Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar

FENOMENE DE TRANSPORT PRIN MEMBRANA CELULAR

Structura i funciile membranei celulare
Organismele vii sunt alctuite dintr-un numr foarte mare de compartimente fluide
interdependente, mrginite de membrane plasmatice. Membranele celulare sunt structuri
planare cu grosimi moleculare cuprinse ntre 6 i 10 nm (1 nm = 10
-9
m) care ndeplinesc
cel puin dou funcii dinamice eseniale, ele neputnd fi privite ca nite pelicule pasive
care delimiteaz dou medii care au caracteristici fizico-chimice diferite (lichidul interstiial
i citoplasma).
Prima funcie a membranei celulare este de a mpiedica micarea liber a
particulelor ntre dou compartimente adiacente (lichidul interstiial i citoplasma), prin
urmare membrana are rolul unei bariere fizice active. Lichidul interstiial i citoplasma sunt
sisteme disperse avnd ca solvent apa, iar ca faze dispersate electrolii (ioni de Na, K,
Cl, Ca, Mg), macromolecule (de ex. proteinele), organite intracelulare (de ex.
mitocondriile) i molecule polare mici, n concentraii diferite. Lichidul interstiial i
citoplasma au aceeai osmolaritate de aproximativ 300 mOsM/l, fiind deci, lichide
izotonice.
Fiind semipermeabile i selective, membranele celulare ndeplinesc i o a doua
funcie foarte important i anume reglarea volumului i a compoziiei mediului
intracelular. Aceast reglare asigur meninerea la valori constante a compoziiei i
volumului intra- i extracelular, n ciuda fluctuaiilor din mediul extern.
Structura membranei celulare a fost studiat prin microscopie electronic, difracie
de raze X i recent, vizualizat cu ajutorul microscopiei de for atomic.


Fig. 1 Structura membranei celulare conform modelului mozaicului fluid proteolipidic

Principalii constitueni ai membranelor biologice sunt lipidele i proteinele, conform
modelului mozaicului fluid proteolipidic (Fig. 1) al lui Nicholson i Singer elaborat n
1972: membrana este format dintr-un bistrat lipidic, n care sunt inserate proteine i
glicoproteine. Acest model presupune distribuia uniform a diferitelor tipuri de lipide n
bistrat, lucru care a fost infirmat n ultimii ani. Simon si Ikonen au demonstrat n 1987
existena aa numitelor microdomenii lipidice (lipid rafts) de colesterol i sfingomielina
care nu sunt solubile n detergeni nonionici, adic prezena unor insule membranare,
lipidele nedistribuindu-se uniform pentru a forma bistratul lipidic.

Lipidele
Sunt molecule insolubile n ap i uor solubile n solveni organici, constituind
aproximativ 50% din masa membranelor celulelor animale, avnd o densitate de
aproximativ 510
6
lipide / 1 m
2
arie de membran. Lipidele formeaz matricea pentru
fixarea proteinelor, dar ndeplinesc i alte funcii.
1
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
Lipidele sunt fie amfifile, adic prezint capt polar (extremitate polar care
interacioneaz puternic cu apa) i una sau mai multe catene alifatice puternic hidrofobe
(formate din dou lanuri de hidrocarburi numite i cozi hidrofobe) (Fig. 2).

Fig. 2 Moleculele lipidice sunt amfifile

Aceast conformaie influeneaz mpachetarea i micarea respectivei molecule
lipidice n planul lateral al membranei. Capetele polare ale moleculelor amfifile au radicali
fosfat i sunt fie ionice fie neutre, acestea din urm au o distribuie asimetric a sarcinii
electrice determinnd orientarea n cmpul electric sau magnetic.
Cele mai importante clase de lipide ntlnite n constituirea bistratul lipidic sunt:
fosfolipidele, glicolipidele i colesterolul.
Fosfolipidele sunt derivai ai glicerolului (alcool simplu) sau ai sfingosinei (alcool
complex) (Fig. 3). Exist fosfolipide care conin colin: fosfatidilcolina, sfingomielina sau
care nu conin colin: fosfatidiletanolamina, fosfatidilserina, fosfatidilinositol etc. Una dintre
cele dou cozi hidrofobe ale fosfolipidelor se prezint sub forma unui lan drept de acizi
grai saturai, iar cealalt prezint o mic bucl datorit unei legturi duble cis nesaturate.
Fosfolipidele sunt asimetric distribuite n bistrat, astfel, pe partea interstiial a
membranei se afla fosfaditilcolina i sfingomielina, iar pe partea citoplasmatic a
membranei se afla fosfatidiletanolamina i fosfatidilserina care are i sarcina electric
negativ.
Glicolipidele conin la captul polar molecule de zahr (glucoz sau galactoz), ele
fiind ntlnite exclusiv pe suprafaa extracelular a membranelor lipidice.
Colesterolul se orienteaz n biomembrane cu gruprile hidroxil din structura
inelar steroid n vecintatea capetelor polare ale fosfolipidelor (Fig. 99) interacionnd i
imobiliznd parial gruprile hidrocarbonate din cozile fosfolipidelor, avnd ca efect
scderea fluiditii biomembranelor.

