MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE

LABORATOR AL RICKETTSIOZELOR

CARACTERISTICA GENERAL A RICKETTSIILOR

Rickettsiile sunt bacterii intracelulare obligatorii. Ciclul lor de dezvoltare
necesit o gazd vertebrat (om, cine, obolan) i un vector (pduche,
purice, cpu, acarian).
Reprezint mi/o gram- de dimensiuni mici, comparabile cu virusurile
mari (500 nm). Totui, reprezint bacterii, deoarece se multiplic prin
diviziune binar, posed ADN i ARN, sunt sensibile la antibiotice.

CLASIFICARE
Familia Rickettsiaceae
Genuri: Rickettsia (care include 2 grupuri)
1. Grupul tifos, constituit din R.prowazekii (responsabil de tifosul
exantematic epidemic, vector pduchele) i R. typhi (responsabil de
tifosul exantematic endemic, murin, vector puricele)
2. Grupul febrelor ptate, transmise prin cpue (R.rickettsii,
R.conorii, R.australis, R.akari, R.sibirica, etc)

Genul Orientia, cu unica specie O.tsutsugamushi, agentul febrei de lstri

Genul Coxiella, unica specie C.burnetii, responsabil de febra Q

Genurile Ehrlichia i Bartonella nu mai aparin familiei Rickettsiaceae

 RICKETTSIA
Caractere morfotinctoriale: bacterii G-, polimorfe (coco-bacterii,
bastonae, forme filamentoase, etc), imobile, asporogene, posed
microcapsul. Prin tehnica de colorare Macchiavello-Gimenez
(fucsin+verde de malahit) rickettsiile apar colorate n rou pe fondul
verde palid al citoplasmei. Coloraia Giemsa roii n citoplasma
albastr.

Caractere de cultur: fiind parazii intracelulari (nu pot

fosforila glucoza i folosesc metabolii intermediari din
gazd), rickettsiile nu cresc pe medii artificiale. Ele pot fi
cultivate doar pe animale de laborator, vectori, ou embrionat
de gin sau culturi de celule.
Rickettsiile se multiplic prin diviziune binar n interiorul
celulei-gazd. Imediat dup diviziune, in condiii nutritive
bune, rickettsiile sunt antrenate n micri rapide i parcurg
citoplasma celulei-gazd n toate direciile. Aceste deplasri
sunt determinate de polimerizarea filamentelor de actin.
Atunci cnd mediul este srac diviziunea se oprete,
bacteriile se alungesc, cu apariia formelor filamentoase.

Strategii de multiplicare intracelular:

1.
2.

Reprezentanii genului Rickettsia vieuiesc liber n citoplasm, graie

capacitii de a prsi rapid vacuola de fagocitoz
Coxiella burnetii se multiplica n fagolizosomi cu pH acid

Structura antigenic a rickettsiilor:

1. Ag corpuscular cu specificitate de specie
2. Ag solubil cu specificitate de grup
3. Fracii Ag comune cu tulpina Proteus OX
- OX 19 pentru grupul tifos exantematic
- OX 2 i OX 19 pentru grupul febrelor ptate
- OX K pentru grupul tifos de lstri
Factori de patogenitate:
- Exotoxina
- Hialuronidaza
- Hemolizina

TIFOSUL EXANTEMATIC
- 1909 Ch. Nicolle la institutul Pasteur din Tunis descrie
transmiterea tifosului epidemic prin intermediul
paduchelui (premiul Nobel)
- 1910 Brill descoper tifosul de recdere, descris dup 20
de ani de Zinsser, de unde denumirea maladiei Brill-Zinsser
- 1916 Rocha-Lima descoper bacterii fine n corpul unui
pduche de la un bolnav de tifos. Aceste mi/o au fost
denumite Rickettsia prowazekii (n cinstea lui Von
Prowazek i Ricketts, care au murit de tifos studiind
maladia)
- 1928 Mooser separ tifosul murin de tifosul epidemic

Agenii cauzali ai tifosului exantematic:

1.
R.prowazekii provoac tifosul exantematic epidemic
2.
R.typhi provoac tifosul endemic, murin
Patogeneza tifosului exantematic epidemic:
Sursa de infecie omul bolnav de tifos exantematic sau de boala BrillZinsser
Vectorul pduchele uman

