Boli genetice si de dezvoltare

Motto: Nu este nimic ascuns care nu va fi descoperit, nimic tinuit care nu va fi cunoscut i nu va veni la lumin (Luca, 8:17)

I) Introducere : Majoritatea oamenilor de tiin ai sec.XVII i XVIII credeau ntr-o doctrin numit preformare, ce susinea c individul se afl ata format ntr-una din celulele erminale, av!nd dimensiuni foarte mici. "ceast teorie avea # versiuni : versiunea ovist $ care susinea c omul este %reformat n ovul i c s%ermato&oidul d im%ulsul necesar de&voltrii lui i versiunea animalculist $ care susinea c omul este %reformat n s%ermato&oid i c ovulul i ofer acestui doar su'stanele nutritive necesare de&voltrii. "cestei teorii i se o%unea alta $ doctrina epigenetic $ ce susinea c de&voltarea em'rionului se face din celule nedifereniate formate du% se mentarea oului, du% unirea s%ermato&oidului cu ovulul. "ristotel n sec. IV .(r. descrie onto ene&a la %uiul de in, studiind oule em'rionate n diferite stadii de de&voltare i %une %entru %rima data 'a&ele em'riolo iei com%arate) de asemenea, arat c n %rocesul %rocreaiei contri'uia femeii este la fel de im%ortant ca i a 'r'atului, %resu%un!nd corect, %rin analo ie, c em'rionul uman se %oate de&volta ca la %uiul de in, dar sur%rin&tor rm!ne un %reformist convins. (ele # teorii %reformist i e%i enetic au %ersistat %!n n sec.XIX, c!nd au fost desco%erii aci&ii nucleici i s-a artat c orice celul are %rini, a%r!nd %rin divi&iune *+udol%, Virc,o- : omnis cellula e cellula. $ /012). 3n /042, 5riedric, Miesc,er desco%er aci&ii nucleici din nucleu, studiind su'stana seminal a somonului, dar nu sete relaia dintre ei i cromo&omi. 3n /006, 7alt,er 5lemmin desco%er cromo&omii su' forma unor structuri lun i i su'iri n nucleul metafa&ic al unei celule ve etale, dar nu face le tura ntre ei i ereditate. 3n /266, %reotul i naturalistul ce,, 8re or Mendel, desco%er le ile ereditii studiind ncruciarea ntre diferite soiuri de ma&re *9isum :ativum). 3n /26;, <,omas Mor an, studiind =roso%,ila Melano aster *musculia de oet) in sco%uri e>%erimentale, confirm le ile lui Mendel i arat n /2// c enele niruite de-a lun ul cromo&omilor sunt a enii %urttori ai ereditii. 3n /262, 9,oe'us ?evene arat c aci&ii nucleici conin o su'stan &a,aroas : ri'o&a, iar #6 ani mai t!r&iu desco%er i e>istena de&o>iri'o&ei, m%rind aci&ii nucleici n # clase : acid ri'onucleic *+@") i acid de&o>iri'onucleic *=@"). ?a nce%utul anilor /216, c,imistul ?inus 9aulin ajun e la conclu&ia c structura unei clase de %roteine este elicoidal, av!nd forma unei s%irale tridimensionale. Aa&!ndu-se %e aceast idee, 5rancis (ricB i Cames 7atson, utili&!nd reelele de difracie cu ra&e X, sta'ilesc structura elicoidal a =@"ului, %ro%un!nd n /21D un model n du'lu ,eli>, cu 'a&ele a&otate ae&ate fa n fa, du% %rinci%iul com%lementaritii. 3n /24#, 7atson i (ricB %rimesc

%remiul @o'el %entru medicin, iar 9aulin %rimete %remiul @o'el %entru c,imie i %entru %ace, %entru c s-a o%us testrii armelor nucleare n atmosfer. Aa&!ndu-se %e desco%eririle 'iolo iei moleculare din a doua jumtate a sec.XX, oamenii de tiin au emis o serie de i%ote&e cu %rivire la ori inea omului. =atele de %aleontolo ie o'inute %rin anali&a fosilelor, au artat c %roto-omul a a%rut n "frica *acum 1-; milioane ani) ca s%ecie numit Eomo Frectus, care a emi rat a%oi n Furo%a i "sia acum / milion de ani. =u% aceea, a%are Marea =ivi&iune., c!nd din Eomo Frectus a%are Eomo :a%iens *omul modern). "nali&a =@" mitocondrial *care se transmite la descendeni numai de la mam), %reluat de la ru%uri etnice diverse i cercetrile de secveniere ale cromo&omului G *transmis numai de la tat) arat c strmoul omului modern a a%rut ntr-un sin ur loc, n "frica, de unde s-a rs%!ndit %e tot lo'ul, strmoul comun fiind o femeie ce a locuit %e acest continent acum a%ro>imativ #66.666 ani *teoria Eva), fiind astfel n s%iritul crii 8ene&ei din Ai'lie. :-a folosit s%re anali& =@"mt *mitocondrial), deoarece are o rat a mutaiilor foarte ridicat i nu sufer modificri %rin crossin -over *re%licare ncruciat). 3n %re&ent, se consider c strmoul comun al omului i maimuelor antro%oide *cim%an&eu, ura utan, orila) ar fi fost =rGo%it,ecus, un en de %rimate care a trit n India acum D6-H6 milioane de ani n Miocen *<eriar). =in el s-a des%rins +ama%it,ecus, n urm cu /D-; milioane de ani, acesta fiind %ro'a'il strmoul "ustralo%it,ecului i al omului %rin intermediul altor fosile ,ominide. "ceast %erioad de trecere la %o&iia vertical a fost denumit e%oca co'or!rii din co%aci.. Eomo este un en de %rimate ce include i omul actual) cele mai vec,i fosile sunt ale lui Eomo Ea'ilis, a%rut n urm cu /,;1 milioane de ani n <an&ania. =in el s-a des%rins acum /,1 milioane de ani Eomo Frectus, din a crui s%ecie fac %arte omul de Cava *9it,ecantro%us) i omul de Aeijin *:inantro%us). Eomo :a%iens este ultima veri a acestui lan, fiind mai cur!nd omul care tie dec!t omul nele%t, fiind s%ecia creia i a%arinem. =in aceast s%ecie fac %arte Imul de @eandert,al *a%rut acum /66.666 ani) i omul de (roma non *a%rut acum D6.666 ani). ?a ora actual, cele mai im%ortante teorii n domeniul 'io-medical sunt : /) <eoria evoluiei %rin selecie natural *(,. =ar-in Iri inea s%eciilor.) $ %ostulea& c %lantele i animalele s-au de&voltat n urma evoluiei din or anisme %rimitive su' %resiunea mediului am'iental #) <eoria celular *<. :c,-ann) $ %ostulea& c la 'a&a structurii tuturor esuturilor i or anelor din lumea animal i ve etal a <errei st celula D) <eoria ereditii *8r.Mendel) $ %ostulea& c la 'a&a controlului i transmiterii caracterelor ereditare stau cromo&omii) teoria se 'a&ea& %e # le i *mendeliene) : le ea se re rii factorilor ereditari i le ea com'inrii li'ere a caracterelor.

II) (ito enetic eneral *carioti%ul uman normal) structura cromo&omilor) noiunea de satelito&) anali&a cito enetic) "ranjamentul sistemati&at al cromo&omilor umani foto rafiai se numete cariotip. +e%re&entarea su' form de dia rama a carioti%ului se numete ideogram. ?a s%ecia uman, numrul cromo&omilor din carioti% este de H4 : HH somatici *autosomi) i # se>uali * ono&omi), i re%re&int numrul di%loid, fiind dis%ui in #D de %erec,i: ## alctuind autosomii i o %erec,e ono&omii *>> sau >G). (romo&omii sunt alctuii din # cromatide identice, unite ntre ele la nivelul centromerului *constricie %rimar). ?a acest nivel, e>ist o structur %roteic com%le> numit Binetocor, care are rol de a fi>a cromo&omii %e fi'rele fusului de divi&iune. F>tremitile cromo&omilor se numesc telomere i m%iedic ali%irea lor n tim%ul divi&iunii. ?ocali&area centromerului este folosit %entru clasificarea cromo&omilor n : cromo&omi metacentrici, su'metacentrici, acrocentrici i telocentrici. (romo&omii metacentrici au centromerul n mijloc, la cei su metacentrici centromerul i m%arte ntr-un 'ra scurt % i unul lun J, cromo&omii acrocentrici au centromerul e>centric, iar cei telocentrici au centromerul locali&at terminal. (romo&omii telocentrici nu se sesc la s%ecia uman. (romo&omii acrocentrici %re&int constricii secundare la nivelul e>tremitilor terminale ale 'raelor scurte, care detremin a%ariia sateliilor. @umrul cromo&omilor satelitai ntr-o celul este ma>im 2. F>tremitile satelitate ale cromo&omilor acrocentrici se %ot asocia n tim%ul mito&ei, fenomen numit asociaie satelitar. !ateli"ii sunt uniti re%etitive *a%ro>. /66 %') dis%use n serii, fiind locali&ai n ,eterocromatina re iunilor %ericentromerice i telomerice, %recum i n cromo&omul G. Varia'ilitatea lor este mai mic dec!t cea a mini- i microsateliilor. #inisateli"ii sunt uniti *a%ro>. /1 %') re%etate de sute sau mii de ori locali&ate n eucromatin, varia'iliatea lor fiind e>trem. #icrosateli"ii sunt uniti scurte *#-1 %') re%etitive dis%use n tandem i form!nd 'locuri dis%ersate uniform n ntre ul enom *%este /66.666). <rstura caracteristic o constituie marea varia'ilitate a numrului de co%ii %re&ente la un locus. (aracterul ,i%ervaria'il comun a determinat reunirea mini i microsateliilor su' numele de uniti cu numere varia'ile de re%etri n tandem *VNTR $ varia'le num'er of tandem re%eats). 9e 'a&a unor trsturi morfolo ice comune, %erec,ile de autosomi sunt dis%use n ; ru%e *cu%rin&!nd %erec,ile /-D, H-1, 4-/#, /D-/1, /4-/0, /2-#6, #/##) notate cu litere de la " la 8, cromo&omii se>uali not!ndu-se n continuare cu > i G. (el mai mare cromo&om uman este (&/ *metacentric), iar cel mai mic este (& ## *acrocentric). ?a femeie, unul din (&X este condensat n interfa&, form!nd corpusculul $arr, vi&i'il su' forma unui a%endice %erinuclear n '

