Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Petrisor Stefania Anul IV - Mutageneza
Petrisor Stefania Anul IV - Mutageneza
VETERINARĂ BUCUREŞTI
FACULTATEA DE HORTICULTURĂ
ID
Mutageneza
Petrișor Ștefania
anul IV
1
CUPRINS
Introducere………………………………………………………………………..3
Importanta mutagenezei…………..…………………………………………….4
Mutageneza caracterizate și utilizare…………………………………………….5
Concluzii……………………………………………..……………………………..…10
Bibliografie minimală…………………………………………………………….11
2
Introducere
3
Importanta mutagenezei
4
Mutageneza caracterizate și utilizare
Mutageneza este procesul prin care apar schimbări ereditare bruște în informația genetică a
unui organism, care nu sunt cauzate de segregarea genetică sau de recombinare genetică,
ci induse de agenți chimici, fizici sau biologici. Înmulțirea cu mutații folosește trei tipuri de
mutageneză. Acestea sunt:
- mutageneza indusă, în care mutațiile apar ca urmare a iradierii (raze gamma, raze X,
fascicul de ioni etc.) sau a tratamentului cu mutageni chimici;
- mutageneza dirijată pe situs, care este procesul de creare a unei mutații la un loc definit
într-o moleculă de ADN;
- mutageneza de inserție, care se datorează inserțiilor de ADN, fie prin transformarea
genetică și inserarea ADN-ului T sau prin activarea elementelor transpozabile.
5
utilizare, disponibilitatea mutagenilor, eficiența în inducerea anumitor modificări genetice,
țesutul adecvat, costul și disponibilitatea. infrastructura, printre alți factori.
Mutațiile induse de radiații ca instrument pentru generarea unei noi variații genetice în
plante au avansat ca domeniu după descoperirea acțiunii mutagene a razelor X demonstrată
în porumb, orz și grâu de către Stadler. Primul soi comercial mutant a fost produs în tutun în
1934. Înainte de 1995, Acquaah a raportat 77 de soiuri care au fost dezvoltate prin
mutageneză. În 1995, numărul de soiuri lansate comercial a crescut la 484. Acest număr a
crescut brusc de atunci, noi soiuri mutante fiind raportate continuu pe diferite continente.
Unele dintre plante includ pomi fructiferi (de exemplu, măr, citrice, piersici), plante
ornamentale (de exemplu, crizantemă, dalie, poinsettia), culturi alimentare (de exemplu,
orez, orz, grâu, porumb, mazăre), etc. Caracteristici agronomice modificate datorită la
reproducerea mutațiilor includ rezistența la adăpostire, maturitatea timpurie, rezistența la
iarnă, calitatea produsului (de exemplu, conținutul de proteine și lizină) și numeroși mutanți
ornamentali. Ca instrument de ameliorare, mutageneza a devenit foarte populară începând
cu anii 1950, când o gamă largă de culturi și specii de plante ornamentale au fost tratate
predominant prin iradiere pentru a crește variația trăsăturilor.
Mutageneza fizică
Radiația este definită ca energie care călătorește pe o distanță sub formă de unde sau
particule. Acestea sunt niveluri de energie relativ ridicate ale spectrului electromagnetic (EM)
care sunt capabile să disloce electronii de pe orbitele nucleare ale atomilor asupra cărora
aceștia au impact. Prin urmare, atomii afectați devin ioni. De aici, termenul de radiații
ionizante. Aceste componente ionizante ale EM includ razele cosmice, gamma (γ) și X
Razele X au fost primele folosite pentru a induce mutații. De atunci, diferite particule
subatomice (neutroni, protoni, particule beta și particule alfa) au fost generate folosind
reactoare nucleare. Radiația gamma de la cobalt radioactiv (60Co) este utilizată pe scară
largă. Are un potențial mare de penetrare și este periculos. Cu toate acestea, poate fi folosit
pentru iradierea plantelor întregi și a materialelor delicate, cum ar fi boabele de polen.
Efectul mutagen rezultă în principal din rupturile ADN-ului dublu catenar.
Razele gamma au o lungime de undă mai mică și, prin urmare, posedă mai multă energie
decât protonii și razele X, ceea ce le oferă capacitatea de a pătrunde mai adânc în țesut..
