Proteine

Dr.Antonescu Angela
Proteinele sunt compui macromoleculari, respectiv
biopolimeri rezultai din policondensarea
aminoacizilor legai ntre ei prin legturi peptidice.
Diferena ntre proteine i polipeptide se face pe
baza dimensiunii moleculare, limita de delimitare
fiind stabilit arbitrar la o greutate molecular de 8 x
10 Kd. Lanurile de peptide alctuite din sub 10
resturi de aminoacizi se numesc oligopeptide, iar
cele de pn la 50 60 de resturi de aminoacizi se
numesc polipeptide. Proteinele sunt formate din sute
de resturi de aminoacizi, iar masa lor molecular
poate urca la sute de mii de daltoni.
Aminoacizii
Aminoacizii sunt unitile structurale de baz din molecula
proteinelor. Aminoacizii conin dou grupri funcionale comune
tuturor aminoacizilor: o grupare aminic i o grupare carboxilic.
Capacitatea unui aminoacid de a se condensa cu ali aminoacizi
pentru a forma peptide este dependent de propritile chimice ale
acestor dou grupri funcionale. Cea mai important proprietate a
aminoacizilor este aceea de a servi ca subuniti monomerice
pentru proteine, dar ei prezint i alte roluri importante pentru
celul. De exemplu, glutationul este o tripeptid cu funcii
importante, alte peptide mici au funcii de hormoni, sau n unele
organisme au rol de antibiotice. Acidul glutamic are rol de neuro
transmitor. Aminoacizii sunt precursorii unei variti de
biomolecule (de exemplu: hitidina pentru histamin). Unii aminacizi
sunt metabolizai i utilizai pentru producerea de glucoz
(gluconeogenez). Deoarece nu exist rezerve de aminoacizi, cu
excepia celor implicai n structura proteinelor, atunci cnd
gluconeogeneza are nevoie de aminoacizi, acetia sunt eliberai prin
decompunerea proteinelor.

Structura aminoacizilor

n proteinele tuturor speciilor procariote i
eucariote a fost identificat un set de cca 20 de
aminoacizi, marea majoritate aprinnd seriei
sterice L. Toi aminoacizii, cu excepia prolinei,
prezint aceeai strucutur general n sensul c
atomul de carbon - este legat de o grupare
COOH, de una NH
2
i de un rest R rspunztor
de proprietile diferite ale diferiilor aminoacizi.
Formula general a unui aminoacid
R
CH COO
NH
3
-
+
n toi - aminoacizii, cu excepia glicinei,
carbonul este optic activ. Izomerii posibili
aparin seriei D sau L. S-a constatat c toi
izomerii existeni n mod natural n constituia
proteinelor aparin seriei sterice L. Sarcinile
aprute n formulele aminoacizilor sunt cele care
apar la pH 6-7. Ca urmare, la pH 6-7, un
aminoacid poate s aib caracter acid sau bazic.
Clasificarea aminoacizilor

Din punct de vedere structural aminoacizii se pot clasifica astfel:
-aminoacizi alifatici
-aminoacizi hidroxilai
-aminoacizi cu sulf
-aminoacizii dicarboxilici i amidele lor
-aminoacizi aromatici
aminoacizi cu dou grupri bazicen funcie de polaritatea radicalului,
aminoacizii se clasific, astfel:
aminoacizi neutri: Gly,Ala, Ser, Cys, Thr, Asn, Gln care au radicalul polar,
dar lipsit de sarcin electric la pH=7.
aminoacizi hidrofili, cu caracter acid: Asp, Glu, Tyr care sunt aminoacizi
ncrcai negative la pH fiziologic.
aminoacizi hidrofili cu caracter bazic: Arg, Lys, His aminoacizi care la pH
fiziologic sunt ncrcai cu sarcin pozitiv.
aminoacizi hidrofobi: Val, Leu, Ile, Met, Pro, Phe, Trp







HC COOH
NH
2
2
H
3
C CH
COOH
NH
2
H
3
C CH CH COOH
CH
3
NH
2
H
3
C CH
CH
3
CH
2
CH COOH
NH
2
H
3
C CH CH COOH
NH
2
CH
CH
3
2
aminoacizi alifatici


glicina ( glicocol, Gly) alanina(Ala)




leucina (Leu)

Izoleucina (Ile)
valina(Val)
aminoacizi hidroxilai

HO CH
2
CH
COOH
NH
2

serina (Ser)
H
3
C CH CH
OH
COOH
NH
2
)
treonina (Thr)
aminoacizi cu sulf
HS CH
2 CH
COOH
NH
2
cisteina (Cys)
H
3
C S
CH
2
CH
2
CH
COOH
NH
2
metionina (Met)
aminoacizii dicarboxilici i amidele lor
HOOC CH
2
CH COOH
NH
2
Acid aspartic(Asp)
H
2
N CO CH
2
CH COOH
NH
2
Asparagina ( Asn)
HOOC CH
2
CH
2
CH COOH
NH
2
Acid glutamic (Glu)
HN CO CH
2
CH
2
CH COOH
NH
2
2
Glutamina (Gln)
aminoacizi cu dou grupri bazice
H
2
N CH
2
CH
2
CH
2
CH
2
CH COOH
NH
2
Lisina (Lys)
H
2
N C
NH CH
2
CH
2
NH
CH
2
CH COOH
NH
2
Arginina (Arg)
N NH
CH
2
CH COOH
NH
2
Histidina (His)
aminoacizi aromatici

