Metabolismul bacterian

Particularitatile metabolismului microbian

l) intensitate neobinuit
1g de celule de Micrococcus ureae metabolizeaza l200 g uree / ora; 1g bacterii lactice hidrolizeaz l4 000 g lactoz/ora. valoarea nalt a raportului suprafa/volum (greutate celular). 2) Natura substratului - foarte divers. grupul cel mai omnivor din ntrega lume vie. substane anorganice simple, inclusiv substane toxice pentru sistemele biologice, pn la substane organice complexe: cauciucul, asfaltul, fenolii, parafinele, petrolul, lemnul, substanele antibiotice, cheratina, detergenii, masele plastice. 3) Plasticitatea metabolismului bacterian - capacitatea bacteriilor de a folosi, alternativ, diferite surse de carbon i energie. microorganisme, considerate strict autotrofe sunt facultativ heterotrofe microorganisme heterotrofe (organotrofe), n absena substanelor organice utilizeaz compui anorganici. caracter adaptativ semnificaie ecologic major 4) Potenialul de sintez l0ll / unitatea de greutate. O celul de E. coli sintetizeaz circa l000 molecule de proteine/secund, circa 4000 molecule de lipide i 4 molecule de ARN. 5) Diversitatea cilor catabolice alternative, prin care poate fi degradat un compus chimic: calea glicolizei, a untului hexozo-monofosfailor, calea Entner-Doudoroff.

Metabolismul energetic bacterian

ci amfibolice
- cile de producere a energiei - catabolice sau degradative; - cile consumatoare de energie - anabolice sau de biosintez.

ci anaplerotice Fazele degradarii catabolice ale unei macromolecule :

I. reaciile biochimice catalizate de exoenzime, macromoleculele nutritive sunt scindate n spaiul extracelular, la subunitile specifice: glucide, aminoacizi, oligopeptide, nucleozide, fosfai organici cu molecul mic (glicerol-fosfat). II - monomerii sunt degradai pe ci specifice i rezult un numr limitat (circa l2) de molecule mici, denumite intermediari metabolici ai cilor centrale, aceiai la diferite tipuri de bacterii. In aceast etap se elibereaz circa 1/3 din energia molecular; III : n aerobioz, reaciile evolueaz n sensul metabolizrii integrale a compuilor, pn la CO2 i H2O, cu eliberarea ntregii cantiti de energie. In anaerobioz, reaciile evolueaz dup modelul respiraiei anaerobe sau al proceselor fermentative i cantitatea de energie care se elibereaz este mic.

Tipuri de metabolism energetic in funcie de acceptorul final de electroni

metabolism energetic de tip aerob (oxibiotic) sau metabolism respirator, dependent de citocromii catenei de respiraie celular, propriu microorganismelor al cror acceptor final de e-, la captul catenei de respiraie este O2; metabolism energetic anaerob (anoxibiotic), acceptor final de e- este un compus anorganic oxigenat (nitratul, sulfatul, carbonatul) sau un compus organic (fumaratul). In prezena O2, respiraia este de tip aerob, deoarece catena de respiraie celular este funcional; reacii metabolice de tip fermentativ - care au loc numai n condiii de anaerobioz, dar acceptorul final de e- este un compus organic (de exemplu, piruvatul).
La bacteriile fermentative lipsete lanul citocromilor din catena de respiraie, pentru transportul e-. Substratul acceptor este redus la produse de fermentaie (de exemplu, piruvatul, la lactat). Reducerea acceptorului final este cuplat cu reoxidarea coenzimelor.

Tipuri respiratorii: bacterii strict aerobe - necesit O2 molecular ca acceptor final de e-. bacterii microaerofile - O2 ca acceptor final de e-, < concentraia natural a O2 (20-21%) bacteriile facultativ anaerobe i obin energia pe cale oxidativ, folosind O2 ca acceptor final de e -, dar cresc i n condiii de anaerobioz i i obin energia pe cale fermentativ; bacteriile anaerobe nu folosesc O2 molecular ca acceptor de e-.
diviziuni fiziologice:

a) bacteriile anaerobe aerotolerante cresc puin (dar cresc) n condiii de aerobioz, ntr-o ambian care conine ntre 2-8% O2. Creterea optim are loc n anaerobioz (de exemplu, bacteriile lactice);
b) bacteriile anaerobe obligate variaz n privina sensibilitii lor la O2: unele tolereaz cantiti mici de O2, iar altele strict anaerobe nu cresc n prezena unei concentraii mai mari de 0,5% O2.

