Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Elena Petrescu
2
O reacţie cu G° > 0 poate avea loc în sensul direct (spre dreapta) dacă G < 0, acest
lucru fiind posibil dacă termenul „RT ln [Produşi]/[Reactanţi]” este negativ şi are o valoare absolută
mai mare decât G°. Așa se întâmplă în celulă atunci când: (a) produsul de reacţie este îndepărtat
imediat pe măsură ce se formează, prin angajarea într-o altă reacţie, sau (b) are loc aportul continuu
al unor cantități mari de reactant provenit din sânge sau dintr-o altă reacţie. Ambele situaţii menţin
raportul [P]/[R] mult sub 1, astfel încât termenul RT ln [P]/[R] are o valoare negativă mare.
Pentru o cale metabolică ce cuprinde mai multe reacţii succesive, fiecare având o anumită
valoare a lui G:
diferenţa de energie liberă pentru întreaga cale este Gtotal = G1 + G2 + G3 + G4 + ..... (datorită
caracterului aditiv al variației energiei libere pentru reacţiile succesive). Dacă Gtotal < 0, calea
metabolică este exergonică în ansamblu şi are loc în sensul figurat mai sus, chiar dacă unele reacţii
individuale au G > 0.
3
TRANSFERUL ENERGIEI LIBERE ÎN CURSUL PROCESELOR METABOLICE
Celulele organismului uman îşi obţin energia liberă prin catabolismul combustibililor
biologici conținuți în nutrienţii ingerați (glucide, lipide, proteine) și în depozitele tisulare (de
glicogen, trigliceride, proteine). Catabolismul reprezintă una din laturile metabolismului și cuprinde
reacţii de degradare (rupere de legături covalente), care sunt exergonice.
Anabolismul, cea de a doua latură a metabolismului (sinteza moleculelor complexe din
precursori simpli), cuprinde reacţii de sinteză (formare de legături covalente), care sunt
endergonice, deci se desfășoară cu consum de energie liberă.
Cum este posibil ca energia liberă degajată în procesele catabolice să poate fi utilizată
(transferată) în procesele anabolice, astfel încât ea să nu se piardă sub formă de căldură? Cu alte
cuvinte, cum se poate realiza cuplarea unui proces exergonic cu unul endergonic?
Molecula care joacă un rol central în transferul energiei libere de la procesele exergonice la
cele endergonice este ATP (adenozin trifosfat).
4
- mai întâi, gruparea fosfat sau AMP din ATP este transferată pe o moleculă substrat (X)
(sau pe un rest aminoacidic dintr-o enzimă), devenind ataşată covalent şi crescând conţinutul de
energie liberă al moleculei respective;
- într-o a doua etapă, gruparea Pi sau AMP este dezlocuită de către cel de al doilea substrat
(Y). În felul acesta, o parte din energia legăturii fosfoanhidridice din ATP este transferată şi
conservată în noua legătură covalentă formată între X şi Y.
(1) X + Y + ATP → X−Y + ADP + Pi sau (2) X + Y + ATP → X−Y + AMP + PPi
X + ATP → X~P + ADP X + ATP → X~AMP + PPi
X~P + Y → X−Y + Pi X~AMP + Y → X−Y + AMP
În reacţia (2), pirofosfatul anorganic (PPi) este hidrolizat la 2Pi sub acţiunea pirofosfatazei
anorganice (enzimă prezentă în toate celulele), într-o reacţie exergonică. Îndepărtarea PPi din
mediu face ca echilibrul reacţiei de sinteză să fie şi mai mult deplasat spre dreapta.
Şi alţi compuşi au potenţial energetic ridicat (valori negative mari pentru G° la hidroliză).
Compuşii fosforilaţi din organism pot fi împărţiţi în două grupe, în funcţie de G° pentru reacţia de
hidroliză:
- compuşi „înalt energetici” (conţin legături de tip ”macroergic”, simbolizate prin „~”) - au
G° la fel de negativ sau mai negativ decât ATP-ul (la scindarea în ADP şi Pi: − 7,3 kcal/mol);
- compuşi „cu energie joasă” (conţin legături de tip ”microergic”) - au G° mai puţin
negativ decât această valoare.
▪ ATP și alți nucleozid trifosfați - GTP, UTP, CTP (2 legături tip anhidridă acidă fosforică)
- ATP este un donor universal de energie, pentru diverse procese biochimice și fiziologice;
- UTP este utilizat în procesul de sinteză a glucidelor;
- CTP este folosit în sinteza lipidelor complexe;
- GTP furnizează energie în procesul de sinteză a proteinelor;
- fosfoenolpiruvat și 1,3-difosfoglicerat sunt intermediari ai glicolizei (cale de degradare a
glucozei cu scopul de a genera energie);
- acil-CoA reprezintă forma activă a acizilor grași, sub care aceștia participă atât la procesul
de degradare cât și la sinteza diverselor clase de lipide.