CH
2
CH COOH
NH
2
Fenilalanina (Phe)
CH
2
CH COOH
NH
2
HO
Tirozina (Tyr)
N
CH
2
H
CH COOH
NH
2
Triptofan (Trp)
N
COOH
H
Prolina (Pro)
Proprietile aminoacizilor

Aminoacizii sunt substane solide, cristaline i au
puncte de topire sau de descompunere peste
200
0
C. Ei sunt mult mai solubili n ap dect n
solveni nepolari. n reeaua cristalin, moleculele
de aminoacizi sunt atrase prin fore
electrostatice. Dac aminoacizii ar cristaliza ntr-o
form neionic, datorit atraciei Van der Waals,
atunci ar avea puncte de topire mult mai sczute.
Toate acestea duc la concluzia c aminoacizii se
gsesc n soluii apoase i n reeaua cristalin sub
form de ioni dipolari sau amfioni.

H
2
N R COOH
HN R COO
-
3
+
Datorit caracterului lor amfoter, aminoacizii formeaz sruri att cu acizii ct i cu bazele.

HN R COO
-
+
+

H
+
HN R COOH
3
+
+
3
COO
-
R HN +H
2
O
HN
R COO
-
2
+

H
2
O
Deci, n mediu acid, aminoacizii se comport ca baze, iar n mediu bazic se
comport ca acizi.
Datorit faptului c aminoacizii posed grupri carboxilice i grupri
bazice, ei prezint proprieti datorate gruprilor carboxil i proprieti
datorate gruprii aminice precum i proprieti determinate de ambele
grupri.
Proteinele i funciile lor biologice
Proteinele sunt cele mai rspndite molecule organice din celul.
Masa molecular a proteinelor este foarte mare, dar prin hidroliz
acid toate se transform n compui organici simpli, i anume L-
aminoacizi.
Proteinele se mpart, n funcie de compoziia lor n dou clase
principale:
proteine simple
proteine conjugate
Proteinele simple sunt acelea care prin hidroliz formeaz numai
aminoacizi i nici un alt compus organic sau anorganic.
Proteinele conjugate sunt acelea care prin hidroliz pun n libertate
pe lng aminoacizi i ali compui organici sau anorganici.
Partea conjugat a proteinei, care nu este aminoacid se numete
grupare prostetic.
Tipul proteinei Gruparea prostetic Locul n care se gsesc


nucleoproteine
acizi nucleici: -ARN,
ADN
ribozomi -
virusul mozaicului
tutunului

lipoproteine
lipoproteinele
plasmatice

fosfolipide lipide membranare

glicoproteine glucide: - hexozamine --
galactoz
manoza

globuline

fosfoproteine fosfai esterificai cu
radicali ai serinei
cazeina
hemoproteine hem hemoglobina

metaloproteine metale feritina

Diversitatea funcional a proteinelor

Proteinele ndeplinesc n organism multiple funcii, dintre care amintim urmtoarele:
1.Enzimele sunt proteine ce catalizeaz diverse reacii biochimice.
Exemplu: hexokinaza, lactat dehidrogenaza
1.Proteinele de rezerv
Exemplu:
ovalbumina proteina din albuul de ou
cazeina proteina din lapte
feritina proteina de depozitare a Fe n splin
zeina proteina din semine de porumb
gliadina proteina din gru
2.Proteine de transport
Exemplu:
hemoglobina proteina ce transport oxigenul n sngele vertebratelor
hemocianina proteina ce transport oxigenul din sngele nevertebratelor
mioglobina proteina ce transport oxigenul n celulele musculare
albumina seric proteina ce transport acizii grai n snge
1-lipoproteina proteina ce transport lipidele n snge
ceruloplasmina proteina ce transport cuprul n snge

4.Proteinele contractile sunt proteine cu rol esenial n fenomenul de
contracie i n micare.
Exemplu:
actina filamentele subiri din miofibrile
miozina filamentele groase din miofibrile
dineina proteinele din cili i flageli.
n muchi, actina i miozina sunt aezate n iruri paralele, alunecnd unele pe
lng altele n timpul contraciei.
5.Proteinele cu rol de protecie n sngele vertebratelor
Exemplu:
anticorpii formeaz compleci cu proteinele strine
sistemul complement formeaz complexe cu anumite sisteme antigen-anticorp.
Fibrinogenul precursor al fibrinei n coagularea sngelui
Trombina particip la procesul de coagulare.
Unele proteine au rol de aprare sau de protecie.
Proteinele sanguine (trombina i fibrinogenul) particip la coagularea sngelui
oprind astfel pierderile de snge n sistemul vascular al vertebratelor.
Cele mai importante proteine cu rol de aprare a organismului sunt anticorpii
sau globulinele imune, care se combin cu proteinele strine sau cu alte substane
strine intrate ntmpltor n organism, neutralizndu-le.
6.Toxinele
Exemplu:
toxina din Clostridium botulinum
toxina difteriei
veninul de arpe
ricinul
gossipina
Toxinele sunt substane foarte toxice pentru organismul animalelor superioare, chiar i n cantiti
foarte mici.
7.Hormoni
Exist proteine care funcionez ca i hormoni.
Exemplu:
insulina este secretat de anumite celule specializate din pancreas i regleaz metabolismul
glucozei. Hormonul adrenocorticotrop: hormonul de cetere sau somatotropina este un hormon al glandei
hipofizare anterioare, care regleaz sinteza corticosteroizilor.
8.Proteinele structurale
Exist o clas de proteine care servesc ca i elemente structurale.
Exemplu:
proteinele din nveliul viral
glicoproteinele
- keratina
sclerotina
fibrina
colagenul
elastina
mucoproteinele
Anticorpii i rspunsul imun. Specificitatea de
specie a proteinelor.


