Familia

Mycoplasmataceae
Disciplina de Microbiologie
Prof. dr. Gh. Rpuntean
Conf.dr. S. Rapuntean

1
 Incadrare taxonomic
Germenii inclui n aceast grup fac parte din clasa
Mollicutes (Edward i Freundt 1967), ordinul
Mycoplasmatales (Freundt 1955), care cuprinde 3
familii:
Mycoplasmataceae (Freundt 1955),
Acholeplasamataceae
Spiroplasmataceae.
Denumirea de Mollicutes este inspirat de absena
peretului celular rigid, astfel c nveliul este moale (lat.
mollis moale, elastic i cutis nveli).
Microorganismele din acest grup sunt larg rspndite la
om, animale i plante i au drept caractere comune
absena peretelui celular, dimensiuni mici, n jurul a 200
nm i posibilitatea de a se cultiva in vitro pe medii
acelulare.

2
 Genul Mycoplasma
Primul reprezentant al acestui gen a fost studiat de
Nocard i Roux (1898) i anume agentul
pleuropneumoniei contagioase a bovinelor, care de-a
lungul timpului i-a pstrat poziia de specie de referin
pentru tot grupul.
Autorii menionai au cultivat bacteria n medii
nsmnate i introduse n saci de colodiu implantai n
cavitatea peritoneal la iepure.
n 1900 Dujardin i Beametz sunt primii care reuesc
cultivarea n bulion cu ser, iar Elfort (1929)
demonstreaz filtrabilitatea micoplasmelor, prin filtre cu
pori de 125-150 nm.

3
 Specii de interes veterinar

Mycoplasma mycoides M. hyopneumoniae (M.

subsp. mycoides, suipneumoniae),
M. mycoides subsp. M. hyorhinis,
capri, M. gallisepticum,
M. bovigenitalium, M. meleagridis,
M. bovirhinis, M. sinoviae,
M. agalactiae, M. gallinarum,
M. bovis, M. iners,
M. anatum.

4
 Alte specii izolate mai recent

la bovine: M. alvi, M. arginini, M. bovirhinis,

M. verecundam;
la cai: M. equigenitalium, M. equirhinis, M. fastidiousus,
M. salivarium, M. subdolum;
la porci: M. flocculare, M. hyofarngitis, M. sualvi;
la oi i capre: M. arginini;
la cini: M. edwardii, M. canis, M. maculosum,
M. molare, M. opalescens, M. spumans;
la pisici: M. feliminutum, M. gateae;
la cobai: M. caviae;
la psri: M. gallinarum, M. cloacae

5
 Ecologie, rezisten
Micoplasmele sunt germeni epifii obligatoriu, prezeni la
nivelul diferitelor mucoase, mai ales respiratorii i
genitale, la om, animale i psri.
S-au izolat i de la o serie de animale din grdini
zoologice, animale marine.
Datorit absenei peretului celular, micoplasmele sunt n
general mai sensibile fa de factorii de mediu,
comparativ cu bacteriile clasice.
Fa de antibiotice s-a constatat, la cele mai multe
tulpini, sensibilitate fa de tetracicline, tylan,
spiramicin, cloramfenicol i altele.
Toate micoplasmele sunt rezistente la penicilin, motiv
pentru care penicilina se introduce n mediile de cultur
ca agent inhibitor, alturi de acetatul de thaliu.
6
 Morfologie
Membrana lipoproteic limitant permite o plasticitate
morfologic deosebit, ceea ce face ca acest grup de
microorganisme s fie tot att de divers ca i bacteriile.
n anumite condiii de cultivare fiecare specie are
caracteristicile ei morfologice, dar totui nu exist un
prototip morfologic pentru diferitele specii cunoscute.
Sunt germeni necapsulai, nesporulai, neciliai.
Mobilitatea observat la unele specii rezult dintr-o
micare de alunecare.
Forma i dimensiunile micoplasmelor depind n mare
msur de modul lor de reproducere.

