Curs I

Microbiologia este tiina care studiaz

organismele vii cu dimensiuni mai mici
dect dimensiunea care constituie limita
vizibilitii cu ochiul liber (0.10 mm).
Microbiologia medical studiaz
microorganismele care pot determina boli
ale organismului uman, boli denumite
infecii.
Existena microorganismelor a fost bnuit din
timpuri strvechi, timpuri n care li se observau
doar efectele (acrirea laptelui, transformarea
vinului n oet, dospirea pinii). Un moment
decisiv n studierea microrganismelor, definite
ca vieuitoare invizibile cu ochiul uman liber
(limita vizibilitii cu ochiul liber este de 0,1
mm) a fost inventarea primului istrument de
mrire al obiectelor extrem de mici n raport cu
capacitatea de distincie a ochiului uman i
anume microscopul. Primul microscop a fost
realizat n anul 1665 prin combinarea unor
lentile i descris de ctre Robert Hooke n
lucrarea sa Micrografia n anul 1672.

Anthony van Leeuwenhoek a fost cel care n anul
1683 folosete un microscop construit de el dintr-un
sistem de oglinzi luminate de o lumnare cu ajutorul
cruia descoper i descrie lumea liliputan a
microorganismelor. n acel moment nu s-a legat
prezena microorganismelor de boli ale omului sau ale
altor vieuitoare.
Se poate observa o miraculoas lume microscopic,
divers ca form i ca mobilitate. Astfel Anthony van
Leeuwenhoek descrie spermatozoizi, vieuitoare mici i
diferite care au fost denumite mai trziu bacterii,
celulele ale sngelui i ale urinii n anul 1873.
Surprinztoarea metod i mai fenomenala lume
microscopic a fost prezentat de meterul oglindar
unei prestigioase comuniti tiinifice a vremii i
anume Societii tiinifice Regale a Angliei.


n acel moment nu s-a fcut nicio legtur ntre
minusculele vieuitore i boli ale omului.
A fost nevoie de nc un secol i de strlucirea
minii geniale a savantului francez Louis Pasteur
pentru ca s devin evident determinismul clar al
bolilor omului denumite infecii .
Secolul XIX a reliefat prin munca a doi titani ai
medicinii , Louis Pasteur i Robert Koch, conturul
extrem de precis al apariiei infeciei n urma aciunii
microorganismelor denumite bacterii.
La ora actual, la interval de 5 secole, se condider c
lumea nevzut cu ochiul liber a microorganismelor
constituie cea mai numeroas dar i cea mai
necunoscut dintre lumile care populeaz planeta
noastr.


Microorganisme importante
medical

Microorganismele care pot determina boli oamenilor sunt urmtoarele:
Virusurile microorganisme acelulare alctuite doar din o molecul de
acid nucleic (ADN sau ARN, niciodat ambii acizi nucleici)i un nveli
proteic. Virusurile sunt forme simple de via care nu se pot multiplica
dect n celule strine parazitate deoarece nu au materii prime, proteice
i enzimatice, necesare sintezei de substane proprii.
Bacteriile sunt microorganisme care au ca unitate structural celula
procariot. Celulele bacteriene au ambii acizi nucleici, au dimensiuni de
0,1-10 , superioare dimensiunilor virusurilor care au dimensiuni mai mici
de 0,1 , i au capacitatea de a-i sintetiza singure componentele
celulare datorit unui sistem sofisticat de autogospodrire.
Ciupercile sunt organisme cu model structural de
celul eucariot. Pot determina infecii caracterizate
prin evoluie cronic i sunt deosebit de greu tratabile
datorit perversitii infiltrrii printre celulele
organismului uman, celule cu care au asemnri.

Paraziii sunt vieuitoare caracterizate printr-o varietate
nalt a structurii interne i a dimensiunii, de la parazii
microscopici cu structur simpl (parazitul malariei)
pn la paraziii de dimensiuni care ating 10 m (teniile)
care aparin regnului animal.

Prionii sunt o grupare atipic de ageni infecioi care
nu au caracteristici de celul vie. Sunt doar proteine
patologice care se sintetizeaz la comanda unei gene
patologice dar bolile generate au toate caracterele unor
boli infecioase.