Interacia fosfolipide ap
Capetele polare ce conin gruparea fosfat interacioneaz cu moleculele polare de
ap. Deoarece cozile moleculelor amfifile sunt hidrofobe, interaciunea cu moleculele de
ap este mai slab dect interaciunea dintre moleculele de ap, din acest motiv, la
contactul cu apa, cozile hidrofobe sunt eliminate din contactul cu aceasta.
n funcie de concentraia fosfolipidelor n ap, se pot realiza trei tipuri de structuri
(Fig. 4):
- monostrat lipidic pentru concentraii mici de fosfolipide; prin mprtierea unei soluii de
lipide pe o faz apoas se formeaz spontan un monostrat la interfaa aer/ap unde
capetele polare ale lipidelor sunt orientate ctre ap, iar cozile hidrofobe ctre aer; astfel,
2
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
lipidele sunt surfactani (au proprietatea de a scdea coeficientul de tensiune superficial
al apei)


Fig. 3 Clasificarea lipidelor membranare n funcie de structura lor (Structure-based classification of
membrane lipids Expert Reviews in Molecular Medicine 2002 Cambridge University Press)

- micele, cnd coninutul de lipide al amestecului este mult mai mare catenele alifatice se
vor orienta ctre interior, iar capetele polare vin n contact cu faza apoas
- bistraturi, la concentraie foarte mare de fosfolipid, capetele polare vin n contact cu
faza apoas, iar catenele alifatice sunt mpachetate paralel una cu alta; miezul lipidic fiind
hidrofob este exclus din faza apoas, iar bistraturile lipidice se nchid spontan formnd
vezicule stabile.
3
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar

Fig. 4 Organizarea spontan n ap a moleculelor lipidice n funcie de concentraie




Fig. 5 La temperatura la care se desfoar procesele biologice, bistratul lipidic se comport ca o structur
dinamic

Bistratul lipidic este o structur dinamic, prezentnd fluiditate: moleculele lipidice
prezint micri de translaie n stratul n care se afl (difuzie lateral), rotaie n jurul axei
proprii, rotaie descriind o suprafa conic, flexie, basculare dintr-un strat lipidic n cellalt
(Fig. 5).

Experimentul Gorter Grendel
n 1925, Gorter i Grendel (iniiatorii modelului de bistrat al membranei plasmatice)
au emis ipoteza c dac membrana plasmatic este bistrat, atunci, suprafaa ei trebuie s
fie jumtate din cea ocupat de totalitatea lipidelor sale ntr-un monostrat. Pentru a testa
aceast ipotez ei au msurat suprafaa eritrocitelor recoltate de la diferite mamifere la
microscop, apoi au extras lipidele din membrana eritrocitelor, au mprtiat lipidele la
suprafaa aer/soluie salin i au msurat aria monostratului obinut. Prin compararea
celor dou tipuri de msurtori s-a obinut raportul de aproximativ 2:1 pentru diferitele
celule roii, confirmnd astfel modelul de bistrat al membranei plasmatice.

Proteinele membranare
Proteinele sunt macromolecule care constituie elemente eseniale pentru toate
procesele biologice. Concentraia proteinelor membranare variaz ntre 20% (mielina, de
exemplu) i 75% (n membrana mitocondrilor) sau chiar 80% (n membrana
microorganismului Halobacterium halobium, coninnd bacteriorodospin care este un
pigment fotosensibil).
Proteinele reprezint elementul activ al membranei, fiind structuri organizate de
baz n desfurarea urmtoarelor procese biologice:
- fenomene de transport (canalele i transportorii care contribuie la transportul ionilor i al
moleculelor mici sunt proteinele specifice)
- cataliza enzimatic (enzimele, n majoritatea cazurilor, sunt structuri proteice, care
mresc vitezele de reacie ale proceselor desfurate in vivo de ordinul milioanelor)
- micarea coordonat (de exemplu, actina i miozina sunt structuri proteice specifice
responsabile pentru existena micrii coordonate)
4
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
- suport mecanic (colagenul este o protein esenial n structura pielii, a esuturilor
osoase i a tendoanelor)
- imunoprotecie (anticorpii sunt de asemenea proteine extrem de specializate cu rol n
recunoaterea organismelor strine)
Varietatea lor este mult mai mare dect a lipidelor fiind determinat de diversitatea
funciilor lor.
n funcie de modul n care se insereaz n membran, proteinele (Fig. 6) sunt:
a) proteine intrinseci (integrale) care au urmtoarele caracteristici:
- traverseaz membrana celular o dat (glicoforina) sau de mai multe ori (exemplu:
proteinele transportoare, pompe ionice constituite din mai multe helixuri)


Fig.6 Tipuri de proteine membranare

- pot fi extrase prin tratare cu detergeni
- sunt implicate n procesele de transport
b) proteine extrinseci (periferice)
- ptrund n membran pe o anumit distan, pe una din cele dou fee, sau sunt ataate
la suprafaa membranei (receptorii membranari, proteine cu rol imunologic etc.)
- pot fi ndeprtate prin splare ori prin tratare cu soluii cu trie ionic sczut
- sunt implicate n transmiterea informaiei n interiorul celulei

