Laboratorul 12

GRUPA BACTERIILOR DE FORM ALUNGIT,

ONDULATA SAU SPIRALATA

Familia Spirochetaceae
Familia Leptospiraceae
Familia Spirillaceae
Microbiologie FMV Cluj-Napoca

Familia Spirochetaceae
Genul Brachispira
Brachispira hyodisenteriae specia tip
Morfologie
- aspect alungit, 6-8,5/0,3-0,4 m
- 3-4 ondulatii neregulate, amplitudinea de 2-4 m
- necapsulati, nesporulati
- ciliati 8-9 flageli foarte mobili
- Gram negativi, Giemsa sau impregnatia argentica
mai frecvent folosite
2

Brachispira hyodisenteriae specia tip

Medii de cultur i condiii de incubare
- se dezvolta cu dificultate, tardiv in 5-6 zile
-Medii speciale
- Solide cel mai des utilizate
agar cu ser/sange pH 6,9
adaus de spectinomicina
- Lichide bulion din soia cu tipticaza
+ ser fetal 10%
bulion cord + creier
- anaerob, oxigen tolerant
- cultivare in atm. 20% CO2
- incubare la 42C, limite 36-42C
3

Brachispira hyodisenteriae specia tip

Caractere culturale
Medii lichide:
- turbiditate absenta, mediu limpede
Medii solide: - agar cu sange
- colonii mici, 0,5 mm, lucioase, convexe, semitransparente,
- hemoliza clara, evidenta

Proprieti biochimice
-uzual nu se investigheaza
-Indol +

Conduita diagnosticului microbiologic

Material patologic
- cadavre de purcei
- portiuni de intestin gros
- tampoane rectale
- materii fecale
- portiuni din colon cu 10% formaldehida

Conduita diagnosticului microbiologic

Examen bacterioscopic
- foarte util stabileste gradul de infectie
- amprente din raclat profund de mucoasa
- suspensie in ser fiziologic, fixare, col. Gram, Giemsa
- se examineaza 10 campuri
Semnificaie
- morfologia caracteristica
-nr. de germeni/camp:
- 1-5 = inf. slaba, subclinica
- 6-15 = inf. cronica
- 16-25 = inf. subacuta
- 26-100 = inf. acuta, grava

Conduita diagnosticului microbiologic

Examen bacteriologic
-Insamantari pe agar + ser sau sange
-Incubare in conditii de anaerobioza, la 42C
Semnificaie
- aspectul cultural, hemoliza completa
- indol +
Infectia experimentala
- Purcei SPF; HDCDIR
- Testul ansei ligaturate

Familia Spirochetaceae
Genul Borellia
- sunt spirochete inalt adaptate la transmiterea prin artropode
- capusile rezervor principal pentru borelii
- inmultire prin diviziune transversala
- se cultiva greu, pe medii complexe
Borellia burgdorferi specia tip
Morfologie
- aspect alungit, 10-30 m
- Evidentiere prin microscopie in camp intunecat,
IF, coloratia Giemsa
- Gram negativi, mobili
8

Borellia burgdorferi specia tip

Medii de cultur i condiii de incubare
- se dezvolta cu dificultate pe mediul Kelley cu proteina animala si
galbenus de ou
- pe o mixtura de celule somatice (limfoide, epiteliale, sinoviale)

Conduita diagnosticului microbiologic

Material patologic
- se expediaza probe de piele cu eritem (locul muscaturii)
- lichid pericardic sau peritoneal
- portiuni de seroase, lichid cefalorahidian, creier, lichid sinovial
- sange pentru examen serologic (diagnostic retrospectiv)

10

Conduita diagnosticului microbiologic

Examen bacterioscopic
- se evidentiaza morfologia boreliilor (aspect caracteristic)
- densitatea acestora in campurile examinate

Examene serologice
- hibridari AND, PCR,
- tehnici imunoenzimatice ELISA, imunoblot

11

Lyme disease

Lab 12\YouTube - Lyme Disease(1).avi

12

How Lyme Disease and it's

Treatments Work

Lab 12\YouTube - How Lyme Disease and it's Treatments Work..avi

13

Familia Leptospiraceae
Genul Leptospira
Leptospira interrogans specia tip
12 specii
29 serogrupe
260 serovaruri:
- L. canicola
- L. icterohemoragiae
- L. pomona
- L. hebdomadis

14

Leptospira interrogans specia tip

Morfologie
- germeni alungiti filamentosi
- flexibili 6-12/0,06-0,12 m
- spiralati, spire fine, apropiate, dispuse regulat
- Capete indoite sub forma de carlig sau croseta
-necapsulati, nesporulati, neciliati
- foarte mobili, miscari de rotatie, translatie si flexiune
- Gram negativi nu se utilizeaza col. Gram
- impregnatie argentica Tribondeau-Fontana
- examinare la microscop cu camp intunecat

15

Leptospira interrogans specia tip

16

Leptospira interrogans specia tip

Medii de cultur i condiii de incubare
- nu cresc pe medii uzuale
- necesita lipide, vitamine (B1, B12)
- se folosesc medii lichide:
- m. Korthof
- m. Uhlenhuth
T de cultivare diferita
- leptospire patogene 25-30C
- leptospire nepatogene 5-13 C
- germeni aerobi
- se dezvolta lent in 6-8 zile

17

Leptospira interrogans specia tip

Caractere culturale
- n medii lichide
- nu produce turbiditate
- mediile raman limpezi
- In iluminare oblica valuri carasteristice
-In medii semisolide (agar moale)
-se pastreaza tulpinile de colectie

Proprieti biochimice
- nu se testeaza in mod curent
18

Conduita diagnosticului microbiologic

Material patologic
Difera in functie de stadiul evolutiv:
- animale in viata:
faza de leptospiremie (5-7 zile) sange
faza de leptospirurie (8-14 zile) urina
- cadavre: - portiuni de organe (ficat, rinichi)
- avortoni

19

Leptospira

Lab 12\YouTube - LEPTOSPIRA.avi

20

Leptospira2

Lab 12\YouTube - Leptospira2.avi

21

Conduita diagnosticului microbiologic

Examen microscopic in camp intunecat

Semnificatie:
- prezenta
pe fondul
intunecat a unor
germeni subtiri,
stralucitori,
foarte mobili

22

Conduita diagnosticului microbiologic

Examen bacterioscopic
- frotiuri din materialul patologic, dupa centrifugare
- Colorare Tribondeau - Fontana
Semnificaie
- prezena germenilor filamentosi capete incurbate
- colorati in brun pe fondul galben al preparatului

Examen bacteriologic
- probele trebuie insamantate in cel mai scurt timp
- incubare la 25-30C

23

Conduita diagnosticului microbiologic

Infectia experimentala
-cobai, inoculat i.p. 2-3 ml material patologic
-termometrare zilnica , prima zi de febra examene specifice

Examene serologice
RMAL (MAM micro-aglutinarea microscopica) diagnosticul
retrospectiv al bolii
- identificarea serogrupei si titrul anticorpilor aglutinanti

24