Reacii de oxidare a substratului energetic

Metabolismul energetic - lant de reacii de oxido-reducere, n cursul crora substratul energetic este oxidat.
l. Reacia de oxidare consecutiv pierderii de e-. 2. Reacii de oxidare catalizate de dehidrogenaze 3. Reacia de oxidare care comport ctig de atomi de oxigen de ctre substratul oxidat

Transportorii de e- :
liber difuzibili (NAD+, NADP+). Totdeauna transfer 2 atomi de H spre urmtorul purttor al catenei. Transferul atomului de H se numete dehidrogenare; ferm ataai de enzimele din membrana citoplasmatic. In dublul strat fosfolipidic sunt inserate sistemele redox proteine cu rol de transport n catena de respiraie celular: flavoproteine, quinone, proteine cu Fe-S, citocromii.

Respiraia aerob bacterian

Componentele catenei respiratorii bacteriene

Componentele catenei sunt reduse de forma redus a purttorului anterior i sunt oxidate de forma oxidat a componentului urmtor. 3 segmente funcionale, al cror potenial redox crete de la flavoproteine, pn la citocromoxidaza terminal primul segment funcional format din urmtoarele componente:
Dehidrogenazele cu nucleu piridinic (NAD sau NADP) - asociate feei interne a membranei celulare; dehidrogenazele cu nucleu flavinic (un derivat al riboflavinei), FAD i FMN; Flavoproteinele sunt proteine care conin un derivat al riboflavinei(vitamina B2). Poriunea flavinic, legat de o protein, este grupul prostetic care accept atomi de H i se reduce sau doneaz e- i se oxideaz. {n celule se gsesc 2 flavine: FMN i FAD. Proteine nehemice cu Fe-S.

al II-lea segment funcional - familie de molecule chinonice liposolubile, denumite lipoquinone sau coenzime Q.
Quinonele (ubiquinona = CoQ) sunt molecule foarte hidrofobe, solubile n lipide i au rol n transportul e-.

al III-lea segment funcional al lanului respirator este format din citocromi. Citocromii - proteine de care se ataeaz inelul porfirinic cu Fe - hemul, ca grup prostetic. {n centrul grupului prostetic se gsete un atom de Fe. Gruparea prostetic se numete hem, dac Fe este n stare redus (Fe2+) sau hemin, dac Fe este oxidat (Fe3+).
Citocromii transport numai e- i se gsesc numai n celulele aerobe. Citocromii bacterieni funcioneaz n transportul fotosintetic al e- i n respiraia aerob, cuplat cu oxidarea substratului redus (substane organice, H2, S redus sau metale). Citocromii au rolul de a transporta e- la alt citocrom cu potenial redox mai pozitiv, pn la acceptorul final. Citocromul terminal al catenei de respiraie a 3 (citocrom-oxidaza) conine Cu. Este singura protein capabil s transfere e- la O2 molecular

inteza ATP dependent de gradientul protonic

Starea energizat a membranei este folosit direct pentru activiti fiziologice (transportul ionic, rotaia flagelului) sau pentru conversia ADP la ATP. Teoria chemiosmotic sau chemiosmoz (Mitchell, l961). Fora proton-motrice este convertit n energie chimic prin sinteza ATP din ADP, sub aciunea ATPsintazei (ATP-az). Evenimentele transportului de e- sunt influenate de dou clase de ageni chimici: inhibitori i decuplani. Inhibitorii blocheaz fluxul e- i astfel inhib chiar fora proton-motrice: CO i CN-(cianida) se leag strns de anumii citocromi i inhib funcionarea lor. Decuplanii inhib sinteza ATP fr s afecteze transportul e-: substanele liposolubile ca dinitrofenolul i dicumarolul cresc permeabilitatea membranei i astfel fora proton-motrice este anulat. In compuii fosforilai, grupul fosfat este ataat prin atomul de O legat esteric. Nu toate legturile fosfat sunt macroergice (fosfoenol-piruvatul). Oxidoreductazele care folosesc ali acceptori de e Nitrat-reductaza este enzima implicat n respiraia anaerob a nitratului, cupleaz fosforilarea respiratorie cu reducerea NO3 -, n absena O2. E. coli are 2 izoenzime nitrat-reductaze: NAR membranar i NAR periplasmic; Nitrit-reductaza (periplasmic), catalizeaz dou reacii de transfer al e -: reducerea NO2- --- NO (oxid nitric) + H2O reducerea O2 ---- H2O Reductaza oxidului nitric (NOR) convertete NO --- N2O, n reacia de denitrificare. Dimetil sulfoxid reductaza (DMS), ancorat de membran printr-un citocrom b. Reductazele compuilor cu sulf, implicate n reducerea respiratorie a compuilor cu S. Fumarat-reductaza reduce fumaratul ca acceptor final al unei catene transportoare de e-, rezultnd succinatul. accept e- de la un donor i i transfer unui acceptor conserv o parte din energie n procesele de fosforilare oxidativ.