Sunt cel mai bine folosite pentru materiale, cum ar fi semințele uscate. Diverse forme de
neutroni au fost, de asemenea, studiate pe larg pentru utilizarea lor în mutageneză în anii
1960 și 1970. Deși s-a dovedit a fi un mutagen eficient, în special pentru producerea de
deleții mari de fragmente de ADN, aplicarea neutronilor în mutageneza indusă este limitată.
În ultimele două decenii, fasciculele de ioni, fie prin implantare, fie prin iradiere, au
devenit un nou tip de mutagen fizic în locul razelor gamma, razelor X și neutronilor. Ele
constau în particule care călătoresc pe o cale care variază în masă de la un proton simplu la
un atom de uraniu care sunt generate prin acceleratorii de particule. Ionii încărcați pozitiv
sunt accelerați cu o viteză mare (aproximativ 20%-80% din viteza luminii) și formează radiații
cu transfer liniar de energie (LET) ridicat. Radiația LET provoacă efecte biologice
semnificative, cum ar fi aberația cromozomială, letalitatea etc., în comparație cu alte tipuri de
6
radiații utilizate în mutageneza fizică. Potențialul mutagen al acestor raze a fost confirmat în
multe organisme. Emisia de lumină UV (250–290 nm) are o capacitate modestă de a se
infiltra în țesuturi în comparație. cu radiații ionizante. Fasciculele de ioni, fie prin implantare,
fie prin iradiere, au devenit un nou tip de mutagen fizic în locul razelor gamma, razelor X și
neutronilor utilizate pe scară largă. Daunele cauzate de fasciculele de ioni catenelor duble
de ADN sunt mai puțin reparabile în comparație cu cele induse de razele gamma din cauza
ștergerii fragmentelor de ADN de diferite dimensiuni
Radiațiile ionizante provoacă mutații prin ruperea legăturilor chimice din molecula de
ADN, ștergerea unei nucleotide sau înlocuirea acesteia cu una nouă. Acquaah a subliniat,
de asemenea, importanța ca radiația să fie aplicată la doza adecvată, un factor care depinde
de intensitatea radiației și de durata expunerii. Doza de radiație este de obicei măsurată în
unități roentgen (r sau R). Expunerea poate fi cronică (doză mică continuă administrată pe o
perioadă lungă) sau acută (doză mare pe o perioadă scurtă). Calitatea mutației (proporția de
mutații utile) nu este neapărat corelată pozitiv cu rata dozei. Este cunoscut faptul că o doză
mare nu dă neapărat cele mai bune rezultate. Doza de mutagen utilizată ar trebui să fie un
compromis între încărcarea mutației și șansa de a găsi mutații dorite, iar acest lucru depinde
în mare măsură de rentabilitatea selecției. Screening-ul populațiilor mutante mai mari care
provin dintr-o doză mai mică de mutagen poate fi fezabilă pentru trăsături cu criterii de
selecție fenotipică simple, cum ar fi maturitatea timpurie. Pe de altă parte, screening-ul
aceleiași populații pentru trăsături fenotipice complexe, cum ar fi calitatea proteinelor din
semințe, nu ar fi fezabilă.
Mutageneză chimică
Efectul mutagenilor chimici asupra materialelor vegetale este, în general, considerat mai
blând. Un avantaj al agenților chimici mutageni este că aceștia pot fi aplicați fără
echipamente sau instalații complicate. Raportul dintre modificările mutaționale și cele
nedorite este în general mai mare pentru mutagenii chimici decât pentru mutagenii fizici. De
obicei, materialul este înmuiat într-o soluție de mutagen pentru a induce mutații. Cu toate
acestea, mutagenii chimici sunt în general cancerigeni și, prin urmare, trebuie acordată o
atenție sporită pentru protecția sănătății în timpul procedurii. Materialele și fișele cu date de
securitate pentru mutagenul chimic specific ales trebuie citite cu atenție, iar agentul trebuie
inactivat în mod corespunzător înainte de eliminare. În ciuda numărului mare de compuși
mutageni, doar un număr mic a fost testat pe plante. Dintre aceștia, doar un grup foarte
restrâns de agenți de alchilare și-a găsit aplicații mari în mutageneza experimentală a
plantelor și în creșterea mutațiilor plantelor. Peste 80% dintre soiurile de plante mutante noi
înregistrate raportate în baza de date a Asociației Internaționale pentru Energie Atomică
(IAEA) obținute prin mutageneză chimică au fost induse de agenți de alchilare. Dintre
aceștia, trei compuși sunt semnificativi: etil metan sulfonat (EMS), 1-metil-1-nitrozouree și
1-etil-1-nitrozuree, care reprezintă 64% din aceste soiuri.
