INFECIILE

ZOOANTROPONOZE
MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL ANTRAXULUI,
TULAREMIEI, BRUCELOZEI I PESTEI

1.

2.
3.
4.

Zooantroponozele reprezint maladii ale

animalelor care pot fi transmise oamenilor
n rezultatul unui contact direct sau
indirect cu populaii animale infectate.
Unele dintre aceste infecii - antraxul,
tularemia, pesta, bruceloza fac parte din
categoria infeciilor extrem de periculoase.
Sunt foarte contagioase (transmitere
aerogen, alimentar, prin contact direct,
receptivitate general)
Se manifest nu doar ca epidemii, ci i ca
pandemii
Reprezint infecii cu evoluie foarte grav
Agenii cauzali sunt rezisteni n mediul
extern

Microbiologia i diagnosticul de
laborator al antraxului
Clasificarea:
Familia Bacillaceae
Genul: Bacillus
Specii: Bacillus anthracis (patogen, agentul
antraxului)
Bacillus cereus (intoxicaii alimentare),
Bacillus polymyxa (genul Paenibacillus),
Bacillus brevis (genul Brevibacillus), Bacillus
subtilis bacili antracoizi, produceni de AB
Bacillus anthracis a fost prima bacterie la care a fost
demonstrat rolul n patogenia unei infecii.

n 1877, Robert Koch a izolat microorganismul n

cultur pur, demonstrnd capacitatea lui de a
forma endospori i a produs antraxul experimental
inoculndu-l la animale.

Caracterele morfobiologice ale

B.anthracis
Bacil mare (5-6 m x 1 m), cu extremitile
drepte (tiate), gram-pozitiv, imobil
(antracoizii sunt mobili), n produse
patologice se prezint sub form de lanuri
scurte, iar n cultur lanuri lungi (tulpin
de bambus).
Tulpinile virulente formeaz capsul
polipeptidic (acidul D-glutamic).

Sporul este ovoid, n poziie central, nu

deformeaz celula. Sporogeneza are loc n
cultur, n sol i n esuturi i exsudate din
animale moarte (n prezena oxigenului),
dar nu n snge sau esuturi de animale vii.

Caractere de cultur

B.anthracis nu este exigent nutritiv, cultiv pe medii

uzuale. Facultativ-anaerob, t optim 35-37 grade,
pH 7-7,4.
Peste 24 ore de incubare formeaz colonii R, mari, cu
contur neregulat, opace, plate, uscate, rugoase
(coam de leu, cap de meduz). Nehemolitice
pe geloz-snge (antracoizii sunt hemolitici).
Pe geloz-ser, n exces de CO2, formeaz colonii S
(producerea capsulei). Pe mediu cu 0,5-1 UI de
penicilin B.anthracis formeaz lanuri din forme
globulare - colier de perle (proprietate absent la
antracoizi).
n bulion peptonat formeaz flocoane la fundul
eprubetei, cu supernatantul clar.
B.anthracis este sensibil la fagul gamma.

The following figures (5, 6, and 7) from the CDC are reliable images of Bacillus anthracis grown as described in the figure legends.

Caractere biochimice

Activitate proteolitic lichefiaz gelatina n

form de brad inversat, peptonizeaz
laptele, diger serul coagulat, nu produce H 2S.
Activitate zaharolitic fermenteaz unele
glucide: glucoza, maltoza, zaharoza, tregaloza,
etc. Nu fermenteaz lactoza i arabinoza.
Rezistena n mediul extern: formele vegetative
sunt slab rezistente, sporii rmn viabili n sol
decenii, se distrug la fierbere n 30-40 min.


1.

Factori de patogenitate
Capsula polipeptidic, codifict de
plasmida pX02. Inhib fagocitoza i
puterea bactericid a sngelui. Capsula
joac un rol important n etapele iniiale
ale infeciei. Formarea capsulei are loc in
vivo i in vitro, pe medii cu ser i n
atmosfer cu 5 % CO2.

