Sunteți pe pagina 1din 31

4

SEMNALIZAREA CELULAR








4.1. Noiuni generale

Semnalizarea este o modalitate important de comunicare att ntre
organisme, ct i la nivel celular. Strategiile adoptate pentru realizarea
comunicrii difer n funcie de distana pe care moleculele semnal trebuie
s o strbat pentru a-i atinge inta. Celulele pot trimite semnale att n
imediata vecintate, ct i la distan. Moleculele semnal extracelulare sunt
recunoscute de ctre receptori specifici de pe suprafaa sau din interiorul
celulelor int. Deoarece trebuie s detecteze concentraii foarte mici din
moleculele semnal (de ordin nanomolar sau chiar mai puin), receptorii
trebuie s aib constante de afinitate foarte nalte ( 10
8
L/mol). Transducia
semnalului const ntr-un lan de reacii declanate n urma recepionrii
semnalului; astfel, celula int proceseaz informaiile primite i elaboreaz
un rspuns specific. Modificrile aprute la nivelul celulei int pot fi de
durat mai scurt sau mai ndelungate.
Toate procesele complexe care se desfoar n timpul semnalizrii
intercelulare pot fi rezumate n cteva etape:
- o celul semnalizatoare sintetizeaz anumite molecule;
- moleculele sunt eliberate de ctre celula semnalizatoare;
- moleculele sunt transportate ctre celula int;
- semnalul chimic este detectat de ctre celula int prin
intermediul receptorilor proteici;
- semnalul este recepionat de ctre celula int;
- celula int elaboreaz un rspuns specific la semnalul primit;
- natura rspunsului depinde de o serie de factori ce in de celula
receptoare;
- molecula semnal este inactivat i rspunsul celular nceteaz.

75
4.2. Principalele ci de semnalizare

4.2.1. Semnalizarea endocrin

Celulele secret hormoni, care sunt eliberai n snge i cltoresc pe
calea curentului sangvin pn la nivelul celulelor int, aflate la distan.
Exist o gam larg de hormoni care circul n snge, iar celulele int
trebuie s selecteze i s rein din acest amestec numai semnalul hormonal
specific. Datorit timpului scurs ntre eliberarea hormonului i atingerea
celulei int (de ordinul minutelor sau chiar orelor), semnalizarea endocrin
este considerat relativ lent (Fig. 4.1).

Fig. 4.1 Semnalizarea endocrin


4.2.2. Semnalizarea paracrin

Celulele secret mediatori locali, care acioneaz numai asupra
celulelor din imediata vecintate. Mediatorii sunt de obicei captai imediat
de celulele din apropiere sau sunt degradai rapid (n cteva secunde sau
milisecunde), evitnd astfel difuziunea lor la distan (Fig. 4.2).









Fig. 4.2 Semnalizarea paracrin

76
Un exemplu de semnalizare paracrin l constituie transmiterea
sinaptic: stimulii traverseaz dendritele i axonii sub forma unui impuls
electric, care este transformat n semnal chimic paracrin la nivelul
sinapselor. Un alt exemplu este reprezentat de prostaglandine, care sunt
derivai ai acidului arahidonic i acioneaz ca mediatori locali ai
rspunsului inflamator tisular la leziuni sau infecii. Prostaglandinele
produc vasodilataie, determinnd creterea fluxului sangvin i edem local;
de asemenea, provoac durere acut i cldur local. Aciunea lor este
blocat de aspirin.


4.2.3. Semnalizarea autocrin

Moleculele semnal eliberate de anumite celule acioneaz asupra
celulelor care le-au secretat, realiznd
astfel o cale de feed-back direct. n acest
mod, celulele tumorale sintetizeaz
factori de cretere, care stimuleaz
propria lor cretere i dezvoltarea masei
tumorale (Fig. 4.3).


Fig. 4.3 Semnalizarea autocrin


4.2.4. Semnalizarea prin contact direct

Dup cum am artat n capitolul anterior, jonciunile gap sunt mici
canale prin care celule nvecinate comunic ntre ele, fr a fi nevoie de
prezena unor molecule semnal. De asemenea, anumite molecule proteice,
cum este factorul epidermal de cretere (EGF), sunt sintetizate pe suprafaa
extern a membranei plasmatice i se leag de receptorii celulelor adiacente
prin contact direct (Fig. 4.4). Trebuie precizat c, prin clivaj proteazic, EGF
se poate desprinde de celula
secretoare i acioneaz ca un
semnal endocrin, la distan.


Fig. 4.4 Semnalizarea prin
contact direct
77
78
O celul poate avea mai multe seturi de receptori i, n consecin,
elaboreaz rspunsuri variate la diferite semnale. Deoarece anumite
molecule pot fi integrate n celule sub forma unui semnal combinat, o
cantitate limitat de mesageri poate declana un numr mare de rspunsuri
diferite. Pe de alt parte, diverse tipuri de celule pot reaciona diferit la
acelai semnal, deoarece fie au ali receptori, fie ataarea moleculei semnal
declaneaz ci diferite de transducie. De exemplu, acetilcolina declaneaz
contracia muchiului scheletic i relaxarea muchiului cardiac, deoarece
utilizeaz receptori diferii; tot acetilcolina are efect de stimulare a secreiei
anumitor celule, ce au acelai tip de receptori ca i fibrele musculare
cardiace, dar care declaneaz ci de transducie diferite.