Una dintre cele mai eficiente grupări chimice mutagene este grupul agenților de alchilare
(aceștia reacționează cu ADN-ul prin alchilarea grupărilor fosfat, precum și a purinelor și
pirimidinelor). Un alt grup este cel al analogilor de bază (sunt strâns legați de bazele ADN și
7
pot fi încorporați greșit în timpul replicării). Un avantaj clar al mutațiilor punctiforme create de
mutagenii chimici este potențialul lor de a genera nu numai fenotipuri de pierdere a funcției,
ci și de creștere a funcției, dacă mutația duce la o activitate sau afinitate modificată a
proteinei, cum ar fi toleranța la erbicidul glifosat sau sulfonilureea prezentată în
leguminoasele Medicago truncatula. Concentrația mutagenului, durata tratamentului și
temperatura la care se efectuează experimentul afectează eficiența mutagenezei. Deoarece
mutagenii chimici sunt foarte reactivi, este important să folosiți loturi proaspete de substanțe
chimice care au fost depozitate în mod corespunzător.
Tipuri de mutații
Mutațiile pot fi împărțite în linii mari în mutații intragenice sau punctiforme (care apar în
interiorul unei gene din secvența ADN); mutații intergenice sau structurale în cadrul
cromozomilor (inversări, translocații, duplicări și deleții) și mutații care duc la modificări ale
numărului cromozomilor (poliploidie, aneuploidie și haploidie). În plus, este important să se
facă distincția între mutațiile nucleare și extranucleare sau plasmoniale (în principal
cloroplastice și mitocondriale), care prezintă un interes considerabil pentru agicultură. Printre
diferitele tipuri de modificări mutaționale la nivel molecular se numără substituțiile de baze,
termen care înseamnă modificări de nucleotide care implică înlocuirea unei baze cu alta.
Acest lucru se poate întâmpla prin împerecherea greșită a analogului de bază din ADN-ul
tratat în timpul replicării, ducând la mutații prin tranziții atunci când schimburile au loc fie
între purine (A-G), fie între pirimidine (T-C) și transversii atunci când purinele sunt schimbate
cu pirimidine. sau invers (A, G–T, C).
Practic, tranzițiile și transversiunile sunt cele mai simple tipuri de schimbări de perechi de
baze, dar pot avea ca rezultat mutații vizibile fenotipic. Nu există restricții privind diferitele
tipuri de modificări de secvență în ADN-ul unei gene în urma diferitelor tipuri de greșeli de
imprimare în timpul replicării. O altă eroare comună ar fi adăugarea sau ștergerea unei
perechi de baze de nucleotide atunci când una dintre baze reușește să se împerecheze cu
două baze sau nu reușește să se împerecheze deloc. Aceste tipuri de modificări de
secvență care au ca rezultat o modificare a cadrului de citire a ADN-ului genei sunt
cunoscute sub numele de mutații de schimbare a cadrului. Ele sunt mai drastice în efectul
lor, deoarece pot schimba complet mesajul genei începând cu punctul de ștergere/adăugare.
Unele dintre mutații apar din rearanjarea bazelor din ADN. O secvență mică sau mare de
baze poate fi inversată ca urmare a ruperii cromozomilor, iar reunirea capetelor rupte poate
implica diferite molecule de ADN într-o rearanjare reciprocă sau în pierderea unui fragment.
Duplicarea unei secvențe ADN este un alt mecanism comun de modificare a structurii unei
gene care duce la mutația genei.