2. Exotoxina antraxului, codificat plasmidic

(pX01)
Este constituit din 3 componente:
Factorul I, edematogen (EF), care este o
adenilat-ciclaz. Acumularea de cAMP duce la
modificarea permeabilitii membranare cu
producerea edemului. inta celulele
endoteliale (efect - oc hipovolemic, oc septic)
Factorul III, letal (LF), responsabil de
efectele letale ale toxinei anthrax. Este o
proteaz Zn++ dependent care induce
producerea citokinelor de ctre macrofage i
limfocite (efect recie inflamatoare, oc septic)
Factorul II, antigen protector (PA), induce
sinteza Ac antitoxici protectori. PA este
responsabil de fixarea toxinei pe receptorii
celulelor sensibile.

Aparte, aceti factori exercit activitate

biologic nesemnificativ la animal. Din
contra, combinaii din doi sau trei factori
toxici determin urmtoarele consecine la
animale experimentale:
PA+LF = activitate letal
PA+EF = produce edem
PA+LF+EF = edem i necroz cu efect letal
EF+LF = inactiv
Acest experiment sugereaz c toxina
antraxului are structur clasic de
citotoxin bacterian de tip A-B cu PA n
calitate de B-fragment (de fixare pe
receptori celulari) i cu factorii EF i LF cu
funcie de fragment A (activ), care
acioneaz n interiorul celulei.

1.
2.

3.

Structura antigenic a
B.anthracis
Ag polipeptidic capsular (induce Ac
neprotectori)
Ag polizaharidice somatice
termostabile (depistate n reacia
de precipitare Ascoli)
Toxina (componentul PA), induce
formarea Ac protectori,
neutralizani

Epidemiologia i patogeneza antraxului

Sursa de infecie animalele erbivore bolnave de

antrax (ovine, caprine, bovine, suine). Solul
contaminat cu spori este un rezervor de germeni
important i permanent (decenii).
Transmiterea:
- prin contact direct cu animalele bolnave sau
produse contaminate (carne, piei, ln, blan, etc),
puni i nutreuri contaminate, cu ptrunderea
agentului prin tegumentul lezat
- aerogen, prin inhalarea sporilor de B.anthracis
- pe cale alimentar (consum de carne de la animale
bolnave de antrax insuficient prelucrate termic)
n majoritatea cazurilor antraxul se manifest ca boal
profesional a ngrijitorilor de animale, personalului
de la abatoare, ntreprinderi de prelucrare a
produselor animaliere, veterinarilor,
zootehnicienilor, mcelarilor, tbcarilor, etc.

 Formele

clinice de antrax

I. Antraxul cutanat , pustula

malign (forma cea mai frecvent).

Sporii intr printr-o leziune a tegumentului,

germineaz i prolifereaz la poarta de
intrare, cu dezvoltarea unui edem gelatinos
local caracteristic.

La poarta de intrare, peste 12-36 ore de

la penetrare, apare o papul, care
evolueaz rapid ntr-o vezicul, apoi
n pustul cu coninut sanguinolent.
La spargerea pustulei se formeaz o
leziune necrotic, prezentnd n
centru o escar neagr nconjurat de
vezicule satelite. Leziunea se
localizeaz mai frecvent pe mini,
fa, ceaf, etc.
Ptrunderea n snge determin
diseminarea sistemic a bacteriei.

II. Antraxul pulmonar apare la

inhalarea sporilor de B. anthracis ,
care sunt nglobai de macrofagele
alveolare unde ei germineaz i se
multiplic, determinnd o pneumonie
foarte grav cu edem.

Urmeaz infectarea ganglionilor limfatici

mediastinali cu dezvoltarea unei necroze
hemoragice. Pacientul manifest febr,
stare de ru, mialgie, tuse ne-productiv.
Din ganglionii limfatici infecia poate
trece n snge.
Decesul poate
surveni n 24 h.

III. Anthraxul digestiv apare n urma

consumului de carne infectat. n mucoasa

intestinal se dezvolt procese identice cu
cele din antraxul cutanat (enterocolit
ulceroas). Clinic: vom i diaree, cu
snge n masele fecale.

