naftol produs de condensare
Reactivi
soluţie de proteidă
soluţie de NaOH 10%
111
reactiv Mollisch ( 0,1 g -naftol se dizolvă în 25 cm3 alcool şi se diluează la 100
cm3 cu apă distilată).
soluţie de hipobromit de sodiu (12 picături de brom la 6 cm3 NaOH 30%).
Modul de lucru
într-o eprubetă se introduc 2 cm3 soluţie de proteidă
se alcalinizează cu 2 cm3soluţie de NaOH 10 %
se adaugă 2 cm3 naftol şi 5 -7 picături de hipobromit de sodiu
în prezenţa argininei apare o coloraţie roşie
Principiul metodei:
Proteidele care conţin tioaminoacizi (cisteina, cistina, metionina etc.)
prin încălzire în mediu puternic alcalin, eliberează sulful sub formă de ioni
de sulf (S2-).
R-SH+ 2NaOH Na2S+ R-OH +H2O
Anionul de sulfură S2- se pune în evidenţă prin tratare cu acetat de
plumb, cu care formează un precipitat negru de sulfură de plumb (PbS),
conform reacţiei:
Na2S + (CH3-COO)2Pb PbS +2CH3COONa
Reactivi
NaOH soluţie 10%
soluţie de proteidă
acetat de plumb soluţie 0,5%
Modul de lucru
se introduc 2cm 3 soluţie de proteină într-o eprubetă
se adaugă acelaşi volum de NaOH 10% şi se fierbe timp de 5 minute
se adaugă 2-3 cm3 acetat de plumb 0,5% şi se încălzeşte
112
se obţine un precipitat de culoare brună neagră
Principiul metodei:
Proteidele din soluţiile apoase pot precipita prin adăugare de săruri
(sulfaţi) de sodiu, magneziu şi amoniu. Globulinele, având molecula mare,
precipită la semisaturaţie (soluţie semisaturată), albuminele, având molecula
mai mică precipită la saturaţie (soluţie saturată).
113
Reactivi
soluţie de proteidă(ser diluat )
soluţie saturată de sulfat de amoniu proaspătă.
Modul de lucru
într-o eprubetă se introduc 3cm 3 soluţie de proteidă (ser diluat)
se adaugă un volum egal de soluţie saturată de sulfat de amoniu
se agită conţinutul eprubetei şi se observă apariţia unui precipitat (globulinele)
se filtrează
peste filtratul obţinut se adaugă cristale fine de sulfat de amoniu pînă la saturare
se observă formarea precipitatului de albumine
la adăugare de apă precipitatul se dizolvă
Metoda serveşte pentru separarea albuminelor de globuline.
Principiul metodei:
Proteidele pot fi deshidratate cu alcool, datorită deshidratării ele se
aglomerează şi precipită. Prin adăugare de apă precipitatul proteic se
dizolvă.
Metoda serveşte la separarea diferitelor fracţiuni proteice, variind
concentraţia alcoolului, pH-ul şi temperatura. La acţiunea îndelungată a
alcoolului asupra proteidelor, acestea se denaturează.
Reactivi
soluţie de proteidă
alcool etilic 95%
114
Modul de lucru
se introduce într-o eprubetă 1 cm 3 soluţie de proteidă
se adaugă 1 cm3 alcool etilic
se observă formarea unui precipitat
se împarte precipitatul în două eprubete
în prima eprubetă se încearcă dizolvarea precipitatului imediat
se observă că se dizolvă
în eprubeta adoua se încearcă dizolvarea precipitatului după 2-3 ore
Principiul metodei:
Acizii minerali concentraţi precipită ireversibil proteidele în soluţie
apoasă, datorită denaturării lor.
Reactivi
soluţie de proteidă
HCl conc., HNO3 conc.
Modul de lucru
se iau două eprubete în care se introduc câte 1cm 3 soluţie de proteidă
în prima eprubetă se adaugă 1cm 3HCl conc.
în zona de separaţie a celor două lichide se formează un inel alb (precipită
proteidele)
prin agitare , inelul dispare, se dizolvă datorită excesului de HCl
în eprubeta a doua se adaugă 1 cm3 HNO3 conc.
se observă formarea unui inel alb la zona de separare a celor două lichide
115
prin agitare, precipitatul nu se dizolvă (inelul nu dispare )
Principiul metodei:
Acizii organici ca: acidul tricloracetic, acidul sulfosalicilic, picric şi
citric (reactiv Essbach), precipită proteidele. Excesul de acid, nu dizolvă
precipitatul. Precipitarea cu acid tricloracetic se foloseşte pentru
deproteinizarea unor lichide biologice. Precipitarea cu acid sulfosalicilic este
foarte sensibilă şi serveşte pentru identificarea proteidelor.
COOH
OH
H2C COOH O2N
OH CH2 COOH NO2
CCl3COOH HO CH
C COOH
COOH
HO CH COOH
H2 C COOH
SO 3 H NO2
Reactivi
soluţie de proteidă
soluţie de acid tricloradcetic 5 %
soluţie de acid sulfosalicilic 20%
reactiv Essbach ( 10 g acid picric şi 20 g acid citric se solubilizează în apă distilată
şi se aduce la 1 dm3 soluţie)
Modul de lucru
se iau trei eprubete în care se introduc câte 1 cm3 soluţie de proteidă.
în prima eprubetă se adaugă 1 cm3 soluţie de acid tricloracetic. Se observă
formarea unui precipitat alb abundent.