de to'oar. *drum-sticB), la nivelul 9M@. "cesta se re%lic la sf!ritul %erioadei : a ciclului celular, n tim% ce cellalt se re%lic concomitent cu autosomii. "nali&a cito enetic se face mai frecvent %e culturi de limfocite circulante, care sunt stimulate s intre n divi&iune su' aciunea unor factori mito eni, cum ar fi fito,ema lutinina sau concanavalina ". ?imfocitele sunt a%oi 'locate n metafa&, %rin utili&area unor a eni statmoBinetici, cum ar fi colc,icina sau derivai alacaloi&i de Vinca Major *Vin'lastina), du% care sunt strivite ntre # lame de sticl %entru dis%ersarea cromo&omilor. "cetia sunt colorai cu te,nici standard %entru identificare i 'andare. Aandarea cromo&omial se face %entru recunoaterea fiecrui cromo&om i identificarea defectelor de %e fiecare se ment cromo&omial. Aen&ile cromo&omiale sunt urmtoarele : /) $en%ile & $ identificate n /2DD de Eeit& $ colorea& selectiv ,eterocromatina constitutiv fiind locali&ate la oameni la centromerele tuturor cromo&omilor i %e 'raul lun al (& G. #) $en%ile ' $ identificate de (as%ersson $ se colorea& cu Juinacrin mutar i e>aminate n lumin ultraviolet se %re&int ca 'en&i transversale fluorescente i ntunecate alternativ, interes!nd am'ele cromatide i av!nd dis%o&iie identic n cromo&omii omolo i. D) $en%ile ( $ se colorea& cu 8iemsa i sunt dis%use transversal %e 'raele cromo&omilor) se mentele de =@" 'o ate n adenin i timin *"K<) conin %uine ene transcrise i se re%lic tardiv n fa&a :, cores%un&!nd 'en&ilor ntunecate. H) $en%ile ) $ au dis%o&iie invers fa de 'en&ile 8 *revers 'ands.)) ele sunt 'o ate n uanin i cito&in *8K() i se re%lic %recoce n fa&a :. 1) $en%ile N*) $ re iunile cromo&omiale ce forme& i menin nucleolii n interfa& se numesc re iuni or ani&atoare nucleolare *@I+). Fle sunt locali&ate la nivelul constriciilor secundare ale 'raelor scurte ale cromo&omilor acrocentrici i conin ene de =@" ri'o&omal nsoit de %roteine acide ce devin vi&i'ile %rin im%re nare ar entic *'andare " @I+). Aolile enetice i de de&voltare sunt clasificate astfel: - anomalii de morfo ene& *de&voltare) - anomalii cromo&omiale *de structur i de numr) - defecte enice sin ulare *'oli mendeliene) - 'oli c!ti ate %oli enice In lume, a%ro>imativ /: //; de nou nscui au defecte de de&voltare. (au&ele acestor 'oli sunt n ;6L din ca&uri necunoscute, n #6L fiind 'oli ereditare, iar restul fiind %roduse de factori traumatici n cursul sarcinii, iradiere, dro uri, infecii etc.

III) "nomalii de de&voltare *morfo ene&) ") =efiniie : <eratolo ia este disci%lina care se ocu% cu studiul anomaliilor de de&voltare * r. +eraton M monstru). " enii terato eni %ot fi c,imici *medicamente : talidomida, fenitoina) dro uri: ?:=), fi&ici *iradierea, traumatisme), 'iolo ici *virusuri: v. +u'eolic, 'acterii: tre%onema, %ara&ii: to>o%lasma). A) 9rinci%iile teratolo iei : /) !uscepti ilitatea la teratogeni este varia il $ unii co%ii %ot fi afectai, alii nu. Nn e>em%lu l constituie sindromul alcoolic fetal care afectea& o %arte din co%iii cu mame alcoolice, n tim% ce alii sunt re&isteni. #) !uscepti ilitatea la teratogeni este specific fiecrui stadiu de de%voltare $ %erioada ma>im de sensi'ilitate la terato eni este n %rimele 0 s%tm!ni de sarcin, c!nd are loc or ano ene&a, fiecare or an fiind afectat n mod s%ecific. D) #ecanismul teratogene%ei este specific fiecrui teratogen $ astfel virusurile afectea& anumite esuturi cum ar fi creierul, inima, iar medicamentele in,i' activitatea unor en&ime i rece%tori sau interfer cu formarea fusului de divi&iune. H) +eratogene%a este dependent de do% $ teoretic orice terato en are o do& %ra , %!n la care nu se de&volt nici o anomalie, dar aceast do& limit nu %oate fi %rev&ut %entru fiecare femeie. 1) +eratogenii produc malforma"ii, retardare de cretere, func"ionarea deficint a organelor sau moartea fetal () @omenclatura anomaliilor de de&voltare : /) ,gene%ia re%re&int a'sena com%let a %rimordiului unui or an i se %oate %re&enta ca : - a'sena com%let a unui or an *e>. a ene&ia renal) - a'sena unei %ri dintr-un or an *e>. a ene&ia cor%ului calos din creier) - a'sena unor esuturi sau celule dintr-un or an *e>. a'sena celulelor erminale %rimordiale din infertilitatea con enital) #) ,pla%ia re%re&int a'sena unui or an, cu%lat cu %ersistena unor resturi rudimentare care nu se de&volt niciodat. =e e>em%lu, a%la&ia %ulmonar se refer la o condiie n care 'ron,ia %rinci%al se termin n fund de sac. *are un ca%t or') ntr-o mas or anic com%us din ducte rudimentare i esut conjunctiv. D) -ipopla%ia re%re&int reducerea dimensiunilor unui or an datorat unei de&voltri incom%lete) de e>em%lu, microcefalia este caracteri&at %rin e>istena uni ca% i creier mic. H) .ispla%ia re%re&int or ani&area anormal a celulelor n esuturi, duc!nd la o ,isto ene& anormal *a nu se confunda cu termenul folosit %entru le&iunile e%iteliale %reneo%la&ice)) e>em%lu: sclero&a tu'eroas n care se

o'serv %re&ena unor a re ate celulare n creier su' form de tu'erculi.. 1) ,tre%ia re%re&int un defect cau&at de incom%leta formare a unui lumen. 3n decursul em'rio ene&ei, o serie de or ane cavitare sunt re%re&entate de %rimordii formate din cordoane celulare, care vor de&volta n interior un lumen, celulele din aceast %oriune central intr!nd n a%o%to&. =e e>em%lu, atre&ia esofa ian se refer la oclu&ia %arial a lumenului, care nu s-a de&voltat com%let n evoluie. 4) Ectopia *,eteroto%ia) re%re&int o anomalie n care un or an nu se sete n re iunea anatomic normal *nu e la locul lui)) de e>em%lu: inima ecto%ic locali&at e>tratoracic sau insule de %ancreas ,eteroto%ic n %eretele astric %e care se %ot de&volta adenocarcinoame. ;) .istopia re%re&int retenia unui or an la locul unde era locali&at %e %arcursul de&voltarii em'riolo ice) de e>em%lu: rinic,ii disto%ici rmi in %elvis, testiculul disto%ic reinut n canalul in ,inal. 0) ,nomaliile disrafice sunt defecte cau&ate de nefu&ionarea unor structuri a%o&iionale) e>em%lu: s%ina 'ifida. 2) /nvolu"ia insuficient se refer la %ersistena unei structuri em'rionare care tre'uia s involue&e de-a lun ul de&voltrii intrauterine) e>em%lu: %ersistena canalului tireo los. /6) .ivi%iunea insuficient este cau&at de incom%leta clivare a esuturilor em'rionare, %roces care de%inde de moartea celular %ro ramat. Nn e>em%lu, l constituie %ersistena celulelor ce unesc de etele de la nivelul mu urilor mem'relor, care a%ar ali%ite *sindactilie). =) Malformaiile : /) =efiniie : +e%re&int defecte sau anomalii morfolo ice a unui or an, %ri de or an sau re iune anatomic, care re&ult %rin %ertur'area morfo ene&ei #) 8eneraliti : =ivi&iunea &i otului duce la a%ariia a # celule i a%oi a H celule em'rionare numite lastomere care sunt ec,i%otente, fiecare se%arat %ut!nd da natere unui or anism adult. :e%ararea lor com%let n acest stadiu duce la a%ariia emenilor sau a cvadru%leilor. =eoarece 'lastomerele sunt ec,i%otente, %ierederea unuia dintre ele nu este semnificativ, celelalte %ut!nd com%ensa aceast %ierdere. 9e de alt %arte, %entru c sunt identice, %re&ena unui set de ene letale la un 'lastomer %resu%une i e>istena lui la celelalte astfel nc!t vor duce la moartea invaria'il a %rodusului de conce%ie. =eoarece n aceast %erioad &i otul nu este im%lantat, %ierderea lui va trece neo'servat sau se va manifesta %rintr-o menstruaie nt!r&iat, a'undent. 9erioadele de&voltrii intrauterine se m%art n: - stadiul de 'lasto ene& *ntre &iua / i &iua /1) - stadiul em'rionar *&iua /1 $ luna III) - stadiul fetal *luna IV %!n la natere)

?e&iunile din aceast %erioad duc la a%ariia 'lasto%atiilor, em'rio%atiilor sau feto%atiilor. Injuriile %roduse ntre a 0-a i a /6-a &i du% fertil&are, duc la incom%leta se%arare a 'lastomerelor, cu a%ariia unor montri du li. Montrii du'li asimetrici sunt re%re&entai de emeni se%arai incom%let * emeni siame&i.), unii la nivelul diferitelor re iuni anatomice: ca%ul $ craniopagi, torace $ toracopagi, re iune lom'ar $ isc0iopagi. Montrii du'li asimetrici au o %arte 'ine de&voltat numit auto%it i o %arte rudimentar $ para%it. 8eamnul rudimentar este anormal i %oate fi ataat la e>terior *ecto%it) sau n interiorul cor%ului *endo%it sau fetus in fetu). <eratoamele con enitale, mai ales cele din re iunea sacrococci ian sunt n esen montri du'li asimetrici. D) (lasificarea malformaiilor: a) Montri du'li : - montri du'li li'eri $ dedu'lare cu # indivi&i normali : emeni monovitelini - dedu'lare cu malformaie : co%il normal K ,oloacardian acefal *avorton fr ca% i fr inim) - montri du'li unii $ simetrici $ incom%let *dicefal) - com%let *%a us) $ cranio%a us, toraco%a us - asimetrici $ auto&it i %ara&it *ecto&it sau endo&it) ') Malformaii sim%le : - %rin in,i'iia creterii : a%la&ia, atre&ia, rinic,iul %olic,istic *fi ./) etc. - %rin e>ces de cretere : ,i%er%la&ia, or ane su%ranumerare, du%licia *uter 'icorn, lande mamare su%ranumerare) - %rin a'eraii de locali&are $ aderene, fu&iuni *rinic,i n %otcoav, ciclo%ie) - anomalii de rotaie i form *situs inversus, trans%o&iie de mari vase) - ,eteroto%ie *,amartoame) - %rin %ersistena unor structuri fetale $ %ersistena canalului arterial - diverticulul MecBel H) Malformaii induse de a eni c,imici : a) +alidomida : Fste un derivat de acid lutamic utili&at ca sedativ i care n administrarea la femeile nsrcinate determin a%ariia unor fei malformai care %re&int : focomelie *mem're scurte asemntoare cu nottoarele de la foc), microtie *urec,i mici) sau anotia *li%sa urec,ilor) i malformaii cardiace. (o%iii au inteli en normal, :@( nefiind afectat. ') 1enitoina : Fste o ,idantoin antie%ile%tic ce %roduce sindromul fetal ,idantoinic, %rin administrarea la mamele e%ile%tice cu a%ariia la co%il a unor malformaii faciale, defecte cardiace con enitale i ,i%o%la&ia de etelor i un ,iilor. Mecanisnul terato enic %are a fi su erat de %re&ena unor nivele sc&ute de en&ime micro&omale fetale, ce joac rol n deto>ifierea medicamentului, cu acumularea unor meta'olii ,idantoinici.