Poate urma invazia ganglionilor limfatici

mezenterici i a sngelui, asociat cu
prostraie profund, oc i moarte.
Meningita poate apare (foarte rar) ca
urmare a oricrei
forme de antrax

 Diagnosticul

de laborator al

antraxului
Se efectueaz numai n laboratoare
specializate cu respectarea unor
reguli stricte de securitate.
Prelevate (n funcie de forma clinic):
exsudat din leziunea cutanat, sput,
snge, LCR, materii fecale, bioptate
din ganglioni limfatici, probe
necroptice, probe de la animalul
suspect i elemente din mediul extern


1.

Examenul microscopic direct

n frotiuri pregtite din prelevate i
colorate Gram sau cu albastru de metilen
se observ bacili mari cu morfologia
caracteristic, izolai sau n lanuri scurte.
Sporii sunt rareori prezeni.

2. RIF


I.

II.

III.

Examenul bacteriologic
Prelevatele monomicrobiene se
nsmneaz pe geloz i gelozsnge, iar cele polimicrobiene se
nclzesc n prealabil 10 min la 75
grade C. Incubarea la 37 C timp de 24
ore. Sngele n bulion glucozat,
repicri zilnice timp de 7 zile pe gelozsnge.
Examinarea coloniilor crescute, selecia
celor suspecte i acumularea lor
Identificarea culturii pure acumulate i
diferenierea de antracoizi.

Characteristic
growth requirement for thiamin

B. anthracis B. cereus
+

hemolysis on sheep blood agar

glutamyl-polypeptide capsule

lysis by gamma phage

motility

growth on chloralhydrate agar

string-of-pearls test

Table 1. Differential Characteristics of B. anthracis B. cereus and B. thuringiensis

Examenul biologic
Se inoculeaz prelevatele la cobai sau
oareci, care sunt foarte sensibili la
infecie. Dup moartea lor (36-48h) bacilii
sunt depistai n frotiuri din snge i organe.
Depistarea Ag polizaharidice termostabile
n prelevate (reacia de precipitare inelar
Ascoli)
Diagnosticul serologic. Ac anti-antrax pot fi
depistai la convalesceni n RP sau RFC
Diagnosticul imunologic (proba cutanat
alergic). Se pune n eviden starea de
hipersensibilizare prin inocularea
intradermic a 0,1 ml de antraxin (extract
din tulpina vaccinant de B.anthracis).
Reacie pozitiv edem i hiperemie cu
diametrul de peste 8 mm.

Tratamentul antraxului
- Antibiotice (peniciline, cefalosporine,
fluorochinolone)
- Imunoglobulina antiantrax
Profilaxia specific a antraxului
- Depistarea i izolarea animalelor bolnave,
incinerarea animalelor moarte sau
ngroparea adnc a cadavrelor i
acoperirea cu var nestins
- Vaccinarea animalelor
- Imunizarea personalului expus cu vaccin
viu atenuat, vaccin acelular (elaborat din
tulpini acapsulate avirulente, coninnd
proteina PA). n curs de elaborare vaccin
cu PA i antigen capsular.

Microbiologia i diagnosticul de
laborator al tularemiei
Clasificarea
Familia Francisellaceae
Genul Francisella
Specii: F.tularensis (agentul cauzal
al tularemiei)
F.philomiragia (infectii
sistemice)

Se cunosc 4 biovaruri (subspecii) de

F.tularensis, care difer dupa activitatea
biochimic, virulen i rspndire
geografic:

F.tularensis tularensis (nearctica) (tip A;

foarte virulent, raspndit n America de
Nord)
F. tularensis holarctica (palearctica) (tip B;
mai puin virulent, cu raspndire n Europa)
F. tularensis mediasiatica: virulen similar
cu F. tularensis holarctica
F. tularensis novicida: virulen redus,
cauzeaza infecie numai la gazde
imunocompromise. Izolat n SUA.

