Oxidarea

biologic
Lanul respirator
Fosforilarea
oxidativ

OBIECTIVELE

Oxidarea biologic. Dehidrogenarea substratelor - sursa energetic pentru

sinteza ATP - ului. Enziniele dehidrogenni.
Lanul respirator (schema). Complexele enzimatice. Acceptorii principali de
electroni i protoni, structura lor chimic.
Potenialul de oxido-reducere a componentelor lanului respirator.
Fosforilarea oxidativ. Locurile de fosforilare. Produsele finale ale oxidrii.
Reglarea intensitii funcionrii lanului respirator. Coeficientul
P/O, controlul respirator.
Decuplarea produselor de oxidare i fosforilare, principalii ageni
decuplani. Rolul biologic al produsului de decuplare, respiraia liber.
Mitocondriile, structura i permeabilitatea selectiv a membranelor pentru
diferii cumpui.. Sistemele-navet de transport al echivalenilor de
reducere.
Ipotezele principale, care explic procesele fosforilrii oxidative. Ipoteza lui
Mitchell.
Oxidarea microzomal, rolul citocromului P450 n reaciile de oxidoreducere.
Vitaminele i rolul lor n procesele de oxidare biologic.
Noiune de radicali liberi. Oxidarea peroxidic a acizilor grai nesaturai
din membrane. Sistemele de protecie a celulei de acumilarea radicalilor
liberi.

Oxidarea biologic. Dehidrogenarea

substratelor. Enzimele
dehidrogenrii.

Oxidarea biologic (OB) reprezint

totalitatea reaciilor de oxido-reducere ce
decurg n celule i esuturi.
Rolul: asigur organismul cu energie
accesibil n form de ATP.
OB are loc prin reacii de dehidrogenare
donarea atomilor de H2 sub form de
protoni i electroni: H22H+ +2 .
Are loc sub aciunea E dehidrogenaze,
ale cror Co sunt NAD+ i FAD

SUBSTRATELE NAD
Izocitrat +NAD alfa-cetoglutarat
+NADH+H
E- izocitratDH
2. Alfa-cetoglutarat +NAD succinil
Coa +NADH+H
E-alfacetoglutaratDH
3.Malat +NAD OA+NADH+H
E-malatDH
4. DOP
1.

Lactat +NAD Piruvat +NADH+H

E-lactatDH
Gliceraldehidfosfat +NAD +H3PO41,3
difosfoglicerat +NADH+H
E- GAP DH
Hidroxiacil CoA +NAD cetoacil Co-A
+NADH+H
E-hidroxiacil -CoA DH
Dezaminarea Glu
Oxidarea 3 hidroxibutiratului
Catabolismul alcoolului

SUBSTRATELE FAD
dependente

Succinat +FAD Fumarat +FADH2

E- succinat DH
Acil CoA + FAD enoil-CoA+FADH2
E- acil CoA DH
Glicerol 3 P + FAD GAP+FADH2
NADH+H+ i FADH2 rezultai n
reaciile de oxidare a acestor
substrate transfer p i n lanul
respirator.

Lanul respirator (LR). Rolul.

Structura.

LR - un ansamblu (complex) de
enzime i sisteme de oxidoreducere, ce particip la transferul
H+ i de la Co reduse (NADH,
FADH2) la O2 cu formarea H2O.
Este ultima etap a degradrii
aerobe.
Este localizat n membrana intern
a MC

Funcia LR:
1. Prin

transferul protonilor i
electronilor Co se reoxideaz,
putnd asigura dehidrogenri n
continuare.
2. Cnd Co se reoxideaz, se elibereaz
energie ce servete la sinteza ATP.

Componenii LR
1.

NADH+H sau FADH2

2.

