Lucrarea de laborator N.

18
TEMA: MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL SPIROCHETOZELOR
1. Caracteristica general a spirochetelor, clasificarea i rolul lor n patologia uman.
Spirochetele bacterii helicoidale (form de tirbuon), flexibile i mobile (fibrile interne),
rspndite n natur, comensale ale mucoaselor umane.
Familii : Spirochaetaceae, Leptospiraceae
n aceste 2 familii intr bacterii saprofite i patogene. Din saprofite - Spirochaeta i Cristispira.
Spirochetele patogene triesc pe substraturi moarte, n bazine poluate, n intestinul animalelor
pochiloterme. Dupa Romanovski-Giemsa se coloreaz n albastru.
Spirochete patogene (genuri): Treponema, Borrelia, Leptospira.
-Agentul patogen al sifilisului
-Agentul framboesiei (seamana cu sifilisul, dar se transmite extragenital)
-Agentul bajelului (seamana cu sifilisul, pe cale menajera)
-Agentul pintei
-Agenii patogeni ai tifosului recurent (epidemin, endemic
-Agentul patogen al bolii Lyme
2. Caracteristicele morfobiologice ale agentului cauzal al sifilisului.
Familia Spirochaetaceae
Genul Treponema
Specii : - T.pallidum (patogen)
subspecii (variante):
T.pallidum pallidum (agentul sifilisului)
T.pallidum endemicum (agentul bejelului, sifilis endemic nevenerian leziuni cutanate)
T.pallidum carateum (agentul pintei/carate, nevenerian, America Central i de Sud)
T. pertenue (agentul pianului, maladie cutanat, nevenerian, zone tropicale i subtropicale)
Treponeme comensale:
Orale (T.denticola, T.orale, etc)
Genitale (T.phagedenis, T.refringens, etc)
CARACTERE MORFOLOGICE I TINCTORIALE
T.pallidum bacterie fin, helicoidal, cu 8-14 spire regulate i capetele ascuite, mobil cu micri
de flexie, nurubare i translaie. Gram -.
Evidenierea :
- preparate native (microscopul cu fond negru, contrast de faz)
- Nu se coloreaz dup Gram
- Romanovsky-Giemsa roz-pal
- Impregnare cu sruri de argint (filamente negre-brune pe fondul galben)
- Frotiuri Burri necolorate pe fondul negru

CARACTERE DE CULTUR
Cultivarea T.pallidum in vitro imposibil
Pasaje succesive n testicule de iepure (tulpina Nichols de T.pallidum).
Suspensii de astfel de treponeme supravieuiesc 72 ore n mediul Mayer-Nelson (la 25 grade n
anaerobioz).

STRUCTURA ANTIGENIC
Haptene lipidice (antigen cardiolipinic / cardiolipin, Ag nespecific) fosfolipid prezent la
treponeme patogene i esuturi ale mamiferelor (extras din cord bovin)
Antigen proteic, de grup, comun treponemelor patogene i nepatogene (obinut din tulpina Reiter
a T.phagedenis)
Peptide i glicopeptide din membrana extern, specifice T.pallidum (obinute din tulpina Nichols a
T.pallidum)
FACTORI DE PATOGENITATE
Factori de adeziune
Factori de invazie (hialuronidaza)
Factori de sensibilizare
Endotoxina
Supresia rspunsului imun celular n stadiile iniiale ale bolii
3. Sursa, mecanismul i cile de transmitere ale infeciei. Patogeneza, stadiile clinice ale
sifilisului.
PATOGENEZA SIFILISULUI
Sursa de infecie omul bolnav
Cile de transmitere:
Sexual
Contact indirect (srut, obiecte, instrumente chirurgicale recent contaminate, transfuzii de snge,
etc.)
Transplacentar (vertical)

Poarta de intrare tegumentul lezat, mucoasa genital, bucal, anal

Perioada de incubaie 2-6 sptmni (3)
Evoluia sifilisului
Sifilisul primar (4-6 sptmni)
la poarta de intrare apare ancrul sifilitic: ulceraie cu baza indurat, nedureros, bogat n
treponeme (99% localizare genital i anal, 1% - bucal).
Adenopatie satelit
Vindecare spontan a ancrului (imunitatea local)

