Pseudomonas aeruginosa

Pseudomonas aeruginosa
Caractere generale:
• bacili Gram negativi, nefermentativi, mobili (1 cil polar), subtiri, drepti 0,5-0,8/1,5-3µm/
• dispusi in perechi, strict aerobi catalaza+, oxidaza+ (au citocrom oxidaza)
• nesporulati, la pacienti cu fibroza chistica s-au detectat specii cu capsula polizaharidica
• produc pigmenti ( piocianina -albastru ; fluoresceina- galben, piorubina-caramiziu)
•bacteria a fost izolata pentru prima data in 1882 din puroi verde de catre Gessard.
Ubicuitar
• prezent in ape statatoare, de scurgere chiar si in apa distilata contaminat
• in sol (ca agent de putrefactie ai materiei organice vegetale si animale)
•potential pathogen de spital in special in unitatile de terapie intensiva prezent in rezervoare
umede ( chiuvete, bai) sau in echipamentele de respiratie.
• predispozitie pentru infectarea gazdelor imunodepresate in special pacientii cu arsuri
• patogen important pentru pneumonia asociata ventilatiei asistate
P. aeruginosa si Enterococcus fecalis
CHROM agar 37ºC/ 48 h
Pseudomonas sp. Colonii verzi
albastrui
DIAGNOSTIC BACTERIOLOGIC
Recoltare: sange, lichide din seroase, LCR, urina, bila,sputa
Izolare-geloza sange , IM, bulion /apa peptonata1%, geloza inclinata 2%
Identificare:
Caractere de cultura creste usor pe medii simple in aerobioza -bulion, apa peptonata1%, geloza,pH 7,2
geloza simpla: colonii rotunde convexe fluorescente, deseori cu reflexe metalice (galben verzui), miros
aromatic(acetaminofenona)
: uneori disociaza-col.S-mucoase,gelatinoase nepigmentate-izolate din infectiile cronice ale tractului
respirator/ colR/col.pitice apar in aceeasi cultura-falsa impresie ca sunt specii
diferite : multe tulpini prezinta luciu metalic argintiu si pete iridiscente (bacterii autolizate) dedesubtul
carora se vad cristale in mediu(saruri de acizi grasi eliberati prin autoliza)
bulion/apa peptonata: tulburare cu formare de pelicula la suprafata care dupa cateva zile se
fragmenteaza,cade la fund, mediul devine filant si vascos, concomitent mediul se pigmenteaza in albastru
verde si apare mirosul aromatic de flori de tei
mediul Istrati-Meitert: colonii mici albastre, aderente de mediu
geloza-sange:col.gri , lucioase,hemolizaβ-intensificata la temperatura camerei(tulpinile izolate din mediu
extern nehemolitice/slab hemolitice)
mediu Loeffler: -dupa 48h la37°C-suprafata mediului devine anfractuoasa datorita prezentei enzimelor
proteolitice, pigmentandu-se rapid in verde-albastru
caractere de cultura/oxidaza+, catalaza+,oxideaza glucoza, nu maltoza,zaharoza, lactoza,ureaza-, H2S,- se
dezvolta la
42°C si nu la 4°C, formeaza nitritii din nitrati,indol-, rosu metil-
Lizotipie,serotipie, piocinotipie
Tratament combinat Imipenem , Ticarcilina.; prevenirea contaminarii pacientilor sau echipamentului steril
Imunoprofilaxia : vaccin piocianic polivalent(preparat din 11 serotipuri diferite cele mai frecvent izolate)
 Familia Pasteurellaceae
Genul Haemophilus
bacili gram-negativi 0.2 to 0.3 × 1.0 to 2.0
µm
facultativi anaerobi
medii de imbogatire - crestere mai lenta