7
 Mycoplasma pneumoniae
gliding phase.mpg

8
Bacteriologie - curs 7\YouTube - Mycoplasma pneumoniae gliding phase.mpg.avi
 Formele micoplasmelor
Rezultatele studiilor privitoare la morfologia
micoplasmelor, au permis stabilirea urmtoarelor forme:
celule cocoide,
celule cocoide cu tubuluri membranoase,
celule filamentoase,
celule filamentoase cu structuri terminale,
celule n form de par cu structuri terminale.
Toate aceste forme nu se gsesc n orice condiii de
cultivare, dar n principiu caracterele morfologice sunt
suficient de caracteristice pentru a permite aceast
clasificare.

9
 nmulirea micoplasmelor
Se realizeaz prin diviziune binar, care poate s
alterneze cu reproducerea prin corpi elementari, sub
forma unui ciclu biologic, cnd dintr-o celul cocoid se
dezvolt un filament, care se ramific printr-un proces
asemntor cu nmugurirea.
Formele filamentoase ajung la dimensiuni de 150 m i
aspectul unui pseudomiceliu.
n interiorul filamentului iau natere formaiuni sferice, ce
reprezint aa numiii corpi elementari.
Acetia sunt pui n libertate cnd ajung la maturitate
prin strangularea filamentelor la nivelul zonelor de
separare, fr a se constitui septumuri transversale

10
 Colorarea micoplasmelor

Se realizeaz cu dificultate.
Ele sunt germeni Gram negativi, dar pentru studiul lor se
utilizeaz mai mult metoda Giemsa.
Pentru a avea certitudine observrii germenilor n frotiuri,
culturile pot fi n prealabil centrifugate, dar se va ine
seama de producerea unor eventuale modificri ca
urmare a centrifugrii.
forme sferice
filamente
celule aberante
aspecte deformate
11
 Cultivarea

Micoplasmele se cultiv n medii acelulare cu o anumit

compoziie, n anumite condiii de temperatur,
umiditate, pH, atmosfer etc.
Unele specii pot fi cultivate n oul embrionat de gin
i/sau culturi celulare.
n practic se folosesc aproape exclusiv medii acelulare
semisintetice sau chiar sintetice, lichide, solide sau
bifazice, cu pH 7,68,0.
Temperatura optim de cultivare este de 37oC.
La prima izolare se recomand o compoziie atmosferic
de 95 % N2 + 5 % CO2.
12
 Cultivarea
Dezvoltarea culturii se face n general lent, motiv pentru
care se recomand ca incubarea s dureze cel puin 1-3
sptmni, cu examinarea periodic la 2-3 zile.
Mediile cele mai adecvate sunt bulionul i agarul la care
se adaug un surplus de ingrediente menite s satisfac
exigenele nutritive ale micoplasmelor (ser sangvin,
extract de drojdie, glucoz, peptone, vitamine etc.).
Aceste medii se cunosc sub numele de bulion i agar
PPLO.
Pn n prezent nu s-a descris un mediu universal,
capabil s asigure cultivarea tuturor speciilor cunoscute.
Pentru selectivitate i inhibarea dezvoltrii altor germeni,
mediile conin penicilin (800100 UI/ml) i acetat de
thaliu (0,05 %), iar ca indicator rou fenol (0,002 %).
13
 Aspecte culturale (1)
n medii lichide se constat o turbiditate slab care se
percepe mai bine cnd examinarea se face ntr-o
ncpere semintunecoas i iluminarea lateral a
tuburilor.
n unele cazuri mediul poate rmne limpede dei
tulpina nsmnat s-a multiplicat.
Se constat virarea culorii mediului din rou n galben.
Pentru obinerea de culturi ct mai bogate s-au folosit cu
succes cultivarea pe agitator sau culturi rotate.
n cazul tulpinilor T titrul maxim este atins dup 1618
ore de la nsmnare, titru ce se menine aproximativ o
zi sau numai cteva ore.