116
în eprubeta a doua se adaugă câteva picături de acid sulfosalicilic 20 %. Se
observă formarea unui nouraş de precipitat
în eprubeta a treia se adaugă câteva picături de reactiv Essbach. Se observă
formarea unui precipitat galben.
Principiul metodei:
Proteidele formează cu ionii metalelor grele ( Cu2+, Pb2+, Mg2+, Ag+)
precipitate greu solubile.
Reactivi
soluţie de proteidă
soluţie de Cu SO43%
soluţie de Pb (CH3-COO)2 0,5%
Modul de lucru
se iau două eprubete în care se introduc câte 1 cm3 soluţie de proteidă
se adaugă în prima eprubetă 0,5cm3 soluţie de Cu SO4 3%
în eprubeta a doua se adaugă 0,5 cm3 soluţie de acetat de plumb (CH3 -COO)2 Pb
0,5%
se observă apariţia unor precipitate abundente
Principiul metodei:
117
Proteidele, sub acţiunea căldurii, în mediu acid şi în prezenţa unor
electroliţi, precipită datorită fenomenului de denaturare. Precipitarea este
maximă în apropierea punctului izoelectric. Acţiunea denaturantă a
căldurii poate fi anulată în totalitate, în mediu puternic acid sau bazic.
În asemenea medii, stabilitatea proteidelor este maximă, deoarece pH-
ul este foarte îndepărtat de punctul izoelectric.
Reactivi
soluţie de proteidă
soluţie de CH3COOH 0,1%
soluţie de CH3COOH 1 %
soluţie de NaOH 1%
Modul de lucru
se iau 4 eprubete care se numerotează de la 1la 4 şi se introduce în fiecare 1cm3
soluţie de proteidă
eprubeta 1 se încălzeşte la fierbere şi se observă că majoritatea proteidelor
precipită
în eprubeta 2 se adaugă 1-2 picăturide acid acetic 0,1% şi se încălzeşte la fierbere
precipitatul format este în cantitate mai mare faţă de eprubeta 1, ceea ce denotă
că proteida se află într-un mediu cu un pH foarte apropiat de punctul
izoelectric
în eprubeta 3 se adaugă 1-2 picături de acid acetic 1 % şi se încălzeşte.
nu se formează precipitat din cauză că pH-ul este foarte îndepărtat de punctul
izoelectric
în eprubeta 4 se adaugă 1-2 picături de soluţie de NaOH 1 % şi se încălzeşte.
nu se formează precipitat din cauza mediului puternic bazic (îndepărtat de punctul
izoelectric)
118
Principiul metodei:
Se neutralizează aciditatea liberă a laptelui prin titrare cu NaOH
soluţie 0,143 N în prezenţă de fenolftaleină.
Se adaugă formaldehidă care blochează grupările aminice (-NH2) ale
aminoacizilor constituienţi ai proteinei, rămânând libere grupările acide
(-COOH) care se titrează cu NaOH 0,143 n. Culoarea obţinută la titrare se
compară cu cea obţinută în fiola în care la 50 cm3 lapte s-a adăugat pe lângă
oxalat de potasiu şi 1 cm 3 soluţie de sulfat de cobalt.
R CH COOH H R CH COOH
+ OC
NH2 H N CH2
H2O
protida baza Schiff
Reactivi
soluţie hidroxid de sodiu - NaOH 0,143 n lipsită de CO2 (într-un dm 3 de
apă fiartă şi răcită se dizolvă 5,75 g NaOH p.a. Titrul soluţiei se
stabileşte cu ajutorul unei soluţii de acid oxalic 0,143 n = 9 g de acid
oxalic la dm3.)
soluţia alcoolică de fenolftaleină 2%
soluţie de sulfat de cobalt – CoSO4 5%
soluţie de oxalat de potasiu neutru – K2C2O4 28%
soluţie de formaldehidă 37% ( cantitatea de formaldehidă necesară
pentru determinările zilnice se neutralizează cu o soluţie de hidroxid de
sodiu 0,1 n).
Modul de lucru
119
În două fiole conice se introduc cu o pipetă câte 50cm3 lapte şi câte 2cm3
soluţie de oxalat de potasiu şi apoi se agită. Intr-una din fiole ce constituie proba
martor, se introduce 1 cm3 soluţie de sulfat de cobalt şi apoi se agită.
Apare o coloraţie roz. În cea de a doua fiolă conică se introduce 1 cm3
soluţie de fenolftaleină şi se adaugă picătură cu picătură dintr-o biuretă
hidroxid de sodiu, pentru a neutraliza aciditatea liberă, până se obţine o
coloraţie roz de aceeaşi intensitate ca a probei martor. În proba de analizat se
adaugă 10 cm3 formaldehidă şi se agită. Se constată că coloraţia roz dispare.
Se lasă 30 secunde în repaos, se agită şi se titrează din nou până la coloraţia
roz de aceiaşi intensitate cu proba martor.
Calcul:
Titrul protidic = V x F / 2 unde:
V= volumul de hidroxid de sodiu 0,143 n utilizat la cea de a doua
titrare exprimat în cm3.
H2 N CH COOH H2 N CH COO- + H +
R R
aminoacid anion
+
H2N CH COOH + H2O H3N CH COO- + HO -
R R
aminoacid cation
120
La valori de pH mai mic decât pHi , proteinele sunt cationi, iar la
valori de pH mai mare decât pHi proteinele se comportă ca anioni. Punctul
izoelectric este o constantă fizico-chimică ce caracterizează fiecare tip de
proteină.
