Listeria

Listeria monocytogenes

 Controlul microbiologic al
alimentelor
 
 SR EN ISO 11290-1/2005
 ISTORIC

 Denumiri: 
 Bacterium monocytogens
 Agent patogen descris în 1926 – Murray şi Webb;
 Monocitoză – inoculare i.v. - animale de laborator (iepuri şi
porci de Guineea);

 Listerella hepatolytica
 Pirie (1927) – rozătoare – necroză hepatică – Africa de sud;

 Listerioza –
 primul caz de îmbolnăvire umană – raportat de Nyfeldt
(1929), Danemarca
 ISTORIC

 Listeria monocytogens
 Denumire introdusă de Pirie (1940) în onoarea
lordului John Lister (părintele antisepsiei);

 Focar de listerioză
 Canada (1981) – salată fertilizată cu îngrăşăminte
naturale;
 Prima argumentare ştiinţifică a implicării

alimentelor
ROMÂNIA
 Volintin (1951)
 izolează primele tulpini de Listeria monocytogenes la capre şi porci

 Roşca şi colab. (1960)

 a descris primul caz de listerioză umană

 2008
 Listeria monocytogenes – a fost introdusă în controlul curent al
alimentelor (Regulament CEE/EU 2074/2005):
 Carne şi preparate din carne;

 Produse de peşte;

 Lapte şi produse lactate,

 Produse baby-food (Programe Naţionale – Ministerul Sănătăţii);

 Suplimente alimentare cu destinaţie specială (Programe Naţionale

– Ministerul Sănătăţii);
 CONSIDERAŢII TAXONOMICE

 Genul Listeria – cuprinde 7 specii:

 Listeria monocytogenes – agent patogen uman;

 Listeria ivanovii:
 subspecia ivanovii;
 subspecia londosiensis;
 Listeria innocua;
 Listeria seeligeri;
 Listeria welshimeri;
 Listeria grayi;
 Listeria murrayi;


L. denitrificans – reclasificată Jonesia denitrificans
 L. ivanovii şi L. seeligeri – excepţional listerioză umana (McLauchlin,
1996)
HABITAT
 Listeria spp. – microorganisme ubicvitare:
 Sol argilos (65-67 zile), nămoluri (295 zile);
 Materii vegetale descompuse;
 Apă de suprafaţă:
 295 zile la la 37˚C
 750 zile la 2-5 ˚C
 Apă clorinată:
 113 zile la 37 ˚C;
 578 zile la 2-5 ˚C
 Efluenţi reziduali;
 Alimente crude şi/sau procesate:
 pH : 4,5 - 9,2;
 aw ≥ 0,92;
 2-5 ˚C – temperatură de multiplicare;
 Inactivată – temperaturi ≥ 60 ˚C;
 Excepţional - rezistă la temperatura de pasteurizare, 72,5 ˚C, 15 sec
(bacterie facultativ intracelulară);
 conc. ≥ 10-20 % g/l NaCl;
 conservanţi (nitriţi).
INCIDENŢA ÎN ALIMENTE

 Lapte crud:
 Carne roşie crudă:
 5 – 36,4 %;
 4,9 – 28 %;
 Îngheţată:
 Carne de pui:
 2,8 – 3,5 %;
 9,7 – 61 %;
 Brânzeturi cu pastă  Semipreparate din
moale; carne (carne tocată, pastă
 0,8 – 46 %; de mici) :
 Brânză Gorgonzola  3,6 – 23,6 %;
/Roquefort:  Produse de pescărie:
 4,8 – 28,5 %;  4 – 78 %

 reţeaua FOODNET
 SURSA DE AGENT PATOGEN
 Animală
 complexă şi diversă
 Listerioza - zooantroponoză:
 boală tipică/atipică;
 Umană

purtători asimptomatici
 Mamifere sălbatice - 15 specii:
 vulpi, lupi, iepuri, rozătoare,

porci mistreţi etc
păsări – 16 specii;
 peşti, crustacee;
 insecte;
 reptile;
 animale domestice
 ovine, caprine, porcine, bovine
etc.

