ENZIMELE

GENERALITI. CLASIFICARE. STRUCTUR MARKERI TUMORALI

Enzimele sunt substane chimice complexe de natur organic, eliberate de plante sau animale, capabile s mreasc viteza reaciei chimice (= BIOCATALIZATORI). Denumirea de enzim provine de la enzim n levur pornind de la faptul c din drojdie s-au extras primele enzime. Procesele enzimatice: fermentarea vinului, dospirea pinii, au fost cunoscute din antichitate, dar primele identificate au fost amilaza din mal / salivar, pepsina. Toate sunt de natur proteic i ndeplinesc rol de catalizator al transformrilor biochimice din celulele vii. Proprieti: - mresc viteza reaciilor chimice, posibile din punct de vedere termodinamic prin scderea energiei de activare i instalarea strii de echilibru; - activitatea catalitic se manifest la concentraii mici, mediul de reacie coninnd concentraii relativ mari de substrat; - la sfritul transferului se regsesc nemodificate din punct de vedere cantitativ i calitativ. Enzimele intracelulare - sunt produse i i desfoar activitatea n celula care le-a sintetizat - sunt legate puternic de structura celulei i nu pot fi extrase dect prin distrugerea acesteia pe cale mecanic - extragerea se face cu ap, glicerin, meninnd activitatea ca i n interiorul celulei. Enzimele intracelulare pot fi legate prin absorbie i se numesc bioenzime, iar cele care sunt legate profund de celule prin legturi chimice, se numesc dezmoenzime. Enzimele extracelulare sunt enzimele care dei biosintetizate n celul, sunt eliminate n lichide din organism sau medii de cultur exercitndu-i aciunea la acest nivel. n organism exist enzime fie independente de poziia substratului numite constitutive, fie enzime care sunt sintetizate n caz de nevoie, numite enzime adaptative. Structura enzimelor Numeroase enzime au o structur binar care const ntr-o component proteic, numit apoenzim i una sau mai multe componente neproteice numite cofactor. Acest complex enzim-cofactor se numete holoenzim, fiind activ d.p.d.v. catalitic. Prin ndeprtarea cofactorului rmne componenta proteic inactiv, influennd forma liber. n structura holoenzimei, cofactorul imprim specificitate de aciune, respectiv determin tipul i viteza reaciei catalizate, n timp ce apoenzima imprim specificitate de substrat.

Dup natura chimic i modul lor de legare la coenzim, cofactorii se clasific n: - Coenzime care sunt compui organici, majoritatea derivai din vitamine care se ataeaz temporar la apoenzim prin legturi necovalente i care sunt uor disociabile de aceasta. Pot trece uor de la o apoenzim la alta, putnd astfel participa la transferul altor molecule de substrat dup terminarea unei reacii chimice: NAD+, NADP+, ATP, CTP, acid lipoic. - Gruprile prostetice sunt substane organice fixate pe apoenzim i care disociaz greu deoarece sunt legate prin legturi covalente. Ex: hem, piridoxal fosfat. Aceste grupri imprim mecanismul unor procese enzimatice: transportul de electroni, de gruparea acetil (hem care conine ion de Fe, care este o component a citocromilor fiind puternic legat de apoenzim prin legturi covalente). - Ionii metalici sunt indispensabili pentru exercitarea forei catalitice participnd n calitate de cofactor, nu de component structural. Aceste enzime se numesc i metal enzime, iar printre ionii care ndeplinesc rol de cofactor sunt: Mg, Zn, Cu, Fe, Mo (molibden), unele enzime pot conine chiar 2 ioni metalici. Specificitatea enzimelor Enzimele difer de catalizatorii neproteici prin specificitate. Astfel nelegem proprietatea sa de a aciona preferenial numai asupra unui anumit substrat, sau mai multe substrate cu caracter chimic comun. Aceasta se manifest la nivelul tipului de reacie catalizat de enzime i la nivelul substratului. Cinetica reaciilor enzimatice Msurarea activitii enzimatice se reduce la stadiul cineticii i vitezei reaciilor catalizate. Reglarea activitii enzimatice La nivel celular activitatea enzimelor de care depind procesul metabolic este asigurat de mecanisme de reglare: Sinteza enzimelor (biosinteza protein-enzimelor) Mediu intracelular o pH i electrolii care pot avea efect inhibitor sau activator. Ex: ionii de Ca exercit un rol reglator al glicolizei. Astfel concentraiile mari inhib aciunea piruvatchinazei la cumulare de fosfoenolchiruvat. o Hormonii sunt organisme pluricelulare reglate prin funcii hormonale. Acioneaz asupra activitii enzimelor ca factori enzimatici sau asupra sintezei lor. Astfel hidrocortizonul mrete de 25 de ori activitatea cetoglutarat transaminazei, iar insulina inhib biosinteza enzimelor gluconeogenezei. o Concentraia intracelular a cofactorilor (NAD, NADP, ATP) spre exemplu n metabolismul acidului piruvic, calea pe care aceasta o va urma este n funcie de concentraia NAD, care depinde de coninutul n oxigen. Dac n celul exist oxigen disponibil, NAD va fi produs n cantitate suficient i astfel acidul piruvic va fi metabolizat prin ciclul acidului citric. Dac exist puin oxigen NADH+ i H+ nu va fi oxidat de NAD i n acest caz acidul piruvic va fi redus la acidul lactic. Membranele celulare Pentru ca o molecul a unei substane s fie metabolizat de celul, ea trebuie s ptrund n celul. Pentru acest scop exist un sistem specific de transport realizat de permeaze, care sunt tot enzime. De asemenea membranele intracelulare (mitocondriile) a cror permeabilitate pentru diversele substane permit fracionarea normal a celulei.
2