5
În general, compușii fosforilați macroergici nu reprezintă forme de stocare pe termen lung a
energiei; ei sunt forme tranzitorii de depozitare a energiei, având rolul de a transporta energia dintr-
un punct în altul, de la un sistem enzimatic la altul, în cursul defășurării proceselor biologice și
chimice din celulă. ATP-ul are un turnover rapid (viteza de degradare și resinteză este mare).
Excepție face creatin-fosfatul, care reprezintă o formă de stocare a energiei în mușchiul
scheletic (și miocard), utilizabilă în condițiile creșterii substanțiale a necesarului energetic în cursul
efortului fizic susținut.
ATP are o poziţie intermediară în ceea ce priveşte valoarea G° la hidroliză (tabelul 1); în
consecinţă:
ATP poate fi sintetizat prin transferul, pe ADP, a unei grupări fosfat de la compuşii înalt
energetici care au G° mai negativ decât − 7,3 kcal/mol, conform ecuaţiei generale:
Deci ATP-ul poate transporta energia liberă între cele două categorii de compuşi biochimici
(înalt energetici şi cu energie joasă) → serveşte ca „moneda” energetică universală în celulele vii.
6
REACŢII DE OXIDO-REDUCERE
7
În reacţiile de dehidrogenare se transferă, de la o moleculă donoare la o moleculă
acceptoare, 2 echivalenţi reducători (termenul de „echivalent reducător” se referă la un electron, un
atom de hidrogen sau un ion hidrid H:−, care participă la o reacţie de oxido-reducere).
În cadrul căilor metabolice de degradare a combustibililor biologici, în reacţiile de
dehidrogenare catalizate enzimatic, electronii de la multiple substrate diferite sunt canalizaţi spre
câteva tipuri de transportori de e− universali: coenzimele piridinice şi cele flavinice.
NAD+ NADH
Majoritatea dehidrogenazelor care acţionează în catabolism sunt specifice pentru NAD+ ca
acceptor de e−; unele sunt localizate în citosol, altele în citoplasmă, iar altele au izoenzime
mitocondriale şi citosolice.
8
FOSFORILAREA OXIDATIVĂ (PO)
Sediul PO este mitocondria. Acest organit celular are două membrane care înconjoară
matricea mitocondrială:
Membrana externă este permeabilă pentru molecule mici şi ioni, care trec liber prin canale
proteice transmembranare.
Membrana internă este impermeabilă pentru majoritatea moleculelor mici hidrosolubile şi
a ionilor; moleculele care o pot străbate o fac cu ajutorul unor transportori specifici. Această
membrană conţine componentele LR şi ATP sintaza.
Matricea mitocondrială conţine enzimele care intervin în toate căile de degradare oxidativă
a substratelor energogene, cu excepţia glicolizei.
9
Componentele LR cuprind:
Componentele lanțului respirator sunt aşezate în ordinea creşterii potenţialului redox (E).
10
Transportorii de e− din LR sunt organizaţi în 4 complexe supramoleculare integrate în
membrana mitocondrială internă. Complexele I şi II catalizează transferul de e − către coenzima Q,
de la doi donori de e− diferiţi: NADH, respectiv succinat.
CoQH2 (coenzima Q care a fost redusă sub acțiunea complexului I sau a complexului II)
difuzează în membrana mitocondrială internă pînă la complexul III, unde va fi oxidată. Fiind
capabilă să accepte şi să cedeze 1 sau 2 electroni, coenzima Q are o poziţie intermediară între un
donor de 2 e− (NADH, prin intermediul complexului I şi succinat, prin intermediul complexului II)
şi un acceptor de 1 e− (citocromul b din componenţa complexului III).
11
Conţine citocromii b şi c1 şi proteine cu Fe-S.
Transferă e− de la coenzima Q redusă la citocromul c, conform ecuaţiei:
CoQH2 + 2 cit c (Fe3+) → CoQ + 2 cit c (Fe2+) + 2 H+
Rezultatul net al activităţii complexului III: CoQH 2 este reoxidată şi 2 molecule de cit c sunt
reduse.
Citocromul c
Este o proteină solubilă din spaţiul intermembranar, asociat cu faţa externă a membranei
mitocondriale interne. Acceptă 1 e− de la complexul III, după care se deplasează spre complexul IV
pentru a-i ceda electronul.
12
- gradient chimic: pe faţa externă a membranei mitocondriale interne, pH-ul este mai acid în
comparaţie cu faţa sa matriceală.