Flavoproteinele FP: preiau p i e- de la

NADH+H sau FADH2
FPN (NADH DH) - ca Co FMN - preia H2 de la NADH+H
FPs (succinatDH)- ca Co FAD- preia H2 de la FADH2

Componenii LR
3. Coenzima Q

4. Citocromii
b560, b562, b 566, c1, c, a i a3

CH3
CH3

H3C
N

OOC

CH2

CH2

HC

Fe

CH2
COO

protein

CH3
N
CH

CH2

CH2

CH2

protein

CH3

CH3

Heme c

5. Proteinele Fe-S
a. ntre FP i CoQ
b. ntre cit b i citc1

[2Fe-2S]

[4Fe-4S]

Schema LR

Potenialul oxidoreductor
Fiecare verig a LR poate exista n 2 forme
redus i oxidat, deci,
2. Formeaz o pereche oxidoreductoare
3. Fiecare sistem redox (O/R) este alctuit
dintr-un donor i acceptor
4. Caracteristica
lor
principal
este
potenialul oxidoreductor (redox), care
1.

se msoar n voli.

5.

El este msura valoric a capacitii de

oxidare sau reducere a compusului

Potenialul oxidoreductor
Potenialul redox E mrime egal
cu fora electromotoare ce apare n
semiconductor, n care donorul de ei acceptorul acioneaz n c% de
1,0 mol, la t =25 *c, i pH 7,0
formnd un echilibru cu elecrodul ce
adiioneaz e- de la donor i-i
transfer la acceptor.

6. Cu ct potenialul redox este mai

electronegativ cu att este mai nalt
capacitatea de a ceda , i invers,
cu ct potenialul este mai
electropozitiv, cu att este mai nalt
capacitatea sistemului de a adiiona
electroni.
7. Sistemele redox sunt aranjate n
ordinea creterii potenialului de
oxido-reducere.

Potenialul oxidoreductor
al verigilor LR
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.

NAD+/NADH.H+
(-0,32V)
FAD/FADH2 (-0,05)
CoQ/CoQH2 +0,04
cit.b (Fe3+)/cit.b (Fe2+) +0,07
cit.c1 (Fe3+)/cit.c1 (Fe2+) +0,23
cit.c (Fe3+)/cit.c (Fe2+) +0,25V
cit.a (Fe3+)/cit.a (Fe2+) +0,29
cit.a3 (Fe3+)/cit.a3 (Fe2+) +0,55V
O/H2O +0,82V

Potenialul oxidoreductor
8. transferul n trepte permite eliberarea
energiei n pachete a crei valoare este
n jurul lui 7,3 kcal/mol (ct necesit
sinteza unui mol de ATP din ADP i
H3PO4).

4 H+ + 4 + O2 2 H2O + G0
G0 = 52,6 kcal
Cantitatea energiei eliberate
depinde de potenialul redox

tiind potenialul redox al fiecrei

perechi se pot calcula modificarea
energiei libere standard.
G = -nFE
n-numrul de
F-constanta lui Faraday (23062
cal/Vmol)
E0-diferena de potenial
G = -223062[+0,82-(-0,32)] =
-52,6 kcal
7,3 x 3 = 21,9 cal
Randamentul utilizrii energiei libere
42%

Torentul de e orientat n direcia

micorrii energiei libere a sistemului
Cu ct e mai mare diferena
potenialului dintre 2 redox perechi
cu att mai mare e diminuarea
energiei libere la transferul .

FOSFORILAREA
OXIDATIV

reprezint sinteza ATP din ADP i

Pi (cuplat cu LR), pe seama
energiei eliberate la transferul
echivalenilor reductori n LR de
la coenzimele reduse la O2.

Deoarece transferul de are loc

treptat, energia se elibereaz n
pachete n trepte .
Pentru a se forma ATP diferena de
potenial trebuie s fie nu mai mic
de 0,22V.
Funcionarea cuplat a LR i FO este
asigurat de 5 complexe

Composition of Respiratory
Chain Complexes
No. of
Proteins

Gruprile
prostetice

Complex

denumirea

Complexul I

NADH
Dehidrogenaza

46

FMN,
Fe-S

Complexul
II

Succinat-CoQ
Reductaza

FAD, cit b560,

Fe-S

Complexul
III

CoQ-cit c
Reductaza

11

cit b562, cit b566,

Fe-S, cit c1,

Complexul
IV

Citochrom
Oxidaza

13

cit a, cit a3, Cu

Complexul I- NADH CoQ

reductaz

1mol ATP
Inhibat: rotenon(otrav pentru peti),
Na amital (barbiturat); pericidin
(antibiotic)