La punctul izoelectric unele proprietăţi fizice ale proteinelor se
modifică. Astfel solubilitatea proteinelor este minimă, stabilitatea este de
asemenea minimă (precipită uşor), nu migrează în câmp electric deoarece
sarcinile de semn contrar se compensează reciproc, atracţia celor doi poli
devenind egală.
La punctul izoelectric grupările încărcate pozitiv şi grupările încărcate
negativ din moleculele proteidei se compensează în aşa fel încât încărcarea
electrică a moleculei devine egală cu zero şi molecula nu mai migrează în
câmpul electric.
Principiul metodei:
Soluţia de cazeină este stabilă doar într-un domeniu bine determinat
de pH, când particulele coloidale au o anumită sarcină electrică. Pe măsură
ce pH-ul se apropie de punctul izoelectric, soluţia de cazeină devine din ce în
ce mai puţin stabil şi coagulează. Coagularea maximă apare la punctul
izoelectric.
Reactivi
apă distilată
soluţie acid acetic – CH3COOH 0,01N
soluţie acid acetic – CH3COOH 0,1N
soluţie cazeină în acetat de sodiu – CH3COONa 0,1N
121
Modul de lucru
Se introduc cu ajutorul unei microbiurete sau a unei pipete, apă
distilată şi soluţie de acid acetic 0,01n, 0,1n şi 1n într-o serie de 9 eprubete,
în cantităţile specificate în tabelul 10, în care este indicat şi pH-ul
corespunzător soluţiei. În fiecare eprubetă se mai adaugă câte 1 cm3 soluţie
de cazeină în acetat de sodiu 0,1n.
Soluţiile se amestecă şi după 5 minute se observă o tulbureală în una
dintre eprubete care se notează cu +, iar în cea care s-a produs coagularea
se notează cu x. Coagularea cea mai intensă apare la punctul izoelectric. Se
determină din tabel la ce pH corespunde punctul izoelectric al cazeinei.
Observaţii:
122
123
Observaţii:
124
Observaţii:
5.2. GLUCIDE
125
Glucidele sunt componente ternare ale materiei vii care conţin:
carbon, hidrogen şi oxigen. Proprietăţile lor chimice sunt determinate de
prezenţa în moleculă a unei grupări carbonilice şi a mai multor grupări
funcţionale hidroxilice (OH).
Glucidele se clasifică în două grupe principale: glucide simple şi
glucide compuse.
Glucide : Glucide simple (oze) : -monoglucide
Glucide compuse (ozide) : --oligoglucide
-- poliglucide
Monoglucidele se deosebesc între ele după numărul de atomi de
carbon ce intră în molecula lor şi după funcţiunea carbonil, pe care o conţin.
Glucidele compuse sunt constituite din glucide simple (monoglucide),
Oligoglucidele sunt compuse din 2-6 monoglucide iar poliglucidele
dintr-un număr mare de monoglucide.
Principiul metodei:
Monoglucidele sunt solubile în apă şi sunt insolubile în solvenţi
organici.
Reactivi
126
glucoză, fructoză
alcool etilic – C2H5-OH, soluţie concentrată
apă distilată
Modul de lucru
Se introduc în două eprubete 0,2 g glucoză şi 0,2 g fructoză şi apoi se
adaugă în fiecare eprubetă câte 2 cm 3 apă distilată. Se agită şi se observă
solubilizarea lor.
Se iau alte 2 eprubete şi se introduce în fiecare câte 0,2 g glucoză şi
0,2 g fructoză şi câte 2 cm3 alcool etilic, se agită şi se constată că atât
glucoza cât şi fructoza rămân nesolubilizate.
Reacţia Schiff.
Principiul metodei:
Monoglucidele datorită prezenţei în molecula lor a grupărilor
aldehidice sau cetonice mascate (semiacetalizate) dau foarte încet reacţia
Schiff, spre deosebire de aldehidele libere care recolorează imediat fucsina
decolorată.
Reactivi
glucoză 2%
aldehidă formică 5%
acid fucsin sulfonic (reactivul Schiff)
Modul de lucru
127
Se introduce într-o eprubetă 1 cm3soluţie de glucoză 2%, iar într-o altă
eprubetă 1 cm3 soluţie de formaldehidă. Se adaugă în fiecare eprubetă 2-3
picături din reactivul Schiff (acidul fucsin sulfonic). Se observă că în
eprubeta cu soluţia de glucoză, culoarea roşie apare mult mai încet decât în
eprubeta care conţine aldehidă formică.
Reactia Selivanoff
Principiul metodei:
Reacţia Selivanoff permite o diferenţiere între aldoze şi cetoze.
Hexozele sub acţiunea acidului clorhidric, se transformă în oximetilfurfurol.
Viteza de trecere a cetozelor în oximetil furfurol este de 20 de ori mai mare
decât a aldozelor. Oximetilfurfurolul format reacţionează cu rezorcina, dând
o coloraţie roşie. Această reacţie permite identificarea cetozelor atât libere
cât şi combinate. Coloraţia este datorată structurii chinoidice a produsului de
oxidare obţinut în faza finală.
HOHC CHOH H CH
H C C OH 3 H 2O C C C O
O O
HOH2C CH2OH HOH2C H
fructozã hidroximetilfurfurol
OH OH
HC CH HC CH
+ - -2 H2O
C C H OH C C HC O
O O
HOH2C C O
H OH HOH2C
H
OH OH
Reactivi
128
fructoză soluţie
soluţie glucoză 2%
soluţie zaharoză 2%
reactiv Selivanoff (0,5 g rezorcină în 100 cm3 HCl 20 %)
Modul de lucru
Se iau trei eprubete, în care se introduc câte 1 cm3 de soluţie de
fructoză, glucoză şi zaharoză şi apoi câte 2cm3 de reactiv Selivanoff proaspăt
preparat. Se introduc eprubetele într-o baie de apă fierbinte timp de 2
minute. În eprubeta în care am introdus fructoza şi zaharoza,se formează o
coloraţie roşie.