Anticorpii sau imunoglobulinele au o importan foarte mare n
demonstrarea faptului c proteinele sunt specifice pentru fiecare
specie. Moleculele de anticorpi apar n serul sanguin sau n anumite
celule de vertebrate ca rspuns la introducerea unei proteine sau a
unei alte macromolecule strine acelei specii. O astfel de
macromolecul strin speciei respective se numete antigen.
Moleculele specifice de anticorpi produse n acest mod se pot
combina cu antigenul care a determinat formarea lor pentru a
forma complexul antige-anticorp. Aceast reacie, numit rspuns
imun, este baza ntregului domeniu al imunologiei. Imunitatea fa
de o anumit boal infecioas poate fi adesea realizat prin
injectarea unei cantiti foarte mici de componeni
macromoleculari din microorganisme sau virusuri care provoac
boala respectiv. Ca rspuns la antigenul strin se formeaz
anticorpul specific, sau o imunoglobulin, care rmne n snge un
timp ndelungat. Dac microorganismul va ptrunde mai trziu n
snge sau n limf, aceti anticorpi specifici l vor putea inactiva sau
chiar omor prin combinare cu componenii lor antigenici.
Rspunsul imun este dat numai de vertebrate.

Anticorpii sunt foarte specifici pentru moleculele strine care le produc. Un anticorp
format de un iepure injectat cu ou de gin, de exemplu, se va combina cu acesta, dar nu
i cu alte proteine, cum ar fi hemoglobina uman. Mai mult ei sunt specifici pentru
structura tridimensional a albuminei native din oul de gin, astfel nct dac aceasta
este denaturat prin nclzire sau prin alt mijloc, cu deplierea lanurilor polipeptidice
componente sau este modificat chimic, anticorpii nu se vor mai combina cu ea. De aici
putem trage urmtoarele concluzii:
Proteine cu funcii diferite aparinnd unei singure specii determin formarea unor
anticorpi diferii. Astfel cnd se imunizeaz un iepure cu hemoglobin de cal, anticorpii
vor precipita hemoglobina de cal i nu celelalte proteine de cal.
Proteine omoloage de la specii diferite nu sunt identice imunologic.
Specificitatea anticorpilor reflect relaia filogenetic.
Exemplu:
Proteinele omoloage a speciilor foarte nrudite sunt mult mai asemntoare ntre ele
dect ale speciilor foarte ndeprtate. Astfel, anticorpii produi de iepure fa de
hemoglobina de cal reacioneaz cel mai bine cu hemoglobina de cal. Ei reacioneaz, de
asemenea puternic cu hemoglobina altor specii nrudite cu calul (zebra, vaca, porcul sau
alte copitate) dar sunt mult mai puin reactivi cu hemoglobina roztoarelor, psrilor sau
amfibienilor.
Astfel cu ct dou specii sunt mai apropiate cu att mai asemntoare sunt i
secvenele de aminoacizi ale proteinelor lor omoloage. Deci, secvena de aminoacizi ale
proteinelor omoloage poate da informaii preioase despre evoluia diferitelor organisme
i pentru legtura lor filogenetic.

Structura proteinelor

Lanurile polipeptidice ale proteinelor se pliaz n diferite
moduri, att n cadrul propriului lan, dar i ntre lanurile
vecine, adic intracatenar i intercatenar. Acest mod de
pliere este esenial pentru activitatea biologic a
proteinelor i aceast organizare complicat este cea care
trebuie conservat pe parcursul procedurilor implicate n
purificarea proteinelor. Dei mult timp s-a considerat c
modurile de pliere ale lanurilor polipeptidice sunt
determinate numai de secvena aminoacizilor din lan,
astzi s-a stabilit c proteinele avnd aceeai secven a
aminoacizilor pot exista n forme diferite de mpachetare i
c astfel de plieri pot fi influenate de prezena altor
proteine.
Structura proteinelor a fost imaginat ca avnd 4 nivele de
organizare, i anume: structura primar, secundar, teriar
i cuaternar.
Structurile proteice sunt stabilizate de dou tipuri de legturi
puternice:
legtura peptidic i puntea disulfidic, precum i de trei tipuri
de legturi slabe.
Legtura disulfidic se stabilete ntre dou resturi de cistein,
aparinnd sau nu aceluiai lan polipeptidic i este la fel de
rezistent ca i legtura peptidic la aciunea agenilor
denaturani uzuali ai proteinelor. Aceast legtur poate fi
distrus prin oxidare cu acid performic sau prin reducere cu
betamercatoetanol. Legturile disulfidice sunt prezente de
obicei n proteinele extracelulare i aproape c lipsesc din
cele intracelulare. Legturile slabe sunt reprezentate n
general de legturile necovalente, i anume: legturi de
hidrogen, ionice i hidrofobe. Legturile de hidrogen se stabilesc
ntre grupri CO i NH aparinnd unitilor peptidice diferite,
aflate n poziie adecvat.