4.3. Moleculele semnal

4.3.1. Tipuri de molecule semnal

Diferite tipuri de substane chimice derivai de aminoacizi, acizi
grai, colesterol, peptide mici i proteine pot funciona ca semnale
celulare. Moleculele semnal pot declana o modificare imediat n
metabolismul celular (de exemplu, stimularea glicogenolizei atunci cnd o
celul hepatic detecteaz prezena adrenalinei), o schimbare a polaritii
membranei plasmatice (sursa potenialelor de aciune) sau o schimbare a
expresiei genelor transcripia n nucleu. n general, moleculele chimice
pot fi clasificate n hidrofobe i hidrofile.
Moleculele mici, hidrofobe, cum sunt hormonii steroidici, hormonii
tiroidieni, retinoizii i vitamina D, se deplaseaz pe calea curentului
sangvin, legate de molecule de transport (carrier). Aceste molecule semnal
(liganzi) pot cltori astfel cteva ore, chiar zile n cazul hormonilor
tiroidieni. n final, ele difuzeaz prin membrana plasmatic a celulelor int
i se leag la receptori intracelulari. Ataarea liganzilor duce la activarea
receptorilor i determin reglarea transcripiei unor gene specifice.
Transcripia constituie un prim pas n integrarea semnalului, fiind necesar
prezena n acelai timp a mai multor molecule semnal pentru activare.
Acesta este rspunsul primar, care se desfoar n prima jumtate de or,
cnd are loc transcripia direct a genelor int. Unii din produii acestor
gene induc un rspuns secundar.
Moleculele hidrofile, cum sunt proteinele, peptidele mici,
nucleotidele, aminoacizii i derivaii lor, nu pot trece prin membrana
plasmatic i se leag la receptori de pe suprafaa celulelor int. n mod
normal, durata de via a acestor molecule n snge este de cteva minute.
4.3.2. Semnalizarea prin intermediul hormonilor

Hormonii pot fi mprii n trei categorii: (1) molecule lipofile mici,
care difuzeaz prin membrana plasmatic i interacioneaz cu receptori
intracelulari; (2) molecule hidrofile i (3) molecule lipofile mari, care se
leag la receptori celulari de suprafa.
1. Hormonii liposolubili cu molecule mici difuzeaz prin membrana
plasmatic i interacioneaz cu receptorii citosolici sau nucleari.
Complexele hormon-receptor rezultate se leag la regiuni de control al
transcripiei din ADN i modific expresia unor gene specifice. Hormonii
din aceast categorie includ steroizii (cortizolul, progesteronul, estradiolul,
testosteronul), tiroxina i acidul retinoic (Fig. 4.5).


Fig. 4.5 Aciunea moleculelor hormonale mici, liposolubile, pe receptorii
intracelulari

Hormonii steroidieni sunt sintetizai pornind de la colesterol i au
acelai schelet chimic. Dup ce strbat membrana plasmatic, hormonii
steroidieni interacioneaz cu receptorii intracelulari, formnd complexe
care stimuleaz sau inhib transcripia unor gene specifice. De asemenea,
79
aceste complexe de tip ligand receptor pot afecta stabilitatea ARNm
specific. Steroizii sunt activi ore sau zile i adesea influeneaz creterea i
diferenierea tisular. De exemplu, estrogenii stimuleaz creterea peretelui
uterin n vederea implantrii embrionului.
Tiroxina (tetraiodotironina) i triiodotironina sunt sintetizate n
tiroid prin proteoliza intracelular a unei proteine iodate tiroglobulina
i sunt imediat eliberate n snge. Aceti doi hormoni tiroidieni stimuleaz
expresia multor enzime citosolice (de exemplu, hexokinaza hepatic, care
catalizeaz catabolismul glucozei), precum i a unor enzime mitocondriale,
care catalizeaz fosforilarea oxidativ.
Retinoizii sunt derivai lipidici ai retinolului (vitamina A). Ei
realizeaz o serie de funcii reglatoare n diverse procese celulare. Astfel,
retinoizii regleaz proliferarea, diferenierea i moartea celular i au
numeroase aplicaii clinice. Efectele lor extrem de diverse reflect att
multitudinea derivailor din aceast categorie, ct i existena a dou clase
distincte de receptori (care formeaz heterodimeri), precum i diferenele de
la nivelul situsurilor reglatoare de pe ADN. n timpul dezvoltrii, retinoizii
acioneaz ca mediatori locali ai interaciunii intercelulare.
2. Moleculele semnal solubile n ap (hidrofile) nu pot difuza prin
membrana plasmatic i se leag la receptori celulari de suprafa. Aceast
clas de compui se mparte n dou categorii: hormoni peptidici, cum sunt
insulina, factorii de cretere i glucagonul i molecule mici, ncrcate
electric, cum sunt epinefrina i histamina, care funcioneaz ca hormoni sau
neurotransmitori. Muli hormoni hidrosolubili induc modificri n
activitatea uneia sau mai multor enzime prezente n celula int. n acest caz,
efectele atarii hormonului la receptorii de suprafa sunt imediate, dar
persist o perioad foarte scurt. De asemenea, aceste semnale pot da
natere la modificri n
expresia genelor, cu
durat variabil, de la
cteva ore la cteva
zile. n alte cazuri pot
apare modificri
ireversibile, cum ar fi
diferenierea celular
(Fig. 4.6).



Fig. 4.6 Aciunea moleculelor hidrofile asupra receptorilor de suprafa

80
81
3. Principalii hormoni liposolubili cu molecule mari, care se leag la
receptori celulari de suprafa, sunt prostaglandinele. Exist cel puin 16
prostaglandine diferite, grupate n nou clase chimice, notate prescurtat
PGA PGI. Prostaglandinele fac parte dintr-o familie mai larg de hormoni
cu 20 de atomi de carbon, numii eicosanoizi. n afar de prostaglandine,
acetia mai cuprind prostaciclinele, tromboxanii i leucotrienele.
Eicosanoizii sunt sintetizai pornind de la un precursor comun acidul
arahidonic. Att la vertebrate, ct i la nevertebrate, prostaglandinele sunt
sintetizate i secretate continuu de ctre multe tipuri de celule i sunt rapid
descompuse de enzime din snge. Multe prostaglandine acioneaz ca
mediatori locali n timpul semnalizrii paracrine i autocrine i sunt distruse
n imediata vecintate a locului de sintez. Ele moduleaz rspunsul altor
hormoni i au efect asupra multor procese celulare. Anumite prostaglandine
contribuie la agregarea i aderarea plachetelor sangvine la pereii vaselor de
snge, intervenind astfel n patologia vascular i n vindecarea rnilor.
Aspirina inhib ireversibil sinteza prin acetilarea sintazei prostaglandinei
H
2
. Alte prostaglandine iniiaz contracia celulelor musculare netede; ele se
acumuleaz n uter n timpul travaliului i se pare c joac un rol important
n inducia contraciei uterine.