Reaciile de oxido-reducere a componentelor catenei transportoare ndeplinesc dou funcii:

Reaciile de fosforilare:
reacii de fosforilare la nivelul substratului, catalizate de enzime citoplasmatice; reacii de fosforilare oxidativ, catalizate de enzimele localizate la nivelul membranei citoplasmatice i a intruziilor sale; reacii de fosforilare fotosintetic.

Mecanisme moleculare protectoare care permit respiraia aerob

Respiraia anaerob

Fermentaia
lat. Fervere- a fierbe - degajarea CO2 n timpul fermentaiei. Fermentaia este un proces catabolic productor de energie n absena O2, n care compuii organici au rolul de donori i de acceptori de electroni (metabolii derivai dintr-un substrat fermentabil (de exemplu, un glucid). Procesele redox se produc n absena oricrui acceptor terminal de electroni. L. Pasteur. In perioada l857-l875 ansamblu de reacii biochimice anaerobe de oxidare i de reducere care furnizeaz celulei energia necesar prin mecanismul fosforilrilor la nivelul substratului, care au loc n citoplasm. Funcia energetic major sau unic - producerea ATP. ATP Fermentaiile se desfoar n condiii anaerobe. Efectul inhibitor al O2 asupra fermentaiei- inactivarea uneia din enzimele cheie ale cii Embden-Meyerhof, fosfofructokinaza. La microorganismele aerobe-facultativ anaerobe, inhibiia fermentaiei n aerobioz - efect Pasteur* Substraturile fermentabile : glucide sau compui nrudii (acizi organici, alcooli), aminoacizi, amine, purine, pirimidine. In procesul fermentativ este meninut echilibrul redox. Degradarea substratului n fermentaie este incomplet i de aceea se elibereaz o cantitate mult mai mic de energie dect n procesul de respiraie, n cursul creia oxidarea substratului este complet. Procesele de fermentaie sunt iniiate de fosforilri la nivelul substratului. Rezultatul lor este sinteza ATP, dar i a altor compui cu o legtur bogat n energie, cel mai important fiind acetil-CoA Diferena esenial ntre metabolismul aerob i anaerob: in metabolismul aerob, NADH este oxidat n catena transportoare de e-, cu sinteza ATP prin fosforilare oxidativ, iar n anaerobioz NADH este folosit n reducerea anaerob a compuilor organici.

Fermentaia glucidelor
Glucidele - cele mai importante substraturi fermentabile.
polizaharide (amidonul, celuloza, pectina, chitina) dizaharide (lactoza, maltoza, zaharoza), hexoze (glucoza, fructoza, galactoza) pentoze (arabinoza, xiloza) acizi derivai din zaharuri (acidul gluconic i glucuronic) polialcooli (manitol, glicerol).

Fermentaia - etape specificice, urmate de o etap nespecific (enzime implicate n fermentaia glucozei). Fermentaia glucoazei
Etapa I reacie de fosforilare, n urma creia rezult glucozo-6 fosfatul. etapa a II-a - reacii de reducere a compuilor intermediari, prin care se formeaz mai multe produse finale.

Glucoza este oxidat pe una din urmtoarele 4 ci:

calea Embden-Meyerhoff-Parnas (EMP, denumit i calea hexozo-difosfatului sau a glicolizei); calea hexozo-monofosfatului (HMP, denumit i calea pentozo-fosfatului); calea fosfocetolazei; calea Entner-Doudoroff.