Fluiditatea membranelor plasmatice
La temperatura la care se desfoar procesele biologice, membrana are
proprieti fizice ce o apropie mai mult de starea de agregare fluid, aadar, dispunnd de
o mare libertate, att lipidele ct i proteinele membranare pot executa diferite micri.
Aceste micri sunt datorate agitaiei termice proprii, precum i ciocnirilor cu
moleculele cu care vin n contact, ceea ce permite realizarea reaciilor enzimatice.
Proteinele pot executa micri de translaie lateral prin bistrat, precum i de rotaie n
jurul unei axe perpendiculare pe bistratul lipidic. Spre deosebire de lipide care se pot
mica liber n bistrat, micarea proteinelor este mai restrictiv, fiind condiionat de
interaciunea cu alte proteine. n orice moment o fraciune nsemnat a lipidelor
membranare este adiacent proteinelor, dar exist un permanent schimb ntre lipidele
limitrofe i cele din restul stratului lipidic. Diversele tipuri de lipide au afinitate diferit fa
de proteine, aadar vor exista diferene ntre compoziia general a bistratului i a pturii
adiacente a proteinelor.
Fluiditatea membranar depinde de compoziia acesteia. Cnd membranele
plasmatice sunt alctuite din fosfolipide nesaturate sunt mult mai permeabile pentru
substanele liposolubile. Acest lucru poate fi explicat prin existena legturilor duble ale
catenelor alifatice din fosfolipidele nesaturate, legturi duble care mpiedic rotirea
catenelor conducnd la imposibilitatea mpachetrii strnse a acestor catene. Prin urmare,
interacia dintre catene este mai slab i fluiditatea membranei crete. Se poate astfel
explica de ce substanele lipidice difuzeaz mai repede prin membrane mai fluide.
Fluiditatea membranelor biologice depinde i de cantitatea de colesterol din membran.
5
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
Structural, colesterolul este situat alturi de capetele polare determinnd extinderea
catenelor alifatice n aceast zon (Fig. 7).



Fig.7 Colesterolul n bistraturile lipidice

Rigiditatea inelului colesterolului limiteaz micarea natural a catenelor alifatice
nvecinate, partea dinspre exterior a moleculei lipidice devenind mai puin flexibil,
creterea concentraiei de colesterol din membran determinnd scderea fluiditii
membranare. Acest efect al colesterolului are un anumit rol i n natur. De exemplu,
unele antibiotice formatoare de canal (Nystatinul, de exemplu) opereaz numai n
membrane ce conin colesterol, probabil c rigiditatea membranar indus de colesterol
determin o stabilitatea mai mare a porilor. Pe de alt parte, colesterolul descrete
permeabilitatea biomembranelor pentru moleculele biosolubile mici, conducnd la
creterea stabilitii mecanice a bistratului lipidic. S-a constatat c membrana celulelor
crora le-a fost suprimat genetic capacitatea de a sintetiza colesterol sunt foarte fragile
din punct de vedere mecanic, prezena colesterolului fiind absolut necesar supravieuirii
celulelor respective.

Funciile membranei celulare
n primul rnd, membrana asigur meninerea caracteristicilor fizico-chimice diferite
ale celor dou compartimente pe care le separ. Membrana reprezint o zona de
comunicare controlat ntre cele dou compartimente, n ambele sensuri prin:
1. Transport de substan prin membrana intact (molecule, ioni i ap) sau prin
ruperea membranei urmat de refacerea acesteia datorit plasticitii ei excepionale.
2. Traducere i transfer de informaie adus de diferii stimuli (mecanici, electrici,
electromagnetici, chimici, termici etc.) prin receptorii specifici pe care membrana i conine.
3. Implicare n funciile celulare datorit enzimelor i complexelor enzimatice pe care le
conine: replicarea ADN, biosinteza proteinelor, bioenergetic celular, rspuns hormonal.

Transportul de substan prin membran se face prin macrotransport dac
substana transportat este n stare solid sau lichid (formele de macrotransport fiind
fagocitoza i pinocitoza) i prin microtransport care poate fi pasiv sau activ.

Macrotransportul
n procesul de fagocitoz celula nglobeaz particule de substan solid,
nvluindu-le anterior cu nite prelungiri citoplasmatice numite pseudopode, prelungiri
care fuzioneaz apoi n spatele acestor particule.
La protozoare (la amoebe de exemplu) fagocitoza este procesul prin care celula se
hrnete. La celulele mai dezvoltate, acest mecanism servete altor scopuri i anume:
macrofagele i leucocitele nghit fragmente celulare i intrui.
6
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
Prin pinocitoz, lichidele, dispersate n picturi fine, i macromoleculele sunt
introduse n celul sau scoase din aceasta, dup ce n prealabil au fost nvelite ntr-un
bistrat lipidic devenind vezicule. Veziculele fuzioneaz cu membrane celular i pot fi
transportate dintr-o parte ntr-alta a membranei. Expulzarea coninutului lichid al veziculei
are loc ca efect al forelor de tensiune superficial
Formele pinocitozei sunt:
- endocitoza (ptrunderea in interiorul celulei a veziculei, urmat de expulzarea
coninutului acesteia).
- transcitoza (vezicula traverseaz celula, fr a se sparge, Fig. 8) are loc cu precdere
n celulele endoteliului capilar, facilitnd trecerea proteinelor plasmatice din snge ctre
spaiul extravascular.


Fig. 8 Transcitoza

- exocitoz (expulzarea de ctre celul a unei vezicule care, de exemplu, conine
substane pe care celula este incapabil de a le utiliza). Fenomenele de exocitoz sunt
frecvente n terminaiile nervoase i n celulele secretorii.