• Haemophilus : hemo – sange, hilos – iubitor de sange- creste

pe geloza sange
• H. influenzae- initial s-a crezut ca este agentul etiologic al gripei
• H. aegyptius, "Egyptian" (observat de R. Koch in 1883 in
exudatele unui egiptean cu conjunctivita
• H. ducreyi– numele bacteriologului Ducrey, care a izolat
pentru prima data acest microorganism
• Actinobacillus -actinis, raza, crestere sub forma filamentoasa
• Aggregatibacter; agregare, - bacterii care agrega
• Pasteurella – numele Louis Pasteur
 Haemophilus
Haemophilus influenzae – infectii la copii ; inaintea introducerii vaccinului
Hib (meningita, epiglotita)
Haemophilus aegyptius – conjunctivita purulenta acuta, febra purpurica
Braliliana
conjunctivita urmata de febra , dureri abdominale , varsaturi, petesii,
purpura, soc, moarte
Haemophilus ducreyi – sancru moale ( BTS)- inaparent clinic la femei,
manifest la barbati-
incubatie 5-7zile, papula pe o baza eritematoasa , genital, anal, 2zile
ulcereaza , dureroasa, adenopatie inghinala
Haemophilus parainfluenzae (biotipuri II, III) – prezent in cavitatea
bucala, infectii
oportuniste tract respirator sup/inf

Cresterea multor specii Haemophilus – medii suplimentate cu unul sau

ambii factori de stimulare ai cresterii:
hemina (X factor)
nicotinamid adenin dinucleotid (NAD; V factor - vitamina)
geloza sange contine cei doi factori -distrugerea inhibitorilor factorului V –
incalzire usoara-
geloza chocolat
 Structur
STRUCTURA
a
LPZ- endotoxina
ME: proteine specifice de specie si de tulpina
multe tulpini - capsula polizaharidica : 6 serotipuri antigenice ( a-f), Hib
> 95% infectii invazive (inaintea introducerii vaccinului)
tulpinile necapsulate – infectii invazive
-3 reactii biochimice; producere de indol, activitatea ureazei si a ornitin
decarboxilazei: 8 biotipuri ( I-VIII)
Patogeneza, Imunitate
-primele luni de viata –Haemophilus sp, necapsulate H. parainfluenzae-
colonizeaza tractul respirator superior
- diseminare locala – otita, sinuzita, Infectii tract respirator inferior
-Hib biotip I- bola invaziva la copii nevaccinati ( meningita, epiglotita)
-Pilii, adezinele nonpiliare – colonizare orofaringe
-LPZ, glicopeptide- blocheaza functia ciliara- distrugeri epiteliu respirator
-Bacteriile pot transloca prin celulele epiteliale si endoteliale – circulatie –
diseminare meninge
-Capsula poliribitol fosfat- (PRF) rol antifagocitar
--Ac anti capsula – urmare a infectiei naturale sau vaccinarii cu PRF purificat
-IgA1 proteaza- faciliteaza colonizarea bacteriana
 
H. influenzae - Produs patologic: puroi, exsudate nazofaringiene, exsudate vaginale, spută, LCR
Microscopie: colorație Gram prelungită 10-20 min., cocobacili cu capete rotunjite, mici Gram-, izolați în
aceeași direcție, aspect de bancuri de pești; variază ca formă de la cocobacili la filamente lungi pleomorfe,
(detectate la pacienți cu meningita netratată)
Identificare antigenică:
latex aglutinare pentru antigenului polizaharidic capsular PRP (numai H. influenzae tip b); există reactii
incrucisate cu S. pneumoniae si E. coli, se impune cultivarea pentru confirmare
reacția de umflare a capsulei Quellung: ser anti H.influenzae specific de tip + produs patologic + Albastru
de metilen;
imunofluorescentă (IF); contraimunoelectroforeza CIE ( din LCR)
Insamanțare: bulion hemoglobinat, geloza sânge, geloza Levinthal, mediul Fildes, geloza chocolat
H.influenzae necesită factori de creștere prezenți în sânge: factorul X protoporfirina/protohem
termostabil, cu rol în sinteza enzimelor respiratorii ce conțin Fe (citocromi; catalază; oxidază); factorul V
nicotin amid adenin dinucleotid (fosfat) NAD (P) termolabil cu rol în procesele de oxidoreducere
Caractere de cultură:
-bulion hemoglobinat creștere sub forma de flocoane mici albe
-geloza sânge cu penicilina (inhibă flora de asociație), la 36 h: colonii mici transparente, izolate, în picătură
de rouă
-geloza Levinthal- după 10-18 h (germeni încapsulați), colonii cu irizație caracteristică în lumină oblică
care dispare după 24h de incubare și apare o culoare cenușie albastră (colonii ce conțin germeni
neîncapsulați)
-mediu Fildes-geloză topită cu sânge supus digestiei peptice
-geloză chocolat cu 5U/ml bacitracina și 5mg/ml cloxacilina – colonii mici rotunde transparente
-geloză sânge- fenomen de satelitism; se insamanțează în paralel cultură de stafilococ, hemolizinele
lizează eritrocitelor din mediu se eliberează factorilor X și V;. coloniile sunt mult mai mici decât pe geloza
chocolat deoarece inhibitorul factorului V prezent in sânge nu este inactivat
-Identificare biochimică: indol+/-, reduc nitrații de K la nitriți K, biloliza +, ureaza +
Fenomenul de
satelitism
H. ducreyi
Produs patologic: tampon steril, se șterge
marginea șancrului, se apăsă la baza ulcerației
și se pătrunde sub baza ulcerației, se
recoltează câteva picături de serozitate
Microscopie: bacili mici Gram - capete colorate
mai intens (măciuca), dispuși izolat, în diplo
sau lanțuri scurte cu aspect de “lanț de
bicicletă”
Izolare: geloza 3% cu sânge defibrinat de
iepure 30%-în atm umedă cu 10% CO2,
necesită prezenta factorului de creștere X
Caractere de cultură:
–colonii mici 1mm S, cenușii, lucioase
- după câteva zile apare o zona de hemoliză
îngusta pe mediul gonococ agar (GC)
suplimentat cu 1%-2% hemoglobină, 5% ser
fetal bovin
 Haemophilus parainfluenzae- endocardita
subacuta