c) ,lcoolul : 9roduce sindromul alcoolic fetal la mame etilice cronice, care consum cantiti mari de 'uturi tari n %rimul trimestru de sarcin, mecanismul de a%ariie fiind necunoscut. (o%iii nscui %re&int retardare mintal i la'ilitate emoional, retardare de cretere i dismorfism facial *microcefalie, micro na&ie, fisuri %al%e'rale scurte, filtru sla' de&voltat, %liuri e%icantice). 1) Malformaii induse de a eni 'iolo ici : Complexul TORCH : "cronimul se refer la un com%le> de semne i sim%tome, %roduse %rin infecia n tim%ul sarcinii cu o serie de microor anisme : to>o%lasma, v.ru'eolei, citome alovirus, ,er%esvirus, I M ot,ers *altele) i cu%rinde infecii sifilitice, cu 'acil Ooc,, le%tos%ira, varicela, virus F'stein-Aarr, EIV. 9atolo ic i clinic, co%iii %re&int : a) Le%iuni cere rale $ sunt cele mai im%ortante i im%lic encefalita cu focare de necro&, urmat de calcificri cere'rale focale *<o>o%lasma). =e asemenea se %ot si microcefalie cu micro irie, %orencefalie, li%sa 'ul'ului olfactiv, traduse clinic %rin cri&e e%ile%tice, retardare mintal, deficite neurolo ice motorii. ') .efecte oculare $ sunt re%re&entate de laucom, cataract, microoftalmie, colo'om *malformaii retiniene) $ n infecia cu v. ru'eolei) de asemenea, corioretinita n infecia cu <o>o%lasma, Beratoconjunctivita n infecia cu virusul Eer%es :im%le>. c) ,nomalii cardiace $ %ersistena canalului arterial, defecte se%tale, steno&a arterei %ulmonare. d) ,lte manifestri : %neumonie, ,e%atos%lenome alie, icter, %eteii, %ur%ur. IV) "nomalii *a'eraii cromo&omiale) : ") "nomalii de structur : "%ar n tim%ul ameto ene&ei i se transmit la toate celulele somatice al %rodusului de conce%ie, duc!nd la 'oli ereditare. "cestea sunt : /) .ele"ia $ re%re&int %ierderea unei %oriuni dintr-un cromo&om. (el mai cunoscut este sindromul (ri du c,at. *del 1%). (o%iii %re&int microcefalie, retardare mintal, ,i%ertelorism, urec,i jos inserate, %liuri e%icantice %roeminente. (aracteristic este i%tul co%ilului la natere asemntor cu mieunatul unei %isici, de unde i numele sindromului. #) .uplica"ia $ re%re&int %re&ena unui se ment cromo&omial su%limentar. D) &romo%omii inelari $ re%re&int %ierderea am'elor ca%ete cromo&omiale, cu reunirea e>tremitilor ru%te. "u consecine minore asu%ra ftului. H) +ranslocarea $ re%re&int sc,im'ul de material cromo&omial ntre # cromo&omi neomol i. 9oate fi reci%roc, nereci%roc sau de ti% ro'ertsonian *fu&iunea centric). :e s%une des%re o translocaie reci%roc c este 'alansat *ec,ili'rat), c!nd nu se %ierde material enetic i se mentul cromo&omial este translocat n totalitate. (!nd o astfel de translocaie este %re&ent n amei, %rodusul de conce%ie %re&int anomalia structural n toate celulele somatice. =eoarece translocaia

'alansat nu se nsoete de %ierdere de ene, %urttorii unor astfel de anomalii sunt fenoti%ic normali. "ceti %urttori au totui risc de a %roduce descendeni cu cariot% neec,ili'rat i anomalii fenoti%ice severe, duc!nd la a%ariia unor malformaii. 1) /nversia $ re%re&int fra mentarea unui cromo&om, urmat de reunirea fra mentelor du% ce au suferit o rotaie de /066 fa de restul cromo&omului. 9oate fi %aracentric $ c!nd im%lic doar un fra ment de %e un 'ra sau %ericentric $ c!nd im%lic i centromerul. 4) /%ocromo%omii $ sunt cromo&omi anormali re&ultai %rin divi&iunea centromeric %er%endicular %e a>ul lun al cromo&omului. (ea mai im%ortant condiie clinic n care sunt im%licai i&ocromo&omii este sindromul <urner *H1, X6) "nomaliile cromo&omiale de structur %ot fi nsoite de malformaii diverse sau de transformarea fenoti%ic a celulei normale ntr-una tumoral *ve&i neo%la&ia). A) "nomalii cromo&omiale de numr : "'eraiile numerice a%ar %rin non2dis3unc"ie *nese%ararea celor # cromatide n tim%ul meio&ei, astfel nc!t una din celulele erminale va avea am'ele cromatide, iar cealalt nici una). Nn amet cu #H de cromo&omi care fertili&ea& unul normal cu #D de cromo&omi, duce la un &i ot trisomic. @ondisjuncia duce la aneu%loidie c!nd numai o %erec,e de cromo&omi nu se se%ar i la %oli%loidie c!nd ntre setul de cromo&omi nu se se%ar. I form s%ecial de non-disjuncie este anafa%a 4nt5r%iat *anafa&a la ), n care un sin ur cromo&om nu se m%erec,ea& cu omolo ul su n tim%ul anafa&ei. "cesta se %ierde i nu este ncor%orat n celula fiic, astfel nc!t re&ult o celul monosomic i una eu%loid *normal). @on-disjuncia n tim%ul meio&ei a%are mai frecvent la %ersoane cu anomalii cromo&omiale structurale. (o%iii nscui de femei n v!rst au anomalii cromo&omiale numerice mai frecvent dec!t cei nscui de femei tinere. Marea majoritate a a'eraiilor cromo&omiale sunt incom%ati'ile cu viaa, e>ce%ie fc!nd-o c!teva sindroame. (ondiia n care or anismul conine dou sau mai multe linii celulare cu carioti% diferit, dar care %rovin din acelai &i ot se numete mo%aicism. 5emeia este un mo&aic celular n care unul din cromo&omii X inactivat este fie cel matern, fie cel %atern. Ir anismul ale crui celule deriv din doi sau mai muli &i oi se numte 0imer) e>%erimental or anismul ,imeric %oate fi o'inut %rin inseria unor ene strine *animale trans enice). 3ncruciarea inters%ecie duce la o'inerea unui animal 0i rid, frecvent de se> masculin, infertil i cu ca%acitate mare de efort fi&ic *cat!rul, c!inele-lu%). /) "'eraii numerice ale cromo&omilor somatici : a) <risomia #/ *sindromul ?an don-=o-n sau idioia mon oloid) Incidena sindromului =o-n se corelea& cu v!rsta mamei astfel nc!t mamele %este H6 de ani au risc de 1-/6 ori mai mare dec!t cele tinere de a da

natere unor co%ii cu malformaii. +ata co%iilor nscui cu sindrom =o-n este de /:/666 de nou-nscui, %!n la v!rsta de D6 ani i de /:D6, du% v!rsta de H6 ani. =ou treimi din %roduii de conce%ie sunt avortai s%ontan sau mor in utero. 3n %rivina %ato ene&ei sunt im%licate D mecanisme : - non-disjuncia din tim%ul %rimei divi&iuni meiotice *2#-21L) - translocarea ntre (& #/ i un cromo&om acrocentric *1L) - non-disjuncia mitotic $ ce duce la un mo&aicism *#L) Mecanismul %rin care creterea v!rstei mamei este asociat cu risc crescut de a da natere unui co%il cu sindrom =o-n nu este cunoscut, dar se %resu%un # teorii alternative : - i%ote&a oului 'tr!n. $ susine c non-disjuncia meiotic e mai frecvent la femeile n v!rst - i%ote&a seleciei rela>ate. $ susine c v!rsta mamei nu are nici un efect asu%ra non-disjunciei, ar ument!nd c femeile mai n v!rst fac mai uor avort s%ontan dec!t cele tinere. =in %unct de vedere anatomo-%atolo ic, cea mai interesant caracteristic o re%re&int le&iunile morfolo ice cere'rale asemntoare cu cele din 'oala "l&,eimer. "ceste le&iuni se sesc la toi %acienii cu sindrom =o-n i sunt re%re&entate de : - de enerescena ranulo-vacuolar - neurofi'rile n ,em. *tan le fi'ers) - %lci senile - %ierdere neuronal 9lcile senile i vasele cere'rale conin ntotdeauna un amiloid com%us dintr-o %rotein P-%liat. :imilaritatea ntre caracterele neuro-%atolo ice ale sindromului =o-n i 'oala "l&,eimer se reflect %rin a%ariia demenei n #116L din cei cu sindrom =o-n, care nu %oate fi atri'uit doar retardului mental. (linico-morfolo ic se constat urmtoarele: !tatusul mental $ se caracteri&ea& %rin retardare mintal %ro resiv, evideniat %rin scderea QI-ului de la ;6 la D6, n decurs de /6 ani. (o%iii au o %ersonalitate stereoti% i sunt descrii tradiional ca fiind afectuoi i foarte ataai de %ersoanele cunoscute *%rini, frai, rude) !omatic $ co%iii sunt mici, cu m!ini lar i i scurte, care %re&int anul simian *un %liu ce traverse& %alma transversal), au o fa %lat, cu fisuri %al%e'rale o'lice, distan inter%u%ilar redus cu as%ect mon oloid., irisul %re&int %ete n %eriu., urec,ile sunt mari, lim'a %roeminent fr fisura central) o treime au anomalii cardiace re%re&entate de defecte se%tale atriale i ventriculare, %ersisten de canal arterial, tetralo ie 5allot) %ot avea steno& duodenal, 'oal Eirsc,%un ) 'r'aii sunt toi sterili, i sunt citate c!teva ca&uri de femei care au dat natere la co%ii, din care H6L cu sindrom =o-n. (o%iii sunt susce%ti'ili la infecii %ulmonare