 Reglarea alosteric Mecanismul cel mai complex al coordonrii metabolice este reglarea alosteric n care sunt implicate enzime alosterice. Ele intervin n reglarea i controlul diferitelor secvene de reacii ale cilor metabolice.

Clasificarea enzimelor 1. oxidoreductazele catalizeaz reacii de oxidoreducere ce au loc n organismele vii. 2. transferazele catalizeaz reacii de transfer a unor grupri de atomi de la un substrat la altul. 3. Hidrolazele catalizeaz scindrarea diferitelor legturi covalente din molecula substratului. 4. Liazele catalizeaz reacii de adiie a unor grupri de atomi la molecula substratului 5. Izomerazele catalizeaz diferite reacii de izomerizare a substratelor. 6. Ligazele catalizeaz formarea unor legturi chimice C-C sau C-heteroatom. Principalii markeri tumorali Incidena cancerului: se ntlnesc 10 milioane de cazuri pe an. Clasificarea markerilor tumorali, importana lor i reguli de testare: Alfa-fetoproteina (AFP) Antigen carbohidrat 15-3 (CA 15-3) 19-9 (CA 19-9) 125 (CA 125) Antigenul cancinoembrionar (CEA) Antigenul prostatico specific (PSA) Calcitonia (CT) Cronogramia (A) Enolaza neuron specific (NSE) Citocheratina 19 (Cyfra 21-1) Gonadotropina carion uman (HCG) S-100 Tireoglobulina Antigenele tumorale care aparin celulelor tumorale (TSA) i cele care aparin celulelor normale (TAA). Dei nu toate celulele neoplazice dispun de markeri fiziologici, la majoritatea pot fi identificate structurile antigenice diferite, numite neoantigene. Antigenele retrogenice care n condiii fiziologice sunt exprimate exclusiv pe suprafaa celulelor embrionare, dar nu i a celor de dup nater. AFP i CA care apar dup natere. Antigenele de difereniere apar doar n faza determinant a matulaiei unor serii celulare (elementele imature din leucemie). Antigenele de difereniere: Pentru leucemia acut LLA - CD 10 forma comun ; LLA - CD 19 cu lanuri libere Pentru leucemie cronic LLC - CD 19; LLC - CD 21 Definiia markerilor tumorali.
3

Sunt substane produse de un esut tumoral care rmn n/sau pe celule productoare sau sunt secretai n tumorile nconjurtoare a cror identificare i dozare este util n diagnosticul clinic al afeciunilor canceroase. Utilitate Screening al populaiei de risc - calcitonina n familiile cu afeciuni neoplazice endocrine multiple de tip I sau AFP la pacienii cu ciroze hepatice alcoolice, care au risc de carcinom hepatocelular. Diagnosticul tumorilor n scopul completrii simpatologiei clinice. Stabilizarea prognozei n unele cazuri concentraia markerilor este n strns legtur cu masa esutului tumoral. Monitorizarea rspunsului la tratament chirurgical, chimioterapie sau radioterapie. Stabilirea recurenelor / recderii / metastazrii Markerul tumoral ideal este cel efectuat din snge sau alt lichid cu rezultate pozitive pentru bolnavii de cancer, corelat cu stadiul i rspunsul la tratament. Nu exist marker tumoral ideal. Caracteristici: sensibilitate de 100% - capacitatea de a identifica toi pacienii cu tumor n stadiu ct mai precoce. specificitate 100% - identificarea indivizilor sntoi i a celor cu neoplast. specificitate de organ corelaia ntre concentraia seric a markerilor i stadiul tumorii capacitatea de a identifica modificrile induse de tratament capacitatea prognostic n funcie de concentraie. Antigene oncofetale (CEA) n viaa embrionar.... Se produc n pancreas i trastul intestinal. Este o glicoprotein complex fixat n membrana celulei neoplazice de unde se elibereaz n snge. Valori crescute ntlnim n carcinoame ale tractului gastrointestinal, pancreatic, gastric, pulmonar, mamar, ovarian. Concentraia crescut n urin de peste 35 mg/mL indic carcinom al vezicii urinare Valori crescute n lichidul cefalo-rahidian indic metastaz cerebral. Antigene oncofetale (AFP) Este o glicoproteina de origine oncofletal. Sinteza ei este suprimat la adult. n cursul viei intrauterine se formeaz n sacul vitehi, n ficat i tractul gastro intestinal. Sinteza maxim este realizat n sptmna 14-20. Fiind o protein plasmatic n serul mamei, concentraia maxim fiind atins n sptmna 35-38. Valori crescute apar n carcinomul hepato celular, testicular. Valorile moderat crescute n neoplazii testiculare, ovariene, n boli maligne (ciroza hepatic, hepatit acut viral).