purtători asimptomatici umani
(faringieni, intestinali):
 populaţia generală: 2-6 %
(Roucourt, 1996);
 personal manipulator– ind.
alimentară 0-46,2%
 MOD DE TRANSMITERE
 Direct
(contact strâns om – animal);
 Contaminare:
 Cale digestivă:
 Indirect:  ingerare apă/alimente
contaminate;
 Apă;  Cale respiratorie:
 Aer; 
inhalare praf;
 Sol;  Cale transplacentară;
 Alimente;
 Obiecte/mâini contaminate
 RECEPTIVITATE

 generală:
 Frecvenţă şi gravitate crescută – grupe
populaţionale cu risc – mortalitate crescută (20-30 %):
 Nou-născuţi (prematuri, distrofici);
 Gravide;
 Persoane imunosupresate (cancer, transplant, hemodializaţi,
SIDA etc);
 Vârstnici;

 Persoane cu rezistenţa normală

 Infecţia – evoluţie inaparentă;
 Manifestări locale nespecifice;
 LISTERIOZA
 Incubaţie: 1-90 zile;
 Tropism marcat pentru sistem
nervos şi placentă;
 Forme clinice severe  Forme clinice
(grupe populaţionale cu risc): localizate – persoane
 Meningită/meningo- aparent sănătoase (20-30 %):
encefalită;  Endocardite;
 Septicemie;  Pleuro-pneumopatii;
 Granulomatoză septică;  Gastroenterite;
 Avort spontan/naştere  Colecistite, abcese hepatice;
prematură;  Faringite;
 Adenite etc
 FORME DE MANIFESTARE
A PROCESULUI EPIDEMIC

Frecvent - Cazuri sporadice:
 2-3 cazuri/ 1 000 000 locuitori – SUA (2004);
 4 cazuri/ 1 000 000 locuitori – Canada (2004);
 3,3 cazuri/ 1 000 000 locuitori – Europa (2007):
 4,8 cazuri/ 1 000 000 locuitori – Franţa;
 7,5 cazuri/ 1 000 000 locuitori – Suedia;
 0,3 cazuri/ 1 000 000 locuitori – Grecia

 Izbucniri epidemice – rare:

 1983, SUA: lapte contaminat postpasteurizare;
 1985, SUA: brânză mexicană;
 1987, Elveţia: brânză cu pastă moale;
 1987-1989, Marea Britanie: pate de ficat;
 1991, Franţa: limbă de porc în aspic;
 1992, Franţa: carne tocată prăjită;
 2001, Finlanda: margarină
 CARACTERE BACTERIOLOGICE

 Morfologie
 Bacili scurţi, drepţi, extremităţi rotunjite (culturi tinere, frotiu din produs
patologic):
 Dimensiuni: 0,5-2 μm lungime/0,4-0,8 μm grosime

Culturi vechi: aspect pleomorf:
 cocobacili; forme filamentoase (6-20 μm)
 Dispuşi :
 izolat, perechi (litera V sau Y), palisadă;
 Gram pozitiv (culturi tinere)/Gram-variabil
(culturi vechi);
 Mobili (22-25˚C):
 2-4 flageli dispuşi peritrich: preparat proaspăt: mişcare “în piruetă “;
 Imobili (4˚C, 37˚C);
 Nesporulaţi;

Necapsulaţi.
 CARACTERE DE CULTIVARE

 Listeria spp.
 Microorganisme aerobe/facultativ anaerobe;
 Temperatură: 0-45˚C, optim 20-35˚C;
 4˚C – temperatură de multiplicare (metodă de îmbogăţire);
 Inactivate la 55˚C, 30 minute;
 pH: 5,6 – 9,6; optim: 7,2-7,6;
 rezistă la: > 10 g % NaCl, 40 g % bilă, 0,5 g % telurit de
potasiu
 Cresc pe medii uzuale (Tryptone Soy Yeast Extract Agar):
 colonii 1 -1,5 mm (24-48 ore, 35-37˚C);
 rotunde, netede, bombate;
 uşor transparente – picături de rouă;
 aspect iridiscent – lumină oblică (testul Henry);
 CARACTERE DE CULTIVARE