Reacţia Molisch
Principiul metodei:
Monoglucidele în mediul de acid sulfuric concentrat la cald se
deshidratează şi se transformă în furfurol, în cazul pentozelor şi în oximetil
furfurol în cazul hexozelor. Furfurolul şi oximetil furfurolul dau cu -
naftolul, o coloraţie violetă caracteristică. Această reacţie o dau şi oligo şi
poliglucidele, deoarece sub acţiunea acizilor minerali are loc o hidroliză
parţială până la monoglucide.
Reactivi
soluţie de glucoză 2%
acid sulfuric concentrat
reactiv Molisch (soluţie alcoolică de -naftol 0,5%)
Modul de lucru
129
Se introduce într-o eprubetă 1 cm3 soluţie de glucoză şi 2-3 picături de
soluţie alcoolică de -naftol (reactiv Molisch), se adaugă apoi 1cm3 H2SO4 conc.
în aşa fel încât să se prelingă pe marginea eprubetei. Se formează două straturi
de lichid. La suprafaţa lor de contact, apare un inel violet.
Reacţia Trommer
Principiul metodei:
Hidroxidul de cupru format sub acţiunea NaOH asupra CuSO4, este
redus de către glucidele reducătoare mai întâi la hidroxid cupros şi apoi la
oxid cupros roşu.
OH
HC O C O
+ 2Cu(OH) + 2 CuOH + H2O
(CHOH)4 2 (CHOH)4
CH2OH CH2OH
Reactivi
soluţie de glucoză 2%
soluţie de sulfat de cupru diluat 1 %
soluţie hidroxid de sodiu 10%
130
Modul de lucru
Se introduc într-o eprubetă soluţie de glucoză cu câteva picături de
CuSO4 diluat şi NaOH iar apoi se fierbe. Se observă formarea unui precipitat
galben care apoi trece în roşu.
Reacţia Fehling
Principiul metodei:
Glucidele reducătoare reduc complexul cuprotartric format prin
amestecarea soluţiilor Fehling I şi II , până la oxid cupros roşu, iar gruparea
aldehidică se oxidează la carboxil.
Reacţiile caracteristice glucidelor reducătoare (ex. glucoza -
aldohexoză) sunt prezentate în cele ce urmează:
HO CH COONa O CH COONa
Cu(OH)2 + Cu +2H2O
HO CH COOK O CH COOK
sare Seignette complex cupro tartric
Reactivi
131
soluţie de glucoză 2%
soluţie Fehling I( 3,5 g CuSO4 se dizolvă în 50 cm3 apă distilată)
soluţie Fehling II (17,3 g sare Seignette şi 6 g hidroxid de sodiu se dizolvă în 50
cm3 apă distilată).
Modul de lucru
Se introduce într-o eprubetă 1 cm3 soluţie diluată de glucoză şi se
adaugă apoi 1 cm3 reactiv Fehling I şi 1 cm3 reactiv Fehling II. Se
încălzeşte eprubeta la flacăra unui bec timp de 3 min, se observă formarea
unui precipitat roşu de oxid cupros.
Reacţia Benedict
Principiul metodei:
Metoda se bazează pe reducerea cuprului din soluţia Benedict (sulfat
cupric) de către glucoză la oxid cupros – care colorează soluţia în roşu.
Culoarea obţinută poate varia de la verde la roşu în funcţie de cantitatea de
oxid cupros formată.
2 CuSO4 x 5 H2O + C6H12O6 → C6H12O7 + Cu2O + 2 H2SO4 + 8 H2O
(Cu2+) (Cu1+)
Reactivi
soluţie de cercetat
reactiv Benedict.
Se solubilizează 173g citrat de sodiu anhidru şi 90 g carbonat de sodiu anhidru în
600 cm3 apă distilată la cald. Se filtrează, se completează cu apă distilată până
la 850 cm3.
132
Se solubilizează 17,3 g sulfat de cupru (CuSO4 x H2O) în 100 cm3 apă distilată şi
se completează la 150 cm3.
Soluţia “a” se toarnă sub agitare în soluţia “b”.
Modul de lucru
Se introduce într-o eprubetă 1,5 cm3 reactiv Benedict şi se adaugă 3
picături de soluţie de cercetat, apoi se lasă timp de 2 minute pe baia de apă
la fierbere şi apoi se răceşte. Se poate obţine o coloraţie verde sau un
precipitat de culoare verde, portocaliu sau roşu. Culoarea depinde de
cantitatea de glucide conţinută în proba de cercetat.
După tabelul de mai jos, vom putea aprecia concentraţia aproximativă
în glucide, în funcţie de culoarea obţinută.
Principiul metodei:
133
Azotatul de argint prin tratare cu hidroxid de amoniu diluat precipită
oxidul de argint, care se dizolvă în exces de reactiv cu formarea hidroxidului
diamoniacoargentic. Acesta este redus de către glucidele reducătoare, până la
argint metalic, care se depune pe pereţii eprubetei sub formă de oglindă.