Structura primar

n structura oricrei proteine sau peptide se
distinge un element comun, reprezentat de
axul covalent, care se formeaz prin repetarea
gruprii peptidice i o parte a variabilei
reprezentat de radicalii aminoacizilor
constituieni.
Structura primar este definit ca secvena
resturilor de aminoacizi ce deriv din
policondensarea lor prin legturi - peptidice.

H
2
N CH CO
R
1
NH CH
R
2
CO
.......
NH CH COOH
Rn
Cunoaterea structurii primare a proteinei const n stabilirea naturii radicalilor, n
ordinea nlnuirii i localizarea eventualelor puni disulfidice i stabilirea tuturor
conexiunilor dintr-un lan polipeptidic.
Semnificaia structurii primare
Prima protein a crei structur primar a fost identificat este
insulina. S-a dovedit c structura primar a proteinelor este
determinat genetic i c proteinele din toate organismele sunt
sintetizate printr-un mecanism comun.S-a constatat c secvena de
aminoacizi este veriga ntre mesajul genetic cuprins n ADN i
structura tridimensional responsabil de funcia biologic a
proteinei. Cunoaterea secvenei de aminoacizi aduce informaii
eseniale pentru descifrarea conformaiei i mecanismului de
aciune, cu privire la nrudirea proteinelor, n legtur cu evoluia
filogenetic a speciilor precum i cu domeniul patologiei
moleculare. Activitatea biologic a unei proteine poate depinde
direct i indirect de structura ei primar. Modificri minore, ca
nlocuirea, pierderea sau inseria unui aminoacid se traduc
biochimic prin polimorfismul proteinelor n cadrul speciei conferind
individualitate organismelor prin specificitatea de specie i prin boli
genetice consecutive alterrii sau pierderii funciei.

Structura secundar a proteinelor

Structura secundar a proteinelor se refer la
dispunerea spaial a resturilor de aminoacizi
nvecinai n secvena liniar, ce poate fi
ordonat sau dimpotriv cu puine
neregulariti.
Structura secundar prezint 2 modele, i
anume: modelul -helix i foaie pliat.

Modelul -helix

Modelul -helix reprezint un tip de structur secundar ce
presupune ca lanul s se nfoare strns pe o direcie
spiralat formnd un cilindru cu interiorul aproape plin, din
care radicalii aminoacizilor apar nt-o dispunere helicoidal.
Ca sens de rsucire n proteine a fost identificat -helix pe
dreapta.
Stabilitatea -helixului este meninut prin legturi de H ce
se formeaz ntre gruprile carbonil i aminice din lanul
spiralat aflate fa n fa la o distan adecvat. La -helix
fiecare aminoacid avanseaz spirala cu 1,5A
0
la o rotire de
100
0
, pe fiecare spiral existnd 3,6 resturi, deci pasul
spiralei este de 5,4A
0
. Aceste dimensiuni arat formarea
legturii de H ntre gruprile CO i NH din cadrul lanului
polipeptidic.


Modelul sau foia pliat

Structura de foaie pliat a fost studiat tot de Pauling i
Corey, curnd dup -helix, de aceea au numit-o
structura . Cele 2 modele difer n primul rnd prin
faptul c lanul polipeptidic n conformaia este mai
relaxat, fiind aproape complet extins. Distana axial
ntre dou resturi succesive este de 3,5A
0
fa de 1,5A
0
n
-helix, cu o periodicitate decorespunznd la cca 7A
0
.
Lanurile polipeptidice sunt aezate n foi pliate, care sunt
legate ntre ele prin legturi de hidrogen. Radicalii
aminoacizilor se situeaz deasupra i dedesubtul planului
foii. Dac sensul de desfurare a lanului n poriunile
adiacente coincide, foaia este numit paralel.
Aranjamentul alternativ n foaia antiparalel este
favorabil, succesiunea gruprilor CO i NH fiind
complementare.


Modelul sau foia pliat
Aminoacizi mici: gly, ala, avantajeaz foaia pliat, iar cei cu
radical mare sau cu sarcin stnjenesc aranjamentul.
Ca i modelul de -helix, structura se ntlnete n
multe proteine globulare sau fibroase. Asocieri de lanuri
paralele apar n fibroina (mtase) i antiparalele apar n -
keratina.
Un exemplu de protein fibrilar prezent la animlaele
superioare este colagenul din esutul conjunctiv, fiind cea
mai rspndit protein dintre proteinele vertebratelor
superioare. Cu ct un animal este mai mare i mai greu, cu
att proporia de colagen este mai mare. Fibrele de colagen
sunt aranjate n moduri diferite, depinznd de sarcina
biologic pe care o are de ndeplinit proteina
Structura teriar a proteinelor
Structura teriar a proteinelor reprezint aranjamentul
spaial general al moleculei, rezultat prin asocierea dintre
diferite regiuni ale aceluiai lan, a cror structur secundar
poate sau nu varia. Aranjamentul spaial al proteinelor s-a
studiat cu raze X.
Printre proteinele globulare ale cror structur teriar
este binecunoscut sunt: mioglobina, hemoglobina, lizozomii,
ribonucleaza, citocromul c, lactat dehidrogenaza.
Reprezentantul clasic al structurii teriare este mioglobina.
Mioglobina este o protein globular relativ mic, care
conine un singur lan polipeptidic format din 153 resturi de
aminoacizi, a cror secven nc nu se cunoate. Mioglobina
conine o feroprotein, sau hem, grupare identic cu cea a
hemoglobinei, fiind i ea capabil s se oxigeneze i s se
deoxigeneze.
Mioglobina se gsete n celulele muchilor scheletici i este
deosebit de abundent la mamiferele acvatice, cum ar fi: balena,
foca sau morsa, a cror muchi sunt att de bogai n mioglobin
nct sunt colorai n brun nchis.
Scheletul moleculei de mioglobin este format din opt
segmente aproximativ drepte, unite prin poriuni curbate. Fiecare
segment drept este un -helix, cel mai lung fiind constituit din 23
de aminoacizi, iar cel mai scurt este format din numai 7
aminoacizi i toi au sensul de rsucire spre dreapta. Aceste
regiuni - helicoidale reprezint 70% din aminoacizii din molecul.
Dei structura mioglobinei pare neregulat i asimetric, ea nu
este deloc ntmpltoare. Toate moleculele de mioglobin au
aceeai configuraie.
Structura cuaternar