4.3.3. Implicaiile monoxidului de azot n semnalizarea celular

Din categoria moleculelor semnal face parte i oxidul nitric sau
monoxidul de azot (NO). NO are o reactivitate crescut, participnd la
numeroase procese chimice. NO se regsete n gazele de eapament ale
automobilelor, dar, paradoxal, are i o serie de roluri biologice. n celule,
NO este sintetizat de ctre enzima NO sintaza (NOS). Toate tipurile de NOS
produc NO din arginin, n prezena oxigenului molecular i a NADPH.
Genomul uman conine trei gene diferite care codific NO sintaza:
- nNOS (NOS-1), identificat n neuroni;
- iNOS (NOS-2), ntlnit n macrofage; n timp ce nivelele nNOS
i eNOS sunt relativ constante, expresia genei iNOS se modific
n cazul unor stimuli (de exemplu, ingestia unor parazii);
- eNOS (NOS-3), aflat n celulele endoteliale, care delimiteaz
lumenul vaselor sangvine.
NO difuzeaz liber prin membrana celular. El acioneaz local
(semnalizare paracrin sau autocrin) i este rapid transformat n nitrat de
ctre oxigenul i apa din spaiul extracelular, avnd o durat de via de 2
30 secunde. NO este cunoscut ca factor de relaxare derivat din endoteliu
82
(EDRF). NO relaxeaz fibrele musculare netede din pereii arteriolelor. La
fiecare sistol, celulele endoteliale elibereaz NO, care difuzeaz n stratul
de celule musculare netede, determinnd relaxarea i facilitnd astfel
curgerea sngelui. oarecii la care a fost suprimat experimental activitatea
NO sintazei eNOS au manifestat hipertensiune arterial. Mecanismul de
aciune al nitroglicerinei, un medicament utilizat frecvent n reducerea
durerilor anginoase, se bazeaz pe generarea de NO, care relaxeaz pereii
arterelor coronare i arteriolelor. Acest mecanism de aciune a fost
descoperit de F. Murad, care a primit premiul Nobel n 1998. De asemenea,
NO inhib agregarea plachetar i formarea cheagurilor care ar putea
mpiedica curgerea sngelui.
Oxidul nitric are i alte roluri:
- eliberarea de NO la nivelul glomerulilor renali crete fluxul
sangvin n zon, stimulnd astfel rata filtrrii i formarea urinii;
- erecia penisului n timpul excitaiei sexuale este mediat prin
eliberarea de NO la nivelul terminaiilor nervoase din jurul
vaselor sangvine peniene; relaxarea acestor vase determin
acumularea sngelui n sinusurile capilare i producerea ereciei;
medicamentul Viagra (sildenafil citrat) inhib disocierea NO,
prelungindu-i efectul; n plus, eliberarea NO de ctre acrozomul
spermatozoidal stimuleaz meioza II la nivelul ovulului;
- micrile peristaltice ale tractului gastrointestinal sunt stimulate
de efectul relaxant al NO asupra musculaturii netede parietale;
- n schimb, NO inhib contractilitatea musculaturii netede a
uterului; n momentul travaliului, producia de NO scade; s-a
constatat c administrarea de nitroglicerin la gravidele cu risc
de natere prematur poate contribui la ducerea sarcinii la
termen;
- NO influeneaz secreia unor glande; astfel, stimuleaz
descrcarea hormonului eliberator de gonadotropin (GnRH)
din hipotalamus, a amilazei pancreatice din pancreasul exocrin i
a adrenalinei din medulosuprarenal;
- unii neuroni motori parasimpatici utilizeaz NO ca
neurotransmitor;
- hemoglobina transport NO n acelai timp cu oxigenul i l
descarc la nivel tisular; n dezoxigenrile severe, celulele din
bulb, sensibile la NO, rspund prin creterea frecvenei i
amplitudinii respiratorii;
- la animalele de laborator, s-a observat c NO eliberat de ctre
neuroni hipocampici stimuleaz anumii receptori responsabili
pentru anumite tipuri de nvare i memorie; uurina cu care
NO difuzeaz la nivelul unei sinapse l face capabil s
influeneze i sinapsele nvecinate, astfel c aciunea, la nceput
localizat, este apoi amplificat; obolanii tratai cu inhibitori
nNOS nu dezvolt rspunsuri condiionate i prezint modificri
de comportament (violen, deviaii sexuale).
Mecanismul de aciune al NO debuteaz cu legarea sa la receptori
proteici de pe suprafaa sau din interiorul celulei. Situsurile de legare pot fi
un ion metalic din molecula proteic sau un atom de sulf (n cazul cisteinei,
de exemplu). n urma atarii, receptorul proteic sufer o modificare
allosteric, care declaneaz formarea unui mesager secundar n celul. Cea
mai frecvent protein int pentru NO este guanilat ciclaza, enzima care
genereaz mesagerul secundar guanozin monofosfatul ciclic (GMPc). Astfel,
eliberarea de acetilcolin determin influxul de Ca
2+
n celulele endoteliale
din pereii vaselor de snge. Complexul format prin legarea Ca
2+
la
calmodulin stimuleaz activitatea NO sintazei eNOS. NO format difuzeaz
din celulele endoteliale n celulele musculare netede nvecinate, unde se
leag de guanilat ciclaza solubil. Activarea guanilat ciclazei induce
creterea nivelului GMPc i, n consecin, are loc relaxarea muscular i
dilataia vascular (Fig. 4.7).


Fig. 4.7 Mecanismul de aciune al NO la nivelul celulelor musculare
netede din pereii vaselor de snge (Dup Lowenstein, 1994)
83
4.4. Receptorii celulari de suprafa

Exist patru tipuri de receptori celulari de suprafa, care
interacioneaz cu liganzi hidrosolubili. Ataarea liganzilor la unii dintre
aceti receptori induce formarea de mesageri secundari.
1. Receptorii cuplai cu proteina G. Printre aceti receptori se
numr cei pentru epinefrin, serotonin i glucagon. Ataarea liganzilor la
aceti receptori activeaz proteina G, care, la rndul su, activeaz sau
inhib o enzim, avnd drept rezultat generarea unui mesager secundar
specific sau modularea unui canal ionic, ceea ce determin n final
modificarea potenialului membranar (Fig. 4.8).