Antigene carbohidrai (CA 125)

4

Este o glicoprotein intern n carcinomul ovarian, prezent n epiteriul ovarian, pancreatic, vezic biliar, stomac, bronhii, colon. Se gsete n cantitate ridicat n lichidul amiotic, lapte i serul femeii nsrcinate. Cauza frecvent a prezenei fals pozitive este endometrita, diabet zaharat, ciroz hepatic, insuficien renal cronic. Este indicat pentru monitorizarea i evoluia bolii. Dac nivelul de C 125 rmne constant peste 100 U/mL i dac dou testri succesive arat o cretere cu 50% a concentraiei cu acest marker, atunci posibilitatea ca boala s fie progresiv este n procent de 90%. Antigen gastrointestinal CA 72-4 Este o glicoprotein prezent n stomac, ovare, celule epiteriale, pulmonare. Indicat n calcinom colorectal, gastric, ovarian, endometrial, mamar i adenocarcenom pulmonar. Se utilizeaz pentru monitorizarea carcenomului gastric post operator, pentru c indic foarte repede recidiva bolii. Antigen gastrointestinal CA 19-9 Este un gangliozid prezent la persoane cu antigene de grupa sanguin cu risc. l ntlnim n celulele epiteliale, mucoas, pancreas, stomac i intestin. Valori normale: 0 37 un/mL Antigen gastrointestinal CA 15-3 Este o glicoprotein polimorf epitelial cu specificitate pentru carcinomul mamar aflat n diferite stadii. Se utilizeaz pentru monitorizarea post operatorie pentru c indic recidiva cu cteva luni nainte de diagnosticul clinic. TPA Este un antigen asociat tumorilor aniversale deoarece prezint valori crescute indiferent de locul tumorii. Este o polipeptid prezent n esuturile fetale, placent, epiteliul organelor cavitare. Poate fi identificat n urin, saliv, lichid de lavaj bronhoalveolar. Determinarea efectului din acestea sunt mult mai importante dect cele din snge. PSA Este o glicoprotein sintetizat de celule epiteriale prostatice i secretat n lichidul seminal. Valorile crescute apar n prostatit, hipertrofie de prostat. Este un marker specific de organ care poate fi folosit si pentru screeningul grupei de vrst; brbai ntre 50 70 ani. Poate fi folosit i pentru monitorizarea terapiei i determinarea recidivelor. Hormonii Sinteza de hormoni peptidici este o trstur comun a celulelor canceroase. Studiile se refer la cancerul bronic, 10% din pacieni prezentnd sinteze de hormoni. Calcitonina Este secretat de celulele parafoliculare C ale tiroidei. Efectul principal este de a scdea calciul seric prin inhibarea reabsorbiei osoase i stimularea eliminrii Ca. Creterea concentraiei de calcitonin apare n sindromul mielo poliferativ (carcinom tiroidian).

Peptidele
5

Tiroglobulina funcia acesteia este de a transporta hormonul tiroidian n timpul sintezei i acumulrii lui n tiroid. Valorile ei cresc la bolnavii cu carcinom tiroidian. Cea mai mare sensibilitate de diagnostic o are n tumorile tiroidiene (tiroidite, noduli / tumori tiroidiene). Feritina protein responsabil n depozitarea fierului. n esuturile tumorale se gsesc n special izoferitinele acide. n caz de exces de Fe, esuturile tumorale sintetizeaz subuniti H, iar cele normale HL. Valori crescute n: inflamaii, tumori, hepatopatii; leucemia acut, carcinom pulmonar, hepatic, de prostat Valori sczute n: sindrom nefrotic, graviditate. 2 microglobulina Este o protein mic ntlnit pe membranele celulelor difereniate. Este prezent n ser, urin, saliv, lichid cefalo-rahidian i eliminat de rinichi n proporie de 98%. Creterea ei se datoreaz distrugerii celulelor sistemului uman. Creterea concentraiei de 2 microglobulin nu este specific tumorii, ea poate s apar i n infecii, inflamaii sau boli renale. Enzimele Celulele canceroase cu activitate enzimatic diferit att cantitativ, ct i calitativ (LDH, CK, 8GT utile pentru diagnostic primar al tumorii, dar i pentru monitorizarea terapiei). NSE (Enolaza neuron specific) Este o enzim citoplasmatic cu rol n metabolizarea intracelular a glucozei prezente n toate celulele organismului. Indicaii: monitorizarea evoluiei i terapiei cancerului pulmonar cu celule mici. Markeri genetici Oncogenele sunt gene care apar atunci cnd sunt exprimate anormal de intens sau cnd sufer mutaii i sunt implicate n transformarea unei celule normale n celul canceroas.