Structura cuaternar apare la proteinele alctuite din dou
sau mai multe lanuri polipeptidice care se asociaz formnd
o unitate de sine stttoare, cu form spaial bine definit i
posednd o anumit activitate biologic.
Structura cuaternar se refer la felul, numrul i
aranjamentul lanurilor polipeptidice ncluznd i natura
contactelor dintre ele.
Cele mai multe proteine oligomer sunt formate dintr-un
numr mic i par de lanuri, care se numesc subuniti sau
protomeri. Subunitile identice sau diferite au fiecare
structura sa spaial; ele se pot aeza succesiv pe direcie
liniar, circular sau mai compact suprapuse n forme
geometrice diferite. Aceste posibiliti de aranjare se refer la
protomeri identici sau foarte puin diferii. Ansamblul prezint
simetrie, suprafeele de contact sunt complementare,
sugernd gradul nalt de specificitate al structurii cuaternare.

Monomerii realizeaz interaciuni slabe: (legturi saline, legturi de hidrogen,
fore Wan der Waals, legturi hidrofobe), proteina putnd astfel disocia
reversibil.
Lanurile izolate sunt lipsite de activitate, funcia fiind rezultatul ansamblului
cu structur cuaternar.
Exemple de proteine cu structur cuaternar:
creatin kinaza, lactat dehidrogenaza, glutamat dehidrogenaza, enzime, proteine
neenzimatice: hemoglobina , imunoglobulina G.
Printre cele mai simple proteine oligomere este hemoglobina, care este
format din 4 lanuri polipetidice.
Hemoglobina conine 2 lanuri formate din 141 de resturi de
aminoacizi i 2 lanuri formate din 146 de resturi de aminoacizi;
fiecare dintre acestea avnd ataat printr-o legtur necovalent cte un
radical hem. Molecula a fost studiat n forma sa oxigenat, care are o
structur sferic, compact, cu dimensiuni de: 6,4/5,5/5,0mm.
n hemoglobin, ntre cele 2 lanuri , ca i ntre cele dou lanuri
exist foarte puine contacte, n schimb, numeroase grupri R fac
legtura ntre perechile de lanuri care nu sunt asemenea.
Un inters deosebit l prezint aezarea pe fiecare subunitate a cte uneia dintre cele 4
grupri hem, care leag cele 4 molecule de oxigen. Aceste grupri hem, molecule
plane, n care atomii de fier formeaz compleci de coordinare plan-ptrai, sunt
destul de ndeprtate ntre ele i sunt situate la anumite ungliuri unele de altele. n
molecula hemoglobinei rmne o cavitate cental, mrginit de grupri cu radical R
polare.

Metabolismul proteinelor
Digestia i absorbia proteinelor
Majoritatea compuilor cu azot ingerai de om sunt proteine. Deci, atunci
cnd discutm digestia proteinelor, implicit discutm i digestia compuilor
cu azot. Moleculele proteice intacte nu pot fi absorbite ca atare prin tractul
gastro-intestinal la animalele adulte, dect n cazuri excepionale i foarte
rare. Pentru a putea fi absorbite proteinele sunt hidrolizate la structuri cu
molecule mai mici de aminoacizi sau peptide mici. Cu toate c proteinele au
structuri complexe, ele sunt formate de un numr redus de aminoacizi (cca.
20) diferii, legai ntre ei prin legturi peptidice. Legtura peptidic se rupe
uor conducnd la un amestec de aminoacizi liberi. Teoretic, o singur
enzim specific poate asigura scindarea legturilor peptidice i deci
digestia proteinelor. n realitate situaia este mai complex, deoarece
enzimele digestive prezint a mare specificitate pentru localizarea
respectivei polipeptide, localizarea punctului de hidroliz i natura
aminoacizilor, care intervin n legtura peptidic respectiv.
Cu toate c n alimentaie exist n mod obinuit milioane de
proteine, el pot fi digerate de un numr redus de enzime proteolitice, ce pot
fi clasificate n 2 mari grupe: exopeptidaze i endopeptidaze.
Exopeptidazele au rolul de a ndeprta un aminoacid de la captul
lanului prin hidroliza unei legturi peptidice cu obinerea unui aminoacid i
a unei polipeptide cu un aminoacid mai puin n molecul. De exemplu:
carboxipeptidaza, aminopeptidaza, dipeptidaza, tripeptidaza.
Endopeptidazele au rolul de a hidroliza n general legturi
peptidice din interiorul lanului, dnd natere unor lanuri
polipeptidice mai mici. De exemplu: pepsina, tripsina,
chimotripsina, elastina.
Proteinele ptrunse n tractul digestiv sufer
aciunea diferitelor enzime degradndu-se pn la stadiul
de aminoacizi, care la rndul lor sunt apoi catabolizai pe
ci diferite.
O enzim deosebit de important pentru
laboratorul clinic, din categoria N-aminoacidpetidazelor
este LAP (leucinaminopeptidaza). Nivelul acestei enzime
crete mult i specific n afeciunile cilor biliare, dar
rmne nemodificatn leziunile parenchimului hepatic.
Deasemenea are valoare n diagnosticul diferenial al
icterului mecanic fa de cel hepatocelular i cel hemolitic.
n ultimele 2 forme de icter, nivelul rmne cel normal.