HC O HO C O
CH2OH CH2OH
Reactivi
soluţie de glucoză 2%
soluţie de AgNO3 1%
soluţie diluată NH4OH
Modul de lucru
Se introduce într-o eprubetă 1 cm3 soluţie AgNO3 şi se tratează cu
NH4OH diluat, până la dizolvarea precipitatului format iniţial (se va evita
adăugarea unui exces de NH4OH). Soluţia obţinută se tratează cu un volum
egal de soluţie de glucoză. Se încălzeşte conţinutul eprubetei uşor şi se
constată formarea unei oglinzi pe pereţii eprubetei.
5.2.1.4. Reacţii de condensare
Reacţia osazonelor
134
Principiul metodei:
Monoglucidele datorită prezenţei grupării funcţionale carbonilice în
moleculă dau reacţii de condensare cu fenilhidrazina formând la rece
fenilhidrazona, care în exces de fenil hidrazină la cald trec în osazone.
Osazonele sunt substanţe cristaline insolubile în apă. Osazona fiecărei
monoglucide prezintă forme cristaline caracteristice. Glucoza şi fructoza dau
aceeaşi osazonă care privită la microscop apare sub formă de spice colorate
în galben-verzui iar lactosazona sub formă de cristale galbene dispuse
radial.
Reactivi
soluţie de glucoză 5 %
soluţie de lactoză 2%
clorhidrat de fenilhidrazină (cristalizat pur)
acetat de sodiu cristalizat
Modul de lucru
Se amestecă două părţi clorhidrat de fenilhidrazină cu 3 părţi azotat de
sodiu şi se freacă bine într-un mojar. Se iau 4 cm3 din soluţia de glucoză şi se
adaugă 1 g din amestecul pregătit mai sus. Se încălzeşte pe o baie de apă la
fierbere timp de 5-10 minute, agitând continuu. Se repetă experienţa pentru
soluţia de lactoză. Când încep să apară cristalele galbene de osazonă se lasă
eprubeta să se răcească pe stativ, se vor forma cristale mari care se
examinează pe o lamă de microscop.
135
Fig.5.1. Cristale de osazonă
136
monoglucidă. Diglucida formată este reducătoare întrucât are una din
grupările glicozidice libere, care-şi păstrează caracterul reducător. Din acest
tip face parte maltoza.
HO CH 2 HO H C
O 2
O
H O H HO CH 2 OH H O H CH 2 OH
H + H
OH H1 2 OH
H - H2O OH H1 O 2 OH H
HO OH HO H2C H HO H
HO H2C
H OH H OH H OH H OH
-D-glucopiranoza -D-fructofuranoza 2-[ D-glucopiranozil D-fructofuranoza
(zaharoza)
Reactivi
soluţie de zaharoză 2%
soluţie Fehling I şi II
Modul de lucru
Se introduce într-o eprubetă 1 cm3 soluţie de zaharoză şi se
adaugă câte 0,5 cm3 soluţie Fehling I şi II. Se încălzeşte eprubeta până
la fierbere. Se constată că nu apare nici un precipitat ceea ce denotă
lipsa grupărilor funcţionale cu proprietăţi reducătoare.
137
5.2.2.2. Reacţii a diglucidelor reducătoare
Reactivi
soluţie de maltoză 2 %.
Reactiv Fehling I şi II
Modul de lucru
Se introduce într-o eprubetă 1 cm3 soluţie de maltoză şi câte 0,5 cm3
soluţie Fehling I şi II. Se încălzeşte la fierbere şi se constată formarea unui
precipitat roşu de oxid cupros.
5.2.2.3.Hidroliza zaharozei
Principiul metodei:
Zaharoza (-D-Glucopiranozil-1→2--D-fructofunaroza) prin fierbere
cu acizi minerali, hidrolizează şi formează o moleculă de glucoză
138
(-D-Glucopiranoză) şi una de fructoză (-D-fructofuranoză), prezenţa
cărora imprimă soluţiei un caracter reducător.
HO H2C HO CH 2
O O
H O H CH 2 OH H O H HO CH 2 OH
H O H +
OH H OH H - H2O OH H OH H
HO HO H2C H HO OH HO H2C H
H OH H OH H OH H OH
2-[ D-glucopiranozil D-fructofuranoza -D-glucopiranoza -D-fructofuranoza
(zaharoza)
Reactivi
soluţie de zaharoză 2%
acid clorhidric diluat
Reactiv Fehling I şi II
soluţie de NaOH
Modul de lucru
Se introduce într-o eprubetă 1 cm3 soluţie de zaharoză şi se tratează cu
0,5 HCl diluat. Se încălzeşte conţinutul eprubetei până la fierbere şi se
continuă fierberea încă 5 minute. După răcire se alcalinizează soluţia din
eprubetă cu o soluţie de NaOH şi se adaugă 0,5 cm3 soluţie Fehling I şi II.
Prin fierbere se formează un precipitat roşu de oxid cupros.
139
Reactivi
Soluţie de zaharoză (20g zaharoză se solubilizează în 100 cm3 apă, se filtrează şi
se adaugă un mic cristal de timol sau camfor, ca agent de conservare)
Soluţie de HCl 1n (se măsoară exact cu cilindrul gradat 82 cm3HCl conc ( = 1,19
care se aduce cu apă distilată la volumul de 1 dm3).