i au un de /1 ori mai mare de a face leucemie dec!t co%iii normali, aceasta fiind cau&a %rinci%al de deces. !peran"a de via" n %rima decad este dat de %re&ena unei malformaii cardiace, #1L deced!nd %!n la /6 ani. (ei care nu au malformaii cardiace %ot tri %!n la 11 ani, doar /6L atin !nd v!rsta de ;6 ani. ') <risomia /0 : Fste a doua 'oal ca frecven du% sindromul =o-n i afectea& fetele de H ori mai frecvent dec!t 'ieii. :e caracteri&ea& %rin occi%ut %roeminent, micro na&ie, oc,i i urec,i jos inserate, fle>ia de etelor cu su%ra%unerea lor i retard mental. <oi co%iii sufer de defecte cardiace i mor n %rimele D luni de via. c) <risomia /D *sindrom 9atau) : Fste foarte rar i se caracteri&ea& %rin microftalmie, cu oc,i foarte distanai, %alato- i c,eilo-sc,i&is, %olidactilie, %olice n tr aci. *tri er t,um'), microcefalie, ,eman ioame c%ilare i 'oli cardiace con enitale. #) "'eraii numerice ale cromo&omilor se>uali : :unt mai frecvente dec!t cele ale cromo&omilor somatici i nu %ertur' stadiile de&voltrii fetale. :e>ul unui individ este determinat de %re&ena sau nu a cromo&omului G. =iferena dintre cromo&omul X i G este evident : cromo&omul X este unul dintre cei mai mari cromo&omi umani, conin!nd R 4L din totalul =@", av!nd c!teva mii de ene, n tim% ce cromo&omul G este unul dintre cei mai mici i e>%rim doar c!teva ene, din care cea mai im%ortant este :+S *se>-determinin re ion G). "ceasta este un e>on aflat la ca%tul 'raului scurt al cromo&omului G, ce codific o %rotein nuclear mic, care se lea de o alt %rotein *:I9-/), form!nd un com%le> ce funcionea& ca activator transcri%ional al enelor autosomale im%licate n de&voltarea fenoti%ului masculin. =ei femeile au # (& X, at!t 'r'aii c!t i femeile e>%rim aceleai cantiti din %rodusul enelor codificate de (& X. "cest lucru a fost e>%licat %rin efectul ?Gon, care are la 'a& urmtoarele %rinci%ii : - unul dintre cromo&omii X este inactivat ireversi'il n stadiile tim%urii ale em'rio ene&ei - cromo&omul X este inactivat aleator *fie cel de la mam, fie cel de la tat) - inactivarea cromo&omului X este virtual com%let - inactivarea cromo&omului X este %ermanent i transmis la descendeni. (u alte cuvinte, (& X derivat de la mam sau de la tat este %ro%a at clonal. "stfel, toate femeile sunt mo&aicuri celulare n care unul din (&X %rovenit de la mam sau de la tat este inactivat n interfa&. Mo&aicismul %entru 8-4 9=E * luco&o-4 fosfat de,idro ena&) a fost im%ortant n demonstrarea ori inii monoclonale a neo%lasmelor.

a) :indromul Olinefelter *H;, >>G) : :e mai numete i dis ene&ia testicular i are o inciden de /:/666 de nou-nscui) 16L din %roduii de conce%ie sunt avortai s%ontan. (& X adiional a%are %rin non-disjuncia meiotic din tim%ul ameto ene&ei, fiind de ori ine matern n dou treimi din ca&uri. Nnii dintre indivi&i sunt mo&aicuri *H4, >G T H;, >>G) sau au mai mult de # (& X *H0, >>>G)) de asemenea, toi indivi&ii e>%rim cor%usculul Aarr n nucleu. 9atolo ic, tu'ii seminiferi sunt atrofici, ,ialini&ai, cu fi'ro& %eritu'ular) celulele :ertoli i celulele erminale sunt a'sente, n tim% ce celulele ?eGdi sunt ,i%er%la&iate dar nefuncionale. @ivelule de testosteron este sc&ut, n tim% ce nivelele de 5:E i ?E sunt crescute. (linic, %acientul se %re&int ca un individ nalt, dese> masculin, eunucoid, cu %enis i testicule mici, cu ,a'itus feminin * inecomastie, %icioare lun i, dis%o&iie feminin a %rului %u'ian), retardat mental i infertil. ') :indromul <urner *H1, >6) : :e mai numete i dis ene&ia ovarian i are o inciden de /:1666 de nou-nscui, 22L din %roduii de conce%ie fiind avortai s%ontan. :in urul (&X %re&ent se datorea& aneu%loidiei %rin non-disjuncie i n U din ca&uri %rovine de la mam. Nnele %aciente sunt mo&aicuri *H1, >6 T H4, >>)) nici una dintre ele nu e>%rim cor%uscul Aarr. 9acientele cu sindrom <urner au %redis%o&iie %entru de&voltarea tiroiditelor autoimune i tumori lor cu celule erminale. 9atolo ic, femeile au ,i%o%la&ie ovarian, uterul, trom%ele i va inul fiind de&voltate normal. Ivocitele %re&ente iniial n ovare sunt ra%id de radate i dis%ar %!n la v!rsta de # ani, c!nd ovarele sunt nlocuite cu esut conjunctiv fi'ros. :e s%une des%re fetele cu sindrom <urner, c au intrat la meno%au& cu mult nainte de a ajun e la menar,. (linico-morfolo ic, fetele sunt mici *V /1# cm), cu amenoree %rimar i sterilitate, !t scurt cu %terG ium colli, cu'itus val us, %ie%t lat cu mameloane distanate, s!ni mici, infantilism se>ual, rinic,i n %otcoav, defecte auditive i vi&uale, uneori retard mintal, anomalii cardio-vasculare *16L) : coarctaie de aort, 'iscu%idie de valv aortic, E<" i disecie de aort cu deces. 9ro nosticul i su%ravieuirea este e>celent su' tratament cu estro eni i ,ormoni de cretere *:<E). c) :indromul de su%ermascul *H;, >GG) : Interesul %entru aceti indivi&i a fost manifestat de mult vreme mai ales din %unct de vedere medico-le al, c!nd a fost constatat asocierea dintre acest fenoti% i un com%ortament criminal. Ar'aii cu acest fenoti% sunt nali, %re&int un com%ortament a resiv, au %ro'leme motorii i dificulti de lim'aj, unii au acnee c,istic. (romo&omul G su%limentar a%are %rin non-disjuncia meiotic cu aneu%loidie i se motenete de la tat.

d) :indromul de su%erfemel *H;, >>>) : Fste o anomalie manifestat %rin menstruaii nere ulate, la'ilitate emoional, dificulti n nvare i e>%rimare, uneori o uoar retardare mintal. "u fost semnalate ca&uri cu H sau 1 (& X, toate %re&ent!nd # sau mai muli cor%usculi Aarr. V) "nomalii enice sin ulare *'oli mendeliene) : ") 8eneraliti : 3n /044, 8r. Mendel ela'orea& teoria asu%ra ereditii care st la 'a&a eneticii clasice. Fl susinea c trsturile individuale sunt determinate de Wfactori. ereditari, i i e>%rim sintetic teoria su' forma a # le i, cunoscute su' numele de le ile lui Mendel : Legea segregrii afirm c oricare caracter ereditar este determinat de # Wfactori. *care n %re&ent se numesc Walele.) care se des%art i trec n celule erminale diferite. Legea com inrii li ere afirm c %erec,ile de Wfactori. se com'in inde%endent unul de altul n momentul formrii celulelor erminative. Nn caracter *trstur) mendelian este determinat de # co%ii ale aceleiai ene numite alele, care sunt locali&ate n acelai locus %e # cromo&omi omolo i. 8enele autosomale se refer la cele locali&ate %e cromo&omii somatici) enele se>-linBate se refer n s%e la cele locali&ate %e cromo&omul X. Nn caracter este dominant c!nd este e>%rimat doar o alel i este recesiv c!nd sunt e>%rimate am'ele alele *status ,omo&i ot). I 'oal recesiv a%are numai ntr-un individ ,omo&i ot *care e>%rim am'ele ene), n tim% ce o 'oal dominant a%are at!t la un individ ,etero&i ot *care e>%rim doar o en mutant dominant), c!t i la unul ,omo&i ot *care e>%rim am'ele ene dominante). (odominana se refer la situaia c!nd am'ele alele ale unei %erec,i sunt e>%rimate n totalitate la un ,etero&iot, un e>em%lu re%re&ent!ndu-l enele de ru% san vin "AI. 3n conclu&ie, caracterele mendeliene sunt clasificate ca fiind : autosomal dominante *,omo&i ote sau ,etero&i ote), autosomal recesive *numai ,omo&i ote), se>-linBate dominante i se>-linBate recesive. A) Aa&ele 'iolo iei moleculare ale 'olilor mendeliene : =o ma central a 'iolo iei moleculare este =@" X +@"X %roteine, dar desco%erirea revers-transcri%ta&ei *=@"-%olimera&a +@"-de%endent) n /2;6 de ctre <emin i Aaltimore, a artat =@"-ul %oate fi sinteti&at %ornind de la o matri +@". Mutaia %oate fi definit ca o modificare transmisi'il i sta'il la nivelul =@". 9e 'a&a a numeroase studii s-a artat c / din #16 %' *%erec,i de 'a&e) este %olimorf n enomul uman. Mutaiile s%ontane sunt foarte rare i a%ar o dat la c!teva sute de mii sau milioane de ani, afect!nd ntrea a s%ecie, cele mai frecvente fiind ns mutaiile %atolo ice. <i%urile majore de mutaii la s%ecia uman sunt :