Proteine alimentare
oligopetide
aminoacizi si oligopeptide
Ficat
tesut enterohepatic -aminoacizii
catabolizati
utilizati in biosinteza proteinelor
endopeptidaze: pepsina, tripsina, chimotripsina
exopeptidaze
: N-aminoacidpeptidaza, C-aminoacidpeptidaza
intestin subtireunde sunt
catabolizati
utilizati in biosinteza proteinelor
Schema degradrii proteinelor

Metabolismul intermediar al
aminoacizilor

Aminoacizii sunt substanele cele mai importante ale
metabolismului azotului n organismele heterotrofe.
Deasemenea ei pot servi ca surs de energie n special
prin intermediul oxidrii scheletului hidrocarbonat.
Metabolismul aminoacizilor se gsete ntr-o stare
dinamic, la fel ca i cel al hidrailor de carbon i al
lipidelor.
Metabolismul aminoacizilor include cteva probleme
de interes medical. Acestea ar fi: sinteza i degradarea
proteinelor, conversia scheletului hidrocarbonat al
aminoacizilor n intermediari amfibolici, sinteza ureei i
formarea unor compui fiziologici activi( adrenalina,
noradrenalina, DOPA, dopamina, serotonina, acidul--
aminobutiric sau GABA, tirozina, creatina, creatinina,
nucleul heminic, bazele purinice.


Catabolismul N-aminoacidic

Cei cca 20 de aminoacizi care intr n structura
proteinelor prezint pe de o parte mecanisme specifice
de metabolizare, ier pe de alt parte mecanisme
comune.
Cile comune de degradare se refer pe de o parte la
soarta gruprilor funcionale, aminice i carboxilice, iar
pe de alt parte la soarta catenelor ternare, care n
aceste etape trec prin transformri comune.
Principalele mecanisme generale de transformare ale
aminoacizilor sunt:
transaminarea
decarboxilarea
dezaminarea aminoacizilor

Transaminarea

n cel puin 12 aminoacizi gruparea -aminic este
ndeprtat enzimatic prin transaminare. n aceste
reacii, gruparea -aminic este transferat pe atomul
de carbon al unui cetoacid, care, de obicei este
acidul cetoglutaric cu formarea cetoacidului
analog aminoacidului iniial i a acidului L-glutamic.
Enzimele care catalizeaz acest tip de reacii se numesc
aminotransferaze sau transaminaze.
Reaciile de transaminare sunt uor reversibile, ele se
pot desfura n ambele direcii. Glutamatul, produsul
final al majoritii transaminrilor, cedeaz apoi
gruparea aminic ntr-o serie de reacii final, ce duc la
formarea compuilor azotai de excreie.


Transaminazele au drept coenzim piridoxalfosfatul, care poate fixa
aminoacidul formnd o cetimin sau baza Schiff, cu urmtoarea structur:

N
C
CH
2
O
N
C
P
H
COOH
O
-
O
-
HO
H
3
C
R
O
Schema complet cu cei doi timpi ai procesului de transaminare este urmtoarea:


R
1
CH COOH
NH
2
+
E C O
H
H
2
O
H
2
O
R
1
CH COOH
N
C H
E
R
1
C COOH
N
CH
2
E
H
2
O
H
2
O
E CH
2
NH
2

+
R
1
C COOH
O
piridoxal_fosfat_
enzima
aldimina cetimina
piridoxamin_
_fosfat_enzima
R
2
C COOH
O
+
E CH
2
NH
2
H
2
O
H
2
O
R
2
C COOH
N
CH
2
E
R
2
CH COOH
N
CH
E
H
2
O
H
2
O
R
2
CH COOH
NH
2
+
E CH O
piridoxamin_fosfat_
_enzima
cetimina aldimina
piridoxal_fosfat_
_enzima
Piridoxal-fosfatul format poate s reintre ntr-un nou ciclu de transformri. Reacia de
transaminare este un exemplu de dubl dislocare, cu cinetica ping-pong
corepsunztoare.
n enzima liber, piridoxal-fosfatul se leag de proteina enzimatic nu numai
prin azotul din ciclu, ci i prin formarea unei baze Schiff cu gruaparea -amino a unei
lizine din protein. Aminoacidul substrat disloc gruparea lizil--amino din legtura cu
piridoxal-fosfatul, formnd o aldimin substrat-piridoxal fosfat.Baza Schiff se formeaz
prin interaciunea cationic a situsului activ.n felul acesta enzima particip n cursul
transaminrii la transportul gruprii amino.Principalele transaminaze sunt:
-GOT-GLUTAMIC OXALILACETIC TRANSAMINAZ sau
-AST-ASPARTAT AMINOTRANSFERAZ i
-GPT-GLUTAMICPIRUVIC TRANSAMINAZ sau
-ALT-ALANINAMINOTRANSFERAZ.
Acidul glutamic, drept colector universal de grupri aminice joac un rol central n
metabolismulaminoacizilor din dou puncte de vedere. Acesta poate prelua direct sau
indirect gruprile aminice de la majoritatea aminoacizilor i poate regenera, prin
dezaminarea oxidativ acidul -cetoglutaric, care devine apt s accepte gruprile
aminice.