Complexul II- succinat - CoQreductaza

Variaia de potenial este de 0,07V;

G0 = -3,2 kcal/mol nu se sintetizeaz
ATP
Inhibat malonat (inhibiie competitiv)

Complexul III- CoQ- citocrom c

reductaza

G0 = -7,75 kcal se sintetizeaz 1mol

de ATP.
Inhibat antimicina A

Complexul IVcitocromoxidaz
Catalizeaz adiia a 4 la O2 molecular (a 2 la O).
O2 + 4 + 4H+ 2H2O
Cderea de potenial de 0,54V.
G = -24,8 kcal se sintetizeaz 1mol de ATP
Inhibat: CO, ozide, cianide.

Toate componentele LR sunt dispuse n

membrana intern a mitocondriilor.
CoQ i cit c funcioneaz individual, iar
celelalte componente se grupeaz n
complexe.

Complexul V ATPsintetaz

F0 canal de protoni - strbate

membrana intern a MC, const din 4 tipuri de

protein ce formeaz un sistem de pori
transmembranari prin care trec protonii
1. F1- partea catalitic - se afl n intregime
n matrixul MC (form de sfer).
a.
e alctuit din cinci tipuri de proteine (3),
(3), , , .
b.
la acest nivel are loc reacia de condensare a
ADP + Pi ATP+H2O

Inhibat: oligomicin, atractilatul (glicozid)

Mitochondrial ATP Synthase E. coli ATP Synthase

These images depicting models of ATP Synthase subunit
structure were provided by John Walker. Some equivalent
subunits from different organisms have different names.

1.
2.
3.

Locusurile unde are loc sinteza ATP

se numesc puncte de fosforilare.
n LR (lanul respirator)
deosebim 3 puncte de fosforilare:
NADH+H----CoQ
Cit b----citc
cita--cita3

Bilanul general n
procesele LR-FO.

NADH + H+ + O2 + 3ADP + 3Pi

NAD+ + 3ATP + 4H2O
FADH + H+ + O2 + 2ADP + 2Pi
FAD + 2ATP + 3H2O

Raportul ntre numrul de moli de ATP

produi i O2 consumat este numit ct
de fosforilare P/O.
De la NADH+H pn la O2 - P/O =
3/1 ramura lung,
De la FADH2 pn la O2 - P/O = 2/1
ramura medie.
P/O reflect cuplarea transportului H+
i (respiraia) i fosforilarea (sinteza
ATP). Coeficient indic ce cantitate de P
anorganic (H3PO4) se transform n P
organic (ATP) la transportul unei perechi
de H+ i n LR.

Ipoteze principale cu privire la

procesele de FO. Ipoteza lui Mitchell

Prin ce mecanism energia eliberat n LR

este cuplat cu formarea ATP?
Teoria chimic, numit i a intermediatorilor
comuni (produi intermediatori macroergici,
precursori de ATP).
Teoria conformaional (energia este
preluat de o protein ntr-o conformaie
activ, ce stimuleaz ATP).
Teoria chemiosmotic (Mitchell, 1961).

Piter D. MItchell
(1920-1992)
Premiul Nobel
n chimie, 1978
pentru teoria chemiosmotic a cuplrii
oxidrii
cu
fosforilarea n lanul
respirator

Teoria chemiosmotic
postuleaz:
energia care determin sinteza
ATP din ADP i Pi i are originea
n gradientul de protoni ce se
stabilete ntre suprafaa intern
i extern a membranei interne
mitocondriale
n
timpul
transportului de electroni.