Doza unui mutagen care atinge frecvența optimă de mutație cu cea mai mică afectare
neintenționată posibilă este considerată doza optimă pentru mutageneza indusă. Pentru
8
mutagenii fizici, acest lucru este estimat prin efectuarea de teste de radiosensibilitate (din
sensibilitatea la radiații), termen descris ca o măsură relativă care oferă o indicație a
cantității de efecte recunoscute ale expunerii la radiații asupra subiectului iradiat. Valoarea
sa predictivă, prin urmare, ghidează cercetătorul în alegerea dozei optime de expunere în
funcție de materialele vegetale și de rezultatul dorit.
Factorii importanți care influențează rezultatul mutagenezei folosind mutageni chimici
includ starea soluției mutagene; caracteristicile inerente ale țesutului vizat; mediul;
concentrația de mutagen; volumul de tratament; durata tratamentului; temperatura;
preînmuierea semințelor; pH (7,0); agenţi catalitici (Cu2+ şi Zn2+) şi manipularea
post-tratament. Factorii care influențează rezultatul mutagenezei folosind mutageni fizici
includ oxigenul; conținutul de umiditate; temperatura; agenți fizici ionizanți (EM și radiații
ionizante); praf și fibre (de exemplu, din azbest); agenți biologici și infecțioși (atât virali, cât și
bacterieni).
O înțelegere perfectă a structurii genetice a trăsăturilor care trebuie îmbunătățite este foarte
importantă. De exemplu, o trăsătură controlată de mai multe gene (adică poligenică) are
șanse mai mici de a induce modificare în comparație cu o trăsătură care este guvernată de o
singură genă (adică monogenă).
Înțelegerea modului de reproducere al culturii țintă este, de asemenea, o condiție
prealabilă, indiferent dacă este propagată asexuat sau sexual. Dacă este înmulțit asexuat,
atunci metoda de utilizat este următoarea întrebare: dacă va fi in vitro sau in vivo. Dacă
cultura este înmulțită prin semințe, întrebarea va fi despre tipul de fertilizare (autofertilizare
sau încrucișată) care trebuie utilizat.
Determinarea materialului care urmează să fie utilizat pentru înmulțire înainte de tratament,
adică gameți sau semințe pentru culturile înmulțite sexual; și butași de tulpină, muguri,
segmente nodale sau crenguțe pentru cele înmulțite asexuat.
Cunoașterea numărului de seturi de cromozomi din nucleul unei celule (ploidie) a culturii
țintă, mai ales atunci când se referă la modul în care barierele de hibridizare ar putea avea
un impact asupra eficienței prezise a mutanților induși.
Determinări ale pedigree-ului genetic al culturii țintă pentru inducerea mutațiilor, adică
selectarea plantelor homozigote și a celui mai bun genotip care este deficitar într-o singură
trăsătură.
Selectarea unui mutagen adecvat (mutageni fizici sau chimici) și a dozei (durata și
concentrația mutagenilor). De aceea, este recomandabil să se efectueze un test pilot înainte
de tratarea pe scară largă a propagulelor.
Identificarea infrastructurii (casa de iradiere, laboratoare, ecran/casă de sticlă, câmpuri
etc.) pentru selecția cu succes a mutanților doriti.
AIEA și-a clasificat baza de date a soiurilor mutante din 3222 (iulie 2015) de soiuri în
funcție de patru metode de ameliorare, și anume:
utilizarea directă a unei linii mutante care este dezvoltată prin mutageneză fizică și chimică
sau variație somaclonală;
utilizarea indirectă a unei linii/linii mutante, care este/sunt utilizate ca soi/soiuri parentale în
încrucișarea (încrucișare între liniile mutante sau cu un soi/soiuri comerciale);
9
utilizarea alelei (trăsăturii) genei mutante, de ex. alela Calrose 76 sd1 (trăsătura semi-pitică
1) din orez și
utilizarea genelor speciilor sălbatice translocate în genomul plantelor prin translocări
facilitate de iradiere, de ex. genele speciilor relative sălbatice ale grâului.
Printre celelalte clase, s-a obținut mai mult succes prin utilizarea liniilor mutante ca părinte
în programele de reproducere, precum și mutageneza în pepinierele de reproducție.
