INFECIILE

ZOOANTROPONOZE.
MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL ANTRAXULUI,
TULAREMIEI, BRUCELOZEI I PESTEI
Zooantroponozele reprezint maladii ale
animalelor care pot fi transmise oamenilor n
rezultatul unui contact direct sau indirect cu
populaii animale infectate.
Unele din aceste infecii - antraxul, tularemia,
pesta, bruceloza fac parte din categoria
infeciilor extrem de periculoase.
1. Sunt foarte contagioase (receptivitate general)
2. Sunt capabile s provoace nu doar epidemii, ci
i pandemii
3. Provoac infecii cu evoluie foarte grav

Microbiologia i diagnosticul de laborator
al antraxului
Clasificarea:
Familia Bacillaceae
Genul: Bacillus
Specii: Bacillus anthracis (patogen, agentul antraxului)
Bacillus cereus (intoxicaii alimentare),
Bacilus polimyxa, Bacillus subtilis, Bacillus brevis
(produceni de AB) bacili antracoizi
Bacillus anthracis a fost prima bacterie la care a fost
demonstrat rolul ei n patogenia unei infecii.
n 1877, Robert Koch a izolat microorganismul n cultur
pur, demonstrnd capacitatea lui de a forma endospori
i a produs antraxul experimental inoculndu-l la animale.
Caracterele morfobiologice ale B.anthracis
Bacil mare (5-6 m x 1 m), cu extremitile drepte
(tiate), gram-pozitiv, imobil (antracoizii sunt
mobili), n produse patologice se prezint sub
form de lanuri scurte, iar n cultur lanuri
lungi (tulpin de bambuc).
Tulpinile virulente formeaz capsul polipeptidic
(acidul D-glutamic).
Sporul este ovoid, n poziie central, nu
deformeaz celula. Sporogeneza are loc n
cultur, n sol i n esuturi i exsudate din
animale moarte (n prezena oxigenului), dar nu
n snge sau esuturi de animale vii.
Caractere de cultur
B.anthracis nu este exigent nutritiv, cultiv pe medii uzuale.
Facultativ-anaerob, t optim 35-37 grade, pH 7-7,4.
Peste 24 ore de incubare formeaz colonii R, mari, cu
contur neregulat, opace, plate, uscate, rugoase (coam
de leu, cap de meduz). Nehemolitice pe geloz-
snge (antracoizii sunt hemolitici). Pe geloz-ser, n
exces de CO2, formeaz colonii S (producerea capsulei).
Pe mediu cu 0,5-1 UI de penicilin B.anthracis formeaz
lanuri din forme globulare - colier de perle (proprietate
absent la antracoizi).
n bulion peptonat formeaz flocoane la fundul eprubetei,
cu supernatantul clar.
B.anthracis este sensibil la fagul gamma.
The following figures (5, 6, and 7) from the CDC are reliable images of Bacillus anthracis grown as described in the figure legends.




Caractere biochimice
Activitate proteolitic lichefiaz gelatina n form
de brad inversat, coaguleaz i peptonizeaz
laptele, diger serul coagulat, nu produce H2S.
Activitate zaharolitic fermenteaz unele glucide:
glucoza, maltoza, zaharoza, tregaloza, etc. Nu
fermenteaz lactoza i arabinoza.
Rezistena n mediul extern: formele vegetative sunt
slab rezistente, sporii rmn viabili n sol decenii,
se distrug la fierbere n 30 min.

Factori de patogenitate
1. Capsula polipeptidic (poli-D-glutamat), codifict
de plasmida pX02. Inhib fagocitoza i puterea
bactericid a sngelui. Capsula joac un rol
important n etapele iniiale ale infeciei. Formarea
capsulei are loc in vivo i in vitro, pe medii cu ser
i n atmosfer cu 5 % CO2.