Prima descriere a tularemiei a fost realizat n

Japonia n 1837. Denumirea agentului provine
de la regiunea Tulare, California, unde, n
1911, n timpul unei epizootii printre
veveriele de pmnt, a fost izolat tulpina
bacterian.
Dr Edward Francis, n 1928, studiaz i
descrie agentul cauzal i patogeneza maladiei
prin experien personal n peste 800 cazuri.
F. tularensis are rspdire ubicvitar,
parazitnd peste 100 de specii de animale
slbatice (n special roztoare), psri i
insecte i persist n apa din zonele unde se
ntlnesc aceste animale.
Toate mamiferele fac o septicemie cu prezena
bacteriilor n toate tesuturile.

 Caracterele

morfobiologice ale
F.tularensis

Morfologia: F.tularensis reprezint

o cocobacterie foarte mic (0.2-0.5
m x 0.7-1.0 m), gram-negativ,
uneori se coloreaz mai intens la
poli, pleomorf, imobil,
asporogen, tulpinile virulente
posed capsul.

Caractere de cultur: bacteria nu

poate fi cultivat pe medii uzuale.
Pentru izolare se utilizeaz medii
mbogite:
- mediul Francis (geloz + snge de
iepure + cistein + glucoz)
- Mediul McCoy (cu glbenu de ou)
- Geloz-ciocolat
Cultiv la 35 - 37 grade, n aerobioz.
Peste 2-4 zile apar colonii S, mici (1 2 mm n diametru), albe-cenuii,
mucoide, cu marginile regulate i
suprafaa lucioas.

Caractere biochimice:
F.tularensis este catalazo+ i oxidazo-, nu
descompune ureea, produce H2S, unele
biovaruri fermenteaz glicerolul.
Rezistena n mediul extern
Mi/organismele pot supravieui perioade
ndelungate de timp n ap, nmol,
cadavre de animale (mediu umed).
F.tularensis este distrus la 56 grade n 10
minute, dar congelarea permite
conservarea bacteriei.

Factorii de patogenitate :
1.

2.
3.

Capacitatea de a penetra n
macrofage, supravieuind i
multiplicndu-se n interiorul
celulelor pn la moartea lor
(parazitism facultativ intracelular)
Capsula (rol protector)
Endotoxina (LPZ)

Epidemiologia i patogeneza
tularemiei
Sursa de infecie animale bolnave sau
cadavre de animale, transmiterea de la om
la om nu are loc.
Rezervorul principal mamifere mici i medii
(iepuri, veverie, obolani, oareci, roztoare
acvatice, lemingi). Omul, pisicile, cinii,
anumite specii de psri, peti i amfibii pot
fi gazde accidentale
Vectori insecte (tuni, nari, cpue )
Pori de intrare tegumentul (chiar intact),
mucoasele, conjunctiva

Deer ticks

Transmiterea:
- Contact cu animale infectate, cadavre sau
cu apa contaminat (lacuri, bazine, etc)
- Aerogen prin inhalare (vntori...)
- Alimentar, prin consum de ap sau
alimente infectate
- neptura artropodelor hematofage
Francisella tularensis este una dintre cele
mai virulente bacterii. Cteva zeci de
mi/o (10-50) pot provoca suferine grave.

Patogeneza i
formele clinice de tularemie
Francisella tularensis este o bacterie
facultativ intracelular. Iniial
infecteaz macrofagele, cu
diseminarea mi/o i afectarea diferitor
organe, inclusiv plmnii, ficatul,
splina, ganglionii limfatici. Un rol
important n patogeneza leziunilor l
joac hipersensibilitatea tardiv.

Formele clinice de tularemie sunt n

relaie cu calea de ptrundere:
- Forma ulceroganglionar (70-85% de
cazuri), penetrarea agentului patogen prin
tegument sau mucoase. Mi/o se multiplic
local i determin apariia, peste 3-5 zile de
la expoziie, a unei papule la locul de
inoculare. Peste cteva zile se transform n
pustul, care se ulcereaz rapid. Ulcerul are
2 - 4 cm n diametru i marginile
neregulate. Uneori ulcerul poate fi acoperit
cu o crust neagr (asemntoare cu
escara n antrax).