Fig. 4.8 Receptorii cuplai cu proteina G


2. Receptorii canale ionice. Un exemplu l constituie receptorii
pentru aceticolin de la nivelul jonciunii neuromusculare. Legarea
moleculei semnal schimb
conformaia receptorului,
permind pasajul ionului
specific, ceea ce va modifica
potenialul electric al
membranei celulare.

Fig. 4.9 Receptorii
canale ionice

3. Receptorii legai la tirozin kinaze. Din aceast categorie face parte
superfamilia receptorilor pentru citokine, interferon i factori de cretere.
Aceti receptori nu au activitate catalitic intrinsec, dar ataarea ligandului
stimuleaz formarea unui receptor dimeric, care apoi activeaz una sau mai
multe tirozin kinaze citosolice (Fig. 4.10).
84

Fig. 4.10 Receptorii cuplai cu tirozin kinaze (Dup Darnell, 1994)

4. Receptorii cu activitate enzimatic intrinsec. Activitatea
catalitic a anumitor tipuri de receptori este iniat de ataarea unui ligand.
De exemplu, activarea unor receptori catalizeaz conversia GTP n GMPc;
ali receptori acioneaz ca protein fosfataze, ndeprtnd gruprile fosfat de
pe resturile fosfotirozinice ale substraturilor proteice, modificndu-le astfel
activitatea. Receptorii pentru insulin i pentru muli factori de cretere sunt
protein kinaze activate de ligand. n majoritatea cazurilor, liganzii se
ataeaz sub form dimeric, conducnd la dimerizarea consecutiv a
receptorului i iniierea activitii sale kinazice. Aceti receptori (serin/
treonin-kinaze sau tirozin-kinaze receptoare), pe lng fosforilarea unor
substraturi proteice, autofosforileaz i resturile din propriul domeniu
citosolic (Fig. 4.11).


Fig. 4.11 Receptorii cu activitate enzimatic intrinsec
(Dup Schulz, 1989)
85
Ataarea liganzilor la receptorii celulari de suprafa conduce la o
cretere/ scdere de scurt durat a concentraiei unor molecule de
semnalizare intracelulare, numite mesageri secundari. Aceste molecule cu
greutate mic includ: 3,5-AMPciclic (AMPc), 3,5-GMPciclic (GMPc), 1,
2-diacil glicerol (DAG), inozitol 1,4,5-trifosfat (IP
3
), Ca
2+
(Fig. 4.12)


Fig. 4.12 Structura chimic a unor mesageri secundari

Concentraia intracelular crescut a unuia sau mai multor mesageri
secundari, consecutiv atarii unui hormon, determin o modificare rapid a
activitii unor proteine enzimatice sau non-enzimatice. Mesagerii secundari
controleaz o serie de funcii metabolice, cum sunt: captarea i utilizarea
glucozei, stocarea i mobilizarea grsimilor, secreia produilor celulari,
proliferarea, diferenierea i supravieuirea celular, procese care se
realizeaz prin transcripia unor gene specifice. ndeprtarea sau degradarea
ligandului sau a mesagerului secundar sau inactivarea complexului ligand
receptor determin ncetarea rspunsului celular.


4.5. Alte proteine implicate n transducia semnalului

n afar de receptorii celulari de suprafa i de mesagerii secundari,
exist trei clase principale de proteine semnal intracelulare.
Un grup important de proteine de legare la GTP funcioneaz ca
nite adevrate comutatoare moleculare. Aceste proteine se afl n poziia
on (activ) cnd sunt legate la GTP i n poziia off (inactiv) cnd se
leag la GDP. n absena semnalului, proteina este legat la GDP. Ligandul
determin eliberarea GDP i ataarea consecutiv a GTP, favorizat fiind i
de concentraia crescut a GTP n celul. Activitatea GTP-azic intrinsec a
acestor proteine hidrolizeaz GTP legat n GDP i P
i
, determinnd
rentoarcerea la forma inactiv. Exist dou astfel de categorii de proteine:
proteinele G trimerice i proteinele Ras. Ambele tipuri conin regiuni care
86
promoveaz activitatea unor efectori proteici specifici prin interaciuni
directe protein protein. Aceste regiuni se afl n conformaie activ
numai n momentul legrii la GTP. Proteinele G sunt cuplate direct cu
receptorii activai, n timp ce Ras sunt conectate indirect, prin intermediul
altor proteine (Fig. 4.13).












Fig. 4.13 Proteine comutator cu activitate GTP-azic

Activarea tuturor receptorilor celulari de suprafa determin
modificri n fosforilarea unor proteine prin intermediul protein kinazelor.
Kinazele fac parte fie din structura receptorului, fie se gsesc n citosol sau
asociate membranei plasmatice. Celulele animale conin dou tipuri de
protein kinaze: unele activate prin intermediul tirozinei, altele prin serin
sau treonin. Structura miezului catalitic al ambelor tipuri este similar.
Activitatea catalitic a kinazelor este modulat prin fosforilare, fie prin
legarea direct la alte proteine, fie prin modificri ale nivelului unor
mesageri secundari. Activitatea protein kinazelor este opus protein
fosfatazelor, care ndeprteaz fosfatul de pe substraturi proteice specifice
(Fig. 4.14).

Fig. 4.14 Protein kinazele

87
Majoritatea cilor de transducie a semnalului conin complexe de
semnalizare de dimensiuni mari, multiproteinice, care sunt adesea reunite
prin intervenia unor proteine adaptor. Proteinele adaptor nu au activitate
catalitic i nici nu stimuleaz direct proteinele efectorii. Ele conin diferite
combinaii de domenii, care funcioneaz ca situsuri de ancorare pentru
diverse proteine. Aceste combinaii ofer un potenial imens pentru
interaciunile dintre diverse ci de semnalizare (Fig. 4.15).