Tratament -cefalosporine cu spectru larg,- infectii severe

-cele mai puțin severe (sinuzite) cu ampicilină daca sunt sensibile;
- mai mult de 30% sunt rezistente ( produc beta lactamaze)
-izolatele de H.ducreyi si aegyptius- sunt sensibile la eritromicină.
-Prevenirea meningitei cu H. influenzae tip b se face prin imunizare activă înainte de vârsta
de 6
luni urmată de rapeluri ( 2luni)
 BACILI GRAM
POZITIVI
GENURI
Sporulati
Baccillus-­‐aerobi Clostridium –
anaerobi
Nesporulati Corynebacterium
Listeria
 FAMILIA BACILLACEAE GENUL BACILLUS

• B. anthracis
• B. cereus
• B. subtilis
B. Gram +, 3-10µ/2µ, capete taiate drept,
imobili,capsulati (B.anthracis-tesuturi animale
bolnave), dispusi in lanturi,aerobi facultativi
anaerobi
φ Spor < grosimea
bacilului, dispus central
B. anthracis:1x3-8µm, in pp dispusi in diplo, lanturi scurte, serpentine ;
sporii nu se vad pe frotiuri realizate direct din pp; se vad in cele realizate
din culturi de 2, 3 zile
antrax (zoonoza)
cutanat
pulmonar
gastrointestinal
Habitat
tesuturi, umori animale bolnave
dejectii animale- sol (rezervorul natural)- spor
Caractere de cultura
• aerob facultativ anaerob
• medii simple -35-37ºC
• agar- colonii R coama de leu
•bulion - mediu limpede , flocoane depuse
pe peretii eprubetei

Caractere biochimice
• Reduce nitratii
• Indol -
• Ureaza-
• Lichefiaza gelatina
• Hidrolizeaza cazeina
 Antrax - zoonoza

Cutanat- traumatism cutanat prin care patrund sporii (fata,

gat, membre superioare)
-sporii germineaza - multiplicarea celulelor vegetative-
edem gelatinos - papula apare in 12-36 h de la infectie -
vezicula - pustula maligna
- - ulcer necrotic - poate disemina
-Netratata - infectia disemineaza pe cale limfatica/sanguina -
septicemie
• Pulmonar
• Inhalare praf cu spori- debut cu simptome nespecifice
• -tuse uscata si presiune substernala
• implicarea nodulilor limfatici-
• mediastinita hemoragica,congestie severa
• la nivelul mucoaselor,soc septic, moarte in
24 h

Gastro-intestinal
Ingerare carne insuficient preparata - provenita de la animalul bolnav
- Ulceratie la locul de patrundere , limfadenopatie locoregionala , edem , sepsis , febra, grata, varsaturi, dureri abdominale, diaree sanguinolenta
Diagnostic: bacterii prezente in concentratie
ridicata in pp , cresc rapid in medii de cultura
Microscopie – Gram +, imobili , bacili lungi subtiri
singuri sau in lanturi scurte
Sporii nu sunt observati direct din pp; numai din
cultura incubata in prezenta unei concentratii
scazute de CO2
 Colonii nehemolitice aderente
Confirmare prin demonstrarea prezentei capsulei coloratie verde malahit,capsula vizualizatain
microscopia de contrast tus de India
M'Fadyean albastru de metilen , IF directa – ac impotriva polizaharidului capsular
Liza de catre fagul gama Test PCR