2. Exotoxina antraxului, codificat plasmidic (pX01)
Este constituit din 3 componente:
Factorul I, edematogen (EF), care este o
adenilat-ciclaz. Acumularea de cAMP duce la
modificarea permeabilitii membranare cu
producerea edemului. Inactiveaz PMN
Factorul II, antigen protector (PA), induce
sinteza Ac antitoxici protectori. PA este
responsabil de fixarea toxinei pe receptorii
celulelor sensibile.
Factorul III, letal (LF), responsabil de efectele
letale ale toxinei anthrax. Este o proteaz Zn++
dependent care induce producerea citokinelor de
ctre macrofage i limfocite (TNF, IL-1) i
stimuleaz reacia inflamatoare.
Aparte, aceti factori exercit activitate biologic
nesemnificativ la animal. Din contra, combinaii
din doi sau trei factori toxici determin
urmtoarele consecine la animale
experimentale:
PA+LF = activitate letal
PA+EF = produce edem
EF+LF = inactiv
PA+LF+EF = edem i necroz cu efect letal
Acest experiment sugereaz c toxina antraxului
are structur clasic de citotoxin bacterian de
tip A-B cu PA n calitate de B-fragment (de fixare
pe receptori celulari) i cu factorii EF i LF cu
funcie de fragment A (activ), care acioneaz n
interiorul celulei.

Structura antigenic a B.anthracis
1. Ag polipeptidic capsular (induce Ac
neprotectori)
2. Ag polizaharidice somatice termostabile
(depistate n reacia de precipitare
Ascoli)
3. Toxina (componentul PA), induce
formarea Ac protectori, neutralizani
Epidemiologia i patogeneza antraxului
Sursa de infecie animalele erbivore bolnave de antrax
(ovine, caprine, bovine, suine). Solul contaminat cu spori
este un rezervor de germeni important i permanent (80
ani).
Transmiterea:
- prin contact direct cu animalele bolnave sau produse
contaminate (carne, piei, ln, blan, etc), puni i
nutreuri contaminate, cu ptrunderea agentului prin
tegument
- aerogen, prin inhalarea sporilor de B.anthracis
- pe cale alimentar (consum de carne de la animale bolnave
de antrax insuficient prelucrate termic)
n majoritatea cazurilor antraxul se manifest ca boal
profesional a ngrijitorilor de animale, personalului de la
abatoare, ntreprinderi de prelucrare a produselor
animaliere, veterinarilor, zootehnicienilor, mcelarilor,
tbcarilor, etc.
Formele clinice de antrax
I. Antraxul cutanat , pustula malign (forma cea
mai frecvent). Sporii intr printr-o leziune a
tegumentului, germineaz i prolifereaz la poarta
de intrare, cu dezvoltarea unui edem gelatinos
local caracteristic. n locul penetrrii, peste 12-36
ore de la infecie, apare o papul, care evolueaz
rapid ntr-o vezicul, apoi n pustul cu coninut
sanguinolent. La spargerea pustulei se formeaz o
leziune necrotic, prezentnd n centru o escar
neagr nconjurat de vezicule satelite. Leziunea
se localizeaz mai frecvent pe mini, fa, ceaf,
etc. Ptrunderea n snge determin diseminarea
sistemic a bacteriei.
II. Antraxul pulmonar apare la inhalarea
sporilor de B. anthracis , care sunt
nglobai de macrofagele alveolare unde ei
germineaz i se multiplic, determinnd o
pneumonie foarte grav. Urmeaz
infectarea ganglionilor limfatici mediastinali
cu dezvoltarea unei necroze hemoragice.
Pacientul manifest febr, stare de ru,
mialgie, tuse neproductiv. Din ganglionii
limfatici infecia poate trece n snge.
Decesul poate surveni n 24 h.
III. Anthraxul digestiv apare n urma
consumului de carne infectat. n mucoasa
intestinal se dezvolt procese identice cu
cele din antraxul cutanat (enterocolit
ulceroas). Poate urma invazia ganglionilor
limfatici mezenterici i a sngelui.
Clinic: vom i diaree, cu snge n masele
fecale. Invazia sngelui este asociat cu
prostraie profund, oc i moarte.
Meningita poate apare (foarte rar) ca urmare
a oricrei forme de antrax
Diagnosticul de laborator al antraxului
Se efectueaz numai n laboratoare
specializate cu respectarea unor reguli
stricte de securitate.
Prelevate (n funcie de forma clinic):
exsudat din leziunea cutanat, sput,
snge, LCR, materii fecale, bioptate din
ganglioni limfatici, probe necroptice, probe
de la animalul suspect i elemente din
mediul extern