14
 Aspecte culturale (2)
Pe medii solide se formeaz colonii care apar dup un
timp variabil, n general ntre 4872 de ore.
Coloniile, dup nsmnarea primar, apar dup un
interval de timp mai prelungit, n funcie de specie i
originea inoculului, iar dup adaptare, ele se dezvolt
mai repede.
n mod obinuit coloniile de micoplasme sunt rotunde i
prezint un centru dens, granular, nconjurat de o zon
periferic mai lax, pe ansamblu colonia avnd aspectul
de ou ochiuri.
Centrul dens este determinat de acumularea masiv de
celule care cresc n profunzimea agarului, ceea ce
impune folosirea unui agar mai moale.
n zona periferic pot aprea numeroase insule
dantelate sau structuri vacuolare.
15
 Aspectele coloniilor
Morfologia coloniilor se poate observa bine, dac
examinarea se face sub lup, innd seama de
dimensiunile lor foarte mici, diametrul lor variind ntre 10
i 600 de microni.
Unele colonii izolate ating 1 mm diametru i pot fi
observate cu ochiul liber.
S-au descris 3 tipuri de colonii, n funcie de specie,
tulpin i compoziia mediului:
tipul clasic cu aspect de ou ochiuri descris mai sus;
tipul granular cu aspect omogen i suprafaa granular;
tipul T (tiny-punct) cu aspect omogen, granular, dar cu
dimensiuni foarte mici, punctiforme (1525 pn la 175
200 ).
16
Aspecte morfoculturale
Sursa: Internet

17
 Cultivarea n ou embrionate
Pe ou embrionate se multiplic un numr mare de
micoplasme.
Se recomand folosirea oulor n vrst de 12-13 zile,
inocularea fcndu-se pe cale intravitelin.
Unele tulpini produc de la nceput moartea embrionilor,
altele necesit o prealabil adaptare, dup mai multe
pasaje oarbe.
n folosirea acestui substrat biologic se va inea seama
de faptul c 2 specii de micoplasme i anume M.
gallinarum i M. gallisepticum, pot infecta transovarian
embrionul de gin i ar putea crea confuzii de
diagnostic.

18
 Proprieti biochimice

Metabolismul micoplasmelor este predominant

fermentativ i n mai mic msur oxidativ.
Glucidele cele mai frecvent fermentate sunt glucoza,
galactoza, manoza i arginina.
Sunt lipsite de proprieti proteolitice.
Unele tulpini sunt capabile s lichefieze gelatina, serul
coagulat sau cazeina i reduc unele substane colorante
(clorura de trifenil tetrazolium, albastrul de metilen).
Nu produc indol i nu lichefiaz gelatina, iar producia de
H2S i activitatea fosfatazic sunt variabile.

19
 Structur antigenic
Speciile de micoplasma sunt antigenic distincte, dar
ncercrile de clasificare serologic, de identificare a
unor serotipuri n cadrul speciilor de Mycoplasma n-au
dat rezultate concludente.
Determinanii antigenici majori ai micoplasmelor sunt
glicolipidele i proteinele de membran. Glicolipidele
sunt haptene, ele pierzndu-i capacitatea imunogen n
cazul separrii lor de proteinele din membran.
Evidenierea anticorpilor sau micoplasmelor n
organismul animalelor/ psrilor bolnave i/sau
purttoare se poate face prin reacii de aglutinare
(RARL, RAL), hemaglutinare pasiv, RFC,
imunofluorescen, inhibarea multiplicrii, inhibarea
metabolizrii i altele.

20
 Patogenitate, infecii naturale
Patogenitatea. Este condiionat de diferii factori interni
i externi. Mecanismele patogenitii rezid att n
virulena tulpinilor, ct i n prezena unor componente i
secreii toxice, cu efecte mai ales asupra sistemului
nervos.
Infecia natural. Unele micoplasme s-au dovedit
patogene, fiind considerate ageni etiologici ai unor
entiti clinice bine conturate.
Sunt practic afectate toate speciile de animale domestice
i slbatice, psrile i animale marine.
De la animale cu diferite alte boli, precum i de la
animalele sntoase se izoleaz adesea micoplasme, a
cror semnificaie patogenic nu este nc bine
precizat.

21
 Entiti clinice cunoscute
Pleuropneumonia contagioas a bovinelor
Mycoplasma mycoides subsp. bovis
Pneumonia enzootic a porcilor
M. hyopneumoniae
Pleuropneumonia contagioas a caprelor
M. mycoides subsp. capri
Agalaxia contagioas a oilor i caprelor
Mycoplasma agalactiae
Micoplasmoza respiratorie aviar
Mycoplasma gallisepticum
Sinuzit infecioas la curci
Mycoplasma sinoviae
22
Aspecte clinice la psri
Sursa: Internet