Colonii de Bacillus cereus -stanga , colonii de Bacillus anthracis in

dreapta
B. Cereus - colonii mai mari tip M cu o zona de hemoliza pe geloza sange
Liza produsa de fagul gama pe culturile de B.anthracis .
Fagul gama este specific pentru liza B. anthracis,dar nu lizeaza colonii de
B. cereus,
Colonii M - Bacillus anthracis.
Cultura obtinuta in prezenta unei concentratii crescute de
CO2 (5% CO2)-
creste productia de polipeptid capsular
CARACTERE ANTIGENICE
•REACTIA DE PRECIPITARE IN INEL - DG. RETROSPECTIV
ANTRAX

•TRATAMENT- Penicilina G 2 milioane unitati la 6 ore / 7-10 zile,

Eritromicina 500mg la 6 ore, Cloramfenicol

•Profilaxie: Ciprofloxacin, Doxiciclina

•Vaccinare: pentru lucratori in zone la risc vaccin preparat din antigenul

capsular
Bacillus cereus- gastroenterita, inf oculara, sepsis- cateter
Sporii contamineaza orezul, rezista tratamentului termic din timpul
gatitului, germineaza la cald/ reancalzit- T I A -toxic

• 1-6 h incubatie - forma emetica - produsa de enterotoxina stabila

termic ~ Staphylococcus aureus
• 8-16h- forma diareica, crampe abdominale , diaree apoasa, redusa
cantitativ produsa de enterotoxina labila termic care
stimuleaza adenilat ciclaza ~ Clostridium perfringens

Tratament- simtomatic
 CLOSTRIDIUM
Anaerobi / toxine histotrope Anaerobi / toxine
Clostridiile gangrenei neurotrope Cl. botulinum
gazoase Cl. tetani
Cl. perfringens
Cl. histolyticum
Cl.
oedematiens
Cl. septicum
Cl. sporogenes
-gangrena gazoasa/ miozita clostridiana
- celulita clostridiana
- injectita
-sindrom gangrenos postoperator
- sindrom gangrenos postpartum/
postabortum
Clostridium tetani
•Bacili mari, capete rotunjite
• strict anaerobi
•Sporulati- germeni telurici, spor terminal
φ > φ celulei bacteriene- bat de chibrit
•Necapsulati
•Mobili cili peritrichi

•Habitat
•intestin- forma vegetativa
•Sol- sporuleaza
•Caractere de cultura: S , hemoliza pe geloza sange

Dg. - rar izolat de la nivel locului de intrare - nu

are capacitatea de invazivitate
Tetanospasmina- exotoxina- produsa la locul de patrundere-
proteaza- cliveaza proteinele implicate in eliminarea de
mediatori acetilcolina, glicina - spasme musculare generalizate,
hiperreflexie, convulsii
-Dg. Clinic, epidemiologic
-La 4-5 zile - paralizie spastica
-in regiunea patrunderii sporilor
-Mm masticatori- trismus nu se deschide gura
-Facies- risus sardonicus
-Opistotonus
-Moartea 50%: asfixie

-Tratament ser antitetanic , anatoxina tetanica

-Penicilina G
-Prevenirea spasme- diazepam

-Profilaxia plagi risc tetanigen:

-toaleta chirurgicala
-Vaccinare ATPA
-Penicilina G 10 zile
-Profilaxie specifica: DTP 2, 4,6 luni, revaccinareI
la 6 luni de la primovaccinare , revaccinare I I la 36
luni de viata , rapel 6-7 ani cu DT, rapeluri cu
ATPA la fiecare 10 ani
Clostridium botulinum
•bacili mari , necapsulati, mobili, cili peritrichi, in aerobioza sporuleaza,
spor subterminalal
• Cresc pe medii simple, S inconjurate de o zona pufoasa
• Geloza-sange -hemoliza
• Tulbura uniform bulionul
• 8 exotoxine, A, B, E- proteaze, blocheaza eliberarea de acetilcolina ,
doza letqala 1-
• Se multiplica in aliment
BOTULISM-paralizie flasca