Bacteriologia a evoluat n legtur cu nevoia
medicilor de explica relaia apariiei bacteriilor
cu anumite boli.


Astfel s-au aplicat postulatele lui Koch care
au stabilit relaia cauz-efect ntre apariia
bacteriilor i boli specifice.
Astzi majoritatea bolilor bacteriene au fost
diagnosticate iar agenii etiologici au fost
identificai.
Bacteriile sunt organisme unicelulare , fr membran
nuclear, metabolic active i care se divid prin
diviziune binar.
Bacteriile par forme foarte simple de via dar sunt de
fapt sofisticate i foarte adaptabile.
Bacteriile se multiplic rapid i pot utiliza cantiti mari
de hidrocarbonai .
Pot fi parazite sau pot tri liber n natur.
Bacteriile sunt ubiquitare i au o capacitate
remarcabil de adaptare la mediu prin selecia
spontan de mutani.
Diferen Celula procariot Celula eucariot.
Peretele bacterian Complex, rezistent
,dur

Subire, elastic,
structura mozaicului
fluid
Materialul nuclear

Nedelimitat prin
membrana nucleara-
un singur cromozom
Delimitat prin
membrana nucleara-
mai muli cromozomi


Citoplasma

Gel ,dens Complex.

Diviziunea

Simpl, direct.

Complex.

Structura

Morfologia
Bacteriile au forme caracteristice (coci,
bacili, spiralat) i se vd n grupri
specifice (perechi,lanuri, tetrade, ciorchini
etc.)
Structura celular
Procariotele au un nucleoid, o membran
citoplasmatic i un perete cu structur
specific.
Multiplicarea este prin fisiune binar.
Toate bacteriile , patogene i saprofite, sunt
organisme unicelulare.
Majoritatea bacteriilor sunt capabile de existen
metabolic i de cretere independente dar speciile
Chlamydia i Rickettsia sunt parazite obligatoriu
intracelular.
Bacteriile sunt celule extrem de mici i se msoar n
microni (10-6 m). Ele au o mare variabilitate n
dimensiuni ntre Bacillus anthracis (1.0 - 1.3 m X 3 -
10 m) i celule foarte mici ca Pasteurella tularensis
(0.2 X 0.2 - 0.7 m)
Bacteriile au un raport suprafa volum foarte mare ,
de aproximativ 100,000.
Bacteriile au o form caracteristic.
Astfel bacteriile pot avea form:
1. sferic (cocii-sferici sau ovoidali);
2. form de bastona(bacilii);
3. form alungit, filamentoas, ramificat,
4. form spiralat.

Aranjamentul celulelor este de asemenea tipic pentru diferitele specii sau
grupe bacteriene .
Unii coci sau bacili cresc specific n lanuri ( streptococi, streptobacili).
Alte bacterii cresc n form de struguri sau de grmezi (stafilococii).
Aspectul microscopic este important n clasificare i n diagnostic.
Imagine electronomicroscopic a unor coci aezai n
perechi (Neisseria gonorrhoeae). Regiunea nuclear apare mai
transparent fiind alctuit din fibrile ADN, apare distribuoia dens a
ribozomilor din citoplasm i absena organitelor intracelulare.

Nucleoidul

Celule procariote i celulele eucariote au fost
difereniate iniial prin structur.
Nucleoidul bacterian este echivalent cu nucleul
celulelor eucariote dar este o structur mai
simpl , nemrginit de membrana nuclear
(vizibil la microscopul electronic).
n microscopia optic nucleoidul se poate
vizualiza prin coloraia Feulgen care coloreaz
AND-ul.
ADN-ul apare ca o molecul unic, cu greutate
molecular de 3 X 109.
Molecula de ADN poate avea aproximativ 1
mm lungime . Nucleoidul este alctuit dintr-un
singur cromozom.
Mecanismul de separare al celor 2 cromozomi
fiice urmnd replicrii nu este bine explicat .
Oricum cromozomul trebuie s fie permanent
ataat la membrana celular n timpul
diferitelor stagii ale replicrii.