 L. monocytogenes:
 β- hemoliză – zonă îngustă (agar cu 5 %
sânge berbec, cal sau iepure):
 L. seeligeri :
 slab hemolitic;
 L. ivanovii :
 zonă largă de β- hemoliză):
Detectarea Listeriei monocytogenes
alimente ISO 11290 – 1 / 2005
 Ziua 1

 Ziua 1

 Ziua 2, 3

 Ziua 4, 5

 Ziua 6

 Ziua 7

 Ziua 2, 3

 Ziua 4, 5

 Ziua 6

 Ziua 7
 Detectarea Listeriei monocytogenes
alimente ISO 11290 – 1 / 2005

25 g sau ml aliment în 225 ml

Ziua 1 bulion demi-Fraser
30°C, 24 h  2

0,1 ml în 10 ml bulion
Ziua 2, 3
Fraser
35°C, 48 h  2

Ziua 4, 5
Agar Palcam Agar Oxford
35°C, 24-48 35°C, 24-48
h h

5 colonii caracteristice

Ziua 6 Agar TSYE 35°C, 24 h

Confirmare biochimică
Ziua 7
 CARACTERE DE CULTIVARE

 Listeria spp.
 Medii selective:

 Agar Oxford (supliment: Cicloheximidă, Colistin, Cefotetan, Fosfomicină,

Acriflavină):
 Incubare aerobă, 350 C, 24-48 ore;

 Colonii 1-2 mm, culoare gri-verzui;

 Halou negru (hidroliza esculinei).

 Centru concav (amprentă în mediu).

 Agar Palcam (supliment: Ceftazidimă, Polimixină B, Acriflavină):

 Incubare microaerofilă, 350C, 24 -48 ore;
 Colonii 1,5-2 mm, culoare gri-verzui;
 Halou negru (hidroliza esculinei.

 Agar Ottaviani-Agosti;

 Agar McBride; MOX;

AGAR PALCAM
AGAR OXFORD
 PROTOCOL
Confirmare biochimică

Gen Listeria Listeria spp.

Specii - Test CAMP D-xiloză L-rhamnoză Manitol
Gram + hemoliză
S.aureus R.equi
Catalază +
Mobilă 22°C L.monocytogenes + + - - + -
Aerob-anaerob L. i vanovii
facultativ ++ - + + - -
RM + L. innocua - - - - + -
RVP + L. welshimeri - - - + + -
Uree –
L. seeligeri - + - + - -
Indol –
L. grayi - - - - - +
Caractere diferenţiale ale Listeriei spp. comparativ cu alte genuri bacteriene
Caracteristică Listeria spp. Erysipelotrix Corynebacterium spp. Enterococcus spp.
Mobilitate 25°C + - - -
Catalază + - + -
Esculină + - - V
H2S - + - -
Incluzii - - + -
CONFIRMARE
BIOCHIMICĂ
/BIOLOGIE MOLECULARA

 Galerii API - Listeria;

 Medii cromogene:
 COMPASS L.mono Agar:
dublă detecţie enzimatică:
 X-glucoside (substrat
cromogen) - β-
glucozidase – colonii
bleu-vert (Listeria spp.);
 Fosfatidilinositol –
fosfolipaza C
fosfatidilinositol specifică
– halou (Listeria
monocytogens)
 RT-PCR
TEST CAMP
 STRUCTURA ANTIGENICĂ

Listeria monocytogenes Serovar Antigen O Antigen H

1/2a I, II, (III) AB

13 serotipuri. 1/2b I, II, (III) ABC

antigen somatic O 1/2c I, II, (III) BD
antigen flagelar H 3a II, (III), IV AB
3b II, (III), IV, (XII), (XIII) ABC
1/2b – frecvent – în
America
3c II, (III), IV, (XII), (XIII) BD
1/2a şi 4b – frecvent
în Europa;
4a (III), (V), VII, IX ABC
4ab (III), V, VI, VII, IX, X ABC

4b (III), V, VI ABC
4c (III), V, VII ABC
4d (III), (V), VI, VIII ABC

4e (III), V, VI, (VIII), (IX) ABC

7 (III), XII, XIII ABC