1

Biofizica - Conf. Dr. Constanta GANEA - Curs 5 Fenomene de transport prin membrana celular

Structura membranei celulare. Membrana (7,5 nm) - ansamblu de structuri supramoleculare aflat la periferia celulei (sau a organitelor celulare) care separ mediul intern de cel extern (celular de interstiial) i care ndeplineste diferite funcii legate n special vii de au procese metabolice de fundamentale. Membranele proprietile

semipermeabilitate i selectivitate. Datorit acestor proprieti ele nu reprezint simple bariere care separ 2 medii cu pr oprieti diferite, ci structuri active care asigur: - transportul unor molecule, ioni, macromolecule, complexe supramoleculare, dintr-o parte n alta a ei; - traducere i transfer de informaie adus de diferii stimuli (mecanici, electrici, electromagnetici, chimici, termici etc.) prin receptorii specifici pe care i conine; - interconversia diferitelor forme de energie, prin enzimele sau complexele enzimatice pe care le conine. Actualmente se accept c, n general, structura membranei celulare este cea descris de modelul mozaicului fluid proteolipidic al lui Nicholson i Singer (1972). Conform acesui model, membrana este format dintr-un bistrat lipidic, n care sunt nserate proteine i glicoproteine (fig.) Bistratul lipidic este constituit n special din fosfolipide (fosfatidilcolina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol etc.) dar sunt prezente i glicolipide i colesterol. Moleculele lipidice sunt amfifile (amfotere). Ele au un cap polar (extremitate polar) i o extremitate hidrofob (dou lanuri de hidrocarburi - cozi hidrofobe). Moleculele de acest tip se organizeaz

spontan, pe baza principiului de minimizare a energiei poteniale, astfel nct cozile lor hidrofobe s evite contactul cu apa. Ele realizeaz: -structuri micelare - bistraturi (vezicule membranare sau membrane plane)(fig.) n acest fel, ntre cozile hidrofobe iau natere legturi hidrofobe, iar capetele polare sunt expuse mediului apos. Bistratul lipidic este o structur dinamic, prezentnd fluiditate: moleculele lipidice execut micri de translaie i rotaie. De exemplu: -translaie n stratul n care se afl (difuzie lateral) - rotaie n jurul propriei axe - basculare dintr-un monostrat n cellalt - flexie (ndoire) (fig.) Proteinele membranare, n funcie de modul n care se nsereaz n membrane sunt: a) - proteine intrinseci (integrale) - traverseaz membrana celular o dat (glicoforina) sau de mai multe ori (exemplu - proteinele transportoare, pompe ionice constituite din mai multe -helixuri) b)- proteine extrinseci (periferice) - ptrund n membran pe o anumit distan, pe una din cele dou fee, sau sunt ataate la suprafaa membranei (receptorii membranari, proteine cu rol imunologic etc.) i proteinele prezint micri de difuzie lateral i rotaie, ntr-un mod mai restrictiv (depinznd de interaciunile cu alte proteine). Membrana se sprijin pe un citoschelet alctuit din proteine fibrilare (spectrina, anchirina i actina fibrilar - n hematii). Membrane artificiale (model) - permit studiul unor procese membr anare. Sunt lipozomii i bistratele lipidice (BLM).

Clasificarea modalitilor de transport membranar

1. Macrotransport (endocitoza, transcitoza, exocitoza): - fagocitoza - pinocitoza

2. Microtransport - pasiv - activ 1. Fagocitoza - proces n care celula nglobeaz particule de substan solid, nvelite n pseudopode (prelungiri citoplasmatice) care fuzioneaz n spatele lor. Pinocitoza - nvelirea picturilor de lichid i macromoleculelor ntr-un bistrat lipidic i formarea de vezicule care fuzioneaz cu membrana celular i prin aceasta pot fi transportate dintr-o parte n cealalt a membranei. Exemple: - n terminaiile nervoase i celulele secretorii (exocitoz) (acetilcolina) - trecerea proteinelor plasmatice din snge n spaiul extravascular transcitoz prin endoteliul capilar. 2. Transportul pasiv - deplasarea moleculelor i ionilor n sensul gradientului electrochimic sau de presiune - aparent fr consum de energie metabolic. Aparent, deoarece gradientul electrochimic respectiv este rezultatul unor procese anterioare realizate cu consum de energie. Prin transport pasiv sistemul are tendina de a ajunge la echilibru termodinamic. Dac n expresia diferenei de potenial electrochimic notm: c1 = cin c2 = cex V1 = Vin V2 = Vex obinem: W = Win - Wex = RT ln cin/cex + zF (Vin - Vex) W > 0 - ionii au tendina de a prsi celula; W < 0 - ionii au tendina de a ptrunde n celul, dac membrana este permeabil pentru acetia. Transportul unei specii ionice nceteaz la echilibru W = 0: E = Vin - Vex = (RT/zF) ln cex/cin - ecuaia Nernst Difuzia simpl se produce prin dizolvarea speciei moleculare transportate n membran i depinde de raportul dintre solubilitatea substanei respective n bistratul lipidic i solubilitatea ei n ap, deci de coeficientul de partiie . Cum s-a artat, conform legii lui