Citoplasma
Citoplasma este o structur extrem de condensat, n form de gel,
fr cureni n interior. Conine o cantitate mare de ARN.
Ribozomii sunt prezeni n numr mare n citoplasma bacterian.
Sunt clasificai dup constanta de sedimentare la ultracentrifug. Astfel n
celulele eucariote sunt ribozomi 80S iar n cele procariote sunt 70S.
De exemplu ribozomii Escherichiei coli sunt alctuii din 55 molecule de
proteine i 3 molecule de ARNr. Ribozomii bacterieni sunt alctuii din
dou uniti disociabile cu greutate de 30S i de 50S. Raportul dintre
ARN i proteine n ribozomi este de 2/1 sau de 2/3.

Procesul de asamblare a ribozomilor i
funcia lor sunt sub controlul relaiei proteine
ribozomale-ARNr.
Proteinele i moleculele de ARNr ocup
poziii bine definite pe suprafaa ribozomului
dndu-i forma de fotoliu. Printre cele dou
uniti ( unitatea 30S fiin ca o halter care se
sprijin de fotoliu) se gsete un canal ngust
prin care trece ARNm.
Unii ribozomi se leag de faa intern a
membranei plasmatice.
n cursul sintezei proteice ribozomii se
aranjeaz n polizomi cu lungimea
proporional cu lungimea ARNm .

Membrana citoplasmatic

Membrana citoplasmatic este o
structur complex care joac un rol
important n fiziologia bacterian.
Moleculele de lipoproteine, de glucide ,
de lipopolizaharide sunt n permanent
micare (de 1.000.000 de ori pe
secund) ceea ce confer membranei o
mare plasticitate.
Membrana citoplasmatic
Modelul de aranjare a moleculelor membranei
citoplasmatice este modelul mozaicului fluid
descris de Singer i Nicholson n anul 1972.
Aceast structur prezint permeabilitate
pentru moleculele liposolubile i pentru
electrolii. Moleculele lipidice confer o mare
permeabilitate la moleculele hidrosolubile.

Proteinele pot fi transmembranare sau de
suprafa.
Ca rol proteinele pot fi:
Enzime care catalizeaz biosinteza
componentelor celulare:
Proteine de transport celulare,
Proteine cu activitate adenozin-
trifosfatazic (ATP-aza);
Proteine implicate n turnoverul lipidelor
i al proteinelor membranare.

Permeabilitate selectiv-
trec uor anionii (clor Cl-) i moleculele
liposolubile i
trec greu ionii de Na+ , K+, glucidele i
proteinele pentru care sunt necesare sisteme
speciale de transport.
Membrana citoplasmatic are rolul
mitocondriilor din celulele eucariote.
Mezozomii sunt invaginri ale membranei
citoplasmatice care au contact cu genomul
bacterian. Sunt mai numeroi la bacteriile
Gram pozitive.
n mediu hipertonic proemin n spaiul dintre
membrana citoplasmatic i peretele celular. n
contact cu lizozimul sunt eliberai n mediu ca
un ir de mrgele.
Rolul mezozomilor este neesenial pentru
viabilitate.
Mezozomii sunt importani n :
Mrirea suprafeei membranei
citoplasmatice;
n replicare;
n sinteza nveliurilor celulare.
Peretele celular bacterian
Peretele bacterian constituie o structur
unic n lumea vie deoarece conine o
substan complex, peptidoglicanul
inexistent n alte structuri vii.
Peptidoglicanul este o structur pluristratificat
alctuit din lanuri n care alterneaz acidul N-
acetil muramic cu N-acetil glucozamina, lanuri
legate ntre ele prin structuri tetrapeptidice.


Grosimea peptidoglicanului este
diferit ceea ce confer caracterul de
Gram pozitiv sau de Gram negativ astfel:
bacteriile Gram pozitive au peretele gros
de 200-400 nm i lanurile de acizi
aminai sunt legate prin multiple legturi
peptidice.
Peretele bacteriilor Gram negative este
subire, de 10-20 nm. i cu foarte puine
legturi peptidice.