În acest gradient este stocată o energie electro-chimică, ce reprezintă o conservare temporară
a unei mari părţi a energiei eliberate prin transferul e − până la oxigen (aprox. 90%). Energia stocată
astfel se numeşte forţă proton-motoare: atunci când H+ curg spontan în sensul gradientului lor
electrochimic, energia stocată în acest gradient devine disponibilă pentru a efectua travaliu:
susţinerea sintezei ATP din ADP şi Pi.
Sinteza ATP
Are loc la nivelul complexului V: ATP sintaza sau complexul Fo-F1. Acest complex are
două componente (domenii funcţionale):
Fo este integrată în membrana mitocondrială internă; este alcătuită din 3 tipuri de
subunităţi (a, b şi c) în proporţiile ab2c10. Are un canal (por) central pentru H+ prin care protonii curg
în sensul gradientului de concentraţie, din spaţiul intermembranar spre matrice.
F1 este localizată pe faţa internă a membranei mitocondriale interne (proemină spre
matrice) şi este asociată cu Fo. Este alcătuită din 9 subunităţi: Subunităţile
şialternează, fiind dispuse ca feliile de portocală. Fiecare din cele trei subunităţi conţine un
centru catalitic pentru sinteza ATP. Subunitatea formează un ax central care trece prin F1 şi este
asociată cu Fo.
a) F1 izolată de Fo catalizează hidroliza ATP (ATP + H2O → ADP + Pi, G° = − 7,3
kcal/mol), motiv pentru care a fost denumită iniţial „F1 ATP-aza”.
b) F1 integrată în membrana mitocondrială internă, asociată cu F o, catalizează sinteza ATP:
ADP + Pi → ATP + H 2O. Reacţia fiind puternic endergonică (G° = 7,3 kcal/mol), poate avea loc
doar în condiţiile în care atât ATP cât şi H 2O sunt îndepărtate eficient din mediul de reacţie, astfel
încât concentraţia lor să fie menţinută la valori mult mai mici decât concentraţia ADP şi Pi (în felul
acesta G real poate fi negativ). Aceste condiţii sunt create în centrii catalitici ai ATP sintazei:
- mediul hidrofob menţine concentraţia moleculelor de H2O la o valoare redusă;
- ATP este îndepărtat printr-un mecanism rotativ mobilizat de curentul de protoni care trec
din spaţiul intermembranar spre matricea mitocondrială (în sensul gradientului de concentraţie),
prin porul existent în componenta Fo.
13
■ Mecanism de cataliză rotaţională la nivelul ATP sintazei, propus de către Paul Boyer:
Cei 3 centri catalitici ai subunităţilor se pot găsi în 3 conformaţii diferite: -ATP (cu
afinitate mare pentru ATP),-ADP (cu afinitate mare pentru ADP) şi-empty (cu afinitate foarte
mică pentru ATP şi ADP). Fiecare centru catalitic trece succesiv prin fiecare din cele trei stări: mai
întâi-ADP (leagă ADP şi Pi) → are loc sinteza ATP, în acelaşi timp centrul catalitic trecând la
conformaţia -ATP → în final, subunitatea trece la conformaţia -empty, cu afinitate foarte mică
pentru ATP, care va fi eliberat de pe suprafaţa enzimei. Apoi începe o nouă rundă de cataliză.
Aceste modificări conformaţionale ciclice sunt determinate de pasajul H+ prin porul Fo: acest
curent de H+ determină rotaţia cilindului format din subunităţile c şi a subunităţii ataşate. Aceasta
din urmă trece prin centrul sferoidului . Cu fiecare rotaţie de 120°, vine în contact cu o
subunitate diferită, iar contactul forţează acea subunitate să treacă în conformaţia -empty,
determinând eliberarea ATP.
În concluzie:
- prin transferul e− de la NADH sau succinat la O2, prin lanţul respirator, se degajă o anumită
cantitate de energie liberă → aceasta este utilizată la pomparea de H + în afara matricei
mitocondriale de către complexele I, III şi IV → se creează un gradient de H+;
- energia electro-chimică ce este conţinută în gradientul de H + reprezintă o forţă proton-
motoare: aceasta permite sinteza ATP la nivelul componentei F 1 a ATP sintazei, pe măsură ce H +
curg pasiv (în sensul gradientului lor electrochimic) înapoi în matrice prin porul de la nivelul Fo.
Pentru ca forţa proton-motoare să poată fi folosită la sinteza ATP, este absolut necesar ca
membrana mitocondrială internă să fie impermeabilă pentru H+, astfel încât gradientul de H+ să se
menţină şi protonii acumulaţi în spaţiul intermembranar să se poată întoarce în matrice numai prin
porul Fo.