/) Mutaii %unctiforme $ re%re&int nlocuirea unei 'a&e a&otate cu alta. Fle %ot fi : #uta"ii sinonime $ codonul mutant codific aceeai %rotien) e>. NNN i NN( codific fenil-alanina #uta"ii mis2sens $ codonul mutant codific alt %rotein) e>. 8"8 codific acidul lutamic, n tim% ce 8N8 codific valina #uta"ii non2sens $ codonul mutant este de ti% Wterminator. i o%rete translatia la nivelul mutaiei *codon sto%)) e>. N"N codific tiro&ina si N"" este codon sto%. #) Mutaii cadru *frames,ift) $ sunt mutaii care alterea& trama normal de lectur a unei secvene =@". Inseria sau deleia unei 'a&e n re iunea codant a =@" %roduce modificri la nivelul cadrului de citire al codului enetic. D) =eleiile ntinse $ c!nd o secven e>tins de =@" este %ierdut re iunea codificat a unei ene %oate fi tears n totalitate, iar %rodusul %roteic codificat este a'sent. H) Mutaiile dinamice - sunt e>%ansiuni ale unor secvene re%etitive trinucleotidice insta'ile determin!nd o serie de 'oli neurode enerative ereditare. (onsecinele funcionale ale mutaiilor sunt : 1) /ncompleta parcurgere a unei ci meta olice - %rodusul final este a'sent %rin li%sa unei en&ime im%licate n sinte&a lui) e>. al'inismul se datorea& deficitului de tiro&ina& 6) ,cumularea de produi nemeta oli%a"i - %rodusul iniial ce tre'uie meta'oli&at se acumulea& %rin li%sa unei en&ime im%licat n de radarea lui) e>. fenilcetonuria se datore& acumulrii de fenil alanin *9,e "la) %rin li%sa unei ,idro>ila&e 7) .epo%itarea unor meta oli"i intermediari - %rodusul intermediar al unei ci meta'olice se acumulea& %rin li%sa en&imei necesare de radrii lui) e>. 'oala von 8ierBe este o lico eno& datorat deficitului de luco&o-4 fosfata& *8-4 9-a&a) 8) 1ormarea unor produse finale anormale - a%are c!nd o en mutant codific o %rotein anormal) e>. sicBlemia este o anemie ,emolitic ereditar a%rut %rin su'stituirea acidului lutamic cu valina la nivelul lanului P al ,emo lo'inei. =) Aolile autosomal dominante : =oar %ersoanele sim%tomatice transmit 'oala, toi ,etero&i oii fiind sim%tomatici deoarece e>%rim ena dominant. (aracterele acestor 'oli sunt : - at!t femeile c!t i 'r'aii sunt afectai n mod e al - mutaia este transmis eneraiilor urmtoare - mem'rii neafectai ai familiei nu transmit 'oala - %ro%oria descendenilor normali sau 'olnavi este n medie e al

/) :indromul Marfan : "%are %rintr-o mutaie %unctiform mis-sens la nivelul enei ce codific fi'rillina / *5A@ /) de %e (& /1J. 5i'rillinele sunt o familie de %roteine ce formea& un sistem fi'rilar numit microfi'rile. Microfi'rilele formea& o reea %e care se de%une elastina n tim%ul em'rio ene&ei, form!nd esutul conjunctiv elastic. =eficiena n cantitatea i distri'uia microfi'rilelor duce la fra mentarea fi'relor elastice ceea ce face ca esutul conjunctiv elastic s nu re&iste la stressul mecanic normal. Indivi&ii sunt nali, sla'i, cu e>tremiti lun i i de ete su'iri *arac,nodactilie)) %re&int dolicocefalie *ca% alun it) cu eminenele frontale %roeminente, torace de Wci&mar. *%ectus e>cavatum) sau de W%orum'el. *%ectus carinatum), li amente, tendoane i articulaii sla'e, ,i%ere>tensi'ile. 9acienii %ot avea insuficien aortic %rin dilatarea inelului valvei aortice i anevrism disecant de aort ascendent care este %ricnci%ala cau& a morii *microsco%ic fi'rele elastice din %eretele aortei sunt nlocuite cu muco%oli&a,aride). Mai %ot avea su'lu>aie de cristalin, mio%ie, de&li%ire de retin. =urata medie de via este de D6-H6 ani. #) :indromul F,lers-=anlos *Womul de um.) : :e datorea& unui defect n sinte&a i de radarea cola enului care a%are n microsco%ie electronic mai lun dec!t normal i dis%us n 'uc,ete mici. (el mai frecvent im%licat este cola enul ti% III i ti% I, %rin deficiena unor ,idrola&e i o>ida&e cu rol n %rocesarea fi'rilelor. :e cunosc /6 ti%uri ale acestui sindrom av!nd at!t transmitere autosomaldominant, autosomal-recesiv i >-linBat recesiv. Indivi&ii %re&int ,i%erelasticitate i fra ilitatea %ielii *ce %oate fi ridicat n %liuri de c!iva centrimetri), ,i%ermo'iliatea articulaiilor ce se %ot contorsiona n %o&iii de fle>ie i e>tensie neo'inuite, diate&e ,emora ice, ru%turi s%ontane ale tu'ului di estiv, ve&icii urinare, uterului ravid, arterelor mari, cu deces n %rimele D-H decade de via. D) @eurofi'romato&a : Include # 'oli distincte autosomal-dominante : a) <i%ul I *@eurofi'romato&a von +ecBlin ,ausen) $ caracteri&at %rin neurofi'roame multi%le desfi urante, %i mentri 'rune ale %ielii *%ete cafY au lait) i le&iuni %i mentare ale irisului *nodulii ?isc, $ formai din a re ate melanocitice). ?e&iunile se datore& unor mutaii non-sens, mis-sens i deleii ale enei @5/ de %e (& /;J. 8ena @5/ este o antionco en ce codific o %rotein numit neurofi'romina, ce a%arine unei familii de %roteine 8 ,eterotrimere, care inactive& %roteina +as. Aolnavii au risc de #66-166 de ori mai mare de a face leucemii mieloide i cea mai im%ortant com%licaie o re%re&int de&voltarea unui neurofi'rosarcom %le>iform i ant %e un neurofi'rom. ') <i%ul II *neurofi'romato&a central) $ se caracteri&ea& %rin neurofi'roame acustice 'ilaterale *%e traseul n.VIII), menin ioame i lioame.

F) Aoli autosomal recesive : <oi indivi&ii cu aceste 'olisunt ,omo&i oi deoarece e>%rim am'ele ene recesive, ,etero&i oii fiind %urttori asim%tomatici. Marea majoritate a 'olilor meta'olice enetice au un mod de transmitere autosomal-recesiv. (aracteristicele acestor 'oli sunt : - am'ii %rini sunt ,etero&i oi i asim%tomatici - sim%tomele a%ar doar la Z din descendeni */T# sunt ,etero&i oi asim%tomatici i un sfert sunt sntoi) - caracterele autosomal-recesive se transmit e al at!t la 'r'at c!t i la femeie - 'olile autosomal-recesive a%ar frecvent %rin cstorii consan vine - varia'ilitatea e>%resiei clinice a 'olii este determinat de activitatea re&idual a unei en&ime afectate. /) 5i'ro&a c,istic *5() *fi .#): Fste cea mai frecvent 'oal autosomal-recesiv letal la co%iii al'i, incidena fiind de / : #166 de nou-nscui) 21 L sunt de ras cauca&ian *al'), 'oala a%r!nd e>ce%ional la ne ri i niciodat la asiatici. 8ena res%onsa'il %entru 5( se sete %e (& ;J i codific o %rotein numit re latorul conductanei transmem'ranare fi'ro&ei c,istice $ (5<+ *cGstic fi'rosis transmem'rane conductance re ulator). (5<+ este un canal ionic de trans%ort %entru clor, ce se sete n mem'rana celulei e%iteliale) face %arte dintr-o familie de %roteine le ate de "<9. (5<+ are # domenii de le are a "<9 i un domeniu + cu rol n fosforilare. "ctivitatea (5<+ este re lat de ec,ili'rul ntre activitatea Bina&elor i fosfata&elor *fosforilare i defosforilare), funcia sa fiind de e>creie a clorului. 3n 5(, mutaiile enei ce codific (5<+ %ot fi clasificate astfel : li%sa sinte&ei (5<+ li%sa trans%ortului (5<+ la mem'rana celular li%sa le rii "<9 la (5<+ e>creia deficitar a clorului %rin (5<+ mutant <oate consecinele %atolo ice ale fi'ro&ei c,istice sunt atri'uite %re&enei unui mucus v!scos anormal, ce o'struea& lumenul aeriene, ductelor %ancreatice i 'iliare i a intestinului fetal) de fa%t un termen mai vec,i desemnea& aceast 'oal cu numele de mucoviscido&. =in %unct de vedere anatomo-%atolo ic, cele mai afectate or ane sunt %lm!nul i %ancreasul *01L). ?e&iunile %ulmonare sunt re%re&entate de : %re&ena unui mucus v!scos n lumenul 'ron,iolelor cu inflamaia %eretelui ,i%ertrofia i ,i%er%la&ia landelor su'mucoase distensia cilor aeriene %rin o'strucia dat de mucus

I'strucia 'ron,iolelor duce la infecii %ulmonare recurente cu :tafilococ auriu i 9seudomonas "eru inosa, iar n tim% co%ii de&volt a'cese %ulmonare, 'ronit cronic, 'roniecta&ii i cord %ulmonar cronic secundar ,i%ertensiunii %ulmonare. ?e&iunile %ancreatice cu%rind : %re&ena unui material amorf eo&inofil intra ductal dilatarea c,istelor ductale atrofia acinilor %ancreatici nlocuirea %arenc,imului cu esut fi'ro-adi%os 9acienii cu aceste le&iuni de&volt %ancreatit cronic care duce la %ierderea celulelor acinare i e>tensia fi'ro&ei, insulele ?an er,ans rm!n!nd neafectate. "lte le&iuni cu%rind : ciro&a 'iliar secundar o'struciei ductelor 'iliare ,e%atice cu inflamaie cronic %ortal i fi'ro& ileus meconial %rin o'strucia lumenului intestinului su'ire atrofia i fi'ro&a ve&iculelor seminale, ductului deferent i a e%ididimului cu infertilitate. (linic, dia nosticul %o&itiv se %une %e demonstrarea creterii concentraiei clorului n sudoare, iar 9seudomonas "eru inosa n culturi recoltate de la co%ii cu 'oli %ulmoanre cronice confitrm n totalitate dia nosticul. (o%ii au tuse %roductiv cu o s%ut %urulent a'undent, 'ronit cronic i 'ron,o%neumonii recurente, ce duc la insuficien res%iratorie i deces. 9acienii %ot de&volta cord %ulmonar cronic secundar ,i%ertensiunii %ulmonare, %ancreatit cronic, mala'sor'ie %roteic i li%idic cu steatoree i retardare de cretere. #) 5enilcetonuria : Fste o 'oal autosomal recesiv foarte frecvent la evrei i irlande&i datorat deficitului de 9"E *fenil-alanin ,idro>ila&) care transform 9,e-"la n tiro&in. 9,e-"la este un aminoacid esenial o'inut numai din alimente i este neuroto>ic. 9acienii %re&int nivele crescute de 9,e-"la n ser, retard mental *%rin demielini&are), %iele al', %r 'lond i oc,i al'atri *%rin scderea sinte&ei de melanin). 9,e-"la este meta'oli&at su' form de acid fenil-%iruvic eliminat %rin urin care are un miros de oarece. D) "lca%tonuria *ocrono&a) : Fste o 'oal rar autosomal-recesiv, determinat de a'sena unei o>ida&e ,e%atice ce meta'oli&ea& acidul ,omo enti&inic. Aoala se caracteri&ea& %rin e>creia acidului ,omo enti&inic n urin *care este nea r), %i mentare enerali&at i artrit. Indivi&ii au durata de via normal. 5) Aolile >-linBate dominante : "u urmtoarele trsturi : 5emeile sunt de # ori mai afectate dec!t 'r'aii