Coloraia Gram este coloraia de baz n
bacteriologie coloraie care st la baza
clasificrii primare a bacteriilor.
Rolul peptidoglicanului
Interfer cu fagocitoza ajutnd aprrii
antiinfecioase:
are efect pirogen;
are rol mitogenic stimulnd mitoza limfocitelor.
peptidoglicanul este lipsit de lipide i de
proteine;
la anumite bacterii ca Nocardia, Corynebacterii
, Mycobacterii, se mai gsesc n perete acizi
grai cu molecul mare.
Bacteriile Gram pozitive conin i
polimeri solubili n ap care se numesc
acizi teichoici.
Acizii teichoici sunt de trei tipuri:
acizi teichoici parietali;
acizi teichoici transmembranari sau
lipoteichoici care sunt legai de
membrana citoplasmatic formnd reea
ntre aceasta i peretele celular;
acizi teichuronici alctuii din N acetil
glucozamina i acid glucuronic.

meninerea concentraiei ionilor metalici n
spaiul periplasmic (ntre membrana
citoplasmatic i perete), important pentru
activitatea enzimelor;
rol arhitectural;
determinani n patogenitate;
receptori de fagi i de colicine.
Coloraia Gram i diferena ntre bacteriile
Gram-pozitive i Gram-negative.
Spaiul periplasmic conine enzime hidrolitice
importante n scindarea
macromoleculelor:proteaze, lipaze, fosfataze,
nucleaze, colagenaza, hialuronidaza care sunt
i factori de virulen.
n acest spaiu se mai gsesc proteine care
leag penicilina (proteine de legare a
penicilinelor).
ntre peptidoglican i membrana extern se
gsesc molecule de lipoproteine.

Membrana extern
Membrana extern are grosimea de 60-200
angstromi i se poate ndeprta cu detergeni,
cu fenol i cu EDTA.

Funcia
Regleaz trecerea moleculelor mai mari de
700 daltoni n celul.

Stratul intern este alctuit din fosfolipide iar cel
extern din lipopolizaharide.

Proteinele sunt n cantitate mai mare
dect n membrana citoplasmatic.
Proteinele care traverseaz peretele sunt
proteinele transmembranare.
Proteinele care formeaz pori se
numesc porine i permit trecerea
moleculelor mai mici de 700 daltoni.
Alte proteine sunt proteinele integrale
care ajut la meninerea integritii
membranei externe.



Lipidul A este esenial pentru viabilitate .
Lipopolizaharidul este responsabil pentru
activitatea endotoxic i este termostabil.
Lipopolizaharidul eliberat n cantitate mare
determin moartea pacientului n 1-2 ore prin
oc endotoxic.
n cantiti mici lipopolizaharidul este
activator al mediatorilor inflamaiei determinnd
activarea complementului pe calea altern,
activarea factorului tumor necrosis eliberarea
de prostaglandine i de interleukin 1.

este pirogenic,
determin rezistena la fagocitoz;
crete rezistena la antibiotice;
are rol n resorbia osoas.

Acest spaiu ofer un avantaj metabolic bacteriilor
Gram negative deoarece enzimele rmn localizate aici
i pot degrada numeroase substrate.
Bacteriile adaptate n mri, ruri, lacuri sunt
majoritatea Gram negative.
Bacteriile Gram pozitive elibereaz enzimele n
mediu i de aceea au nevoie de medii foarte bogate n
nutrieni i cu mare densitate bacterian pentru ca
produii de digestie s fie accesibili celorlalte celule.

Pe suprafaa bacteriei se pot vedea dou tipuri de
structuri externe sub form de apendice:
flagelii care sunt organe de locomoie ;
pilii sau fimbriile.
Flagelii apar att pe Gram-pozitivi ct i pe Gram-
negativi. Se gsesc pe numeroase specii de bacili i
rar la coci.
Pilii apar aproape exclusiv pe bacteriile Gram-negative
i , mai rar pe bacteriile Gram-pozitive.
Escherichia coli cu flageli i
cu pili
(electronomicroscopia)

Flagelii
Flagelii sunt lungi , filamentoi(3- 12 m) cu diametru de 12
- 30 nm.