• Diplopie la 18-24h de la ingestie

• Paralizie bulbara- imposibilitate de inghitire si
vorbire
• Paralizia muschilor respiratori
• Dg.extractie ag. din aliment, toxina termolabila ;
dg diferential cu toxina termostabila vegetala
• -toxinotipie -soareci inoculati cu antitoxina A,B
• Tratament spalatura gastrica, purgativ, aport hidric
echilibrat , ser antibotulinic mono/polivalent
Clostridium difficile
Exotonine A, B-depolimerizarea actinei
pirderea integritatii citoscheletale,
apoptoza si moartea enterocitelor
Habitat tract GI in 3% din populatie si
30% diin pacientii spitalizati
Colita pseudomembranoasa (sigmoidoscopie) post antibiotica,
clindamicin, cefalosporine de generatia I I , I I I
Diaree fara sange, PMN > 50% cazuri
Dow nloaded from: StudentConsult (on 19 May 2009 04:32
PM)
Clostridiile gangrenei
gazoase

C. perfringens

C.oedematien
s
C. septicum
C.
histolyticum
C. sporogenes
Gangrena gazoasa-
mionecroza
HABITAT: ubicuitare in natura
tract digestiv om, animale - forme vegetative
sol ( dejecte)- sporuleaza- diametru > decat cel al
bacilului; sursa principala de infectie
Caractere generale
Bacili mari 1µ/6-10µ
C. perfringens-capsulat, imobil
Ceilalti -mobili, cili peritrichi
sporul central/subterminal
 

- C.perfringens-
Medii simple creste repede la 45°C, colonii S/R
Geloza-sange- hemoliza tip cald rece
Enzime-histotropism lecitinaza, proteaze, hialuronidaze, colagenaze
Dow nloaded from: StudentConsult (on 19 May 2009 04:32
PM)
Ex. microscopic - secretii din plaga- aspect serosanghinolent,

Cl. perfringens:
- bacil gros, scurt, drept, 0.6 - 2.4 × 1.3 -19.0 µm capete
rotunjite, in produs frecvent nesporulat, incapsulat
- sporii apar in leziuni mai vechi de 3 zile ( ovalari,
subterminali) toxine letale alpha [α], beta [β], epsilon [ε], and
iota [ι]) 5 tipuri A-E lecithinase (phospholipase C)
Cl. oedematiens
- bacil lung, gros, spor ovalar subterminal
Cl.septicum
- bacili subtiri, scurti, spor ovalar subterminal
Cl. histolyticum
- bacil subtire, scurt cu spor ovalar mare situat central- aspect
de butoias
Cl. sporogenes
- bacil lung, gros cu spor ovalar, subterminal, devine foarte
repede liber
Insamantare, izolare
- inactivarea pp. la 70°C timp 30’(inactivare forme vegetative)
- insamantare : bulion VF+AB

- geloza VF (tuburi Weinberg):

C. perfringens- colonii biconvexe cu margini bine delimitate
Celelalte- mobile- colonii - grenada explodata cu un centru opac
cu filamente la unul din poli
Cl. septicum - colonii cu arborescente - tendinta la expansiune
rapida in
mediu
Cl. histolyticum - colonii mici opace cu margini
neregulate Cl sporogenes - aspect de papadie
- geloza cu galbenus de ou, geloza Willis ( galbenus de ou
si lactoza)

Anaerobioza - amestec reducator\etanseizare parafina /amestec

reducator (carbonat de K, pirogalol, talc)
- lecitinaza- Cl perfringens, Cl. Oedematiens
CLOSTRIDIUM SEPTICUM
Teste de patogenitate - cobai-1ml cultura +24mg clorura de calciu in laba piciorului

moartea- 18-72 h
precedata de leziuni caracteristice :

• Cl. perfringens - moarte dupa 24-48 h- gaze ( miros putrid),

mioliza sanguinolenta fara puroi, leziuni hemoragice generalizate
• Cl septicum - moarte in 18h - invazivitate , mobilitate bacteruana
• Cl. oedematiens- moartea in 24-72 h , edem gelatinos la locul
inocularii , bloc unic in care sunt prinse toate tesuturile
• Cl. histolyticum moarte in 24-72h, liza totala a tesuturilor si
tendoanelor, dezarticulatii
• Cl. sporogenes leziuni asemanatoare cu cele de la histolyticum
• Antibiograma nu este necesara_ sensibilitate la Penicilina , Ampicilina,
Eritromicina, Cefalosporine, Cloramfenicol