Bacteriile se rspndesc spre ganglionii

limfatici regionali, unde cauzeaz
limfadenite necrotice, nconjurate de
infiltrate granulomatoase (bubonul
tularemic). Ganglionii limfatici afectai
devin fluctuani, uneori crend canale de
drenare n tegument. Mi/o pot disemina
hematogen infectnd multiple organe, cu
dezvoltarea septicemiei.
- Forma ganglionar se manifest prin
afectarea ganglionilor limfatici regionali,
leziunea de la poarta de intrare lipsete.

Forma oculoganglionar apare la

ptrunderea agentului cauzal prin
conjunctiv. Se dezvolt necroza i
ulceraia conjunctivei, cu infiltraie
limfocitar. Din conjunctiv
bacteriile trec n ganglionii limfatici
preauriculari, submandibulari sau
cervicali, provocnd leziuni similare
cu cele din tularemia
ulceroganglionar.

Forma orofaringean (anginoganglionar)

Mi/o intr prin mucoasa orofaringelui n urma
ingestiei sau inhalrii lor.
Uzual se dezvolt faringite sau tonzilite
exsudative, cu ulceraie ulterioar.
Ptrunderea n ganglionii limfatici cervicali
determin necroz i supuraie.
- Forma tifoidic (abdominal) , cu
afeciuni generalizate. Mi/o ptrund n snge
prin tegument sau mucoase i afecteaz
plmnii i organele reticulo-endoteliale.
Determin frecvent septicemie i oc
- Forma pneumonic , foarte grav. Mi/o
ptrund n plmni aerogen sau hematogen.
-

Diagnosticul de laborator al tularemiei

Se realizeaz doar n laboratoare
specializate
Prelevate: n funcie de forma clinic:
serozitate din leziunea cutanat sau
conjunctiv, exsudat faringean, punctat
din ganglionul limfatic afectat, sput,
snge.
Metode directe de diagnostic
1.
Examenul microscopic direct este
foarte dificil, aproape imposibil. RIF are o
sensibilitate mai mare

2. Examenul bacteriologic.
Izolarea F.tularensis direct din prelevate
este practic imposibil. Uzual se
utilizeaz inocularea prelevatelor la
animale experimentale sensibile (oareci,
cobai). La necropsii se studiaz frotiuriamprente din organele afectate (Giemsa,
RIF), se fac nsmnri pe medii speciale
(Francis, Mc Coy). Tulpinile izolate sunt
identificate morfologic, cultural,
biochimic, antigenic (RA cu seruri antiF.tularensis).

Diagnosticul indirect
1. Serodiagnosticul. Detectarea Ac este
un element esenial n diagnosticul
tularemiei. Ac apar dup ziua a 7 de
boal, ating titrul maxim peste 1-2 luni
(1:1000 sau mai mult) i persist mai
muli ani. RA cu suspensie de bacterii
omorte este cea mai utilizat. Titrul
diagnostic 1:80, cu creterea lui n
dinamic de cel puin 4 ori.
ELISA este posibil.
2. Intradermoreacia cu tularin
Hipersensibilitatea poate fi testat peste
5 zile de la debutul bolii.

Tratamentul tularemiei
Antibiotice: aminozide (streptomicin,
gentamicin), tetracicline, cloramfenicol,
fluorochinolone, eritromicin (exist i
tulpini rezistente)
Profilaxia tularemiei
- Informarea persoanelor expuse
contaminrii
- Supraveghere sanitar
- Vaccinarea contingentelor de risc cu
vaccin viu atenuat asigur imunitatea pe
o durat de 5-7 ani

Microbiologia i diagnosticul de
laborator al pestei
Pesta

(din latin pestis, maladie

contagioas) este o maladie cu
multiple faete mortal pentru om.
Ea este cauzat de Yersinia pestis,
descoperit de Alexandre Yersin de
la Institutul Pasteur n 1894.

 Familia

Enterobacteriaceae
Genul Yersinia
Specia Yersinia pestis
Se disting 3 varieti de tulpini oriental, medieval i antic.
Caractere morfotinctoriale yersiniile
reprezint bastonae drepte, uneori
coco-bacterii Gram negative, uneori
colorate bipolar, acapsulate,
asporulate, imobile la 37C.