aminoacid alfa_cetoglutarat
glutamat
cetoacid
NAD
+
+

H
2
O
NADH

+
H
+

+
NH
3
transaminaza glutamat dehidrogenaza
Dezaminarea oxidativ

La mamifere procesul de dezaminare oxidativ are loc la nivelul esutului
hepatic i esutului renal.Enzimele implicate n dezaminarea oxidativ sunt
aminoacid oxidazele de tip L i D. Aminoacidoxidazele sunt flavoproteine
autooxidabile.
Rezultatul dezaminrii oxidative a aminoacizilor este un cetoacid i
amoniac.Amoniacul fiind un produs toxic este ndeprtat prin ciclul
ureogenetic sau prin formare de glutamin sub aciunea enzimei numit
glutaminsintetaz.
Cetoacidul format este catabolizat direct sau indirect n compui care
intr n ciclul acizilor tricarboxilici.
Ac.glutamicacid -cetogltaric
Ac.asparticac.oxalilacetic
Valinaac.succinic etc.


Multe organisme conin aminoacid oxidaze flavin-dependente, care i ele
catalizeaz dezaminarea oxidativ a aminoacizilor. L-aminoacid oxidaza este
specific pentru dezaminarea L-aminoacizilor i catalizeaz reacia
L-aminoacid + H
2
O + E-FMN

cetoacid +
NH
3 +
E_FMNH
2
L-amionoacidoxidaza are ca grupare prostetic FMN strns legat de proteina
enzimatic. Se gsete n reticulul endoplasmatic din ficat i rinichi.
O alt flavoprotein ce catalizeaz dezaminarea oxidativ este D-aminoacid
oxidaza, prezent n ficat i rinichi, care oxideaz D-aminoacizii la -cetoacizii
corespunztori
D-aminoacid + H
2
O + E-FAD
cetoacid + NH
3
+
E_FADH
2
Rolul D-aminoacidoxidazei este de a iniia degradarea D-aminoacizii
provenii din degradarea enzimatic a peptidoglicanilor din pereii celulari
ai bacteriilor intestinale, care conin acid D-glutamic i ali D-aminoacizi
Decarboxilarea aminoacizilor

Un alt mecanism de degradare a aminoacizilor l
constituie decarboxilarea sub aciunea
aminoaciddecarboxilazelor, acror coenzim este
piridoxal-fosfatul. n urma procesului de decarboxilare
se formeaz aminele primare corespunztoare, numite
i amine biogene.
Din decarboxilarea acidului glutamic se formeaz acidul
-aminobutiric, important pentru metabolismul
esutului nervos; iar din decarboxilarea aminoacizilor
bazici ca: lizina, ornitina, arginina rezult cadaverina,
putresceina, care sunt produi de putrefacie.


Metabolismul amoniacului

Formarea i eliminarea amoniacului


n afara amoniacului care apare n esuturi ca rezultat al metabolismului
aminoacizilor (dezaminarea oxidativ), o cantitate considerabil se mai
formeaz din proteinele alimentare sub aciunea bacteriilor intestinale i
din ureea prezent n lichidele secretate din tractul gastro-intestinal. Acest
amoniac este absorbit din intestin n sngele portal venos, care conine
cantiti mai mari de amoniac dect sngele sistemic. n condiii normale,
ficatul ndeprteaz prompt amoniacul din sngele portal, astfel nct
sngele ce prsete ficatul, este n mod virtual liber de amoniac. Acest
lucru este esenial deoarece cantiti mici de amoniac sunt toxice pentru
sistemul nervos (normal n snge se gsesc 10-20g NH
3
/100ml).
Simptomele intoxicaiei cu amoniac sunt rezultatul unei slbiri ale
funciilor creierului i se manifest prin grea i vrsturi, letargie, ataxie,
convulsii, iar n cazuri mai grave com prin hiperamoniemie (cc 100g NH
3

/100 ml) i chiar moartea. Aceste simptome sunt asemntoare comei
hepatice, cnd nivelul amoniacului din ficat i probabil din creier este
foarte crescut. Intoxicaia cu amoniac pare s fie un factor etiologic n
coma hepatic. Simptome asemntoare apar i n hepatomegalie i n
general, cnd funciile hepatice sunt puternic alterate, deoarece ficatul
este sediul transformrii amoniacului n uree.