Examenul microscopic direct
1. n frotiuri pregtite din prelevate i colorate
Gram sau cu albastru de metilen se observ
bacili mari cu morfologia caracteristic, izolai
sau n lanuri scurte. Sporii sunt rareori
prezeni.
2. RIF

Examenul bacteriologic
I. Prelevatele monomicrobiene se
nsmneaz pe geloz i geloz-snge, iar
cele polimicrobiene se nclzesc n prealabil
10 min la 75 grade C. Sngele n bulion
glucozat. Incubarea la 37 C timp de 24 ore.
II. Examinarea coloniilor crescute, selecia celor
suspecte i acumularea lor
III. Identificarea culturii pure acumulate i
diferenierea de antracoizi.

Table 1. Differential Characteristics of B. anthracis B. cereus and B. thuringiensis
Caracterul B. anthracis B. cereus
Necesitatea de tiamin la cultivare + -
Hemoliz pe geloz-snge - +
Capsula polipeptidic + -
Sensibilitate la fagul gamma + -
Mobilitate - +
Cultivare pe geloz salin - +
Testul colierul de perle + -
Examenul biologic
Se inoculeaz cobaii sau oarecii, care sunt foarte
sensibili la infecie. Dup moartea lor bacilii sunt
depistai n frotiuri din organe.
Depistarea Ag polizaharidice termostabile n
prelevate (reacia Ascoli)
Diagnosticul serologic. Ac anti-antrax pot fi
depistai la convalesceni n RP sau RFC
Diagnosticul imunologic (proba cutanat
alergic). Se pune n eviden starea de
hipersensibilizare prin inocularea intradermic a 0,1
ml de antraxin (extract din tulpina vaccinant de
B.anthracis). Reacie pozitiv edem i hiperemie
cu diametrul peste 8 mm.


Tratamentul antraxului
- Antibiotice (peniciline, cefalosporine,
fluorochinolone)
- Imunoglobulina antiantrax
Profilaxia specific a antraxului
- Depistarea i izolarea animalelor bolnave,
incinerarea animalelor moarte sau ngroparea
adnc a cadavrelor i acoperirea lor cu var
nestins
- Vaccinarea animalelor
- Imunizarea personalului expus cu vaccin viu
atenuat
Microbiologia i diagnosticul de laborator
al tularemiei
Clasificarea
Familia Francisellaceae
Genul Francisella
Specii: F.tularensis (agentul cauzal al
tularemiei)
F.philomiragia (infecii sistemice)
Se cunosc 4 biovaruri (subspecii) de F.tularensis,
care difer dup activitatea biochimic, virulen
i rspndire geografic:
F.tularensis tularensis (nearctica) (tip A; foarte
virulent, rspndit n America de Nord)
F. tularensis holarctica (palearctica) (tip B; mai
puin virulent, cu rspndire n Europa)
F. tularensis mediasiatica: virulen similar cu
F. tularensis holarctica
F. tularensis novicida: virulen redus,
cauzeaz infecie numai la gazde
imunocompromise. Izolat n SUA.
Prima descriere a tularemiei a fost realizat n
Japonia n 1837. Denumirea agentului provine de
la regiunea Tulare, California, unde, n 1911, n
timpul unei epizootii printre veveriele de pmnt, a
fost izolat tulpina bacterian i apreciind aportul
Dr Edward Francis, care, n 1928, studiaz i
descrie agentul cauzal i patogeneza maladiei prin
experien personal n peste 800 cazuri.
F tularensis are rspdire ubicvitar, parazitnd
peste 100 specii de animale slbatice (n special
roztoare), psri i insecte i persist n apa din
zonele unde se ntlnesc aceste animale. Toate
mamiferele fac o septicemie cu prezena bacteriilor
n toate esuturile.
Caracterele morfobiologice ale
F.tularensis
Morfologia:F.tularensis reprezint o
cocobacterie foarte mic (0.2-0.5 m x
0.7-1.0 m), gram-negativ, uneori se
coloreaz mai intens la poli, pleomorf,
imobil, asporogen, tulpinile virulente
posed capsul.