Microtransportul
Transportul pasiv
Prin transport pasiv moleculele i ionii se deplaseaz n sensul gradientului
electrochimic sau de presiune fr consum de energie metabolic, sistemul avnd
tendina de a ajunge la echilibru termodinamic. Gradientul electrochimic este o for
termodinamic productoare de flux i reprezint rezultatul unor procese desfurate cu
consum energetic. n timpul transportului, moleculele i ionii utilizeaz energia micrilor
de agitaie termic i cea derivat din atracia sau respingerea electrostatic.
Un anumit tip de molecule aflate ntr-o soluie nmagazineaz o energie chimic
sub form de potenial chimic care se poate exprima prin relaia
c
c
RT
0
0
ln + =
unde
0
reprezint potenialul standard (potenialul chimic al unui solvit aflat ntr-o
concentraie egal cu unitatea, la 25
o
C), R este constanta universal a gazelor, iar T este
temperatura termodinamic.
n cazul n care solvitul este un electrolit disociat, pe lng energia chimic a ionilor
si exist i energia electric a acestora exprimat prin relaia
zFE
unde este numrul de echivalent-gram de ioni de un anumit tip, z este valena ionilor, F
este numrul lui Faraday (96400 C/eq), V este potenialul electric al soluiei.
Prin urmare, potenialul electrochimic al unei specii de ion n soluie va fi dat de
suma celor dou energii prin expresia:
W = ( + zFV)
7
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
Considernd c de o parte i de alta a membranei celulare avem o anumit specie
ionic n concentraii c
1
= c
in
, c
2
= c
ex
, cu potenialele electrice ale soluiilor V
1
= V
in
,
V
2
= V
ex
obinem:
( )
ex in
ex
in
ex in
V V zF
c
c
RT W W W + = = ln

Deosebim dou cazuri:
- W > 0 - ionii tind s prseasc celula i se ntmpl acest fenomen dac celula este
permeabil pentru acei ioni.
- W < 0 - ionii tind s ptrund n celul, dac membrana este permeabil pentru acetia.
Transportul pasiv al unei specii ionice nceteaz la echilibru, adic n momentul n
care potenialele electrochimice ale ionului n celul i n afara ei devin egale, adic pentru
W = 0:

= =
erior
exterior
ex in
c
c
zF
RT
V V E
int
ln

ecuaia Nernst
Folosind relaia lui Nernst se poate calcula diferena de potenial electric de o parte
i de alta a membranei a unei specii ionice n condiiile n care se cunosc concentraiile
ionului, la echilibru.

Exist trei tipuri de transport pasiv: difuzia simpl, difuzia facilitat i difuzia prin
canale i pori.
Difuzia simpl se produce prin dizolvarea speciei moleculare transportate n
membran. Datorit structurii membranei de bistrat lipidic, zona intern fiind hidrofob, o
particul, pentru a trece de pe o fa a membranei pe cealalt, trebuie s strbat o zon
hidrofil i s ptrund n zona hidrofob. De aici rezult ca mecanismele de difuzie sunt
diferite pentru particulele hidrofile (ioni i molecule polare) i particulele hidrofobe
(nepolare), respective particulele hidrosolubile i liposolubile.
Solubilitatea unei substane este diferit n mediul apos i n membran, prin
urmare, difuzia simpl depinde de coeficientul de permeabilitate al membranei (P vezi
cursul de sisteme disperse) dar i de caracteristicile particulei, adic de coeficientul de
partiie ().
S vedem care sunt particulele care pot traversa membrana prin difuzie simpl. Un
ion n mediu apos formeaz un sistem stabil cu acesta datorit interaciunii cu moleculele
polare de ap, i de aceea pentru a-l transporta n mediul dielectric al bistratului lipidic
este nevoie de un lucru mecanic. Prin urmare, simpla difuzie a ionilor prin bistrat este
improbabil, trecerea ionilor prin membran fcndu-se prin mecanisme specializate care
nltura bariera energetic.
Macroionii nu pot difuza prin membrana celular datorit att sarcinii electrice ct i
dimensiunii lor mari, acest lucru avnd o importan deosebit n stabilirea diferenei de
potenial dintre feele membranei.
Moleculele hidrofobe pot traversa membrana, permeabilitatea membranei pentru
acestea fiind cu att mai mare cu ct dimensiunea particulei este mai mic, deoarece
bistratul lipidic are o structura destul de compact.
n concluzie, numai moleculele mici nepolare, moleculele hidrofobe i gazele pot
traversa membrana prin difuzie simpl.

Difuzia facilitat
Moleculele hidrofile mari, cum sunt muli factori nutritivi necesari celulei, precum i
unii ioni traverseaz membrana prin difuzie facilitat, utiliznd molecule transportoare
8
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
existente n membran sau introduse artificial n aceasta. Asemenea molecule
transportoare au o anumit specificitate, recunoscnd specia molecular sau ionic pe
care o transport. Exist transportori pentru glucoz, colin, pentru diferii ioni (ionofori).