Calea EMP - calea major de degradare a glucozei, integral anaerob, secven de l0 reacii enzimatice, prin care o molecul de glucoz este degradat la dou molecule de piruvat, fr participarea O2 molecular. Glucoza este fosforilat la glucozo-6 fosfat, n cursul procesului de transport membranar, sau intracelular, sub aciunea unei kinaze citoplasmatice, cu consum de ATP. Glucozo-6 fosfatul este izomerizat la fructozo-6 fosfat, iar acesta, sub aciunea fosfofructokinazei este convertit la fructozo-1,6 difosfat. Reacia caracteristic a cii EMP este scindarea fructozo-1,6 difosfatului, ceea ce justific denumirea de calea hexozo-difosfatului. Piruvatul este intermediarul oxidat cel mai frecvent al diferitelor ci catabolice. Uneori se formeaz acetil-CoA. Reducerea piruvatului - formarea diferitelor produse finale, fie unice, fie n amestec, cu grade diferite de oxidare pe baza crora se difereniaz bacteriile fermentative. Produsele finale ale fermentaiei nu pot fi degradate n anaerobioz. Proporia lor n amestec influeneaz n mod direct valoarea pH a mediului la sfritul procesului.

Fermentaia lactic - procesul biologic prin care microorganismele catabolizeaz glucoza din mediu i o tranasform n acid lactic.
bacteriile homofermentative produc numai acid lactic ca produs final al procesului fermentativ: Lactobacillus delbrueckii, L. bulgaricus. L. acidophilus, L. casei, L. plantarum, Streptococcus lactis, S. cremoris, S. thermophilus (calea glicolizei); bacteriile heterofermentative produc, pe lang acid lactic, cantiti mari ale altor produse finale (CO2, etanol, acid acetic, glicerin, manit, in funcie de specie): L. brevis, L. lycopersici, Leuconostoc mesenteroides, L. dextranicum, L. Citrovorumf (calea hexozo-monofosfatului(HMP i continu pe calea fosfocetolazei) fungi filamentoi (Rhizopus).

Fermentaia lactic

Lactat-dehidrogenaza este stereospecific. Diferenele dintre bacteriile homofermentative i heterofermentative sunt determinate de prezena sau de absena aldolazei, enzima cu rol esenial n glicoliz. Bacteriile homofermentative au aldolaz i cliveaz hexozodifosfatul la triozofosfai Din punct de vedere biochimic, fermentaia lactic este cea mai simpl: piruvatul, furnizat pe calea EMP este redus direct, fr decarboxilare, sub aciunea NAD+ - lactat-dehidrogenazei, la lactat. b) Microorganisme heterofermentative (unele specii de Lactobacillus, Peptococcus) realizeaz o

Microorganisme aceto-lactice
Bacteriile din g.Bifidobacterium
fermentaie mixt aceto-lactic amestec de acizi lactic i acetic

Fermentaia alcoolic produs de levuri

Fermentaia alcoolic asemntoare celei lactice Diferena - transformrile acidului piruvic. Levurile catabolizeaz glucoza pe calea EMP.
Producia net de ATP n fermentaia alcoolic este de dou molecule, pentru fiecare molecul de glucoz, mult mai puin dect n catabolizarea aerob.

Prin transferul celulelor n condiii anaerobe, rata degradrii glucozei se intensific de 3-4 ori (efect Pasteur).

Fermentaia alcoolic bacterian

Bacteriile saprobionte anaerobe, aerotolerante, g. Zymomonas , Pseudomonas saccharophila, unii viermi parazii.

Fermentaiile acide
Catabolizarea glucozei la acid piruvic - calea EMP.
amestec de produse de fermentaie n care predomin acizii. dac pH-ul scade sub un anumit nivel, datorit producerii iniiale a acizilor tari (acetic, lactic), metabolismul bacterian este reglat spre producerea acizilor mai slabi (propionic, butiric) i n anumite cazuri, a corpilor cetonici (butanediol) sau a alcoolilor (etanol, butanol).