Caractere de cultur yersiniile sunt mi/o

anaerobe facultative, cultiv pe medii
uzuale la 25-28 C.
n BP cultura se manifest printr-un voal
la suprafa i un aspect floconos n
interior. Pe geloz peste 48h apar
colonii R mari, cu margini neregulate
Activitate biochimic catalaza+,
oxidaza-, fermenteaz glucoza, reduce
nitraii n nitrii.
Yersiniile sunt rezistente n mediul extern i n
cadavre de animale.


1.
2.
3.

4.

5.

Factori de patogenitate
Proteina lcr (low calcium response) permite
multiplicarea intracelulara a bacteriei)
Proteinele V si W determina proliferare rapida
si septicemie
Proteinele Yops,
Yops 11 proteine responsabile de
citotoxicitate, inhibarea migrarii fagocitelor si a
inglobarii, agregarea trombocitelor
Antigenul F-1 complex proteic-polizaharidic,
antifagocitar, se formeaza doar in organismul
mamiferelor
Coagulaza si activatorul de plasminogen,
determina formarea microtrombilor,
promoveaza diseminarea bacteriilor, distruge
C3b de pe suprafata bacteriilor

Aspecte epidemiologice
Sursa de infecie i transmiterea
Roztoarele slbatice constituie rezervorul
natural al maladiei. Yersinia este n principal
vehiculat de un obolan, Rattus rattus, care
o transmite la om prin intermediul puricilor
infectai (Xenopsylla cheopsis, Nosopsyllus
fasciatus). Foarte rar omul se infecteaz prin
muctura obolanului infectat sau consumndu-l.
Iepurii i carnivorele pot infecta omul prin
contact direct sau muctura animalului infectat.
n epidemii transmiterea se poate efectua
interuman pe cale aerogen.

Dup neptura unui purice infectat, germenul se

multiplic la locul de inoculare cu formarea unei
vezicule-pustule apoi ptrund n sistemul limfatic i
colonizeaz ganglionii regionali n care se multiplic.
Peste 2-5 zile apar semne de limfadenit hemoragic
(bubonul pestos). Pesta bubonic 90% din cazurile
de pest.
Diseminarea hematogen permite bacteriilor s ating
ansamblul organelor cu apariia semnelor clinice de
septicemie. Aflat in sange bacteriile determina
coagulare intravasculara diseminata si leziuni
purpurice (hemoragii). Afectarea plmnilor duce la
pesta pulmonar secundar, cu expectoraii
sanguinolente bogate n germeni, foarte contagioase.
Contactul cu aceti pacieni duce, prin contact direct,
la apariia pestei pulmonare primare care prezint
o mortalitate de 90-100% n lips de tratament .

Diagnosticul de laborator al pestei

Se realizeaz n laboratoare specializate cu regim
special strict.
Prelevate: punctat din bubon, sput, snge. Toate
prelevatele de la o persoan infectat sunt
foarte contagioase i manipularea lor cere
msuri speciale de precauie.
Examenul direct
1. Examenul microscopic al punctatului din
bubon colorat Gram sau Giemsa poate fi
evocator (bacterii Gram-, ovoide, cu coloraie
bipolar). RIF nu este destul de semnificativ,
deoarece exist recii ncruciate cu alte
yesinii.

2. Examenul

bacteriologic (izolarea culturii

pure cu identificarea ei ulterioar) este o
investigaie de baz.
n pesta pulmonar, diagnosticul este
confirmat prin izolarea culturii din sput
sau din aspirat bronic.
Hemocultura (izolarea culturii din snge)
reprezint examenul-cheie n forma
septicemic.
Pot fi examinate i probe necroptice,
deoarece germenul este foarte rezistent n
cadavre n curs de putrefacie
3. Depistarea rapid a antigenelor F1.

 Tratamentul

pestei
Antibiotice (streptomicin,
gentamicin, doxiciclin,
cloramfenicol)
Profilaxia
-

pestei
Izolarea bolnavilor
Persoanele de contact carantin
6 zile