Fig. 4.15 Proteinele adaptor


Membrii unei anumite clase de receptori transduc semnalele prin ci
bine conservate. Cu toate acestea, exist analogii ntre cile de semnalizare
asociate la diverse categorii de receptori. n figur sunt ilustrate
componentele principale ale unor ci de semnalizare deosebit de importante
receptorii cuplai cu proteina G (GPCR) i receptorii tirozin kinazici
(RTK). n ambele ci intervin proteinele de legare la GTP, dar poziia lor n
raport cu receptorul difer. Mesagerii secundari sunt componente de baz n
majoritatea cilor GPCR i numai n unele ci RTK, n timp ce proteinele
adaptor funcioneaz numai n calea RTK. Protein kinazele joac un rol
important n toate cile de semnalizare. n final, o protein kinaz activat
fosforileaz unul sau mai multe substraturi proteice. Natura substraturilor
proteice, care includ enzime, tubuline, histone i factori de transcripie,
determin rspunsul celular la un anumit semnal (Fig. 4.16).
88

Fig. 4.16 Calea receptorilor cuplai cu proteina G i calea receptorilor
tirozin kinazici


4.6. Receptorii cuplai cu proteina G

Muli receptori celulari de suprafa sunt cuplai cu o protein
trimeric de transducie a semnalului proteina G. Ataarea ligandului la
aceti receptori activeaz proteina G asociat, ce stimuleaz la rndul ei o
enzim efectoare, care genereaz un mesager secundar intracelular. Toi
receptorii cuplai cu proteina G conin apte regiuni transmembranare, cu
segmentul N-terminal orientat spre exterior i segmentul C-terminal spre
citoplasm (Fig 4.17).

89












Fig. 4.17 Structura receptorilor cuplai cu proteina G


Aceast important familie de receptori cuprinde fotoreceptorii
retineni (rodopsina), receptorii pentru miros din mucoasa nazal, ali
receptori pentru hormoni i neurotransmitori. Cu toate c aceti receptori
sunt activai de liganzi diferii i pot media rspunsuri celulare diverse, cile
de semnalizare sunt similare.
Dei toi receptorii din familia GPCR au o structur tridimensional
similar, secvena lor de aminoacizi este diferit. Secvena de aminoacizi
specific fiecrui receptor determin ce ligand se va ataa i ce tip de
protein G va interaciona cu receptorul respectiv. n plus, un rol important
n determinarea specificitii receptorului pentru o anumit protein G i
revine buclei hidrofile care conecteaz helixurile 5 i 6. Conformaia acestei
lungi bucle citosolice se modific n timpul legrii moleculei semnal,
permind ataarea i activarea proteinei G.
Rspunsul iniial, declanat de ataarea ligandului la receptor, const
n creterea nivelului intracelular al AMPc. Creterea AMPc rezult prin
activarea adenilat ciclazei, care convertete ATP n AMPc i pirofosfat
(PP
i
). Aceast enzim ataat la membran are dou domenii catalitice pe
faa citosolic a membranei plasmatice, care pot lega ATP n citosol.
Conexiunea dintre legarea hormonului la domeniul extern al receptorului i
activarea adenilat ciclazei este oferit de proteina G, care funcioneaz ca un
transductor al semnalului.
Proteina G are trei subuniti: , i . n absena unui ligand ataat
la receptor, subunitatea a proteinei G
s
(G stimulatoare) este legat la GDP
i formeaz un complex mpreun cu subunitile i . Legarea unui
hormon la receptor determin o modificare a conformaiei acestuia i
90
ataarea receptorului la proteina
G
s
. n acelai timp, n structura
proteinei G
s
trimerice se
produce nlocuirea GDP de la
nivelul subunitii cu GTP.
Complexul G
s
-GTP se
disociaz apoi de complexul G


i se leag la adenilat ciclaz, pe
care o activeaz. Aceast
activare este de scurt durat,
deoarece GTP legat la G
s
este
hidrolizat la GDP n cteva
secunde, ceea ce conduce la
reasocierea G
s
cu G

i
inactivarea adenilat ciclazei.
Astfel, subunitatea G
s

transmite modificrile
conformaionale ale
receptorului, ca urmare a legrii
moleculei semnal, pn la
nivelul adenilat ciclazei (Fig.
4.18).
91












Fig. 4.18 Semnalizarea prin
intermediul receptorilor cuplai
cu proteina G



92
Rspunsul celular mediat de AMPc poate necesita zeci de mii sau
chiar milioane de molecule de AMPc pentru o singur celul. De aceea,
semnalul hormonal trebuie amplificat pentru a genera suficient mesager
secundar. Amplificarea este posibil deoarece att receptorii, ct i
proteinele G
s
pot difuza rapid n membrana plasmatic. Un singur complex
receptor hormon poate activa mai mult de o sut de molecule G
s
. n
schimb, fiecare complex G
s
-GTP activeaz probabil o singur molecul de
adenilat ciclaz, care catalizeaz apoi sinteza mai multor molecule de AMPc
pe perioada legrii la G
s
-GTP. Cu toate c extinderea exact a acestei
amplificri este dificil de msurat, legarea unei singure molecule semnal la
un receptor poate determina sinteza a cel puin cteva sute de molecule de
AMPc pentru fiecare complex receptor hormon, nainte de disocierea
complexului i inactivarea adenilat ciclazei.
Rspunsul unei celule int la un hormon trebuie s nceteze rapid
dup ce concentraia hormonului n snge scade sub un anumit nivel. Una
din cile de terminare a rspunsului const n diminuarea afinitii
receptorului, care se manifest dup ce G
s
este activat. GTP legat la G
s

este rapid hidrolizat, adenilat ciclaza este inactivat i rspunsul celular
nceteaz, cu excepia cazului n care concentraia hormonului rmne
suficient de nalt pentru a forma noi complexe hormon receptor. Astfel,
pentru activarea continu a adenilat ciclazei este necesar prezena
hormonului, n cantiti corespunztoare.
Toxina holeric este o protein hexameric (o subunitate i cinci
subuniti ), sintetizat de bacteria Vibrio cholerae, care produce holera.
Aceast boal se manifest, n principal, printr-o diaree fulminant, care, n
lipsa unui tratament susinut de reechilibrare, poate determina moartea.
Mecanismul bolii este declanat de subunitatea a toxinei holerice. Aceast
subunitate penetreaz membrana plasmatic i ptrunde n citosolul
celulelor epiteliale intestinale, unde catalizeaz adiia covalent a ADP-
ribozei din compoziia NAD la G
s
. Complexul G
s
-GTP/ ADP-ribozilat
poate activa adenilat ciclaza n mod normal, dar n acest caz nu se mai poate
realiza hidroliza GTP la GDP. Astfel, G
s
rmne n stare activ i
stimuleaz continuu adenilat ciclaza, ceea ce determin creteri importante
ale AMPc n citosolul enterocitelor. Din aceast cauz, anumite proteine
membranare din celulele epiteliale intestinale vor facilita trecerea masiv de
ap din snge n lumenul intestinal, determinnd diareea masiv (Fig. 4.19).