Ipoteza lui Mitchell

la transferul unei perechi de se

pompeaz 3 perechi de H2+ din
interiorul MC spre exterior (spaiu
intermembranar).
Astfel partea extern a membranei
interne a MC pozitiv, dar cea
intern negativ
apare gradient de protoni

Gradientul protonilor din matrice

n spaiul intermembranar are
2 componente :

1. Electric (potenial de
membran - (0,14V)
2 de pH ( pH)gradientul H+

Gradientul de protoni
determin FORA PROTON-MOTRICE
(p)
p = 2,303(RT/F) pH,
unde: potenialul membranar;
R constanta gazelor;
T temperatura
F constanta Faraday

Protonii revin din spaiu

intermembranar n mitocondrii prin
partea F0 (deoarece restul
membranei este impermiabil).
Acest flux de protoni este fora
morice care determin la nivelul
subunitii F1 sinteza de ATP din
ADP+Pi

Unul din postulatele teoriei

chemiosmotice prevede c apa
rezultat n reacia de formare a ATP
din ADP i Pi se ionizeaz spontan,
ionii H+fiind dirijati spre interiorul
mitocondriei (ei urmnd s creeze
gradientul protonic) n timp ce ionii
OH- snt dirijati spre spapul
intermembranar

Lanul respirator
Mal

OAA Suc Fum

MDH
2H+
2H+
+
NADH
2H+
matrix NAD
FAD
FADH2
C II
SDH

CI

membrana
intern

NADHDH

2e-

2H

spaiul
intermembranar

2H+
O2 H2O

C III

C IV

Cyt bc1

Cyt c ox

+
3H
ATP
H
+

ATPase

QH2

2H

cyt cox cyt cred

2H

H+

2H
2H+
10H+ims/4H+m = 2.5H+ per ATP

3H+

ATP

Datele experimentale ce
confirm:

S-a confirmat generarea gradientului de

protoni n cele 3 puncte ale LR. Anume
gradientul de protoni se utilizeaz la
sinteza ATP.
S-a demonstrat ca pH matrixului
mitocondrial crete, iar cel al mediului
extern al membranei MC scade (acid).
S-a argumentat c transferul H+ din MC
n timpul transportului de i revenirii
lor prin ATP-sintetaza sunt comparabile
cu viteza lor din cadrul FO n MC
intacte.

Transportul mitocondrial al
ATP i ADP

ATP/ADPtranslocazeiasigur transferul
ADP din citozol n
MC n schimbul ATP
din MC- citozol.
Fosfattranslocaza
transfer Pi n MC,
nsoit de
deplasarea ionilor
de H2.

ADP + Pi ATP
ATP4

matrix
lower [H+]

__
++

3 H+

ATP4 ADP3 H2PO4 H+

energy
requiring
reactions

ADP + Pi

higher [H+]
cytosol

Controlul respirator

Organismele vii sintetizeaz ATP n

raport cu necesitatea lui de aceea
FO cuplat cu LR este riguros
controlat.
Deoarece LR i FO etapa final a
degradrii G, L, P controlul
respirator se poate efectua att prin
compui direct implicai n LR i FO,
ct i prin intermediatorii degradrii
celor 3 clase.

Controlul respirator
Rolul primordial i revine ADP.
1. n lips de ADP rmne blocat F1 din
ATP - sintetaz
2. de nivelul ADP e determinat i
intensitatea transferului de protoni
prin F0
3. ADP reglator alosteric (+) pentru
mai multe E ce sunt implicate n
degradarea G, L i P.

Controlul respirator

Lipsa de ADP - inhib respiraia i

stopeaz fosforilarea.
La adugarea de ADP crete brusc
consumul de 02 ---- se activeaza
lantul respirator i ADP se
fosforileaz la ATP.

Decuplarea produselor de oxidare i

fosforilare, principalii ageni decuplani.

1.

2.

AD

La FO contribue:
Integritatea membranei interne a MC
orice leziune duce la pierderea capacitii de
FO (n timp ce transferul de poate continua).
Impermeabilitatea membranei interne
pentru ionii H+ OH- K+ Cl-.
FO poate fi decuplat cu ajutorul unor
substane chimice, ce inhib sinteza ATP dar
neafectnd LR ageni decuplani. La
aciunea lor respiraia crete, iar FO este
inhibat.
protonofori
ionoforele

Protonoforii mresc
permeabilitatea membranei pentru
protoni(H+), lichidnd potenialul
transmembranar.
1. a.g. liberi
2. 2,4 dinitrofenol
3. salicilaii (antiinflamatoare)
4. dicumarol (anticoagulant)
5. T3 i T4 (h.gl.tiroide)
Ionoforele ei leag i transfer ionii
prin membran:
- valinomicina ( K+) , nigericina (
K+), gramicidina A Na+, K+; H+.