 5emeile ,etero&i ote transmit 'oala la 16L din co%ii *e al at!t la 'r'at i femeie) <atl transmite 'oala numai fiicelor F>%resia clinic a 'olii este mai %uin sever la femeile ,etero&i ote dec!t la 'r'aii ,emi&i oi @u e>ist %urttori asim%tomatici (ea mai cunoscut este ra,itismul ,i%ofosfatemic *vitamino-= re&istent). 8) Aolile >-linBate recesive : "u urmtoarele trsturi : =oar 'r'aii sunt afectai, n tim% ce femeile sunt %urttoare asim%tomatice Ar'aii asim%tomatici nu transmit 'oala 5iii femeilor %urttoare *,etero&i ote) au 16L ansa de a face 'oala Aoala Wsare. eneraii /) Aoala =uc,enne $ AecBer *distrofia muscular %seudo,i%ertrofic) Fste determinat de o deleie a enei =M= de %e (& >% *46L) sau de o mutaie %unctiform *H6L). =M= codific o %rotein numit distrofina, care face %arte din %roteinele citosc,eletului, ce include [-actinina i s%ectrina. =istrofina se sete %e faa intern a sarcolemei i lea actina de o lico%rotein transmem'ranar linBer, care la r!ndul ei se lea de laminin. +olul distrofinei este acela de a menine %ro%rietile mecanice ale muc,ilor n tim%ul contraciei. "'sena ei duce la distru erea sarcolemei n tim%ul contraciei i necro&a miocitului. Microsco%ic se constat atrofia fi'relor musculare striate sc,eletice care sunt nconjurate de esut conjunctivo-adi%os, n care sunt m%rtiate %uine leucocite, necro& i re enerare muscular %e arii ntinse. Aolnavii %re&int atrofie muscular sever cu %seudo,i%ertrofia muc,ilor am'ei, sunt inca%a'ili s mear fiind imo'ili&ai n scaun cu rotile, sunt retardai mintal i de&volt cardiomio%atie care este cau&a %rinci%al a morii %!n la v!rsta de /; ani. #)Eemofilia : Fste o 'oal >-linBat recesiv, datorat deficienei de factor VIII *ti%ul ") sau factor IX *ti%ul A), %rin mutaii %unctiforme, deleii, inserii la nivelul (& >J#0. (a urmare, ,emosta&a este ineficient, re&ult!nd ,emora ii s%ontane, %articular n articulaii *cu anc,ilo& %ro resiv), muc,i i or ane interne *cu ,ematurie, o'strucie intestinal sau res%iratorie), ,emora ia cere'ral sau ru%erea vaselor mari fiind cau& de deces. VI) Mutaiile dinamice : 8enetica clasic se 'a&ea& %e le ile lui Mendel, i arat c mutaiile sunt statice, adic sunt modificri %ermanente, sta'ile ale informaiei enetice, transmise la fel de la o eneraie la alta. "cest conce%t nu este ns ca%a'il s

e>%lice o serie de a'ateri de la conce%tele eneticii menedeliene, cum ar fi : antici%aia, %enetrana incom%let i e>%resivitatea varia'il. 9rin anticipa"ie se nele e tendina unei 'oli de a de'uta mai tim%uriu i de a se %re&enta su' forme mai severe de la o eneraie la alta, n cadrul aceleiai familii. E9presivitatea re%re&int varia'ilitatea manifestrilor fenoti%ice ale unei ene, tradus %rin varia'ilitatea manifestrilor clinice. :enetran"a este frecvena cu care o en sau com'inaie de ene se e>%rim n fenoti%ul %urttorilor. I a'atere de la do ma eneticii clasice o re%re&int %arado>ul lui :,erman : eneraiile succesoare sunt mai sever afectate dec!t eneraiile %recursoare., care este caracteri&at %rin creterea %enetranei n succesiunea eneraiilor. +e&olvarea %arado>ului a fost %osi'il o dat cu desco%erirea mutaiilor dinamice. :%re deose'ire de mutaiile statice, care re&ult n urma unor evenimente discrete, mutaiile dinamice a%ar n urma unor evenimente multi%le care se succed n flu>. "stfel, mutaiile dinamice sunt definite ca o clas de alterri =@" re%re&entat de creteri ale numrului unor re%etri trinucleotidice situate n %ro>imitatea sau n interiorul unor ene structurale. (aracteristica definitorie a mutaiilor dinamice o constituie insta ilitatea genetic, e>%rimat %rin creterea numrului de co%ii ale unitilor trinucleotidice. "lela normal sufer un %roces de am%lificare %ro resiv a secvenelor trinucleotidice n tim%ul divi&iunii, dar care nu este %atolo ic, fenomen numit premuta"ie. (!nd re%etarea secvenelor trinucleotidice de%ete un numr critic, a%are mutaia com%let i semnele 'olii. Aolile datorate mutaiilor dinamice sunt a%ro>imativ /1, dintre care mai im%ortante sunt : sindromul X fra il, distrofia miotonic :teinert, ata>ia 5riedreic,. /) :indromul X fra il : Fste o afeciune cau&at de e>%ansiunea re%etitiv a secvenei (88 de la nivelul (& XJ. "ceast e>%ansiune are # consecine : - atenuea& transcrierea enei 5M+/ *5ra X Mental +etardation) %rin metilarea %romotorului acesteia. 8ena 5M+/ este activ transcri%ional %e tot %arcursul vieii em'rionare, iar n viaa adult este activ doar n creier, uter i testicule. - inducerea unui situs fra il. %e (& X susce%ti'il la ru%turi i identificat ca un ol * a%.) de colorare n te,nicile de 'andare. (el mai im%ortant sim%tom este retardarea mintal, indivi&ii av!nd un QI R 46-#6) interesant este c o %ro%orie foarte mare de 'iei cu autism sunt %urttori ai (& X fra il. 9acienii %re&int un facies rosolan, cu un ca% mare cu urec,i lun i rotate %osterior, articulaii ,i%ere>tensi'ile, testicule mari, valve cardiace anormale, e%ile%sie. =in %unct de vedere %si,ic au deficit intelectual, stereoti%ii, autism, ecolalie, tendin la automutilare.

#) =istrofia miotonic :teinert : Fste cau&at de e>%ansiunea re%etitiv a secvenei (<8 de %e (& /2J. 8ena de la acest nivel codific o serin-treonin Bina&, care fosforilea& canalele ionice de @a, O, (l. "normala fosforilare a acestor canale %rin mutaia enei, duce la alterarea e>cita'ilitii sarcolemei i distrofie muscular. I caracteristic enetic interesant este fenomenul de antici%aie : anali&a %edi ree-urilor *ar'orele enealo ic) arat c indivi&ii cu forme rave ale 'olii sunt co%iii unor mame cu afectare muscular moderat, intensitatea manifestrilor fenoti%ice, corel!ndu-se cu creterea numrului de re%etri trinucleotidice. Microsco%ic se constat atrofia tipului / de fi're musculare *fi're roii, cu contracie lent, care au lico en %uin i multe mitocondrii) i 0ipertrofia tipului // de fi're *fi're al'e, cu contracie ra%id, care au mult lico en i %uine mitocondrii). I caracteristic constant este situarea la interior a nucleilor, iar reacia ,istoc,imic cu "<9-a&a la %E alcalin, arat fi're n inel. *datorat colorrii intense a sarcolemei). Ica&ional, %oate a%are necro& i re enerare. Aoala are # forme clinice : o form con enital i una adult, caracteri&ate %rin sl'iciunea musculaturii mem'relor, atrofia musculaturii faciale, %to& visceral uneori sever, cataract, atrofie testicular, deteriorri de %ersonalitate, aritmii cardiace. 5orma con enital %re&int n %lus i retard mental. D) "ta>ia 5riedreic, : Fste cau&at de e>%ansiunea re%etitiv a secvenei 8"" de %e (& 2J. +e%etrile trinucleotidice a%ar n %rimul intron *fra ment =@" necodant) al unei ene numit X#1, ce codific o %rotein mitocondrial, numit frata>ina, im%licat n trans%ortul 5e n mitocondrie. "natomo-%atolo ic, cele mai im%ortante le&iuni se constat la nivelul mduvei s%inrii: de enerescena cordoanelor %osterioare, fasciculelor s%inocere'eloase i corticos%inale, %rin fenomenul de dGin $ 'acB. *moarte retro rad). =e asemenea, a%are atrofia fi'relor mielinice din nervii %eriferici i %ierderi neuronale din an lionii s%inali. (linic se manifest %rin ata>ie s%inocere'eloas, disartrie, %ierderea refle>elor osteotendinoase i a sensi'ilitii %rofunde, cardiomio%tie ,i%ertrofic i dia'et &a,arat. VII) Aolile mitocondriale : Mitocondria este un or anit ca%a'il s furni&e&e ener ia nma a&inat n le turile macroer ice de "<9 %rin %rocesul de fosforilare o>idativ *+F=IX) e>%licat %rin teoria cu%lrii c,emiosmotice a lui 9. Mitc,ell. Fa %are a fi un %rocariot ancestral, ce a fost n lo'at ntr-o celul eucariot care avea nevoie de o central ener etic. %entru a su%ravieui n atmosfera %rimitiv a 9m!ntului din tim%urile de nce%ut ale a%ariiei vieii. :im'io&a dintre cele # entiti este at!t de %uternic nc!t li%sa tuturor mitocondriilor din celul duce la moartea acesteia din urm.