Pduchele se infecteaz de la bolnav n ultimele 2 zile

de incubaie, pe parcursul perioadei febrile i 2-3 zile
dup normalizarea temperaturi. Rickettsiile se
multiplic n celulele epiteliale intestinale ale
pduchelui fiind eliminate cu dejectele. Astfel, omul se
contamineaz nu prin neptura pduchelui, ci prin
leziunile cutanate sau mucoase n care au nimerit
dejectele insectei. Infectarea este posibil i prin
inhalarea prafului n care se conin rickettsii uscate sau
la nimerirea acestui praf pe conjunctiva ochiului. n
SUA de la veverie zburtoare prin intermediul
ectoparaziilor acestora.

Dup inoculare rickettsiile trec n snge, penetreaz n celulele endoteliale

ale vaselor sangvine mici, se nmulesc i le distrug. Rickettsiile secret
factori procoagulani care determin tromboz cu inflamaie
periadventiial a vaselor mici (nodulii Popov-Frankel). Leziunile sunt mai
numeroase n tegument, SNC, miocard.
Perioada de incubaie 6-23 zile (10-12 zile)
Debutul este brusc, cu febr 40-41 grade C, cefalee, insomnie, slbiciuni,
excitaie, hiperactivitate nervoas i psihic.

Se observ hiperemia feei i faringelui, sclerele sunt injectate.

n ziua a 4-6 a maladiei apare o erupie cutanat rozeolo-peteial (pe trunchi,
apoi pe membre), nsoit de splenomegalie.
Febra dispare peste 2 sptmni. Convalescena este lung i astenia durabil.
Dup vindecare nu rmn sechele.
Imunitatea anti-rickettsian este mediat celular, anticorpii neutralizeaz
efectul toxic al rickettsiilor.

ns imunitatea nu elimin obligatoriu toate rickettsiile

prezente n organismul convalescentului. Aceste bacterii
latente se manifest la persoane n vrst n absena
pediculozei, atunci cnd imunitatea scade. Procesul
infecios poate fi reactivat sub influena unor maladii
intercurente, a stresului, etc (boala Brill-Zinsser, tifosul de
recdere, tifosul fr pduche).
n timpul maladiei B-Z rickettsiemia este de 10 ori mai rar
dect n forma epidemic a tifosului exantematic i
dureaz cel mult 5-8 zile. Evoluia este benign, erupia
este mai abundent, roz, intoxicaia este redus. La
btrni pot surveni complicaii vasculare.

Tifosul exantematic endemic: agentul cauzal este R.typhi,

sursa de infecie obolanul, iar vectorul puricele.
Clinica se aseamn cu cea a tifosului epidemic, dar
gravitatea este redus - simptome mai puin severe,
erupia mai srac.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL TIFOSULUI EXANTEMATIC
Diagnosticul direct (examenul microscopic, bacteriologic)
se efectueaz n laboratoare specializate.
Prelevate: snge, bioptate din esuturile infectate, vectori

 Examenul microscopic: se examineaz celulele endoteliale circulante n

snge sau frotiuri-amprente din esutul infectat. Frotiurile se coloreaz
Giemsa sau Macchiavello. Rickettsiile apar roii pe fondul albastru
(respectiv verde) al citoplasmei celulei-gazd. Poate fi montat RIF.
Examenul bacteriologic: prelevate sunt inoculate la cobai sau oarece, n
cavitatea vitelin a oului embrionat de gin sau pe culturi celulare.
Tulpina izolat astfel va fi identificat prin RIF, RFC, RAR.

 Examenul serologic: este bazat pe depistarea Ac din serul bolnavului cu

ajutorul Ag din Proteus OX i Ag rickettsiene (de grup sau de specie).
Reacii nespecifice: Reacia de aglutinare Weil-Felix, folosete ca Ag suspensii
de Proteus OX 19. Se pozitiveaz la sfritul primei sptmni de boal. Titrul
aglutininelor atinge valoarea maxim la nceputul convalescenei i scade la
valori nesemnificative peste cteva luni dup boal. Valoare diagnostic are
creterea titrurilor de cel puin 4 ori pe parcursul bolii.