■ Acest model pentru sinteza ATP se numeşte modelul chemiosmotic şi a fost propus de
către Peter Mitchell: termenul „chemiosmotic” descrie o reacţie enzimatică ce implică, simultan, o
reacţie chimică şi un proces de transport.
ADP + Pi + nH+ext → ATP + H2O + nH+int
(H ext sunt protonii de pe faţa externă a membranei mitocondriale interne; H+int sunt protonii ajunşi
+
14
■ Raportul P/O = numărul de molecule de ATP sintetizate pentru ½O 2 redus la H2O, sau
pentru fiecare 2 e− transferaţi în LR:
- experimental s-a constatat că numărul de H+ necesari pentru sinteza unei molecule de ATP
este 4;
- atunci când NADH este oxidat în LR, sunt pompaţi 10 H+ la nivelul complexelor I, III şi IV
(4 + 4 + 2) → raportul P/O este 10:4 = 2,5 (prin rotunjire se va considera ca fiind 3);
reacţia de oxidare a NADH cuplată cu sinteza ATP este:
NADH + H+ + ½O2 + 3ADP + 3Pi → NAD+ + 3ATP + 4H2O
- atunci când succinatul este oxidat în LR, sunt pompaţi 6 H+ la nivelul complexelor III şi
IV (4 + 2) → raportul P/O este 6:4 = 1,5 (prin rotunjire se va considera ca fiind 2);
reacţia de oxidare a succinatului cuplată cu sinteza ATP este:
succinat + ½O2 + 2ADP + 2Pi → fumarat + 2ATP + 3H2O
- amital (un barbituric) şi rotenona (produs din plante utilizat ca insecticid) inhibă fluxul e −
de la complexul I la coenzima Q;
- malonatul (similitudine structurală cu succinatul) inhibă competitiv complexul II (succinat
dehidrogenaza);
- antimicina A (un antibiotic toxic) inhibă LR între cit b şi cit c1 (în cadrul complexului III);
- cianurile şi monoxidul de carbon inhibă citocrom oxidaza (complexul IV).
15
Decuplarea lanţului respirator de fosforilarea ADP poate fi realizată:
- 2,4-dinitrofenolul este un decuplant chimic: acid slab cu moleculă hidrofobă, care poate
străbate membrana mitocondrială internă. Intră în matrice în formă protonată şi eliberează un H + →
se întoarce în spaţiul intermembranar în formă deprotonată; aici captează un proton → traversează
din nou membrana şi eliberează protonul în matrice ş.a.m.d.; în felul acesta, DNP permeabilizează
membrana mitocondrială internă pentru H+, disipând astfel gradientul de protoni transmembranar
(este un protonofor).
Rata respiraţiei (consumul de oxigen, sau altfel spus viteza transportului electronilor prin
lanțul respirator) în mitocondrie este reglată riguros; în general este limitată de disponibilitatea de
ADP ca substrat pentru fosforilare, având în vedere cuplarea dintre cele două procese (în prezenţa
ADP, rata consumului de O2 este semnificativ mai mare decât în absenţa ADP).
Concentraţia intracelulară a ADP este o măsură a statusului energetic al celulei.
atunci când consumul de ATP creşte (pentru diverse procese ce au loc cu consum de
energie), acesta este scindat în ADP şi Pi → rezervele de ATP scad iar concentraţia ADP creşte
(aceasta semnifică faptul că rezervele energetice ale celulei trebuie refăcute) → crescând cantitatea
de ADP disponibil pentru procesul de fosforilare, rata respiraţiei va creşte → aceasta va determina
regenerarea ATP;
atunci când consumul de ATP este redus, în celulă se menţin concentraţii ridicate de ATP
(ceea ce semnifică satisfacerea necesităţilor energetice) → în aceste condiţii, concentraţia ADP
este scăzută → scăzând cantitatea de ADP disponibil pentru fosforilare, rata respiraţiei va scădea.
Reglarea ratei respirației are loc sincronizat cu reglarea vitezei căilor metabolice de
degradare a combustibililor biologici, care duc la sinteză de ATP. Acestea sunt, în general,
controlate feedback de nivelul ATP: o creștere a concentrației ATP (ca urmare a utilizării sale
reduse) determină scăderea vitezei căilor degradative, în timp ce creșterea utilizării ATP duce la
scăderea nivelului său și creșterea nivelului ADP sau AMP, având ca efect creșterea vitezei căilor
de oxidare a combustibililor.
Se poate vorbi, astfel, de homeostazia ATP: aceasta se referă la capacitatea celulelor de a
menține niveluri constante de ATP în ciuda fluctuațiilor mari în rata utilizării sale. ATP-ul se
formează atât de rapid pe cât este utilizat în activităţile celulare consumatoare energie.
16