Preparatul microscopic

permanent
Preparatul microscopic permanent
Reprezinta modalitatea de examinare a
unor celule , fragmente de tesut sau
organ , carora li s-au suprimat
procesele vitale prin fixare

- permite examinarea la microscopul
optic a principalelor caracteristici ale
celulelor si a modului lor de
organizare.


Preparatul microscopic permanent
Un preparat microscopic este alcatuit
din:
1. obiect de examinat subtire si
transparent
2. mediu de fixare transparent
3. lama si lamela
Preparatul microscopic permanent
Scopul realizarii unui
preparat microscopic
permanent este de a
conserva structurile
celulare si raporturile
dintre ele pe un timp
nelimitat.


Este folosit in :
- clinica
- laborator de
anatomie patologica
- medicina legala
- cercetare
- in scop didactic
Etapele obtinerii preparatului
microscopic permanent

1. Recoltare
2. Fixare si tratamente postfixare
3. Spalare
4. Includere
5. Sectionare
6. Colorare sau impregnare
7. Montare
8. Etichetare
1.RECOLTAREA
Este operatia prin care obiectul de
examinat este prelevat de la omul sau
animalul viu sau dupa sacrificarea
animalului sau de la cadavru.

Poate fi bioptica sau necroptica
Recoltarea bioptica
- se recolteaza de la om sau animalul viu
si se practica in scop diagnostic.
Se realizeaza prin :
1. raclare
2. punctie bioptica
3. aspiratie
4. interventie chirurgicala
Recoltarea necroptica
- se realizeaza dupa sacrificarea
animalului si se practica in laboratoare
in scop de cercetare sau didactic.
- recoltarea de la cadavrele umane se
practica in laboratoarele de anatomie
patologica si medicina legala in scopul
de a confrunta datele de anatomie
clinica si tanatogenetice.

Recoltarea
Conditiile unei bune recoltari:
1. cat mai aproape de momentul decesului
pentru a evita procesele de autoliza.
2. dimensiunea pieselor sa nu depaseasca 5 mm
3. calitatea instrumentelor bine ascutite
pentru a evita zdrentuirea si pierderea
paralelismului dintre planuri
4. adecvata in functie de tipul organului ; se vor
evita modificarile de volum, forma si relief.

2. FIXAREA
- etapa decisiva in obtinerea unui
preparat microscopic permanent.
- un proces fizic sau chimic prin care
sunt oprite cat mai rapid procesele
vitale celulare, pastrandu-se cu alterari
minime volumul , forma , relieful si
raporturile spatiale si moleculare .

FIXAREA
Prin fixare urmarim :
1. Conservarea tesuturilor
2. Prevenirea pierderii de constituenti
celulari
3. Cresterea diferentierii optice a
structurilor celulare
4. Marirea consistentei tesuturilor in scopul
de a facilita trecerea lor prin celelalte etape
ale tehnicii si mai ales pentru sectionare
FIXATORII
Clasificare
a. Dupa natura lor:
1. fizici
2. chimici
b. Dupa reactia pe care o au cu
proteinele solubile
1. coagulanti
2. necogulanti
FIXATORII
Fixatorii chimici:
1. simpli
2. amestecuri fixatoare

FIXATORII CHIMICI
Fixatori simpli mai des utilizati :
acetona , acid tricloracetic , formol ,
acid osmic , alcool metilic
Amestecuri fixatoare:
- introduse in practica datorita
afinitatii inegale pentru diversele
elemente structurale
Amestecuri fixatoare:
1. dupa compozitia chimica
a. apoase
b. alcoolice
2. dupa scopul urmarit
a. universale (topografice)
b. citologice

Mecanismul fixarii
1. insolubilizarea prin precipitare a
unor constituenti celulari: proteine ,
glucide , saruri minerale, lipide
2. formarea de compusi de aditie intre
fixator si unii constituenti celulari
3. coagularea proteinelor
CALITATILE UNUI BUN FIXATOR
1. patrunde bine in tesuturi
2. stabilizeaza tesuturile pastrand
nealterate caracterul si distributia
constituentilor celulari
3. nu provoaca artefacte
4. nu deformeaza tesutul
5. nu dizolva constituenti
CALITATILE UNUI BUN FIXATOR
6. distruge microorganismele
7. extrage enzimele autolitice inactivate
8. confera consistenta
9. produce diferentiere optica
10. nu-si modifica compozitia
11. ieftin, netoxic, neinflamabil, neiritant

TRATAMENTE
POSTFIXARE

1. decalcifierea
2. disocierea pieselor
3. mordansarea
4.INCLUDEREA
Este procedeul prin care se realizeaza
conditii optime care sa permita taierea
pieselor in sectiuni subtiri de ordinul
m , transparente si cu fete plane astfel
incat sa poata fi examinate la
microscop.

INCLUDEREA
Mase de incluziune :
1. Dupa modul de realizare al includerii :
a. Penetreaza celula
b. Ramane in spatiul intercelular
2.Dupa solubilitatea in apa
a. anhidre , ex. parafina , celoidina ,
paraplastul
b. apoase ,ex . gelatina , polietilenglicol
Incluziunea la parafina etape
premergatoare
a. deshidratare alcool in
concentratii crescande incepand cu 50
fiecare in 3 bai succesive.


Incluziunea la parafina etape
premergatoare
b. clarificare indepartarea
alcoolului din piesa cu ajutorul unor
reactivi numiti clarificatori, miscibili
cu parafina, care fac ca piesa sa devina
translucida. Se efectueaza cu alcool
anilic sau cu hidrocarburi benzenice
(xileni).

Incluziunea la parafina etape
premergatoare
c. impregnarea patrundere a piesei cu
parafina topita si solidificarea in bloc
prin racire pentru a oferi o consistenta
omogena.

d. turnarea blocurilor blocul inglobat
se monteaza pe un port-obiect

5. SECTIONAREA
Piesa inclusa sau inghetata se taie in felii
subtiri de ordinul micronilor cu ajutorul
unui aparat numit microtom.



5. SECTIONAREA
Sectionarea la microtomul ptr. parafina
presupune urmatorii timpi pregatitori:
1. modelarea blocului pentru sectionare
2. lipirea blocului pe portobiect
3. sectionarea propriu-zisa
4. etalarea si lipirea sectiunilor

6. COLORAREA


- se urmareste cresterea contrastului intre
elementele tisulare sau celulare prin
modificarea indicilor de refractie ai
substratului morfologic cu ajutorul
colorantilor.

Tehnica de colorare depinde de natura
fixatorului si de tesutul pe care se aplica.


7.MONTAREA

- protejarea sectiunilor fragile de
eventualele deteriorari, conservarea
coloratiei si asigurarea unui mediu optic
omogen si transparent necesar examinarii
microscopice.

Se face intre lama si lamela in diferite medii
de montare initial fluide.
MONTAREA

Mediile de montare pot fi :
1. Apoase: glicerina, sirop Apathy
2. Anhidre: balsam de Canada, colofoniu


8. ETICHETAREA

Pe fiecare lama se noteaza
- tipul celular
- sursa de recoltare
- fixatorul
- metoda de colorare
- data efectuarii