Subunitile flagelului sunt asamblate sub form cilindric.
Flagelul este alctuit din trei pri: 1.
1. un filament lung ;
2. structura de prindere a filamentului;
3. corpul bazal care imprim micarea filamentului.
Corpul bazal traverseaz membrana extern a bacteriei.
Micarea bacteriei se realizeaz prin rotaia corpului bazal n
sensul invers acelor de ceasornic.

Abilitatea bacteriilor de a se mica le
permite acestora chemotaxia care este
micarea ca rspuns la substanele atractive
sau respingtoare din mediu.
Rspunsul la stimulii chimici implic
receptori localizai pe suprafaa celulei sau n
spaiul periplasmic.
Exist mutani cu motilitate modificat.
Numrul i distribuia flagelilor de pe suprafaa
bacterian sunt caracteristice pentru o
anumit specie bacterian.
Aranjementul tipic al flagelilor :
monotriche V cholerae are un singur fagel la
un pol al celulei ;
Peritriche cu distribuie de jur mprejurul
bacteriei (Proteus vulgaris i E coli);
Flagelii peritrichi se pot agrega la captul
posterior i propulseaz bacteria ntr-o anumit
direcie.
Chimic flagelii sunt alctuii din proteina
numit flagelin.
Structura bazal const n numeroase
proteine.
Mutaiile pot afecta total sau pierderea
motilitii.
Flagelina este imunogen alctuind un grup
de proteine antigenice denumite antigene H,
care sunt caracteristice unei anumite specii,
unei tulpini.
Flagelii pot fi pierdui de pe suprafaa celulei cu
pierderea temporar a motilitii fr pierderea
viabilitii.
Flagelii pot reapare cu recptarea motilitii.

Pilii
Pilii sau fimbriile sunt termenii care descriu
prelungirile subiri, asemntori cu firele de pr , care
apar mai ales pe suprafaa bacteriilor Gram-negative .
Proteina din pili se numete pilin.
Pilii sunt mai rigizi dect flagelii.
Unele specii bacteriene ca Shigella i E coli au pilii
distribuii profuz pe suprafaa celular aproximativ 200
pe celul.
PiliI pot fi de dou tipuri:
Scuri, abundeni pilii comuni;
pili lungi, rari -sex pilii. Sex pilii pot fi distini prin
abilitatea de a fi legai de bacteriofagi specifici (sex pili
acioneaz ca receptori specifici pentru aceti
bacteriofagi).
Sex pilii se ataeaz la bacterii n timpul conjugrii.
Pilii la multe bacterii enterice confer
adezivitatea bacteriilor la suprafaa epiteliilor, a
hematiilor i a ciupercilor.
Adeziunea are rol important n colonizarea
bacterian a suprafeei epiteliilor i este deci
considerat un factor de colonizare.
Pilii gsii pe E coli au specificitate de zahar
fiind inhibat de manoz- bacterii manoz-
sensibile.
Alte bacterii piliate ca gonococii sunt adezive
i hemaglutinante, dar nu sunt inhibate de
manoz.
Exist variaii antigenice n pilin ale
gonococilor.
Capsula i Loose Slime

Unele bacterii formeaz capsul care constituie
nveliul celulei bacteriene i care este alctuit din tr-
un gel vscos. Capsula poate avea 10 m grosime.
Unele bacterii au un strat amorf numit slime layer.
Streptococcus mutans, bacteria gsit n placa dentar
poate s secrete o cantitatea mare de glucani
extracelulari mucoizi din zaharoz.
Capsulele constituie un determinant important al
virulenei.
Speciile ncapsulai sunt bacterii Gram-pozitive i
Gram-negative.
Capsulele sunt compuse din polizaharide vscoase cu
greutate molecular mare care apar ca un gel gros n
exteriorul celulei bacteriene.
Capsula bacteriei Bacillus anthracis este neobinuit
compus din g-glutamyl polypeptid (protein).
Membrana celular este implicat n biosinteza i n
asamblarea substanelor capsulare care sunt
secretate prin peretele celular sau prin membrana
extern.
Pierderea prin mutaie a enzimelor implicate n
biosinteza polizaharidele rezult n variabilitatea
pneumococilor.