Fig. 4.19 Mecanismul de aciune al toxinei holerice

n unele celule, nivelul AMPc poate fi reglat att n sensul creterii,
ct i al scderii prin aciunea unor hormoni diferii. n celulele hepatice, de
exemplu, epinefrina, glucagonul i ACTH stimuleaz adenilat ciclaza, n
timp ce prostaglandina PGE
1
i adenozina o inhib. Receptorii pentru PGE
1

i adenozin interacioneaz cu proteina G inhibitoare (G
i
), care conine
aceleai subuniti i ca i G
s
, dar are o subunitate diferit (G
i
). Ca
rspuns la ataarea unui ligand inhibitor, proteina G
i
asociat receptorului
elibereaz GDP i leag GTP; complexul activ G
i
-GTP disociaz de G

i
inhib adenilat ciclaza. De asemenea, G

poate s inhibe direct activitatea


anumitor izoforme ale adenilat ciclazei (Fig. 4.20).

Fig. 4.20 Proteinele G stimulatoare i inhibitoare (Dup Gilman, 1984)
93
4.7. Receptorii tirozin kinazici i Ras

A doua categorie important de receptori celulari de suprafa este
reprezentat de receptorii tirozin kinazici (RTK). Liganzii pentru RTK sunt
hormoni solubili sau peptide legate la membran, printre care factorul de
cretere neuronal (NGF), factorul de cretere derivat din plachete
(PDGF), factorul de cretere fibroblastic (FGF), factorul de cretere
epidermal (EGF) i insulina. Ataarea ligandului iniiaz activitatea protein
tirozin kinazic intrinsec a receptorului, care stimuleaz cascada de
transducie a semnalului, determinnd modificri ale fiziologiei celulare i
n expresia genelor. Calea de semnalizare prin RTK are un spectru larg de
funcii, cum ar fi proliferarea i diferenierea celular, stimularea
supravieuirii celulare, modularea metabolismului celular. Unii dintre aceti
receptori au fost identificai prin studierea diferitelor tipuri de cancere
umane (de exemplu, cancerul de sn), asociate cu forme mutante ale
receptorilor pentru factorii de cretere.
Toi receptorii tirozin kinazici sunt alctuii dintr-un domeniu
extracelular, ce conine situsul de ataare a ligandului, un domeniu
transmembranar n helix i un domeniu citosolic, care include o regiune
cu activitate tirozin-kinazic. Ataarea ligandului determin dimerizarea
receptorului; sub influena protein kinazei are loc fosforilarea unui set
distinct de resturi tirozinice n domeniul citosolic, proces numit
autofosforilare (Fig. 4.21).

Fig. 4.21 Mecanismul autofosforilrii receptorilor tirozin kinazici
(Dup Mohammadi, 1996)

94
Autofosforilarea se desfoar n dou etape. Mai nti, resturile
tirozinice din apropierea situsului catalitic sunt fosforilate, ceea ce duce la o
modificare conformaional ce faciliteaz ataarea ATP n cazul anumitor
receptori (receptorul pentru insulin) sau legarea unor substraturi proteice n
cazul altora (receptorul pentru FGF). Apoi, activitatea kinazic a
receptorului fosforileaz alte situsuri ale domeniului citosolic;
fosfotirozinele rezultate funcioneaz ca situsuri de ancorare pentru alte
proteine implicate n transducia semnalului mediat de RTK.
Ras este o protein de legare la GTP, care, similar subunitii a
proteinei G, se afl, alternativ, n stare activat (cu GTP legat) i inactiv
(cu GDP). n contrast cu receptorii GPCR, Ras nu este direct cuplat cu
RTK. Activarea Ras i a
G

este declanat de
ataarea hormonului la
un receptor celular de
suprafa adecvat. Spre
deosebire ns de G

,
activarea Ras este
accelerat de o protein,
numit factor de schimb
guaninic (GEF), care se
leag la complexul Ras-
GDP, determinnd
disocierea GDP i
legarea spontan a GTP,
dup care GEF este
eliberat (Fig. 4.22).

Fig. 4.22 Mecanismul
de aciune al proteinei
Ras


Hidroliza GTP legat dezactiveaz att Ras, ct i G

. Durata de via
a complexului Ras-GTP este de aproape un minut, cu mult mai mare dect
cea a complexului G

-GTP, deoarece dezactivarea Ras necesit prezena


unei alte proteine proteina activatoarea a GTPazei (GAP) care se
ataeaz la complexul Ras-GTP i accelereaz activitatea GTPazic
intrinsec de cteva sute de ori. Proteinele Ras mutante sunt asociate cu
multe tipuri de cancere umane. Aceste proteine mutante leag GTP, dar nu-l
95
96
pot hidroliza, astfel c rmn n permanen n stare activ i determin
transformri neoplazice.
Att Ras, ct i G
s
aparin unei mari familii de proteine intracelulare
de legare la GTP superfamilia GTPazelor. Aceast familie include toate
tipurile de subuniti G

(inclusiv G
i
), proteinele Rab, care regleaz
fuziunea intracelular a veziculelor i proteinele Rho, care regleaz
citoscheletul de actin. Multiplele similariti existente ntre structura i
funciile proteinelor Ras i G

demonstreaz c n evoluia timpurie au avut


un strmo comun, o GTPaz de transducie a semnalului. Aceste dou
proteine nrudite controleaz multe aspecte ale creterii i ale
metabolismului celular.