Sifilisul secundar (urmare a diseminrii sangvine) dup 6-8 spt. de evoluie

- Manifestri cutanate (rozeole, sifilide erozive,etc)
Manifestri mucoase (plci mucoase)
Poliadenopatie
Leziuni ale organelor interne (hepatite, nefrite, periostite, meningite, etc)
Rspunsul imun poate duce la dispariia leziunilor n 1-3 luni

Sifilisul latent (treponemele persist n ganglioni limfatici i splin)

Lipsa semnelor clinice
Necontagios
Posibile recidive
Sifilisul teriar (dup 4-30 ani de la contaminare)
Afeciuni cardio-vasculare (aortite, anevrisme)
Afeciuni neurologice (tabes, paralizie general)
Afeciuni osoase i cutanate (gome)
Deces posibil

Sifilisul congenital
n timpul graviditii moartea ftului prin afeciuni poliviscerale
La finele graviditii sau la natere leziuni tardive (dentare, osoase, oculare)
Imunitatea (nesteril)
Umoral
Celular (protectoare, deprimat n sifilisul primar i secundar)

4. Diagnosticul de laborator al sifilisului: produsele biologice, recoltarea lor, metodele de

diagnostic.
IAGNOSTICUL DE LABORATOR
Prelevate: serozitatea din leziunile primare sau secundare, puncii din ganglioni limfatici, serul
sangvin, LCR
Metode de diagnostic
Examenul microscopic
Microscopia pe fond negru, contrast faz
RIF
Impregnare argentic, coloraia Giemsa

Examenul serologic (sifilis secundar, teriar)

I Reacii nespecifice (cu Ag cardiolipinice)
Reacia VDRL (Veneral Disease Research Laboratory) - reacie de precipitare
Ieftin, facil, specificitate redus
Reacii fals pozitive: viroze, colagenoze, paludism, ciroze, reumatism, graviditate, etc.
RFC (Wassermann)

Reacii specifice (cu Ag treponemice)

RFC Wassermann sau Kolmer
RHAI (Ag lizat din tulpina Nichols fixat pe hematii)
RIFI (Ag suspensie de T.pallidum fixat pe lam)
RIT (testul Nelson) (Ag tulpina Nichols a T.pallidum)
RIE (ELISA)
PCR (detectarea ADN) n LCR, lichidul amniotic, esut
EVOLUIA TITRURILOR DE AC
RIFI se pozitiveaz la apariia ancrului (o lun dup infectare)
VDRL dup 6 sptmni
RHAI
RIT n stadiul secundar, 2 luni dup infectare
Dup tratamentul sifilisului:
VDRL se negativeaz prima
Alte reacii rmn pozitive

5. Borreliile i caracterele morfobiologice.

MICROBIOLOGIA I DIAGNOCTICUL DE LABORATOR AL BORRELIOZELOR
CLASIFICARE:
Familia Spirochaetaceae
Genul Borrelia
Specii:
- B.recurrentis (transmis prin pduchi)
- B.duttoni, B.hispanica, B.persica, B.burgdorferi, etc (transmise prin cpue)
CARACTERE MORFOBIOLOGICE
Morfologia: filamente spiralate cu 5-8 spire neregulate, flexibile i mobile, cu micri de flexie i
nurubare. Gram-, colorate n albastru-violet dup Giemsa.
Caractere de cultur: bacterii anaerobe, cultiv in vitro pe medii complexe i in vivo (ou embrionat,
artropode, animale de laborator)

Structura antigenic: variabilitate pronunat

Habitat
- Omul bolnav n snge i esuturi infectate
- Roztoare
- Vectori (pduchi, cpue) n lichidul celomic

6. Sursa de infecie, mecanismul i cile de transmitere ale tifosului recurent epidemic i

endemic
FEBRA RECURENT
Febra recurent epidemic
Agentul cauzal - B.recurrentis
Sursa de infecie omul bolnav
Vector - Pediculus humanus
Contaminare prin lichidul celomic eliberat la zdrobirea pduchilor
Poarta de intrare tegumentul lezat, conjunctiva