Cele mai multe fermentaii bacteriene sunt acide Fermentaia acid mixt (lactatul, acetatul, etanolul i formiatul).
Consecutiv clivrii formiatului,din fermentaia glucozei rezult gaze (CO2, H2). Dac din echipamentul enzimatic lipsete formiat-liaza, fermentaia se produce fr gaze. Unele enterobacterii, n special cele care au formiat-dehidrogenaz, produc o cantitate mic de acid succinic, n prezena ATP, prin reacia de condensare a unei molecule de CO2 cu o molecul de piruvat. Reacia este catalizat de piruvat-feredoxin-oxidoreductaz. Bacterii Voges Proskauer negative

Fermentatia butirica
g. Clostridium: alcooli (butanol, etanol, izopropanol) i aceton (2,3 butan-glicol) - unele enterobacterii (Vibrio, Aeromonas), unele specii de Bacillus i unele bacterii lactice (Streptococcus cremoris, Lactobacillus cremoris).
furnizeaz ca produs final, o molecul neutr de 2,3 -butanediol. Aceast cale metabolic intr n aciune dup ce pH-ul mediului de cretere scade sub 6. Reacia cheie - condensare a dou molecule de piruvat, prin decarboxilare i eliberare a acidului formic. Rezult diacetilul, care este redus la acetoin (acetil-metil-carbinol) (aroma caracteristic untului) redusa la butanediol. Bacterii VP pozitive

Fermentaia butanediolului

Fermentaia acidului propionic

bacterii nesporulate din g. Propionibacterium acidul lactic - acid propionic, acid acetic i CO2. generarea ATP prin metabolizarea acidului lactic sau a acidului piruvic, rezultat pe calea glicolizei

Catabolismul piruvatului

Piruvatul este catabolizat pe cale aerob sau anaerob. Microorganismele strict aerobe sau cele facultative, n prezena O2 realizeaz decarboxilarea oxidativ a piruvatului i formeaz acetil-coenzima A, care intr n ciclul Krebs, la nivelul oxalo-acetatului In anaerobioz, piruvatul este decarboxilat sub aciunea piruvat-decarboxilazei i se formeaz acetaldehid i CO2, redus ulterior la etanol

Catabolismul lipidelor Trigliceridele - hidrolizate la glicerol si acizi grai

exo- sau endolipazele. mucegaiuri (A. flavus, P. roqueforti, Rhizopus sp., Geotrichum) levuri (Candida lipolytica, Torulopsis, S. cerevisiae) bacterii (Serratia liquefaciens, Ps. aeruginosa, Alcaligenes sp., S. aureus).

Glicerolul - calea glicolizei, la nivelul dihidroxi-aceton-fosfatului, trecnd prin dihidroxi-acetona sau prin glicerol fosfat. Ulterior, aceste produse sunt degradate pe calea glicolizei. Procesul este anaerob.

Catabolizarea compuilor organici azotai g. Clostridium i Bacillus

exoproteaze care scindeaz lanurile polipeptidice n fragmente de civa aminoacizi. peptidazele hidrolizeaz polipeptidele i le transform n aminoacizi (endopeptidaze i exopeptidaze). exopeptidazele :
aminopeptidaze, cele care ncep aciunea lor la extremitatea NH2 liber a polipeptidului. Activitatea lor depinde de prezena ionilor metalici ; carboxipeptidaze, cele a cror aciune se initiaz la extremitatea COOH liber a polipeptidului.

Aciunea acestor enzime are ca efect formarea di- i tripeptidelor, ulterior hidrolizate n aminoacizi. Catabolizarea aminoacizilor :
prin dezaminare prin decarboxilare.

Catabolismul compuilor aromatici

bacteriile se mpart n trei categorii: cele care nu degradeaz astfel de compui; cele care realizeaz o degradare incomplet (de exemplu, enterobacteriile). E. coli scindeaz triptofanul la indol i piruvat, sub aciunea unei triptpofanaze, fr s deschid ciclul benzenic sau pirolic. bacteriile care metabolizeaz complet compuii aromatici, prin ruperea structurilor ciclice. Reacia de clivare a moleculelor ciclice este generatoare de energie.

Degradarea hidrocarburilor Nocardia, Pseudomonas, Mycobacterium metan-monooxigenaz Catabolismul compuilor cu un atom de carbon. Bacteriile metilotrofe i metanotrofe Catabolismul alcoolului etilic Unele levuri (Debaromyces, Hansenula, Pichia) i unele bacterii metabolizeaz complet alcoolul etilic, pn la CO2 i ap.