CURS 05 POPULATIILE LIMFOCITARE SI MARKERII LOR DE SUPRAFATA Introducere -din totalul celulelor seriei albe, limfocitele reprezinta cam

m 25 40%, ceea ce corespunde unor valori absolute cuprinse intre 1500 3500 limfocite/mm3 -la microscopul optic, limfocitele se pot imparti in limfocite mici (populatia ma oritara !0 !5% -", care cuprinde doua subvarietati# limfocitele $ si limfocitele % si limfocitele mari, care au un diametru intre 10 1&um, citoplasma este foarte bine reprezentata si abundenta si prezinta numeroase 'ranulatii azurofile( acestea se numesc )*) lar'e 'ranular l+mp,oc+tes si reprezinta 10 15% din totalul limfocitar( )*) cuprinde doua subtipuri de limfocite -. limfocite /0 si limfocitele 0, care sunt implicate in apararea naturala si in 123 Limfocitele mici -ddiferentierea pe baza microscopica a limfocitelor $ si % nu se poate realiza -. sunt necesare diferentieri dpdv functional -. cel mai important test de diferentiere este testul rozetarii -punand in contact limfocite cu ,ematii de oaie/berbec, sin'urele care se asociaza cu acestea sunt limfocitele $ -limfocitele $ sunt pozitive la testul rozetarii deoarece prezinta pe suprafata lor un receptor de adeziune intercelulara care permite an'a area de le'aturi cu ,ematiile( acest receptor este caracteristic limfocitelor $ (deci niciodata nu se va afla pe limfocitele %" Limfocitele T -se impart in diverse clase# $,, $c, $s, $cs (contrasupresoare", $r' (re'latorii" -aceste clase nu pot fi diferentiate nici prin criterii morfolo'ice si nici prin testul rozetarii, deoarece toate sunt pozitive -. se diferentiaza intre ele dupa fenotipul de suprafata (e4presia receptoriala" -toate limfocitele $ e4prima receptori de membrana comuni, dar si receptori definitorii pentru functia fiecarei clase de limfocite (denumiti mar5eri de suprafata" -. evidentierea acestor receptori specifici se realizeaza cu a utorul anticorpilor monoclonali (6c artificiali produsi prin te,nici de ,ibridizare, care au ca particularitate faptul ca recunosc cu specificitate absoluta receptorii specifici de la suprafata limfocitelor, sau de pe suprafata altor celule" Caracterele generale ale limfocitelor T -reprezinta &5% din totalul limfocitelor -sunt limfocite cu durata de viata lun'a, sau foarte lun'a -. un limfocit are o durata de viata de ordinul anilor, zecilor de ani sau c,iar toata toata viata -sunt celule intens recirculante, in vederea cautarii anti'enului pentru care sunt specifice -pot fi identificate cu a utorul testului rozetarii, test care permite identificarea si separarea limfocitelor $ -prezinta receptori de suprafata (373, 374, 37!", cu rol accesor in activarea )$ (372!, 3745" si de adeziune celulara (371, )861 3711a/371!-" -)86 - anti'enul asociat functiei leucocitare Receptorii de suprafata ai limfocitelor T -se impart in 3 cate'orii, la recunoasterea anti'enica participand $31 373 (recunoaste epitopii prezentati" si doi coreceptori, reprezentati de 374 96: 37! (coreceptori de recunoastere a moleculelor prezentatoare de anti'en ;<3 22 374 / ;<3 2 37!" -recunoasterea anti'enica realizata de limfocitele $ este asociativa (recunoaste concomitent 6' si molecula ;<3" -receptorii au rol in activarea metabolica a limfocitelor $

C r cteri!ticile recuno !terii nti"enice le limfocitelor T -limfocitele $ recunosc doar anti'enele prezente pe membranele 6=3 in comple4 cu moleculele ;<3 -. spre deosebire de limfocitele %, )$ nu recunosc niciodata anti'enele solubile -limfocitele $ recunosc anti'enele dupa structura primara -recunoasterea realizata de limfocitele $ este dublu asociativa Complexul TCR-CD3 -pe suprafata )$ in stare de repaus e4ista un numar foarte mare de asemenea comple4e (40 45 de mii " -este un receptor ,eterodimeric -. format din doua lanturi diferite si asociate intre ele -ambele lanturi sunt transmembranare, capetele /-terminale fiind la e4terior, iar cele carbo4iterminale sunt intramembranare -cele doua lanturi sunt alfa (4557a( elaborat dupa codul unor 'ene prezente pe cromozomul 14" si beta (4057a( elaborat dupa 'ene de pe cromozomul >" -lanturile sunt unite prin punti disulfurice situate in apropierea membranei -membrana separa 3 se'mente diferite ca structura si ca functie -. se'ment e4tracelular (lun'", se'ment transmembranar si se'ment intracitoplasmatic 9e'mentul e4tracelular -$31, in se'metul e4tracelular, adopta o conformatie 2'-li5e -prezinta 4 domenii (2 ale alfa, 2 ale beta", situate simetric unul fata de celalalt -domeniile din apropierea zonei /-terminale sunt ,ipervariabile, avand secvente variabile de la clona la clona -. domenii variabile (?alfa respectiv ?beta - variabil alfa/variabil beta" -domeniile ?alfa si ?beta fiind pozitionate simetric, se asociaza intre ele, constituind situsul combinativ pentru anti'ene -domeniile variabile ale alfa si beta sunt variabile si intre ele -domeniile din apropierea membranei sunt de asemenea diferite intre ele, dar sunt identice pentru toate clonele )$ din or'anism -. domenii constante (3alfa si 3beta" 7omeniile variabile -responsabile pentru recunoasterea anti'enica -desi ambele domenii (?alfa / ?beta" sunt responsabile de recunoasterea anti'enica, ele nu an'a eaza le'aturi cu anti'enul prin intrea'a lor secventa de aminoacizi, contactele cu anti'enul sunt punctiforme si se realizeaza de catre secvente mici, scurte de aminoacizi (!-13 66", ce provin din plicaturarea ?alfa si ?beta, care aduc aceste secvente in interiorul cavitatii si ele an'a eaza le'aturi cu comple4ul ;<3-epitop prin complementaritate( aceste secvente de !1266 se numesc 371 (complementar+ determinin' re'ions" -lanturile alfa si beta se plicatureaza intens, baza @vilozitatilorA fiind unite prin punti disulfurice, iar varful @vilozitatilorA prezentand aminoacizii cu rol de 371 (prima vilozitate prezinta 3711, a doua 3712 etcB aceasta numerotare este valabila si pe alfa si pe beta" -3711 si 3712 an'a eaza le'aturi cu ;<3, iar 3713 este sin'urul care realizeaza le'aturi cu epitopul -. are loc o recunoastere anti'enica asociativa monoreceptoriala -cele & 371-uri realizeaza un paratop -. substructura situsului combinativ pentru anti'en, ce este direct responsabila de recunoasterea anti'enica -secventele care nu sunt implicate in recunoasterea anti'enica se numesc 81 (frameCor5 re'ions"