Febra recurent endemic

Agenii cauzali - B.hispanica, B.persica, B.duttoni, etc
Sursa de infecie roztoarele slbatice sau peridomestice
Vectori cpue din genul Ornithodoros
Contaminare prin nep
tur, prin intermediul
lichidului coxal, prin
dejecii anale
PATOGENEZA FEBREI RECURENTE
Perioada de incubaie 3-14 zile (borreliile se multiplic n viscere ficat, splin, creier, etc.)
Perioada febril debut brutal, cu febr 40-41 grade i frison (endotoxina eliberat n snge la
distrugerea borreliilor). Algii difuze, stare de tifos, semne meningeale, hepato-splenomegalie,
icter. Criza febril dureaz 7 zile.
Urmeaz o perioad afebril de o sptmn, succedat de alt criz termic cu durat mai scurt
Accesele se repet (2-4-10 recurene)
Sub aciunea anticorpilor bactericizi formai la sfritul acceselor febrile se selecteaz varianta
antigenic responsabil de urmtorul acces.
Febra recurent endemic are o evoluie mai benign

7. Diagnosticul de laborator al tifosului recurent: materialele de examinat, regulile de

recoltare, metodele de diagnostic.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL FEBREI RECURENTE

Prelevate: snge, LCR

Metode de diagnostic:
1. Examenul microscopic (n perioada febril):
- preparate native (fond negru, contrast de faz)
Frotiuri colorate Giemsa
RIF
2. Examenul biologic (infectarea cobailor, obolanilor)

8. Agentul cauzal al borrelioei Lyme. Caracterele morfobiologice. Rspndirea n natur.

Sursa de infecie, cile de transmitere. Principiile diagnosticului de laborator.
BOALA LYME
Agentul cauzal Borrelia burgdorferi (B.burgdorferi sensu stricto, B.afzelii, B.garinii)
Caractere morfoculturale bacterie helicoidal, mobil prin micri de flexie i rotaie. Nu se
coloreaz prin metoda Gram.
Se cultiv lent (cteva sptmni) numai pe medii speciale
HABITAT I CONTAMINARE
Rezervor de infecie: roztoare, animale domestice (cini, cai, etc), psri.
Vectori: cpue din genurile Ixodes i Amblyomma, nari, tuni
Contaminare: prin nep
tura vectorului infectat
EVOLUIA BOLII LYME
Incubaie 2-4 sptmni
I Faza primar (leziune cutanat eritemul cronic migrator). Durata 3-4 sptmni

Faza secundar durata 2-6 sptmni manifestri neurologice, cardiace, cutanate, artralgii
Faza teriar dureaz luni, ani afeciuni cronice cutanate (acrodermatit cronic atrofiant),
articulare (artrite cronice), neurologice (encefalomielite)

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL BOLII LYME

Prelevate: biopsii cutanate, snge, LCR, lichid sinovial
Metode de diagnostic:
Examenul microscopic (preparate native, coloraia special a biopsiilor, impregnare argentic)
Examenul bacteriologic
Diagnosticul serologic (RIFI, ELISA, Western-blot)
PCR
Tratament peniciline, tetracicline
Profilaxie informarea populaiei, extragerea cpuelor