Modul de lucru
Se introduc cu o pipetă 25 ml de soluţie de zaharoză într-o fiolă conică
de 50 ml şi se aşează în termostat la 25 0C. Într-o altă fiolă conică se introduc
circa 30 ml de HCl 1n. Înainte de utilizare fiolele conice trebuiesc bine
spălate şi uscate. După uniformizarea temperaturii, se scot cu pipeta 25 cm3
de acid şi se introduc în fiola cu soluţie de zaharoză. Se agită bine conţinutul
fiolei şi se introduce în tubul polarimetric a cărui temperatură trebuie să fie
de 250C. Se vor efectua 5-6 citiri, se calculează media citirilor şi se notează
timpul. Unghiul de rotaţie citit “0” va fi unghiul de rotaţie iniţial.
Măsurătorile ulterioare de efectuează din 15 minute în 15 minute şi apoi la
intervale mai lungi. Soluţia se păstrează în termostat şi după 48 de ore se
măsoară rotaţia finală .
Se va ţine seama ca unghiul de rotaţie să fie luat cu semnul corect,la
dreapta cu plus, la stânga cu minus. Rezultatele măsurătorilor se vor trece în
tabelul de mai jos:
T (minute) t1 t2 t3 t4 t5 t…
Unghiul de
rotaţie
140
Poliglucidele sunt formate din lanţuri de molecule de monoglucide.
Cele mai importante poliglucide sunt: amidonul,celuloza şi glicogenul. Toate
trei sunt formate din molecule de glucoză unite între ele prin legături de tip
glicozidic; se deosebesc între ele atât prin modul cum se leagă între ele
monoglucidele, cât şi prin mărimea şi forma catenelor. Poliglucidele nu au
un caracter reducător întrucât toate grupările hidroxilice glicozidice, cu
excepţia celor terminale, au fost blocate. Amidonul şi glicogenul sunt
formate din lanţuri de -glucoză legate între ele glucozidic, unitatea de bază
fiind diglucida maltoza.
Amidonul este format din două componente, amiloza şi amilopectina.
Amiloza este formată dintr-un lanţ lung de molecule de -D- glucoză legate
1-4 glicozidic, unitatea structurală fiind diglucida maltoza.
Amilopectina este formată, de asemenea, din molecule de D glucoză
care sunt legate 1-4 glicozidic şi 1-6 glicozidic la catenele laterale.
Amiloza dă culoare albastră cu iodul. Amilopectina dă o coloraţie roşie
violacee, iar glicogenul o coloraţie roşie brună.
Glicogenul are o structură asemănătoare cu cea a amilopectinei
însă mult mai ramificată.
Principiul metodei:
Soluţia coloidală de amidon se colorează în albastru cu iodul, datorită
formării unui produs de absorbţie.
O O O
n
amiloza
141
Reactivi
Soluţie de amidon 1%( 10g amidon solubil se agită într-un pahar Berzelius cu apă
distilată rece şi apoi se toarnă într-un dm3 de apă distilată la fierbere, se
adaugă soluţiei 10 mg HgI2 pentru conservare.
Soluţie de glicogen 0,3 %.
Soluţie de iod în iodură de potasiu (2g iod şi 5g KI se dizolvă în 100 cm3 apă
distilată).
Modul de lucru
Se introduce într-o eprubetă 1 cm3 soluţie de amidon şi se
adaugă 2-3 picături din soluţia de iod în soluţie de iodură de potasiu.
Se observă apariţia unei coloraţii albastre. Se încălzeşte şi se constată
dispariţia culorii, care reapare prin răcire. În cazul reacţiei cu
glicogenul se obţine o culoare roşie -brună.
Principiul metodei:
Prin fierberea amidonului cu acizi minerai tari acesta hidrolizează
treptat, rezultând amilodextrine, apoi eritrodextrine, acrodextrine,
maltodextrine, maltoză şi în final glucoză. Aceşti produşi intermediari dau
coloraţii diferite cu soluţia de iod în iodură de potasiu.
Reactivi
Soluţie de amidon 2%(20 g de amidon solubil se agită într-un pahar Berzelius cu
apă distilată rece şi apoi se toarnă într-un dm3 de apă distilată în fierbere şi se
adaugă soluţiei 10 mg HgI2 pentru conservare).
HCl 10%
142
I2+ KI
Modul de lucru
Se introduc într-o eprubetă 5 cm3 soluţie de amidon 2% şi se adaugă
0,5 cm3 soluţie de HCl. Se încălzeşte la fierbere pentru efectuarea
hidrolizei.În decursul hidrolizei se scoate din timp în timp cu ajutorul unei
pipete câte 0,5 cm3 din soluţia de amidon care se introduc în alte eprubete.
Se adaugă în fiecare eprubetă o picătură din soluţia de iod. Se constată că la
începutul fierberii soluţia se colorează în albastru,apoi violet şi roşu. După
10 minute de fierbere soluţia nu mai dă coloraţie cu iod.
În continuare, dăm mai jos sub formă de tabel, modul de urmărire a
procesului de hidroliză a amidonului :
Principiul metodei:
Soluţia coloidală de glicogen în reacţie cu iodul prezintă o
coloraţie roşie-brună sau albastră, datorită formării unui produs de
absorbţie. În stuctura glicogenului se evidenţiază prezenţa resturilor de -
143
D-glucopiranoză, cu legături intermoleculare de tip 1-4 şi 1-6 conform
fragmentului de moleculă prezentat mai jos:
HO CH 2 HO CH 2
H O H H O H
H 1 4 H 1
OH H OH H
HO 3 O 3
H OH H OH
O
HO CH 2 HO CH 2 HO CH 2 CH 2 HO CH 2
H O H H O H H O H H O H H O H
H 1 4 H 1 H 1 4 H 1 4 H 1
OH H OH H OH H OH H OH H
HO 3 O 3 O 3 O 3 O 3
OH
H OH H OH H OH H OH H OH
Glicogen
Reactivi
glicogen soluţie 0,3 %
iod (I) în iodură de potasiu (KI) soluţie
Modul de lucru
Se introduce într-o eprubetă 1 ml soluţie de glicogen, se adaugă 2-3
picături din soluţia de iod în soluţie de iodură de potasiu, apoi se observă
apariţia unei coloraţii roşii-brune sau albastre. Se încălzeşte şi se constată
dispariţia culorii, care reapare după răcire.