Fig. 9 Exemplu de difuzie facilitat: difuzia facilitata a gucozei (dupa Baldwin & Lienhard, Trends
Biochem. Sci. 6:210, 1981)

Transportorii sunt proteine att de specializate nct pot deosebi speciile levogire
de cele dextrogire. Fiind vorba despre o form de transport pasiv, sensul de aciune al
transportorilor n difuzia facilitat este sensul gradientului electrochimic.
Molecula transportoare, cu rol enzimatic, se poate gsi n dou stri
conformaionale. n Fig. 9 este figurat transportul facilitat al moleculei de glucoz. Se
poate observa cum molecula de glucoza, numit substrat n aceast situaie, se leag pe
una din feele membranei ntr-un anumit loc de legare numit situs. Se produce n urma
legrii o modificare conformaional i situsul de legare este expus prii opuse, simultan
cu scderea afinitii transportorului pentru glucoz i eliberarea acestei molecule de
partea cealalt a membranei. Prin eliberare se revine la conformaia iniial i ciclul se
repet.

Difuzia prin canale ionice
Substanele ionizate nefiind liposolubile, difuzia lor prin membran se poate face
prin structuri proteice specializate care strbat membrana pe toat grosimea ei i creeaz
ci de trecere pentru ioni, formnd canale sau pori. Noiunea de por este folosit pentru
structurile neselective, fcnd o discriminare doar pe baza diametrului particulei. Cu
precdere, prin pori trece apa, caz n care acetia se numesc porine. Ionii au n jurul lor o
zona de hidratare, din care cauz au diametrul prea mare pentru pori.
Canalele ionice sunt proteine specializate care strbat membrana lipidic celular,
permind astfel trecerea substanelor neliposolubile. Prin canale ionii pot s treac n
ambele sensuri, dar transportul are loc n sensul gradientului electrochimic. Spre
deosebire de pori, canalele ionice sunt structuri selective. Eficacitatea transportului prin
canale este foarte mare, printr-un singur canal putnd trece 10
6
-10
8
ioni/s.
n Fig. 10 este reprezentat schematic structura unui canal ionic. Filtrul recunoate
un anumit tip de ion i l las s treac n vestibulul. Senzorul primete informaia din
exterior, fie din partea unei molecule receptoare, fie direct de la un semnal electric (acesta
este cazul canalului din Fig. 10), i, dac informaia este corespunztoare, comand
9
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
deschiderea porii permind ionului s intre sau s ias din celul, mpins de potenialul
su electro-chimic.
Canalul poate fi nchis sau deschis printr-o modificare conformaional a proteinei
canal comandat printr-un mecanism specific electric, chimic sau prin alte mecanisme.
Fiecare tip de canal poate fi blocat specific de anumite toxine: tetrodotoxina inhib
funcionarea canalului de Na
+
din membrana axonal, tetraetilamoniul blocheaz canalul
de K
+
). Blocanii specifici permit studierea proprietilor canalelor sau identificarea
proteinelor canal.
Canalul ionic este caracterizat de un parametru electric numit conductan G, care
reprezint inversul rezistenei electrice R. Unitatea de msur a conductanei este
Siemens-ul (S). Din punct de vedere biologic, conductana canalului reprezint
echivalentul electric al permeabilitii acesteia pentru un anumit tip de ion. Se poate
aprecia conductana unei poriuni de membran ca fiind dat de produsul dintre
conductana unui canal izolat i densitatea canalelor deschise, deoarece conductana
canalului deschis este constant. Ordinul de mrime al conductanei unui canal ionic este
pS (1 picoSiemens = 10
-12
S).


Fig. 10 Reprezentarea schematic a canalului membranar

Exist substane care formeaz n jurul ionului o structur hidrofob, permindu-i
acestuia difuzia prin bistrat. O astfel de substan care, inclus n membrana celular,
permite translocarea ionilor de pe o fa pe cealalt se numete ionofor. Ionoforii pot
forma canale prin membran sau pot aciona ca nite molecule transportoare. De
exemplu, valinomicina (Fig. 11) este un ionofor care poate ncorpora ionii de K
+
, forndu-i
s prseasc prin membran celula bacterian, provocnd moartea acesteia, acionnd
astfel ca un antibiotic.

Fig. 11 Valinomicina este un ionofor care face ca ionii de K
+
s ias din celula bacterian, provocndu-i
moartea

Din studiul comparativ al transportului pasiv prin difuzie facilitat i al transportului
prin canale rezult urmtoarele:
- moleculele transportoare au o specificitate mai mare pentru moleculele sau ionii
transportai dect canalele, moleculele transportoare putnd distinge ntre diferiii izomeri
ai unei molecule
- moleculele transportoare au o vitez mult mai mic de lucru dect a canalelor ionice,
permind trecerea doar a 1000 de ioni pe secund, acest lucru fiind compensat de
numrul lor foarte mare
- transportorii pot participa i la transportul activ
10
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
- canalele au o foarte mare vitez de lucru, pn la 10 milioane de ioni pe secund motiv
pentru care canalele sunt cile preferate pentru transportul ionilor atunci cnd sunt
necesare variaii brute ale compoziiei i concentraiei ionice (n excitaia celular, de
exemplu).


Fig. 12 Comportamentul diferitelor tipuri de molecule n apropierea membranei lipidice

n concluzie, membrana celular poate fi traversat prin transport pasiv de
moleculele mici hidrofobe prin difuzie simpl, de ioni prin canale i difuzie facilitat i de
moleculele hidrofile mari prin difuzie facilitat (Fig. 12).