Caractere de cultur: bacteria nu poate fi
cultivat pe medii uzuale. Pentru izolare se
utilizeaz medii mbogite:
- mediul Francis (geloz+snge de iepure
+cistein +glucoz)
- Mediul McCoy, cu glbenu de ou
- Geloz-ciocolat

Cultivarea se efectueaza la 35 - 37 grade, n
aerobioz. Peste 2-4 zile apar colonii S, mici (1 -
2 mm n diametru), albe-cenuii, transparente,
mucoide, cu marginile regulate i suprafaa
lucioas.
Caractere biochimice:
F.tularensis este catalazo+ i oxidazo-, nu
descompune ureea, produce H2S, unele
biovaruri fermenteaz glicerolul.
Rezistena n mediul extern
Mi/organismele pot supravieui perioade
ndelungate de timp n ap, nmol, cadavre
de animale (mediu umed). F.tularensis este
distrus la 56 grade n 10 minute, dar
congelarea permite conservarea bacteriei.

Factorii de patogenitate nu sunt nc bine
definii:
1. Pili (adeziune)
2. Capacitatea de a penetra n macrofage,
supravieuind i multiplicndu-se n
interiorul celulelor pn la moartea lor
(parazitism facultativ intracelular)
3. Capsula (rol protector)
4. Endotoxina (LPZ)

Epidemiologia i patogeneza
tularemiei
Sursa de infecie animale bolnave sau cadavre
de animale, transmiterea de la om la om nu are
loc.
Rezervorul principal mamifere mici i medii
(iepuri, veverie, obolani, oareci, roztoare
acvatice, lemingi). Omul, pisicile, cinii, anumite
specii de psri, peti i amfibii pot fi gazde
accidentale
Vectori insecte (tuni, nari, cpue )
Pori de intrare tegumentul (chiar intact),
mucoasele, conjunctiva
Deer ticks

Transmiterea:
- Contact cu animale infectate, cadavre sau cu
apa contaminat (lacuri, bazine, etc)
- Aerogen prin inhalare (vntori...)
- Alimentar, prin consum de ap sau alimente
infectate
- neptura artropodelor hematofage

Francisella tularensis este una dintre cele mai
virulente bacterii. Cteva zeci de mi/o (10-50)
pot provoca suferine grave.

Patogeneza i
formele clinice de tularemie
Francisella tularensis este o bacterie
facultativ intracelular. Iniial infecteaz
macrofagele, cu diseminarea mi/o i
afectarea diferitor organe, inclusiv plmnii,
ficatul, splina, ganglionii limfatici. Un rol
important n patogeneza leziunilor l joac
hipersensibilitatea tardiv.

Formele clinice de tularemie sunt n relaie cu
calea de ptrundere:
- Forma ulceroganglionar (70-85% de cazuri),
penetrarea agentului patogen prin tegument sau
mucoase. Mi/o se multiplic local i determin
apariia, peste 3-5 zile de la expoziie, a unei
papule n locul de inoculare. Peste cteva zile se
transform n pustul, care se ulcereaz rapid.
Ulcerul are 2 - 4 cm n diametru i marginile
neregulate. Uneori ulcerul poate fi acoperit cu o
crust neagr (asemntoare cu escara n
antrax).
Bacteriile se rspndesc spre ganglionii limfatici
regionali, unde cauzeaz limfadenite necrotice,
nconjurate de infiltrate granulomatoase
(bubonul tularemic). Ganglionii limfatici afectai
devin fluctuani, uneori crend canale de
drenare n tegument. Mi/o pot disemina
hematogen infectnd multiple organe, cu
dezvoltarea septicemiei.
- Forma ganglionar se manifest prin afectarea
ganglionilor limfatici regionali, leziunea de la
poarta de intrare lipsete.
- Forma oculoganglionar apare la
ptrunderea agentului cauzal prin
conjunctiv. Se dezvolt necroza i
ulceraia conjunctivei, cu infiltraie
limfocitar. Din conjunctiv bacteriile trec
n ganglionii limfatici preauriculari,
submandibulari sau cervicali, provocnd
leziuni similare cu cele din tularemia
ulceroganglionar.