Dona balama -aflata intre domeniile constante si membrana -reprezinta zona din $31 dotata cu ma4imum de fle4ibilitate, e4ecutand miscari de baleia in toate planurile, miscari care sunt importante in recunoasterea 6' -la acest nivel e4ista punti disulfurice care solidarizeaza cele doua lanturi 9e'mentul transmembranar -format doar din 20 2566 9e'mentul intracitoplasmatic -are ca particularitate ca este scurt sau foarte scurt (! 12 66" -. se'mentul intracitoplasmatic iese foarte putin din planul membranei 1olurile $31 -rol esential in recunoasterea anti'enica asociatia -rol important in 'enerarea unor semnale activatoare care iau nastere in urma adaptarii conformationale a situsului combinativ pentru anti'en, la formarea comple4ului ;<3-epitop -nu poate realiza transmiterea (transductia" semnalelor catre sistemele enzimatice de profunzimea citoplasmei -. transductia semnalelor este realizata de 373, care se asociaza intotdeauna la 373 3omple4ul 373 -comple4 pentameric, cu primele trei lanturi (alfa, beta, delta" scurte si doua (zeta" lun'i -lanturile scurte sunt transmembranare, de 2157a, elaborate dupa 'ene prezente pe cromozomul 11( la aceste lanturi se asociaza doua lanturi frecvent identice intre ele care sunt lun'i, efilate, care patrund adanc in citoplasma limfocitului -lanturile lun'i au 1&57a si sunt elaborate dupa 'ene prezente pe cromozomul 1 -lanturile se asociaza intre ele prin punti disulfurice, formand pentamerul si in plus toate se asociaza lui $31 -. formeaza un comple4 ,eptameric -373 realizeaza transductia semnalului CD4 -este un coreceptor de recunoastere anti'enica -ca distributie, 374 este absolut caracteristic pe suprafata limfocitelor $, -. limfocitele $, sunt )$ 374E 9tructura -'licoproteina transmembranara, care in se'mentul e4tramembranar prezinta 4 domenii diferite ca lun'ime -prezinta si un se'ment intracitoplasmatic foarte lun' 8unctiile se'mentului e4tracelular -rol foarte important in cooperarea dintre limfocitele $, si 6=3 -cooperarea este conditionata de procesul de prezentare anti'enica -. 374 recunoaste molecula ;<3 22 din comple4ul ;<3-epitop, an'a and le'aturi cu domeniul monomorf al ;<3 22 (domeniul alfa2"

8unctiile se'mentului intracelular -rol important in activarea limfocitelor $,, fiind in contact direct cu o enzima din clasa proteintirozin-5inazelor (codificata de )30 =5&"( )30 - leucoc+te c,aracteriscit 5inase / =5& protoonco'ena de 5&57a CD8 -coreceptor de recunoastere anti'enica -este prezent pe $c si $s -. $c si $s se numesc limfocite 37!E 9tructura -prezinta doua domenii situate pe se'mentul e4tracelular (unul al lantului alfa, celalalt al lantului beta" si un domeniu intramembranar foarte lun' 8unctii -37! an'a eaza le'aturi cu moleculele ;<3 2 la nivelul domeniului monomorf al ;<3 2 (domeniul alfa3" -rol important in activarea )$c prin interactiunea cu =5& )30 Freceptorii 374, 37!, $31-373 realizeaza recunoasterea anti'enica dublu asociativa -recunoasterea dublu asociativa reprezinta situatia cand 6=3 prezinta un epitop prin intermediul ;<3, epitop care este recunoscut prin participarea $31 si 37!/374 -. recunoasterea anti'enica este bireceptoriala -. se stabilesc le'aturi si cu ;<3 si cu epitopul -contactele stabilite cu ;<3# prin 3711, 3712 (si ale alfa si ale beta" E 374/37! - 5 contacte -contacte stabilite cu epitopul# prin 3713 (si ale alfa si ale beta" -. 2 contacte -semnificatia 1679 este ca limfocitele $ recunosc doar anti'enele membranare, pentru ca moleculele ;<3 sunt prezente doar pe membranele 6=3