Mecanismul prin care amoniacul i exercit efectul asupra creierului nu se cunoate
nc. SE presupune c se datorete descreterii formrii de ATP pe calea ciclului citric
din cauza transformrii unei cantiti excesive de -cetoglutarat n glutamat i
glutamin. Nivelul acestor metabolii, la fel ca i a amoniacului este crescut n creier n
decursul intoxicaiei cu amoniac. Alterri ale proceselor de transmisie neural datorit
unor formri excesive de acid -aminobutiric (GABA) din glutamat pot fi, deasemenea
implicate.
Coninutul de amoniac din sngele din venele renale, mai mare dect n
arterele renale, indic faptul c amoniacul este produs n rinichi i apoi trece n snge.
Excreia n urin a amoniacului produs n celulele tubilor renali constituie cel mai
semnificativ aspect al metabolismului amoniacului renal. Producerea de amoniac este
un mecanism important al tubilor renali, de reglare a balanei acido- bazice i
conservare de cationi, fiind foarte crescut n acidoza metabolic i sczut n alcaloz.
Amoniacul produs la nivelul rinichilor deriv din aminoacizii intracelulari i n special
din glutamin.
Amoniacul poate fi excretat sub form de sruri de amoniu. Marea majoritate este
excretat sub form de uree, care se formeaz n ciclul ureogenetic. Practic amoniacul
format n esuturi, dar prezent n sngeleperiferic n urme, este ndeprtat rapid din
circulaie sub form de glutamin i uree.


NH
4
+
NH
2
H
2
N C CH
2
O
CH
2
CH COOH
acid glutamic
+
Mg_ATP
Mg_ADP
H
2
O
acid glutamic
glutamin sintetaza
glutaminaza
Interconversia amoniacului i a glutaminei, catalizat de glutaminsintetaz i glutaminaz, poate fi prezentat
schematic astfel:

Ciclul ureogenetic
n cursul reaciilor ce alctuiesc un ciclu complet dintr-un mol de
amoniac rezult un mol de uree i se consum 3 moli de ATP. Reaciile
succesive sunt catalizate de 5 enzime.
Carbamoil sintetaza prezent n mitocondriile hepatice ale
organismelor ureotelice, inclusiv organismul uman, catlizeaz sinteza
carbamoilfosfatului cu consum de 2 moli de ATP.
Ornitincarbamoilaza se gsete n mitocondriile hepatice i catalizeaz
reacia de sintez a citrulinei, pentru care are o mare specificitate.
n continuare citrulina n prezen de arginino-succinat-sintetaza formeaz
arginino-succinatul.
Mai departe, argininosuccinaza, prezent n esutul hepatic i renal al
mamiferelor catalizeaz reacia de scindare a argininosuccinatului n
arginin i acid fumaric, care intr n ciclul citric.
n continuare acidul fumaric intr n ciclul citric i va suferi o
transformare obinuit, adic n prezen de fumaraz trece n acid malic,
care la rndul su sub aciunea malatdehidrogenazei trece n oxalilacetat.
Oxalilacetatul intr ntr-o reacie de transaminare la care particip acidul
glutamic i transaminaza glutamico-oxalacetic(GOT), formnd acidul
aspartic.


Ciclul ureogenetic
Deasemenea arginina format este scindat de arginaz (enzim prezent n ficatul
tuturor organismelor ureotelice) la ornitin i uree. Arginaza se gsete n cantiti
mici i n rinichi, creier, glanda mamar, esut testicular i piele. Emzima poate fi
nhibat competitiv de ornitin i lizin. Ornitina rezultat poate s reia un nou
ciclu, iar ureea format este excretat urinar.
Deci, ciclul ureogenetic este o cale metabolic foarte costisitoare pentru
organism, deoarece pentru fiecare molecul de uree ce se formeaz se consum 3
legturi macroergice.
Cantitatea de uree excretat de un adult normal prin urin este de 25-30g n
24 de ore. Aceast cantitate reprezint 90% din substanele azotate i variaz
proporional cu cantitatea de protein ingerat.
n condiii normale excreia de amoniac reprezint numai de 2,5-4,5% din
totalul azotului urinar. Excreia amoniacului reprezint o funcie important n
meninerea balanei acido-bazice. Amoniacul se formeaz la nivelul rinichilor unde
se combin cu ionii de hidrogen formnd ioni de amoniu. Coninutul su crete n
acidoz i scade n alcaloz.
Ureogeneza este un proces semiciclic deoarece ornitina consumat n reacia 2
este regsit n ultima reacie.




Boli metabolice legate de dereglri aprute n
ciclul ureogenetic


Lipsa uneia dintre enzimele care intervin n ciclul ureogenetic determin
apariia unor afeciuni, care toate sunt cauzate de intoxicaia cu amoniac.
Acesta nu se mai poate transforma n uree, produs netoxic care se elimin.
Deficitul de carbamoilfosfatsintetaz este probabil ereditar i cauzeaz
hiperamoniemia de tip 1.
Deficitul de transcarbamoilaz duce la apariia enzimopatiilor congenitale.
Boala se numete hiperamoniemie de tip II. n aceste cazuri n snge, lichid
cerebrospinal i urin s-au gsit cantiti mari de glutamin, iar n esuturi
cantiti mari de amoniac.
Lipsa activitii argininosuccinat-sintetazei duce la citrilinemie, o boal
foarte rar. n sngele i n lichidul cerebrospinal al pacienilor se gsesc
cantiti mari de citrulin, iar n urin eliminarea este masiv (1-2g
citrulin/24 de ore).
Absena argininosuccinazei duce la argininosuccinurie. Enzima este
absent n creier, ficat, rinichi, eritrocite i fibroblastele din piele.
Absena arginazei conduce la hiperargininemie. Aceasta se caracterizeaz
prin creterea nivelului de arginin n snge i n lichid cerebrospinal.
Arginaza cerebrospinal nu este ntotdeauna absent, uneori este mai
sczut.