=ivi&iunea mitocondrial nu e sincron cu divi&iunea celular, enomul mitocondrial av!nd un =@" du'lu catenar, cu urmtoarele caracteristici :

se motenete numai de la mam co%iile =@"mt sunt varia'ile *re%licarea se face la nt!m%lare, unele co%ii se re%lic de # ori, altele niciodat, dar cantitatea de =@"mt rm!ne constant %entru fiecare celul) are o rat nalt a mutaiilor =@"mt este li%sit de introni H din cele 4H de cuvinte ale codului enetic, au n =@"mt alt semnificaie dec!t n enomul celular *codoni disideni.) erorile re%licrii rm!n necorectate, deoarece mitocondria nu are un sistem de re%arare a =@"-ului le&at *%ot fi re%arate totui le&iunile %roduse de a eni o>idani) efectul %ra : diferite esuturi necesit un anumit nivel *%ra ) de ener ie furni&at de "<9, deci un anumit numr de mitocondrii, cele mai 'o ate n aceste or anite fiind creierul, inima i muc,ii sc,eletici *care consum o mare cantitate de ener ie) Aolile cau&ate de mutaiile n enomul mitocondrial afecte& n s%ecial inima, creierul, muc,ii sc,eletici. =efectele funcionale n toate aceste 'oli sunt traduse %rintr-o fosforilare o>idativ inadecvat. Aolile mitocondriale au fost clasificate astfel : - clasa I $ mutaii nucleare - clasa II $ mutaii %unctiforme ale =@"mt - clasa III $ deleii ale =@"mt - clasa IV $ defecte nedefinite 9rima 'oal uman desco%erit cau&at de mutaii %unctiforme ale =@"mt a fost 'oala ?e'er $ neuro%atia o%tic ereditar, caracteri&at %rin %ierderea %ro resiv a vederii. (ea mai im%ortant 'oal mitocondrial cunoscut este cardiomio%atia ,i%ertrofic cu D forme : - forma simetric $ ,i%ertrofia ntre ului %erete ventricular - forma asimetric $ ,i%ertrofia se%tului interventricular - forma a%ical *ja%one&) $ ,i%ertrofia v!rfului inimii VIII) "m%renta enetic : Inactivarea %ermanent funcie de ori inea %arental a activitii uneia dintre cele # co%ii ale unei ene definete fenomenul amprentrii genomice * enetic im%rintin ). 3n ca&uri e>treme, a fost demonstrat e>%erimental c em'rionii mamiferelor ce conin am'ele seturi de cromo&omi derivai fie numai de la mam, fie numai de la tat, nu su%ravieuiesc.

I manifestare mai %uin sever o constituie disomia uniparental *isodisomia), ca& n care &i otul conine # %ronuclei ce au aceeai ori ine %arental. \i oii %ot fi ginogeno"i *conin informaie e>clusiv matern) sau androgeno"i *conin informaie e>clusiv %atern). Nn astfel de fenomen st la 'a&a %arteno ene&ei. 9arteno ene&a re%re&int de&voltarea unui em'rion dintr-un ovul nefertili&at, %rin activarea meta'olic s%ontan a ovocitelor %ostmeiotice din foliculii ovarieni. =u% %arcur erea %rimelor eta%e ale se mentrii, em'rionii mor n stadiul de 'lastocist * ino enoii mor %rin nede&voltarea %lacentei). (ontinuarea ns a evoluiei duce la a%ariia teratoamelor ovariene *or anisme caricaturale.). Ica&ional acestea se %ot transforma mali n ener!nd teratocarcinoame. 3n mod asemntor iau natere teratoamele testiculare. =e menionat c i tumorile trofo'lastice $ mola ,idatiform i coriocarcinomul iau natere din celule isodisomice %entru setul %atern de cromo&omi. 5enomenul de %arteno ene& are loc s%oradic la unele s%ecii de %lante *%%die), animale *%eti, re%tile, %sri), dar niciodat la mamifere. Varia'ilitatea este foarte redus la s%eciile ce se re%roduc astfel, deoarece cromo&omii ce %rovin numai de la un sin ur enitor sunt identici enetic. ?a om, %ierderea unui cromo&om n ca&ul unei trisomii sau du%licarea unui cromo&om n ca&ul unei monosomii %oate duce la disomie uni%arental. :ur%rin&tor este c em'rionii isodisomici %entru anumii cromo&omi sunt via'ili i nu %re&int anomalii fenoti%ice. I alt o'servaie interesant este fa%tul c V /L din sarcinile via'ile au o disomie uni%arental %entru cel %uin un cromo&om, %ut!nd da natere virtual unui em'rion %arteno enot. Majoritatea enelor umane su%use am%rentrii sunt concentrate n # re iuni enomice, iar mecanismul cel mai credi'il al am%rentrii %are a fi metilarea =@". "m%renta enetic tre'uie s fie %re&ent n ameii unui sin ur se> i s fie suficient de sta'il n mito& %entru a %utea fi %ro%a at n celulele somatice ale viitorului or anism. 5enomenul am%rentrii %resu%une : ac,i&iia am%rentei n eta%ele finale ale formrii ameilor sau imediat du% fertili&are meninerea am%rentei %e %arcursul de&voltrii onto enetice ter erea am%rentei n celulele stem erminale %ro enitoare F>istena am%rentei enetice la om este ilustrat %rin %re&ena a # 'oli ereditare : deleia la nivelul locusului cromo&omial /1J //-/D determin sindromul 9rader-7illi c!nd cromo&omul este motenit de la tat i sindrom "n elman, c!nd acelai cromo&om e motenit de la mam. :indromul 9rader-7illi se caracteri&ea& %rin ,i%otonie muscular, o'e&itate, ,i%o onadism, retardare mintal, n tim% ce sindromul "n elman cu%rinde ata>ie, ,i%eractivitate, accese 'rute de r!s, convulsii i retard mental. IX) Flemente de te,nolo ia =@"-ului recom'inant *in ineria enetic)

Motto : Irice tiin suficient de avansat tinde s se a%ro%ie de ma ie W *"rt,ur (. (larBe)

") Istoric : =ei oamenii au fcut modificri ale or anismelor de c!nd au nce%ut s domesticeasc animalele, adic de acum a%ro>. /6.666 ani, denumirea de in inerie enetic se refer la setul de te,nici ce au devenit a%lica'ile n /2;D. In ineria enetic i are ori inile n /21#, c!nd Cos,ua ?eder'er a desco%erit c 'acteriile *n s%e F. (oli) se m%erec,ea& %entru a face sc,im' de material enetic, fenomen numit con3ugare. Fl a o'servat c e>ist # %o%ulaii 'acteriene, %e care le-a denumit M i 5. =oi indivi&i din cele # %o%ulaii se lea ntre ei %rin intermediul unui tu' *%il se>ual), re%re&entat de o %relun ire a mem'ranei %lasmatice. Materialul enetic *o %lasmid) al unei celule donoare *considerat celul mascul $ M) trece %rin acest tu' i se unete cu cel din cealalt celul acce%toare *femel $ 5). 3n /212, cercettorii ja%one&i au artat c %lasmidele sunt cele care confer 'acteriilor re&isten fa de anti'iotice. 3n /2;D, :.(o,en i E.AoGer arat c moleculele de =@" %ot fi scindate cu ajutorul en&imelor de restricie, ce %ot fi re%roduse %rin inserarea lor n F.(oli) acest este nce%utul in ineriei enetice. 3n acelai an, dintr-un em'rion n ,eat se nate un viel. 3n /2;H, ". Caco' i +. Eed es desco%er trans%o&onii *elemente enetice ce se %ot de%lasa cu uurin de la un cromo&om la altul). Nn an mai t!r&iu este o'inut n "n lia %rimul anticor% monoclonal *"cm). 3n /2;0 este conce%ut %rimul co%il n e%ru'et., numit %runcul din tu'ul de testare., n "n lia. 3n /206 este clonat ena din centromerul cromo&omului de drojdie, n tim% ce (. 7eissman de la Nniversitatea din 8eneva anun c interferonul uman a fost %rodus cu succes la 'acterii. 3n /20/, oamenii de tiin c,ine&i sunt %rimii care clonea& un %ete *cra% auriu), iar cercettorii de la Nniversitatea din "tena creea& %rimii oareci trans enici. 3n acelai an este o'inut %rin in inerie enetic vaccinul %entru ,e%atita A reali&at din s!n e uman. 3n /20# este comerciali&at n :N" %rimul %rodus al in ineriei enetice, insulina uman %rodus de F. (oli. 3n /20H este clonat o oaie, de ctre :teen 7illadsen. F>%erimentul a constat din se%ararea unui em'rion n celulele com%onente i introducerea nucleilor acestor celule n ovulele oii , ale cror nuclee au fost scoase n %reala'il) aceste ovule astfel modificate au fost im%lantate n uterul oii %entru a se de&volta, devenind fetus. 3n acelai an sunt clonate ene %rovenite de la s%ecii

dis%rute) este vor'a des%re clonarea enelor e>trase din %ielea 'ine conservat a unei s%ecii de &e're dis%rut de /66 de ani. 3n /204, "dministraia %entru "limente i Medicamente a :N" a%ro' utili&area %rodusului IO<D, %rimul "cm admis %entru u& tera%eutic la oameni i de asemenea a%ro' utili&area %e oameni a %rimului vaccin o'inut %rin in inerie enetic contra ,e%atitei A, %e culturi de drojdii. ?a mijlocul deceniului 0, OarG Mullis ima inea& o metod de multi%licare a enelor clonate numit 9(+, care a stat la 'a&a unei metode de identificare a unui om, n /200, numai %e 'a&a unui fir de %r. In vara anului /22; este clonata oaia =ollG de catre o ec,i%a de cercetatori scotieni) doi ani mai tir&iu este clonat %rimul em'rion uman format din H66 de celule, dar care este distrus %rin incinerare. :tudiile e>%erimentale ce au urmat %rivind clonarea uman, nu au mai fost fcute oficiale. 9rivind n viitor, se %oate s%une c te,nolo ia =@"-ului recom'inant este un domeniu ce-i %oate oferi omului c,eia de a desc,ide %oarta s%re un univers incredi'il, sau de a desc,ide cutia 9andorei. A) Aa&ele moleculare ale te,nolo iei =@"-ului recom'inant : /) 5enomenul de restricie-modificare : :-a o'servat c moleculele de =@" e>o en viral, care %trund n celulele 'acteriene, dis%ar foarte re%ede din noua a&d, aceasta menin!ndu-i informaia enetic %ro%rie. 5enomenul de nt!r&iere a creterii virusului %e noua a&d %rin nde%rtarea moleculelor de =@" strin se numete restricie. Mecanismul molecular al fenomenului de restricie l re%re&int ,idroli&a s%ecific a =@"-ului %rin intermediul unor endonuclea&e, cu inactivarea lui. 9rocesul com%lementar al acestui fenomen se numete modificare. Nnele enomuri virale sca%. atacului en&imelor de restricie i i vor continua evoluia n interiorul a&dei, devenind infecioase numai %entru aceasta. 5enomenul de ada%tare a unei %articule virale %e o celul a&d, %e care vor crete nein,i'ate se numete modificare. Mecanisul molecular al fenomenului de modificare l re%re&int metilarea en&imatic a =@", cu ajutorul unor metila&e de modificare. "cest %roces este controlat de celula a&d, iar %articula viral nu este ca%a'il s re%roduc infecia. :istemul de restricie-modificare *+-M) se sete %e cromo&omul 'acterian i are rol n %rotecia i meninerea unui ec,ili'ru 'iolo ic ntre celula a&d i %articula infectant, fenomenul +-M manifest!ndu-se fa de orice =@" strin indiferent de %rovenien. #) Fn&ime utili&ate n te,nolo ia =@"-ului recom'inant : :unt uneltele de lucru. n in ineria enetic, necesare o'inerii unor ve,icule i %asa eri adecvai. "ceste en&ime sunt re%re&entate de : Fndonuclea&e de restricie =@" li a&e Metila&e