Principiul metodei:
În urma reacţiei de hidroliză a celulozei se obţin glucide simple, de
tipul tri-, tetra- sau hexa glucide (e.g.: glucoză, celobioză). Prin reacţia
Fehling se poate evidenţia formarea oligoglucidelor şi a glucozei.
HO CH 2 HO CH 2
H O H O
O H 1 H
OH H O 4
H
1
3
OH
H 3
H
H OH H OH n
-D-glucopiranozil-1 4- -D-glucopiranoza
Celuloza
Reactivi
- hârtie de filtru fin mărunţită sau vată
- acid sulfuric soluţie 70%
- hidroxid de sodiu 30 – 40%.
Modul de lucru
145
Se introduce într-o eprubetă 1 ml soluţie de acid sulfuric 70% peste
care se inrtoduce hârtie de filtru fin mărunţită (care conţine celuloză) până se
obţine o soluţie vâscoasă. Se introduce eprubeta într-o baie de apă pentru
încălzirea soluţiei din eprubetă până la apariţia unei coloraţii slab brune. Se
răceşte soluţia obţinută şi se adaugă peste un volum de apă de 5 ori mai
mare.
Din soluţia care se obţine se iau 0,5 ml şi se alcalinizează cu 0,5 ml
soluţie hidroxid de sodiu. În final se evidenţiază prezenţa glucozei cu reacţia
Fehling.
Observaţii:
146
Observaţii:
147
Observaţii:
148
5.3. LIPIDE
Reacţia de saponificare
Principiul metodei:
Prin hidroliza cu alcalii al gliceridelor se obţine glicerol şi acizi graşi, care
datorită mediului alcalin formează săruri numite săpunuri. Această reacţie
numită reacţie de saponificare are loc conform ecuaţiei:
CH2 O CO R CH2 OH
CH2 O CO R CH2 OH
Reactivi
soluţie alcoolică de NaOH (NaOH 20% în alcool 60 %)
ulei vegetal
acid acetic glacial
soluţie saturată de sulfat de calciu
soluţie saturată de NaCl
149
Modul de lucru
se introduc 4-5 picături de ulei vegetal într-o eprubetă
se adaugă 3-4 cm3 alcool sodat
se încălzeşte eprubeta într-o baie de apă la fierbere, până când
se constată dispariţia uleiului, ceea ce indică o saponificare
completă
se adaugă aproximativ 10 cm3 apă
se agită şi se observă formarea unei spume (acţiune detergentă)
Principiul metodei:
Acizii graşi se pot separa din săpunuri prin acidularea unei soluţii se
săpun. De exemplu, prin acidularea palmitatului de sodiu cu acid sulfuric se
obţine acidul palmitic, conform ecuaţiei:
150
Reactivi
săpun
soluţie de acid sulfuric 1/5 n
roşu de Congo
Modul de lucru
se solubilizează în apă distilată 0,1 -0,2 g săpun;
Principiul metodei:
Prezenţa acizilor graşi nesaturaţi în moleculele unor lipide , se poate
pune în evidenţă prin reacţia de adiţie a halogenilor la legăturile duble ale
acizilor graşi din gliceride.
CH3-(CH2)7-CH CH3-(CH2)7-CH-I
+I2
HOOC-(CH2)7-CH HOOC-(CH2)7-CH-I
Acid oleic Acid 9,10-diiod-stearic
Reactivi
ulei vegetal
soluţie cloroformică de brom
151
Modul de lucru
într-o eprubetă se introduc câteva picături de ulei vegetal;
se adaugă picătură cu picătură apă de brom;
soluţia de brom se decolorează datorită adiţiei sale la dubla
legătură.
Principiul metodei:
Gliceridele prin încălzire se descompun, eliberând glicerolul, care în
prezenţa substanţelor deshidratante (KHSO4), pierde 2 molecule de apă,
transformându-se în acroleină, substanţă nesaturată cu miros înţepător
caracteristic.
CH2-OH CH2
-2H2O
CH-OH CH
CH2-OH H-C= O
glicerină acroleină
Reactivi
ulei vegetal
sulfat acid de potasiu KHSO4
Modul de lucru
într-o eprubetă uscată se pun 2-3 picături de ulei vegetal;
se adaugă 2 g KHSO4
152
se încălzeşte la flacără;
se constată degajarea unor vapori cu miros înţepător;
se ţine la gura eprubetei o hârtie de filtru îmbibată în soluţie amoniacală
de azotat de argint şi se constată înnegrirea acesteia datorită vaporilor de
acroleină.
Principiul metodei:
Păstrate mult timp la aer şi la lumina, grăsimile se descompun în
glicerină şi acizi graşi. Acizii graşi se oxidează în compusi volatili cu miros
neplăcut. Gradul de râncezire se poate pune în evidenţa prin reacţii de
culoare.
Reactivi
ulei vegetal proaspăt
Modul de lucru
se introduc 2cm3ulei într-o eprubetă;
se adaugă 2cm3 acid clorhidric şi se agită ;
se adaugă 2cm3 fluoroglucină şi se agită din nou;
153
Steridele sunt esteri ai sterolilor cu acizi graşi superiori. Cel mai
răspândit şi important dintre sterolii animali este colesterolul.