Fig. 13 Difuzia apei printr-un por

Transportul apei care intervine esenial n toate procesele biologice se realizeaz
att prin difuzie simpl i osmoz ct i prin canale (pori apoi (Fig. 13)), permeabilitatea
membranei pentru ap fiind foarte mare. Mecanismele de transport al apei sunt foarte
complexe i incomplet elucidate, un rol foarte important avndu-l diferena de presiune
osmotic.

Canale lipidice
Dei, n general, membranele lipidice sunt privite ca izolatori, practic impermeabile
pentru ioni i pentru moleculele mari ncrcate electric, n apropierea tranziiei de faz,
lipidele nu sunt inerte ci devin permeabile pentru molecule mici, ioni i ap (T. Heimburg,
Review: Lipid Ion Channels, arXiv:1001.2524v1[physics.bio-path], 2010), permeabilitatea
fiind exprimat prin cureni cuantificabili, porii care apar avnd dimensiuni de ordinul nm.
11
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
Curenii tipici care apar ca urmare a permeabilizrii bistratului lipidic n condiii apropiate
de tranziia de faz au amplitudini de 10 pA pentru diferene de potenial de 100 mV, cu
timpi de via de ordinul a 10 ms, valori comparabile cu cele obinute la studiul canalelor
proteice tipice. Apariia lor depinde de temperatur, tensiunea mecanic lateral, prezena
anestezicelor sau a neurotransmitatorilor, pH, concentraia de calciu, diferena de
potenial, precum i de alte variabile termodinamice.
Acest lucru este de o importan deosebit mai ales c membranele biologice se
afl ntr-o stare puin deasupra (cu aproximativ 10-15
o
C) tranziiei de faz, ceea ce
nseamn c n studiile electrofiziologice pe proteine-canal inserate n membrane naturale
sau artificiale este posibil ca decelarea ntre curenii prin canalele proteice i prin porii
aparui n zonele lipidice s fie foarte greu de realizat.

Transportul activ
Este o form de transport care necesit consum de energie metabolic (a unei
reacii chimice, de exemplu). Se realizeaz n sensul invers gradientului de potenial
electrochimic. Se disting dou forme de transport activ: transportul activ primar i
transportul activ secundar.
Transportul activ primar se realizeaz folosind proteine integrale numite pompe
ionice membranare. In urma transportului activ se stabilete gradientul de concentraie n
sensul cruia se desfoar transportul pasiv. Pompa leag ionul pe o parte a membranei
ntr-o anumit zon activ numit situs de legare i, datorit unor modificri
conformaionale care intervin n urma legrii ionului, l transfer pe cealalt parte unde l
elibereaz. Pompa folosete, de obicei, hidroliza ATP n ADP i P.
Exemplul cel mai cunoscut este ATP-aza Na
+
/K
+
care transloc 3 ioni de Na
+
din
interiorul celulei, unde concentraia acestuia este mic, spre mediul extracelular i 2 ioni
de K
+
din exteriorul celulei n interiorul acesteia (Fig. 14).




Fig. 14 Pompa Na/K

Deoarece rezultatul unui ciclu este un transfer net de sarcin pozitiv n exteriorul
celulei, spunem c pompa este electrogenic. De asemenea, pompa de Na
+
/K
+
asigur
prin funcionarea ei osmolaritatea egal pe ambele fee ale membranei.

12
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar


Fig.15 Schema Albert Post a etapelor funcionrii ATP-azei Na
+
/K
+



n Fig. 15 este reprezentat succesiunea etapelor ATP-azei de Na+/K+. Aceasta
este schema Albert Post i are urmtoarele etape:
1. enzima ia Na
+
pe partea citoplasmatic i leag ATP aceast legare este posibil
numai n prezena ionilor Mg
++

2. ATP este hidrolizat, complexul fosforilat sufer o tranziie conformaional, urmat de
scderea afinitii pentru Na
+
i creterea afinitii pentru K
+
3. ionii de Na
+
se desprind i se leag ionii de K
+

4. legarea ionilor de K+ determin defosforilarea
5. n urma defosforilrii, proteina pierde afinitatea pentru K
+
, acetia desprinzndu-se
6. enzima revine la conformaia iniial i ciclul se reia.

Exist i alte pompe n membrana celular, cum ar fi:
- pompa de H
+
, K
+
din mucoasa gastric (din membrana plasmatic a celulelor parietale)
(Fig. 16), tot o ATP-az a crei structur este asemntoare cu cea a Na-K-ATP-azei.

Fig. 16 ATP-aza H+/K+ din mucoasa gastric

Aceast pomp se gsete n veziculele intracelulare. n urma unui semnal hormonal,
veziculele fuzioneaz cu membrana, n care se insereaz pompele. Se pot obine
diferene de pH de 6,6, corespunztoare unui raport de concentraie a protonilor de 4.10
6
.
- pompa de Ca
++
din reticulul sarcoplasmic i din membrana plasmatic

13
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar

Fig. 17 Mecanismul prin care se menine un pH sczut n lumenul stomacal

- pompa protonic bacteriorodopsina (Fig. 18) care, sub aciunea luminii, pompeaz
protoni din interiorul n exteriorul celulei.