Decuplanii

H+

2,4Dinitrophenol
OH
NO2

O
NO2

H+

NO2

NO2

+ H+

H+

Inhibitorii ai fosforilrii acioneaz

asupra ATP-sintetazei.
Oligomicina blocheaz ptrunderea
H+ prin FO (nchide canalul) cu
ncetul slbete respiraia
ntrerupere.

Inhibitorii
Fosorilrii de
ADP

Oligomycin
Atractyloside

Respiraia liber

are loc decuplarea FO de LR i toat

energia este convertit n cldur, care nu
se utilizeaz la executarea funciilor
celulare.
Astfel MC devin o sob, ce produc
cldur. E necesar cnd necesitatea
cldurii este mai mare dect ATP.
n esutul adipos brun MC sunt
specializate la producerea cldurii (nounscui, animale n hibernare)
termogenina.

Oxidarea microsomal

Un alt tip de reacii de OB este cel

oxigenazic. Acestea sunt catalizate de
monooxigenaze.
Lanurile monooxigenazice de oxidare
sunt lanuri scurte de transport al H+ i
a cror surs sunt NADPH+H
SH + O2 +NADPH + H S-OH + H2O +
NADP+
reducerea O2 i incorporarea lui n
anumii compui chimici (include un atom
de O, cellalt este redus la H2O).

un asemenea lan este microsomial localizat n RE al celulelor hepatice

i suprarenale.
Rol esenial l are cit P450
(activatorul O2). El cuprinde o FP
(FAD) la nivelul creia H2 este
disproporionat n H+ i .

Rolul OM

Rolul: plastic i dezintoxicare.

n ficat hidroxilarea medicamentelor,
neutralizarea toxinelor, hormonilor
(sunt eliminai).
n medulosuprarenale sinteza
noradrenalinei i adrenalinei.
n corticosuprarenale sinteza
colesterolului, hormonilor gluco- i
mineralocorticoizi.

Noiune de radicali liberi. Oxidarea

peroxidic a AG nesaturai. Sistemul de
protecie.

La reducerea incomplet a O2 se
formeaz forme reactogene i
agresive ale substanei cum ar fi:
superoxidanionul, peroxidul;
radicalul hidroxil sau peroxidul de
hidrogen.

Specii incomplet reduse ale oxigenului

1.

O2 + O2 (anionul superoxid)

2. O2 + 2H+ + H2O2 (apa oxigenat)

sau
O2 + O2 + 2H+ H2O2 + O2
3. H2O2 + O2 HO + HO + O2
sau
H2O2 + H+ + HO + H2O
(radicalul hidroxil)

Rolul biologic

Sinteza eicosanoizilor
Rennoirea membranelor
biologice
Apoptoza
Transmiterea semnalelor intra- i
intercelular

Speciile reactive ale

oxigenului
implicate n patogeneza:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Cancerogenez
Infarct miocardic
Ateroscleroz
Hipertensiune arterial
Diabet zaharat
Artrit reumatismal
et.c.

Sistemul de protecie
antioxidant
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Enzimatic
Catalaz
SOD superoxid dismutaza
Glutation peroxidaza
Glutation-S-transferaza
Glutation reductaza
Etc.

Neenzimatic

1. -tocoferolul (vit.E)
2. GSH (glutationul)
3. Ac. Ascorbic (vit.

C)
4. Polifenolii
5. Carnozina
6. Etc.

SOD transformarea O2- n H2O2

2 O2- +2H+ O2- + H2O2
Catalaza
2H2O2 2H2O + O2
Glutation reductaza
glutationperoxidaza