Mutațiile induse au contribuit la creșterea semnificativă a producției de culturi în locurile pe
care oamenii le-ar putea accesa direct. Utilizările la nivel mondial ale noilor soiuri derivate
direct sau indirect din mutanții induși sunt orezul în China, Thailanda, Vietnam și Statele
Unite; orz în țările europene și Peru; grâu dur în Bulgaria și Italia, grâu în China; soia în
China și Vietnam; precum și alte leguminoase alimentare din India și Pakistan.
În alte țări europene, dezvoltarea soiurilor mutante cu înălțime mică și cu randament ridicat
de orz „Golden Promise” și „Diamant” a avut un impact major asupra industriei berii. Acești
doi mutanți au fost folosiți și ca părinți pentru multe soiuri de orz din Europa, America de
Nord și Asia. De exemplu, a fost raportat de Ahloowalia că peste 150 de soiuri de orz de top
au fost derivate din încrucișări care implică „Diamant”. Acest soi mutant a fost lansat oficial
în Cehoslovacia în 1965 prin iradierea cu raze gamma a lui „Valticky”. „Diamant” are un
randament crescut de cereale cu 12% și este cu 15 cm mai scurt decât soiul părinte și a fost
cultivat pe mai mult de 43% din suprafața de orz din Cehoslovacia în 1972. Chiar și după 30
de ani de lansare, Golden Promise este încă popular și este utilizat pe scară largă de
industria berii din Irlanda, Scoția și Regatul Unit pentru producția de bere și whisky. Acest soi
se caracterizează prin calitate îmbunătățită a malțului, randament mediu de 4,5 t/ha și paie
rigidă.
Nu există nicio îndoială că există mult mai multe soiuri/soiuri derivate prin reproducere prin
mutații în întreaga lume. Deși nu sunt complet cuprinzătoare, exemplele analizate aici ar
putea servi pentru a ilustra efectul remarcabil pe care această tehnică l-a avut asupra
agriculturii mondiale, atât din perspectivă istorică, cât și contemporană. Pe fundalul
dezbaterilor încă în desfășurare cu privire la siguranța organismelor modificate genetic,
soiurile de culturi și soiurile care au fost derivate prin reproducere prin mutații în ultimii 50 de
ani, continuă să joace un rol cheie în agricultura actuală.
Concluzii
Baza de date privind soiurile mutante eliberate din 1950 arată tendințe specifice ale
activității asupra mutațiilor induse de radiații în peste 70 de țări. Din 3222 de soiuri mutante
înregistrate în peste 232 de culturi și specii de plante diferite eliberate prin mutație indusă,
cel mai mare număr este în China (810), urmată de Japonia (481) și India (330). Pe bază de
culturi, soiurile mutante maxime eliberate sunt soiurile de orez (815), fiind cea mai
importantă cultură alimentară din lume. Mutageneza indusă și strategiile sale de ameliorare
sunt instrumente potențiale pentru îmbunătățirea trăsăturilor atât cantitative, cât și calitative
ale culturilor într-o perioadă de timp mult mai scurtă decât reproducerea convențională.
Datorită simplității sale relative și a costului scăzut, tratamentul mutagen al semințelor și al
10
altor părți ale plantei rămâne un instrument util pentru izolarea variantelor dorite și
dezvoltarea rezistenței la stresul biotic și abiotic în diferite culturi. Astfel, soiurile mutante
eliberate fac deja parte din strategia generală și angajamentul Diviziei mixte FAO/AIEA de a
contribui la securitatea alimentară globală. Prin urmare, impactul soiurilor de culturi derivate
din reproducerea mutațiilor din întreaga lume demonstrează potențialul reproducerii prin
mutații ca o abordare flexibilă și practicabilă aplicabilă oricărei culturi, cu condiția ca
obiectivele și metodele de selecție adecvate să fie urmate în consecință.
Bibliografie:
Kharkwal MC. A brief history of plant mutagenesis. In: Shu QY, Forster BP,
Nakagawa H, editors. Plant mutation breeding and biotechnology
IAEA. IAEA mutant database. Vienna: International Atomic Energy Agency; c2015
11