- Forma orofaringean (anginoganglionar)
Mi/o intr prin mucoasa orofaringelui n urma
ingestiei sau inhalrii lor.
Uzual se dezvolt faringite sau tonzilite
exsudative, cu ulceraie ulterioar. Ptrunderea
n ganglionii limfatici cervicali determin necroz
i supuraie.
- Forma tifoidic (abdominal), cu afeciuni
generalizate. Mi/o ptrund n snge prin
tegument sau mucoase i afecteaz plmnii i
organele reticulo-endoteliale. Determin frecvent
septicemie i oc
- Forma pneumonic, foarte grav. Mi/o ptrund
n plmni aerogen sau hematogen.
Diagnosticul de laborator al tularemiei
Se realizeaz doar n laboratoare specializate
Prelevate: n funcie de forma clinic: serozitate
din leziunea cutanat sau conjunctiv, exsudat
faringian, aspirat din ganglionul limfatic afectat,
sput, snge.
Metode directe de diagnostic
1. Examenul microscopic direct este foarte
dificil, aproape imposibil. RIF are o sensibilitate
mai mare
2. Examenul bacteriologic. Izolarea F.tularensis
direct din prelevate este practic imposibil.
Uzual se utilizeaz inocularea prelevatelor la
animale experimentale sensibile (oareci,
cobai). La necropsii se studiaz frotiuri-
amprente din organele afectate (Giemsa, RIF),
se fac nsmnri pe medii speciale (Francis,
Mc Coy). Tulpinile izolate sunt identificate
morfologic, cultural, biochimic, antigenic (RA cu
seruri anti-F.tularensis).
Diagnosticul indirect
1. Serodiagnosticul. Detectarea Ac este un
element esenial n diagnosticul tularemiei. Ac
apar dup ziua a 7 de boal, ating titrul maxim
peste 1-2 luni (1:1000 sau mai mult) i persist
mai muli ani. RA cu suspensie de bacterii
omorte este cea mai utilizat. Titru diagnostic
1:80, cu creterea lui n dinamic de cel puin
4 ori.
ELISA este posibil.
2. Intradermoreacia cu tularin.
Hipersensibilitatea poate fi testat peste 5 zile
de la debutul bolii.
Tratamentul tularemiei
Antibiotice: aminozide (streptomicin,
gentamicin), tetracicline, cloramfenicol,
fluorochinolone, eritromicin (exist i tulpini
rezistente)
Profilaxia tularemiei
- Informarea persoanelor expuse contaminrii
- Supraveghere sanitar
- Vaccinarea contingentelor de risc cu vaccin viu
atenuat asugur imunitatea pe o durat de 5-7
ani
MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL PESTEI
Familia: Enterobacteriaceae
Genul: Yersinia
Specia: Y. pestis
Biovariante: Antiqua, Medievalis, Orientalis
Descoperit n 1894 de ctre Alexandre Yersin, n timpul
unei epidemii de pest n Hong-Kong.
Pesta este o infecie care a provocat epidemii grave pe
parcursul ultimilor 2000 ani. n timpul epidemiei din
sec. 14, numit Boala Neagr, au decedat peste 1/3 din
populaia Europei.
n prezent peste 3000 cazuri anual
Caractere morfobiologice
Y. pestis reprezint un bastona gram-, care se
coloreaz mai intens la poli, imobil,
asporulat, posed microcapsul.