Capsula nu este esenial pentru viabilitate.
Viabilitatea nu este afectat de pierderea
enzimatic a polizaharidelor capsulare.
Funcia exact a capsulei nu este complet
neleas.
Se tie c ea confer rezisten la fagocitoz
i deci ajut bacteriile protejndu-le de
mijloacele de aprare ale gazdei la invazie.

Componente intracelulare

n citoplasm exist grenulaii dense legate de ribozomii de tip
70S.

Acestea sunt particule alctuite de ribonucleoproteine care au un
diametru de 18 nm nu sunt aranjate pe reticulul endoplasmic ca
n celulele eucariote.

Alte incluzii granulare distribuite n citoplasm sunt particule
metabolice de rezerv ca poli -b-hidroxibutirate (PHB), polizaharid
i granule de glicogen i polimetafosfat sau granule
metacromatice.
Endosporii sunt formatiuni ale unor celule nalt termosensibile,
deshidratate, n repaus metabolic formate intracelular la membrii
genului Bacillus i Clostridium.
Sporularea este procesul de formare al endosporilor I este o
proprietate neobinuit a unor bacterii.
Seriile de modificri biochimice i morfologice care apar n timpul
sporulrii reprezint un model de difereniere al celulei
bacteriene.
Procesul care de obicei ncepe n faza staionar a ciclului celular
vegetativ este iniiat de depleia nutrienilor (de obicei sursele
de carbon sau nitrogen sau amndou).
Celula intr ntr-un proces complex de modificri morfologice i
biochimice care conduc la formarea endosporilor maturi.
Stadiu 0- celulele vegetative cu 2 cromozomi la
sfritul creterii exponeniale;
Stadiul I- formarea filamentului de cromatin axial i
excreia de exoenzime, inclusiv proteaze;
Stadiul II- forespore septum formation and
segregation of nuclear material into two compartments;
Stadiul III- formrii protoplastului sporului ;
Stadiul IV- formarea cortexului care confer aspectul
refractil al sporului;
Stadiul V- formarea nveliurilor sporale ;
Stadiul VI-maturizarea sporului care const n
modificarea peptidoglicanului, preluarea de acid
dipicolinic (structura unic a endosporului) i a
calciului, deyvoltarea rezistenei la cldur i la
solveni organici;
Stadiul VII- maturizarea final i eliberarea
endosporilor din celulele mam.


Endosporii nou-formai apar ca
formaiuni rotunde, nalt refractile n
interiorul celulelor mam.
Unele tulpini produc autolizine care
diger pereii i elibereaz endospori
liberi.
Protoplastul sporal sau core conine
un nucleu complet, ribozomi, i
componentele consumatoare de
energie care sunt incluse ntr-o
membran citoplasmatic modificat.
Peptidoglicanul din peretele sporului
mbrac membrana sporal.
Prin germinare acest perete va determina
peretele celulei vegetative.
n jurul peretelui sporal este un cortex
subire care conine un tip neobinuit de
peptidoglican care este rapid eliberat prin
germinare.
nveliul sporal conine o protein
asemntoare cu keratina care alctuiete
exosporul.
n timpul maturizrii protoplastul sporal se
deshidrateaz i sporul devine refractil i
rezistent la temperaturi nalte, la radiaii, la
presiuni nalte , la desicaie, la chimicale.
Aceste proprieti se corelez cu prezena
peptidoglicanului sporal i cu prezena
unui larg nivel de dipicolinat de calciu.

Recent evidence indicated that the spores of
Bacillus spharicus were revived which had
been preserved in amber for more than 25
million years. Their claims need to be
reevaluated. Figure 2-11 illustrates the
principal structural features of a typical
endospore (Bacillus megaterium) on initiation
of the germination process. The thin section of
the spore shows the ruptured, thick spore coat
and the cortex surrounding the spore
protoplast with the germinal cell wall that
becomes the vegetative wall on outgrowth.

Microscopia electronic a unei seciuni subiri prin sporul de Bacillus megaterium
arat prezena unui nveli sporal gros (SC), germinal groove (G) in the spore coat,
stratul cortical extern(OCL) ,cortexul (Cx), straturile germinale celulare (GCW),
membrana protoplastului sporal (PM), i regiunile unde nucleoidul (n) este vizibil.
(John H Freer, University of Glasgow, Scotland.)