Reacii cu antigene rickettsiene (specifice):

1.
RFC, cu Ag rickettsian total. Devine pozitiv la finele primei sptmni de
boal, maxim n sptmna 3 sau 4 i persist mai muli ani dup vindecare.
Sunt semnificative titruri peste 1:16, cu creterea de cel puin 4 ori n
evoluia bolii
2.
RAR (reacia de aglutinare a rickettsiilor). Este foarte sensibil i specific,
cu utilizarea Ag corpusculare purificate. Curba aglutininelor evolueaz
paralel cu cea a Ac fixatori de complement. Titrul diagnostic - 1:160 i mai
mult.

3. RHAI. Hemaglutininele pot fi detectate din ziua a 4 de boal n titruri 1:20

1:40 care cresc n sptmna a 2 atingnd cifrele 1:160-1:320. Titrul
diagnostic este de 1:160. Peste 3 luni de la debutul bolii titrul acestor Ac
scade pn la valori nesemnificative.
4. RIFI
5. RN a toxinei rickettsiene. Se efectueaz pe oricei. In calitate de toxin se
utilizeaz o suspensie de rickettsii vii, care va fi neutralizat cu ser imun n
diferite diluii.
6. Identificarea ADNului rickettsian prin PCR

Diferenierea dintre tifosul exantematic i boala Brill-Zinsser

Pentru boala Brill-Zinsser este caracteristic:
1.
Tifos exantematic n anamnez
2.
Absena pediculozei
3.
Evoluie benign
4.
Reacia Weil-Felix negativ
5.
Titrul Ac n RFC nu crete n evoluie
6.
Ac din clasa Ig G

Diferenierea tifosului exantematic epidemic de cel endemic

1.
2.
3.

Evoluie benign n tifos endemic

Dup titrul Ac n reaciile cu Ag specifice
Inocularea intraperitoneal la cobai masculi: R.prowazekii provoac
febr, iar R.typhi inflamaie scrotal

Tratamentul tifosului exantematic

Antibiotice care penetreaz intracelular:
- Tetracicline (doxiciclina, minociclina)
- Cloramfenicol
- Rifampicina, eritromicina, ciprofloxacina
Profilaxia tifosului exantematic
Msuri antiparazitare: despduchere, deratizare,
respectarea igienei
Profilaxia specific: exist vaccinuri inactivate (corpusculare
i subunitare) preparate din cultur rickettsian izolat n
oul embrionat, n pduchi sau n plmnii oriceilor albi.
Aceste vaccinuri confer imunitate de scurt durat.
Vaccinul viu, preparat din tulpina E de R.prowazekii este mai
imunogen, dar are proprieti alergizante.

 Genul Coxiella reunete bacterii intracelulare G- (coco-bacterii), care se

disting de reprezentanii genului Rickettsia prin rezistena la ageni fizici
(formeaz spori) i prin structura lor antigenic diferit. Se caracterizeaz
prin variaie antigenic (de faz). Faza I este virulent, faza II este atenuat.
Specia-tip este C.burnetii, cu repartiie mondial. Provoac febra Q (Query
fever).
Rezervorul de germeni i sursa de infecie l constituie animalele (roztoare,
ovine, caprine, bovine).

 Cile de transmitere la om:

- Aerogen (picturi, praf)
- Alimentar (lapte contaminat)
- Prin vectori-artropode foarte rar
Profesiile expuse riscului: agricultori, veterinari,
muncitori la abatoare, mcelari
Dup o incubaie de 2-3 sptmni boala debuteaz
brutal cu febr iniial n platou, apoi ondulant,
cefalee, transpiraii, astenie, semne de bronhopneumonie, pneumopatie atipic i/sau hepatit.
Complicaii endocardita subacut sau cronic cu
hemoculturi negative.

1.

2.
3.
4.
-

Diagnosticul de laborator al febrei Q

Izolarea bacteriilor din bioptate (ficat, tegument, valve)
sau din snge. Se efectueaz inocularea cobailor, a oului
embrionat de gin sau a culturilor de celule. Tulpina
izolat se identific n RIF
Depistarea rapid a C.burnetti n prelevate prin RIF
Detectarea genomului cu ajutorul PCR
Diagnosticul serologic:
RFC cu Ag de faza I i II (existena Ac anti-faza I este utill
n diagnosticul endocarditelor);
RIFI (permite separarea IgG, IgM i IgA); creterea
titrului Ac IgA este specific n endocardite;
ELISA