Fick, n cazul membranelor coeficientul de permeabilitate P este P = D/. Difuzia facilitat - se face prin utilizarea unor molecule transportoare existente n membran sau introduse artificial n aceasta. Asemenea molecule transportoare au o anumit specificitate, recunoscnd specia molecular sau ionic pe care o transport. Exist transportori pentru glucoz, colin, pentru diferii ioni (n acest caz transportorul se numete ionofor). Transportorii pot distinge speciile levogire de cele dextrogire. Ei acioneaz n sensul gradientului electrochimic. Mecanismul de transport se bazeaz pe proprietatea transportorului de a se putea gsi n dou stari conformaionale T 1 i T2. (fig.) Molecula transportat (substratul S) se leag pe una din feele membranei. Se produce n urma legrii o modificare conformaional n starea T2 i situsul de legare este expus prii opuse (diagrama) cu scderea afinitii pentru specia respectiv i eliberarea acesteia. Prin eliberare se revine la conformaia iniial i ciclul se repet. Procesul se desfoar conform cineticii MichaelisMenten pentru reaciile enzimatice. Un exemplu de ionofor este antibioticul valinomicin, molecul hidrofob care poate ncorpora ionii de K+, translocndu-i prin membran (i Rb, mai slab). Valinomicina face ca ionii de K+ s ias din celula bacterian, provocndu-i moartea. Nigericina (K+, H+, schimb neutru). Difuzia prin canale ionice i pori. Canalele ionice sunt proteine specializate care strbat bistratul i permit trecerea unor substane care nu sunt liposolubile. Permit trecerea ionilor n ambele sensuri i sunt selective. Pori - structuri neselective, conteaz doar diametrul particulei. Specia transportat se leag de proteina canal, formnd un complex enzim- substrat care evolueaz pe baza cineticii Michaelis-Menten. Pentru ca ionul s treac dintr-o parte n cealalt este necesar ca un canal s fie deschis.

Componentele canalului: filtru de selectivitate F, vestibul (V), senzor S, poart P, inactivator I

Deschiderea i nchiderea canalului sunt rezultatul unei modificri conformaionale care este comandat printr-un mecanism specific. Acesta poate fi ; - electric - modificarea potenialului membranar (canalele de Na+, K+ n membrana axonal); - chimic (acetilcolina, canalul de Na+, Ca++ controlat de GMPc n membrana celulelor fotoreceptoare); - alte mecanisme (presiune -mecanic). Cnd canalul este deschis - trecere pasiv n sensul gradientului. Blocani specifici - toxine (tetrodotoxina - Na +). Permit studierea proprietilor canalelor. Deosebiri ntre cele dou tipuri de difuzie (facilitat, canale): - transportorii - specificitate mai mare (disting ntre L i D)(mii ioni/s); - canalele - viteza mult mai mare (milioane - sute de milioane de ioni/s, sunt mai adecvate pentru modificri brute; - transportorii sunt n numr mult mai mare; - transportorii pot participa la transportul activ secundar. Transportul activ - form de transport care necesit energie metabolic - cuplare energetic imediat. Transportul activ primar. Se realizeaz cu ajutorul pompelor ionice membranare, structuri proteice transportoare din clasa proteinelor integrale. O pomp ionic este caracterizat prin prezena unui centru activ cu acces alternativ spre partea extracelular i spre cea citoplasmatic. Accesul este modificat ca urmare a unei tranziii conformaionale. Cea mai cunoscut pomp ionic este Na+,K+- ATP-aza. Este alctuit din patru subuniti proteice (2 i 2 ); subunitatea are activitate

ATP-azic.

Hidroliza

ATP

furnizeaz

energia

care

permite

translocarea a 3 ioni de Na n exteriorul celulei i a doi ioni de K n interior. Este o pomp electrogenic ntruct are ca rezultat un transfer net de o sarcin pozitiv per ciclu n exteriorul celulei. Conform schemei Albers-Post, n esen mecanismul de transport este: (schema).

Enzima n E1 ia Na+ pe partea citoplasmatic i leag ATP (n prezena Mg++). ATP este hidrolizat, complexul fosforilat sufer o tranziie conformaional E1 - E2 n urma creia scade afinitatea pentru Na+, crete pentru K+, acesta se ataeaz, defosforilare, pierde afinitatea pentru K+, enzima trece n E1. Pompa H+, K+ - mucoas gastric. Pompe Ca++ - reticul sarcoplasmic.

Transportul activ secundar

Ptrunderea speciilor transportate ntr-un compartiment (extra, intra) mpotriva gradientului lor electrochimic, prin asocierea cu molecule care se deplaseaz normal conform propriului lor gradient de concentraie. Gradientul este ns meninut prin transport activ primar. Transportorul ntlnit n difuzia facilitat poate lega cele dou molecule fie n aceeai stare conformaional (pe aceeai parte) - simport sau co-transport, fie pe cele dou pri, n stri conformaionale diferite - antiport (contra-transport). Simport - enzima leag pe aceeai parte, n T 1, ambele specii i sufer tranziia T1 - T2 numai dup legarea ambelor.

Exemplu: glucoza n celulele mucoasei intestinale se asociaz cu Na + care intr pasiv. Ionii de Na+ sunt eliminai activ prin transport primar, prin hidroliza ATP. Glucoza rmne - transport electrogenic. Antiport - proteina transportoare leag n starea T 2 un alt ion dect cel care sufer difuzia facilitat, care va fi evacuat n compartimentul n care potenialul lui electrochimic este mai mare. Exemplu: muchiul cardiac - antiport 3 Na +/ 1 Ca++ - electrogenic (sarcina net +1). Asigura concentraia sczut a Ca ++ n interior pe seama pomprii active a Na+.