4.8. Calea MAP kinazei

Toi receptorii cuplai cu Ras par s utilizeze o cale de transducie a
semnalului bine conservat, n care semnalul indus de ligand determin
activarea Ras. Activarea Ras iniiaz cascada kinazic, care culmineaz cu
activarea MAP kinazei (protein-kinaz activat de factori mitogeni).
Aceast serin/treonin kinaz, care se poate transloca n nucleu, fosforileaz
multe proteine diferite, incluznd factorii de transcripie, care regleaz
expresia unor proteine implicate n ciclul celular i n difereniere. Activarea
MAP kinazei n dou celule diferite poate da natere la rspunsuri celulare
identice sau diferite, tot aa cum, n aceeai celul, activarea sa se poate
realiza prin stimularea unor RTK diferii.
Studiile biochimice i genetice efectuate la Drosophila i la
mamifere au evideniat o cascad protein kinazic foarte bine conservat,
care funcioneaz n mod secvenial, n aval de Ras activat. Mai nti, Ras
se leag la domeniul N-terminal al Raf o serin/ treonin kinaz. Raf se
ataeaz i fosforileaz MEK, o protein kinaz specific, cu dubl activitate,
care fosforileaz att resturile tirozinice, ct i pe cele serinice. MEK
fosforileaz i activeaz MAP kinaza. La rndul su, MAP kinaza
fosforileaz diverse proteine, printre care factorii nucleari de transcripie,
ce mediaz rspunsurile celulare (Fig. 4.23).




97



































Fig. 4.23 Calea MAP
kinazei (Dup Vojtek, 1993)


4.9. Mesagerii secundari

Efectele diferite ale AMPc sunt mediate prin aciunea protein
kinazelor dependente de AMPc (PKAc), cunoscute i sub denumirea de
protein kinaze A. Aceste enzime modific activitatea enzimelor int prin
fosforilarea resturilor serinice i treoninice specifice. Fosforilarea
moduleaz, n sensul creterii sau al scderii, activitatea catalitic a
enzimelor.
Protein kinazele dependente de AMPc sunt tetrameri, alctuii din
dou subuniti reglatoare (R) i dou subuniti catalitice (C). n forma
tetrameric, enzima este inactiv. Ataarea AMPc la subunitile R
determin disocierea unitilor C, care fosforileaz apoi proteinele acceptor.
Fiecare subunitate R are dou situsuri distincte pentru legarea AMPc,
numite A i B, localizate n domenii diferite. Legarea AMPc la situsul B
induce o modificare conformaional, elibernd astfel situsul A, la care se va
ataa AMPc, determinnd n final disocierea subunitilor C.
n general, toi mesagerii secundari activeaz protein kinazele printr-
un mecanism similar: n mod normal, kinaza are o activitate sczut, care
ns crete odat cu legarea mesagerului secundar. Fiecare tip de kinaz este
inhibat de ataarea la situsul activ a unei secvene peptidice, numit
pseudosubstrat. n cazul PKA, aceast secven face parte dintr-o subunitate
reglatorie distinct. n urma legrii mesagerului secundar au loc modificri
conformaionale prin care situsul activ este pus n eviden (Fig. 4.24).



Fig. 4.24 Activarea protein kinazelor dependente de AMP ciclic


98
Protein kinazele dependente de AMPc induc o multitudine de efecte,
n funcie de substratul lor proteic. Unul dintre rspunsurile celulare mediate
de AMPc este eliberarea glucozei din glicogen n celulele musculare i
hepatice, sub influena epinefrinei. n organism, glucoza este stocat sub
form de glicogen, cele dou depozite majore fiind reprezentate de ficat i
muchi. Glicogenul este sintetizat sub influena glicogen sintazei i este
degradat prin reacii de fosforilare, catalizate de glicogen fosforilaz. Att n
celulele musculare, ct i n hepatocite, glucozo 1-fosfatul rezultat din
degradarea glicogenului este convertit de ctre fosfoglucomutaz n glucozo
6-fosfat, care fie intr n calea glicolitic i genereaz ATP (n cazul
celulelor musculare), fie este hidrolizat la glucoz de ctre o fosfataz (n
celulele hepatice).
Creterea nivelului AMPc, indus de epinefrin, regleaz
transformarea glicogenului n glucozo 1-fosfat n dou moduri: prin
inhibarea sintezei glicogenului i prin stimularea degradrii sale. Scderea
nivelului AMPc activeaz fosfoprotein fosfataza, care ndeprteaz resturile
fosfat att de pe forma inactiv a glicogen sintazei, care este astfel activat,
ct i de la nivelul formelor active ale glicogen fosforilaz-kinazei i glicogen
fosforilazei, pe care le inactiveaz; prin aceste aciuni, fosfoprotein fosfataza
stimuleaz sinteza de glicogen (Fig. 4.25).

Fig. 4.25 Aciunea AMPc asupra nivelului glicogenului

99
AMPc regleaz indirect activitatea fosfoprotein fosfatazei. La nivele
crescute ale AMPc, PKAc fosforileaz un inhibitor al fosfoprotein
fosfatazei, care se leag de
aceasta i i inhib activitatea.
n schimb, cnd nivelul
AMPc scade, inhibitorul nu
mai este fosforilat i
fosfoprotein fosfataza este
activ (Fig. 4.26).
100