23
Aspecte clinico-anatomice la porc
Sursa: Internet

24
Aspecte clinice la ovine-caprine
Sursa: Internet

25
Aspecte anatomo-clinice la
ovine/caprine
Sursa: Internet

26
Micoplasmoz la porcine i bovine
Sursa: Internet

27
 Diagnostic
Micoplasmele sunt microorganisme fragile ce trebuie
pstrate la rece.
Acestea sunt reprezentate de raclaj de mucoas,
exudate traheale, esuturi pulmonare cu leziuni, fluide
din caviti (articulaii, burse seroase, lichid pleural etc.),
lapte mastitic, avortoni, ou.
In consecin probele trebuie s ajung la laborator ntr-
un interval de 24-48 de ore.
Se folosete un mediu de transport.
Un mediu de transport simplu pentru probele de lapte
mastitic, este proba nsi la care se adaug 5 mg/ml
ampicilin. Acesta este inut la temperatura camerei,
care ar permite replicarea micoplasmelor chiar n timpul
transportului.

28
 Examene de confirmare (1)
Examen microscopic direct. Fragilitatea,
pleomorfismul i slaba capacitate de colorare a
micoplasmelor, fac ca examenul microscopic direct s
aib o redus valoare pentru diagnostic.
Examen bacteriologic. Pentru izolarea micoplasmelor
se vor utiliza mediile speciale PPLO.
Se recomand s se nsmneze cte dou plci, una
se va incuba n aerobioz, iar cealalt ntr-o atmosfer
de 5 % CO2 i 95 % N2.
Plcile se in la incubat timp de 48 i 96 de ore i se
examineaz la o lup stereo sau la microscop.
Plcile n care nu se observ colonii se in n continuare
la termostat pn la 14 zile, i numai dup acest interval
se consider negative.
29
 Examene de confirmare (2)
Examen biochimic. n afara testelor precizate la
examenul biochimic se consider necesar efectuarea
urmtoarelor teste:
sensibilitatea la digitonin. Acest test reflect
necesitatea de colesterol pentru cretere.
Microorganismele din genul Micoplasma i Ureaplasma
sunt sensibile la digitonin, n timp ce speciile de
Acoleplasma nu sunt sensibile la aceast substan.
testul ureazei modificat. Ureaplasmele sunt capabile s
produc ureaz; se efectueaz ntr-un mediu ce conine
10% uree i 0,8% clorur de mangan (manganese
chlorid). Un rezultat pozitiv este indicat de o reacie de
culoare la nivelul coloniilor, care devin brune, iar ulterior
negre, ca urmare a depozitrii de mangan.

30
 Examene de confirmare (3)
Examen serologic. Se practic mai multe teste
serologice, care urmresc evidenierea anticorpilor:
aglutinare rapid pe lam prin utilizarea unui antigen
colorat; se folosete ca test screening pentru
micoplasmozele psrilor;
inhibarea hemaglutinrii utilizat pentru diagnosticul
micoplasmozelor aviare;
difuziunea n gel de agar pentru diagnosticul
micoplasmozelor aviare folosind un antigen cunoscut;
R.F.C. utilizat pentru controlul pleuropneumoniei
contagioase a bovinelor i ca test screening pentru
pneumonia enzootic a porcului;
ELISA pentru detectarea anticorpilor la vite, n cazul
infeciilor provocate de M. bovis; infecii cu M.
gallisepticum; infecii cu M. gallisepticum i M. sinoviae;
Latex aglutinarea pentru detectarea anticorpilor n
infeciile cauzate de micoplasme la capre;
31
 Imunoprofilaxie
Micoplasmele ndeplinesc condiii de imunogenitate.
La noi n ar se practic vaccinare mpotriva agalaxiei
contagioase a oilor i caprelor, folosind un vaccin
inactivat i adsorbit pe hidroxid de aluminiu.
Durata imunitii este de 1 an de zile.
Se mai practic vaccinarea psrilor de reproducie,
ncepnd cu vrsta de 6 sptmni, utiliznd un vaccin
preparat dintr-o tulpin atenuat de M. gallisepticum
(MG 6/85), care se administreaz prin aerosoli.
Vaccinul este bine tolerat i induce un rspuns imun prin
formarea de anticorpi aglutinani.
Un vaccin inactivat, preparat cu M. hyopneumoniae, se
utilizeaz la porci (sugari, tineret nrcat i aduli) pentru
prevenirea pneumoniei enzootice.

32