Steridele se pot recunoaşte pe baza reacţiilor de culoare ale sterolilor.
Reacţia Salkowski
Principiul metodei:
În soluţie cloroformică, sterolii, în prezenţa acidului sulfuric
concentrat dau o culoare roşie.
Reactivi
acid sulfuric concentrat
cloroform
grăsime animală
Modul de lucru
într-o eprubetă uscată se introduc 2-3 picături de ulei şi se
solubilizează cu 1-2 cm3 cloroform.
se prelinge pe peretele eprubetei 1 cm3 H2SO4concentrat. Se
constată separarea a două straturi, între ele obţinându-se un inel
roşu-portocaliu;
se agită eprubeta.Stratul cloroformic se va colora în roşu iar
Principiul metodei:
Colesterolul cu anhidrida acetică în mediu de acid sulfuric se va
colora în final în verde închis.
154
Reactivi
anhidridă acetică
acid sulfuric concentrat
grăsime animală
cloroform
Modul de lucru
într-o eprubetă uscată se introduc 1-2 picături de ulei care se solubilizează în 1-2
cm3 de cloroform.
se adaugă 1 cm3 de anhidridă acetică.
se adaugă 3-4 picături de acid sulfuric concentrat şi se agită.La început apare
coloraţie verde-albăstruie care trece treptat în verde închis.
155
1. ulei de bumbac 191 - 198
2. ulei de floarea soarelui 188 - 194
3. ulei de in 189 - 192
4. ulei de măsline 189 - 196
5. ulei de porumb 188 - 198
Principiul metodei:
O cantitatea cunoscută de gliceride, se saponifică cu hidroxid de
potasiu, de concentraţie cunoscută, luată în exces.
Excesul de hidroxid de potasiu se titrează cu o soluţie acidă
echivalentă.
Reactivi
soluţie alcoolică de KOH 0,5 n (28g KOH se solubilizează în puţină apă distilată
şi se completează la 1000 cm3 cu alcool 90% ).
soluţie HCl 0,5 n (41 cm3 HCl concentraţie la 1 litru )
fenolftaleină 1% soluţie alcoolică
ulei vegetal
Modul de lucru
într-un balon Erlenmayer la care se poate adapta un refrigerent cu
reflux, se cântăreşte la balanţa analitică o cantitate de grăsime de
0,5g.
se solubilizează în 10 cm3 benzen
se adaugă 20 cm3 soluţie alcoolică de KOH 0,5 n exact măsurată
paralel se face o probă martor în aceleaşi condiţii dar fără
grăsime,folosind 20 cm3 KOH 0,5 n alcoolic
se montează refrigerentele la cele două probe.
156
se încălzeşte pe baie de apă ,la fierbere 30 minute din momentul
începerii fierberii
se lasă balonul săse răcească şi se scoate refrigerentul
se adaugă 1-2 picături de fenolftaleină
se titrează excesul de KOH cu acid clorhidric 0,5 n până la dispariţia
culorii roşii.
Calcul:
(V2- V1) x FHClx 28,052
Indicele de saponificare =
G
Principiul metodei:
Se titrează o cantitate cunoscută de grăsime cu o soluţie de KOH
de concentraţie cunoscută în prezenţa unui indicator .
CH3-(CH2)14-COOH+KOH CH3-(CH2)14-COOK+H2O
157
acid palmitic palmitat de potasiu
Reactivi
amestec alcool etilic : benzen neutralizat
soluţie hidroxid de potasiu – KOH 0,1N (5,6104 g / dm3)
grăsime animală
fenolftaleină, soluţie alcoolică 1%
Modul de lucru
se cântăresc 2,5 g grăsime într-un flacon Erlenmayer
se adaugă 20 cm3 amestec alcool etilic şi benzen neutralizat în prealabil
se titrează cu KOH 0,1 n în prezenţă de fenolftaleină până la apariţia culorii roz,
persistentă 30 secunde
dacă în cursul titrării amestecul se tulbură , se încălzeşte puţin fiola într-un vas
cu apă caldă.
Calcul:
5,6104x Vx F
Ia =
G
158
Principiul metodei:
Extracţia se realizează, cu aparatul Soxhlet, în proces continuu şi se
bazează pe proprietatea grăsimilor din lichidele biologice şi din ţesuturi de a
se solubiliza în solvenţi organici.
Se îndepărtează solventul din extract şi se cântăreşte cantitatea de
grăsime conţinută de materialul de analizat.
Prin această metodă se determină o grăsime brută, deoarece se extrag
parţial şi alte forme de lipide.
Reactivi
amestec alcool-eter etilic 1:1
sau eter de petrol
Modul de lucru
se usucă la 1050C în etuvă, materialul de analizat, până la greutatea constantă
se cântăreşte o cantitate din materialul uscat
se triturează într-un mojar cu nisip de cuarţ
se introduce materialul într-un cartuş de hârtie de filtru care se închide cu dop de
vată
cartuşul şi dopul de vată se degresează în prealabil cu acelaşi solvent care va fi
folosit la extracţie.
159
3. refrigerent cu reflux
Calcul:
G1 - G0
grăsimea brută % = x 100
G
G0= greutatea fiolei Erlenmayer
G1=greutatea fiolei Erlenmayer cu grăsime după uscare
G =greutatea produsului luat în analiză
Observaţii:
161
Observaţii:
162
Observaţii:
163
Observaţii:
164