9. Leptospirele i caracterele lor morfobiologice. Sursa, mecanismele i cile de

transmitere ale leptospirozei. Patogeneza.
MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL LEPTOSPIROZELOR
Leptospirele sunt bacterii care pot infecta numeroase specii de animale (n special vertebrate) i
accidental omul.
Clasificare
Familia Leptospiraceae
Genul Leptospira
Spp. L.interrogans (patogen pentru om i animale)
L.biflexa (saprofit, ape de suprafa)
L.parva (saprofit, apa de conduct)
CARACTERE MORFOBIOLOGICE
Caractere morfologice bacterii fine i spiralate, cu 10-30 spire strnse i regulate, cu capetele
ndoite n crlig (aspect de S, C, ?).
Realizeaz micri de nurubare, flexie i translaie.
Pot fi examinate la microscopul cu fond negru sau cu contrast de faz.
Coloraia Giemsa roz-pal
CARACTERE MORFOBIOLOGICE
Caractere de cultur
Medii lichide cu sruri anorganice tamponate cu fosfai i mbogite cu ser de iepure (mediile
Korthof, Stuart), medii semisintetice
Aerobioz
28-30 grade C
Leptospirele se multiplic n 3-10 zile (pn la o lun) fr a tulbura mediul
CARACTERE MORFOBIOLOGICE
Structura antigenic a L.interrogans
1. Antigene cu specificitate de gen, LPZ
2. Antigene majore de grup (peste 20 serogrupuri)
Ex.: L.icterohaemorrhagia, grippotyphosa, hebdomadis, canicola, pomona, autumnalis, etc.
3. Antigene minore de tip (peste 200 serotipuri/variante) - proteice
PATOGENEZA LEPTOSPIROZELOR
Sursa de infecie: roztoarele slbatice, accidental-roztoarele peridomestice sau animalele
domestice (porci, cini, cai, bovine) tubii contori proximali renali
Poarta de intrare: tegument i mucoase
Cile de transmitere:
Alimentar (alimente i apa contaminat)
Contact direct cu animalele infectate
Contact indirect (cu apa contaminat)

Leptospirele sunt antrenate n circulaia sangvin fr leziuni la poarta de intrare

Incubaia 1-2 sptmni (10 zile)
Evoluia leptospirozelor:
1. Faza septicemic (generalizat) 7 zile
- febr, frison, sindrom meningeal
2. Faza afebril (1-3 zile)
3. Faza organic (febr, sindrom meningeal, sindrom hepato-renal, sindrom cardio-vascularhemoragic, icter)
Imunitatea: umoral, specific de tip, durabil

10. Diagnosticul de laborator al leptospirolezelor: materialul examinat i regulele de

recoltare, metodele de diagnostic.
DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
Prelevate: snge, LCR (prima sptmn), urin (din sptmna II de boal), probe necroptice
(seciuni histologice renale, hepatice)
Metode de diagnostic
- Examenul microscopic (fond negru, contrast de faz, coloraia Giemsa sau impregnaia argentic
a seciunilor histologice), RIF

Examenul bacteriologic
Probele sunt nsmnate n cte 3-5 tuburi cu mediu de cultur, incubate n aerobioz la 28 grade
pn la 1-3 luni.
Identificarea n baza caracterelor:
Microscopice
De cultur
De patogenitate
Serologice (RFC, RAL)
Examenul biologic (inocularea intraperitoneal la cobai). Peste 1-3 zile leptospirele pot fi
depistate n exsudatul din cavitatea abdominal.
Tehnici PCR (detectarea ADN)
Diagnocticul serologic (din spt. II)
Reacii cu specificitate de gen (RFC, RHAI, RIFI, ELISA)
Reacii cu specificitate de tip (de referin)-RAL (Reacia de aglutinare-liz)
Titrul diagnostic - 1/400 sau cretrea n dinamic de 4 ori

11. Imunitatea, profilaxia i tratamentul specific ale spirochetozelor.

TERAPIA I PROFILAXIA SIFILISULUI
ANTIBIOTERAPIA beta-lactamine, tetracicline, macrolide (rezisten la aminoside)

Reacia Herxheimer este posibil (efectul endotoxinei)

PROFILAXIA depistarea sistematic activ i tratarea bolnavilor

TRATAMENT I PROFILAXIE LEPTOSPIROZELOR

Tratament: penicilin, tetraciclin, gama-globulina antileptospiroas
Profilaxie: deratizarea, igiena i protecia muncii, supravegherea bazinelor de ap, vaccinarea
selectiv (vaccin inactivat, durata imunitii-1 an)
TRATAMENTUL I PROFILAXIA
FEBREI RECURENTE
Tratament: peniciline, tetracicline, cloramfenicol
Profilaxie: lupta contra vectorilor i protecia individual
TRATAMENTUL I PROFILAXIA BOLII LYME

Tratament peniciline, tetracicline

Profilaxie informarea populaiei, extragerea cpuelor