 =@" %olimera&e $ =@" %ol I de la F.(oli - <aJ - %olimera&a - revers-transcri%ta&a - terminal- transfera&a Fndonuclea&ele de restricie sunt en&ime care ,idroli&ea& s%ecific moleculele de =@" d.c. %rin clivarea a # le turi fosfodiesterice, c!te una de %e fiecare caten a moleculei de =@". Eidroli&a =@" se face du% Wrecunoaterea. unor secvene nucleotidice s%ecifice, radul de restricie fiind reflectat de numrul de situsuri e>%use aciunii en&imelor de restricie. :e cunosc %este /#66 de endonuclea&e de restricie m%rite n H clase notate de la I la IV. (ele din clasele I, II, III ,idroli&ea& orice =@" strin, n tim% ce cele din clasa IV ,idroli&ea& numai =@" metilat. Fn&imele de restricie %roduc D ti%uri de fra mente de =@", n ra%ort cu situsul de clivare : - fra mente cu e>tremiti Wdre%te. - fra mente cu e>tremiti Wcoe&ive. *sticBG) - fra mente cu e>tremiti Wnecoe&ive. *'lunt) 9urificarea en&imelor de restricie se face, n eneral, %rin trecerea e>tractelor celulare 'acteriene %e coloane de cromato rafie %line cu rini sc,im'toare de ioni, activate cu un tam%on s%ecific. :emnificaia 'iolo ic a en&imelor de restricie este asemntoare cu cel al sistemului imunitar la or anismele su%erioare, av!nd rol n ec,ili'rul ecolo ic al %o%ulaiilor 'acteriene i fa ice n natur. Fn&imele care sudea& covalent fra mentele de =@" re&ultate din Wdi estia. cu en&ime de restricie se numesc =@" li a&e. Fle au rol n re%ararea =@"-ului n celula normal i sunt folosite n in ineria enetic %entru a insera fra mente de =@" strin n vectori de clonare. Nnirea a # fra mente monocatenare ce %rovin de la # molecule diferite de =@" n structuri 'icatenare, sta'ile n condiii adecvate de tem%eratur, %E i concentraie ionic cu ajutorul =@" li a&elor se numete ,i'ridi&are =@". Ei'ridi&area =@" este condiionat de com%lementaritatea 'a&elor a&otate de %e cele # catene. "cest ti% de =@" d.c. se numete ,eterodu%le>. Fc,ivalentul ,eterodu%le>ului in vivo este intermediarul EollidaG, ce se forme& n cursul recom'inrii enetice din crossin -over. Ei'ridi&rile de aci&i nucleici se %ot reali&a %rin fenomenul de denaturare-renaturare =@", care este de%endent de concentraia 'a&elor 8 K (. D) Ve,icule i %asa eri n in ineria enetic : a) Nn vector de clonare *ve,icul) este o molecul de =@" n care se inte rea& ena de interes *%asa erul) i care este introdus ntr-o a&d s%ecific %entru e>%rimarea unei informaii enetice, re%licarea lui fc!ndu-se inde%endent de cromo&omul a&dei. :e utili&ea& D ti%uri de vectori : 'acteriofa i, %lasmide i vectori ,i'ri&i.

$acteriofagii sunt virusuri ce %ara&itea& o 'acterie i %ot fi de # cate orii: - fa i viruleni $ infecte& o celul, se multi%lic ra%id n interiorul ei i a%oi i distru a&da *li&a celulei 'acteriene) - fa i tem%erai $ infecte& o celul i rm!n n stare latent, enomul lor inte r!ndu-se n cel al celulei a&d i re%lic!ndu-se o dat cu acesta *li&o enie). =in 'acteriofa i deriv o serie de vectori de clonare, cum ar fi fa ul (,aron derivat din 'acteriofa ul ]. :lasmidele sunt structuri =@" e>tracromo&omiale, care se sesc n celulele 'acteriene *dar nu e o'li atoriu), cu ca%acitate de %ro%a are %ro%rie *adic se re%lic inde%endent de de cromo&omi). Fc,ivalentul lor la or anismele multicelulare este re%re&entat de trans%o&oni. =@"-ul %lasmidial are D forme moleculare : circular nc,ise covalent, circular desc,ise, lineare. =u%a im%licarea n transferul de material enetic, %lasmidele %ot fi : conju ative *%romove& conju area) i neconju ative *nu %romove& conju area). ;ectorii 0i ri%i %ot fi : cosmide *%lasmide ce conin ena cos a 'acteriofa ului ]) i fa imide *%lasmide ce conin secvene de =@" de fa i filamentoi). ') 9asa erul este un fra ment de =@" care codific sinte&a unui %rodus 'iolo ic. 9asa erul introdus ntr-un ve,icul adecvat este re%licat de celula a&d m%reun cu aceasta. =e asemenea, =@" %asa er i %stre& ca%acitatea de a dirija i controla sinte&a %rodusului %entru care are informaia enetic. I'inerea %asa erilor se %oate face %rin : - i&olarea lor cu en&ime de restricie - sinte&a en&imatic cu ajutorul revers-transcri%ta&ei - sinte&a c,imic care cu%rinde # eta%e : sinte&a unor fra mente de /6-/# uniti %olinucleotidice i le area lor Wca%-coad. cu =@" li a&e. c) "nsam'lul format de ve,icul i %asa er constituie un re%licon. :tructura lui tre'uie s cu%rind n linii mari : - %romotorul $ secven esenial %entru re larea +@" %olimera&ei i a factorilor de transcri%ie ce tre'uie s conin o'li atoriu cutia <"<" *cutia Eo ness), care este indis%ensa'il %entru iniierea transcri%iei. (ores%ondentul ei la %rocariote este cutia 9ri'no- *<"<"-"<8). - o%eratorul $ funcionea& ca situs de recunoatere i le are %entru un re%resor s%ecific - secvena :,ine-=al arno $ re%re&int n esen locul de le are la ri'o&om - ena marBer $ %entru identificare - ena de structur H) Modaliti de transfectare a =@"-ului recom'inant n celule : a) <ransformarea enetic $ este transferul de informaie enetic reali&at %rin intermediul unei fraciuni de =@" eli'erat %rin e>tracie c,imic sau li& celular, dintr-o celul donor. =u% %trunderea lor n celula a&d, moleculele

de =@" e>o en se multi%lic datorit sistemului %ro%riu de re%licare. (a urmare a re%licrii i %rin am%lificare, fiecare molecul recom'inat d natere unei clone moleculare, care %ro%a un se ment determinat de =@". ') Flectrotransformarea $ se 'a&ea& %e fenomenul electro%orrii. Flectro%orarea re%re&int o'inerea unei %ermea'ili&ri reversi'ile a celulelor %rin utili&area unui c!m% electric. "tunci c!nd celula este e>%us unui c!m% electric, com%onentele mem'ranei se %olari&ea&, iar mem'rana e traversat de un %otenial electric) dac diferena de %otenial de%ete o valoare %ra , mem'rana se ru%e n anumite &one, iar celula devine %ermea'il %entru molecule e>o ene. c) Microinjecia $ const n introducerea enei de interes n %ronucleul mascul al ovului fecundat, cu ajutorul unei micro%i%ete cu v!rf fin de sticl) se %refer %ronucleul mascul %entru c este mai mare i situat s%re %eriferia celulei. d) Metoda 'iolistic $ const n 'om'ardarea celulelor int cu %articule aco%erite cu =@". W8loanele. sunt re%re&entate de micro%roiectile */ ^m) de tun sten sau aur %e care sunt de%use molecule de =@" %reci%itate cu (a(l#. 9articulele sunt introduse ntr-un dis%o&itiv numit W%uc. i sunt m%inse cu un macro%roiectil, do'!ndind o vite& mare) trec %rin orificiul de la nivelul dis%o&itivului de reinere i lovesc inta. 1) "%licaii ale in ineriei enetice. +eali&ri i %ers%ective <e,nolo ia =@"-ului recom'inant i-a sit a%licaii n medicin i industrie %rin o'inerea insulinei umane *,umulina), a ,ormonului de cretere *:<E), a vaccinului anti ,e%atit A %rin clonare n drojdii i a anticor%ilor monoclonali. =e asemenea, i-a sit utili&area n tera%ia enic n ca&ul cancerului *ve&i neo%la&ia), ,emofiliei A, ,i%ercolesterolemiei familiale, :I=". 3n a ronomie, se vi&ea& o'inerea unor %lante trans enice re&istente la atacul unor duntori, re&istente la er'icide, %lante trans enice cu modificri ale culorii florilor, ce %roduc fructe re&istente la nmuiere i m'tr!nire sau ca%a'ile s sinteti&e&e meta'olii secundari n cantiti mari. (ele mai im%ortante a%licaii ale in ineriei enetice au fost n anali&a enomului uman *Euman 8enome 9roject) folosind clonarea %o&iional a unor ene %entru secvenierea =@" * enetica invers), n te,nicile curente de dia nostic molecular : cartarea cromo&omial, 9(+, :out,ern, @ort,ern 'lottin , 5I:E *fluorescence in situ ,i'ridi&ation), (I:E *c,romo enic in situ ,i'ridi&ation), %recum i n metode de detecie ra%id a mutaiilor n ene necunoscute : anali&a %olimorfismului conformaiei monocatenelor, anali&a ,eterodu%le>urilor =@", clivarea c,imic a m%erec,erilor reite. 9re&entarea n detaliu a acestor te,nici ns, de%ete o'iectivul ca%itolului de fa.