Fig. 18 Bacteriorodopsina pompeaz protoni mpotriva gradientului lor electrochimic, sub aciunea luminii


Transportul activ secundar
Prin transport activ secundar speciile transportate ptrund ntr-un compartiment
(extracelular sau intracelular) mpotriva gradientului lor electrochimic, asociindu-se cu
molecule care se deplaseaz n sensul gradientului de concentraie. Specia transportat
ct i molecula care efectueaz transport pasiv se leag de aceeai molecul
transportoare.
Transportul activ secundar utilizeaz transportorii ntlnii la difuzia facilitat,
acetia putnd lega substratele transportate n aceeai stare conformaional sau n stri
conformaionale diferite (Fig. 19). Dac ambele specii moleculare transportate se leag de
aceeai parte a proteinei, transportul poart denumirea de simport sau co-transport, iar
transportorul i poate modifica starea conformaional doar dup ce ambele substrate au
ajuns n situsurile de legare. Cazul n care speciile transportate se leag pe cele dou
pri ale transportorului, care se va afla astfel n stri conformaionale diferite, se numete
antiport sau contra-transport.


14
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
Fig. 19 Comparaie ntre formele de transport activ: primar i secundar

ntlnim simport la ptrunderea glucozei n celulele mucoasei intestinale; ea se
asociaz cu Na
+
care intr pasiv. Ionii de Na
+
sunt eliminai activ prin transport primar, prin
ATP-aza de Na
+
/K
+
, iar glucoza rmne.

Fig. 20 Simportul glucoza Na
+
din celulele mucoasei intestinale
i n acest caz, avem de-a face cu un transport electrogenic deoarece rezultatul net
const n transportul unei sarcini pozitive dintr-o parte a membranei n cealalt.
Un exemplu de antiport este cel de 3Na
+
/Ca
2+
, de la nivelul muchiului cardiac,
care asigur o concentraie sczut a ionilor de calciu n interiorul celulei.
Energia pe care o folosete antiportul este furnizat de transportul activ al ionilor
de sodiu din mediul extracelular ctre interiorul celulei.

Fig. 21 Antiportul de 3Na
+
/Ca
2+
menine sczut concentraia ionilor de calciu n interiorul celulelor

Transportul este electrogenic, deoarece avem sarcin net (+1) translocat prin
membrana celular.

Traducerea i transferul de informaie prin membrana celular
Pentru a menine parametrii termodinamici n limite fiziologice i pentru a deprta
sistemele biologice de strile de echilibru termodinamic este nevoie ca ntre diferitele
compartimente ale unui organism viu s existe transfer de informaie.
Receptorii membranari din membrana plasmatic celular sunt proteine intrinseci
cu funcie enzimatic care au capacitatea de a recunoate o molecul semnal din mediul
extracelular, numit mesager prim, i de a interaciona cu ea rapid i reversibil. Molecula
purttoare de informaie se numete ligand specific i se poate lega de un anumit tip de
receptor. n mod obinuit, moleculele semnal nu ptrund n interiorul celulei, rolul lor fiind
doar de a transmite prin diferite mecanisme membranare informaia pe care o poart.
Mesagerii primi pot fi molecule dar i factori fizico-chimici. Printre moleculele cu rol
de mesager prim se ntlnesc: mediatorii chimici, hormonii polipeptidici, factori de
cretere, antigenii, medicamentele, drogurile.
n urma interaciei, celula poate sintetiza o alt molecul semnal numit mesager
secund care declaneaz rspunsul celular specific. Mesagerul secund poate fi, uneori,
chiar complexul receptor mesager prim.
15
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
Mesageri secunzi frecvent ntlnii sunt: acidul adenozin monofosforic ciclic
(c-AMP), acidul guanozin monofosforic ciclic (c-GMP), diacil glicerolul (DAG), inozitol
trifosfatul (InosP
3
).
Procesele care au loc la nivel celular sunt urmtoarele (Fig. 22): de ndat ce
ligandul s-a fixat de receptor, informaia este transmis la nivelul membranei, acest lucru
survenind de obicei, n urma modificrii conformaiei receptorului; n urma acestui proces
se declaneaz o cascad de reacii n interiorul celulei avnd ca urmare o modificare a
activitii celulare la nivelul metabolismului sau la nivelul expresiei genelor; informaia se
transmite i de-a lungul membranei celulare, prin semnale electrice sub forma de
poteniale locale i de tip tot sau nimic.


Fig. 22 Calea de transducie a unui semnal

De exemplu, membrana plasmatic a axonilor celulelor nervoase este capabil s
conduc pe distane lungi informaia sub forma unui curent electric transmembranar care
se propag de la corpul celular la extremitile sinaptice.

Etapele semnalizrii intercelulare
1. Sinteza moleculei semnal
2. Eliberarea moleculei semnal
3. Transportul moleculei semnal ctre int
4. Detecia semnalului
5. Rspunsul celular
6. Desprinderea moleculei semnal de receptor

Semnalele sunt clasificate in urmtoarele categorii:
- semnale endocrine
- semnale paracrine
- semnale de contact
- semnale nervoase.
Semnalele endocrine sunt reprezentate de hormonii produi n glandele endocrine,
secretai n snge i distribuii n organism; Semnalele paracrine, generate de celule,
acioneaz local n vecintate; Semnalele de contact, necesit contactul intercelular;
Semnalele nervoase se transmit de-a lungul axonilor ctre celulele int;

n ceea ce privete clasificarea receptorilor membranari, aceasta se face dup un
criteriu bazat pe clasele funcionale de evenimente primare asociate cu legarea moleculei
semnal de receptor. Avem de-a face cu
16
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
- receptori ionotropi care sunt asociai cu canalele ionice i care chiar pot fi canale
ionice
- receptori metabotropi care pot determina sinteza mesagerilor secunzi (prin
intermediul unei proteine efectoare), pot fi protein kinaze sau pot activa o protein
kinaz

Receptorii ionotropi conin dou domenii funcionale: o zon extracelular
receptoare care leag mesagerul prim i o zon efectoare prin care comunic senzorului
canalului comanda de deschidere sau nchidere a porii. Un astfel de receptor combin
legarea transmitorului i funcionarea canalului ntr-o singur entitate molecular. De
obicei, sunt alctuii din patru sau cinci subuniti proteice individuale, care contribuie la
alctuirea canalului membranar. n urma activrii, receptorul ionotropic afecteaz direct
activitatea celulei prin deschiderea nemijlocit a unor canale ionice.
Printre receptorii ionotropi se numra receptorul de acetilcolina (Fig. 23), receptorul
acidului gamma-aminobutiric (GABA), receptorul glicinic.

Fig. 23 Receptorul nicotinic de acetilcolin

Receptorii metabotropi se numesc astfel deoarece eventuala trecere a ionilor printr-
un canal depinde de una sau mai multe etape procese metabolice. Aceti receptori nu au
canale ionice ca parte a structurii lor, dar pot afecta funcionarea unui canal prin activarea
unor molecule (proteine efectoare) numite proteine G sau prin cuplarea cu anumite
enzime. Receptorii metabotropi sunt proteine monomere care au un domeniu extracelular
care conine situsul de legare pentru neurotransmitor i un domeniu intracelular care
leag proteina G. Legarea neurotransmitorului de receptorul metabotropic activeaz
proteina G, care se disociaz de receptor i interacioneaz direct cu canalele ionice sau
leag alte proteine efectoare, cum ar fi enzimele, care determin mesagerii intracelulari s
nchid sau s deschid canalele ionice.
Aadar, receptorii metabotropi pot determina sinteza mesagerilor secunzi (prin
intermediul unei proteine efectoare), pot fi protein kinaze sau pot activa o protein kinaz.

Fig. 24 a) activarea unei protein-kinaze
17
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar

Fig. 24 b) Apariia rspunsului celular

Mesagerii secunzi sintetizai activeaz o protein kinaz citoplasmatic -influeneaz
activitatea celulei n etape:
- modificarea metabolic a celulei
- aceasta poate n final s duc la deschiderea sau nchiderea unui canal ionic ori
poate modifica o alt activitate a celulei (de exemplu transcripia unei proteine ori alt
rspuns celular specific).
Prin legarea mesagerului prim de zona receptoare, zona efectoare activeaz
adenilat-ciclaza care catalizeaz transformarea ATP n AMP-ciclic, care este chiar
mesagerul secund. Acesta, la rndul su, activeaz protein kinaza c-AMP dependent,
fcnd-o apt sa declaneze rspunsul celular. Exist posibilitatea ca n loc de c-AMP s
fie folosit c-GMP n calitate de mesager secund, caz in care n locul adenilat ciclazei avem
de-a face cu guanilat ciclaza i cu o protein kinaz c-GMP dependent.


Fig. 25

De exemplu, receptorul de insulin poate activa o tirozin kinaz, se fosforileaz alte
proteine i n final se produce rspunsul celular care poate fi creterea permeabilitii
pentru glucoz.
Exemplu: epinefrina (adrenalina), mesagerul prim, se leag de receptorul specific
(de zona receptoare a acestuia). n urma acestei legri, n urma unei modificri
conformaionale, receptorul devine apt s lege o protein G. Proteina G, alctuit din 3
subuniti notate , i , i care n stare liber leag GDP, sufer la rndul ei o
modificare conformaional n urma creia elibereaz GDP i leag GTP la subunitatea
18
Curs Biofizica MG 2010 2011 Fenomene de transport membranar
. Subunitatea se separ de subunitile i i difuzeaz pn cnd ntlnete un
efector (zona efectoare), adenilat ciclaza. Prin legare de efector acesta se activeaz i
catalizeaz transformarea ATP din celul n c-AMP (mesager secund); c-AMP
declaneaz o serie de reacii enzimatice prin care este activat enzima fosforilaz i
aceasta din urm determin transformarea glicogenului n glucoz ce este eliberat din
celul (rspunsul celular). Dup activarea efectorului, subunitatea a proteinei G, prin
hidroliza GTP devine inactiv i se recombin cu subunitile i , refcnd proteina G.
Procesul se poate relua.
Alt exemplu: ciclul biochimic al rodopsinei n excitaia vizual. Receptorul pentru
lumin, rodopsina, leag n urma fotoactivrii traductina (protein G) i, n mod analog,
traductina activeaz o protein efectoare (PDE). PDE convertete c-GMP (mesager
secund) n GMP. Prin aceast conversie se nchid canalele de Na i Ca. Celula se
hiperpolarizeaz i informaia este transmis creierului pe cile nervoase.
Mesagerul secund c-AMP poate activa o serie de protein kinaze care, la rndul lor,
determin n ultim instan eliberarea de hormoni, neurotransmitori etc.
Ali receptori folosesc drept mesageri secunzi diacil glicerolul DAG sau inozitol
trifosfatul InosP
3
(IP3) care se sintetizeaz plecnd de la fosfatidil inozitol difosfat (PIP2)
din membran.
19