Fig. 4.26 Reglarea
activitii fosfoprotein -
fosfatazei


Degradarea glicogenului stimulat de AMPc constituie un exemplu
tipic de reacii enzimatice n cascad, caracterizate prin faptul c enzima
care catalizeaz o anumit etap este activat/ inhibat de produsul de
reacie al etapei anterioare. Astfel de cascade de reacii prezint cel puin
dou avantaje: n primul rnd, un ntreg grup de reacii catalizate enzimatic
pot fi reglate de un singur tip de molecul (de exemplu, AMPc); n al doilea
rnd, cascada permite amplificarea enorm a unui semnal iniial minim (de
exemplu, o concentraie sangvin a epinefrinei de doar 10
-10
M poate
determina o cretere a glicemiei de pn la 50 %).
n anumite tipuri de celule, o cretere a nivelului AMPc determin
un rspuns benefic ntr-o regiune a celulei, dar acelai rspuns poate avea
efecte nefavorabile, chiar potenial patologice, n alte regiuni ale aceleiai
celule. De exemplu, la nivelul unor celule aflate n migrare, semnalele
specifice dependente de AMPc regleaz dinamica citoscheletului i prin
aceasta motilitatea laturii de naintare a celulei; n acelai timp, modificri
similare ale citoscheletului n alte regiuni ale celulei pot fi duntoare.
Studii recente au identificat o familie de proteine de ancorare, care fixeaz
PKAc inactive n zone subcelulare specifice i restrng astfel la aceste
locaii rspunsurile dependente de AMPc.
Aceste proteine, cunoscute drept proteine asociate kinazelor AMPc
(PAKA), au o structur bipartit, cu o regiune responsabil de localizarea
subcelular specific i o alta care se leag la subunitatea reglatorie a PKAc.
Una dintre aceste proteine PAKA250 integreaz semnalele dependente
de AMPc, reglnd structura citoscheletului de actin. Proteinele specifice de
ancorare localizeaz i alte proteine de semnalizare (kinaze i fosfataze). Ele
joac astfel un rol important n integrarea informaiilor de la multiple ci de
semnalizare i ofer un control local al proceselor celulare specifice.
Creterea nivelului citosolic al AMPc stimuleaz i expresia
anumitor gene. Ca element comun, n structura acestor gene intr o secven
numit element de rspuns la AMPc (CRE), care se ataeaz la forma
fosforilat a unui factor de transcripie numit proteina de legare la CRE
(CREB). Ataarea unor neurotransmitori sau a hormonilor la receptorii
cuplai cu proteina G
s
stimuleaz adenilat ciclaza, conducnd la creterea
AMPc i activarea consecutiv a subunitii catalitice a protein kinazei
dependente de AMPc. Subunitatea catalitic este apoi translocat n nucleu,
unde fosforileaz serina 133 a proteinei CREB. Proteina CREB fosforilat
se ataeaz la genele int ce conin CRE i, de asemenea, interacioneaz cu
un co-activator (CBP/P300), care leag CREB la mecanismul
transcripional, stimulnd astfel transcripia (Fig. 4.27).


Fig. 4.27 Mecanismul semnalizrii pe calea protein G AMPc
(Dup Brindle, 1992)

4.10. Fosfatidil inozitolul, calciul i diacil glicerolul

Un alt mesager secundar este fosfatidil inozitolul (PI). Grupul
inozitol al acestui fosfolipid poate fi fosforilat reversibil, n poziii diferite,
prin aciunea combinat a unor kinaze i fosfataze, rezultnd astfel
fosfoinozitide, legate la membran. Nivelul PI n celul este reglat dinamic
sub influena semnalelor extracelulare. n celulele nestimulate, nivelul
101
celular al PI este foarte sczut. Ca rspuns la anumite semnale (de exemplu,
PDGF) are loc o cretere brusc a PI fosforilat prin activarea kinazei PI-3,
stimulat de GPCR i RTK. PI acioneaz ca un situs de ancorare la
membran a unor molecule semnal i, n anumite cazuri, stimuleaz
activitatea catalitic.
Fosfoinozitidele pot fi clivate de ctre fosfolipaza C asociat
membranei (PLC), genernd ali mesageri secundari: 1,2-diacilglicerol
(DAG), o molecul lipofilic care rmne ataat la membran, i inozitol 1,
4, 5-trifosfat (IP
3
), care difuzeaz n citosol. Stimularea activitii PLC,
indus hormonal, i generarea consecutiv de DAG i IP
3
sunt mediate att
de GPCR, ct i de RTK (Fig. 4.28).


Fig. 4.28 Clivarea fosfoinozitidelor de ctre fosfolipaza C

Deoarece este hidrosolubil, IP
3
poate difuza n citosol, transportnd
semnalul hormonal de la suprafaa celulei la nivelul reticulului endoplasmic
(RE), unde IP
3
se leag de canalele de Ca
2+
, compuse fiecare din patru
subuniti proteice identice.
Ionii de calciu sunt sechestrai n dou depozite intracelulare
principale: RE i mitocondria. Nivelul citosolic al Ca
2+
este meninut foarte
sczut 0,2 M cu ajutorul Ca
2+
-ATPazelor, care pompeaz calciul
citosolic la exteriorul celulei sau n cele dou compartimente de depozitare.
Legarea unor hormoni la receptorii celulari de suprafa este urmat de o
cretere rapid a nivelului Ca
2+
citosolic, ceea ce induce o serie de
rspunsuri celulare. Acest mecanism a fost descifrat la nceputul anilor 80,
cnd s-a observat c o cretere a nivelului calciului citosolic este precedat
ntotdeauna de o cretere a IP
3
. Prin ataarea la canalele de calciu din
membrana RE, IP
3
determin deschiderea acestora i eliberarea Ca
2+
n
citosol. Deschiderea canalelor de Ca
2+
sensibile la IP
3
este reglat de
concentraia citosolic a Ca
2+
: un nivel sczut al Ca
2+
n citosol crete
afinitatea receptorilor pentru IP
3
i, consecutiv, eliberarea masiv a Ca
2+
din
RE, n timp ce concentraia crescut a Ca
2+
citosolic are un efect contrar.
102
Reglarea complex a receptorilor IP
3
din membrana RE determin
oscilaii rapide ale nivelului Ca
2+
citosolic, atunci cnd este stimulat calea
IP
3
. De exemplu, stimularea celulelor secretorii ale glandei pituitare prin
factorul de eliberare a hormonului luteinizant declaneaz creteri rapide i
frecvente ale nivelului Ca
2+
citosolic. Fiecare din aceste creteri este urmat
de un maxim al secreiei hormonului luteinizant (LH). Motivul pentru care
apar aceste fluctuaii nu este nc elucidat, dar se pare c o cretere
constant, susinut, ar fi toxic pentru celul.
Nu toate celulele rspund identic la IP
3
. Aceast sensibilitate
variabil poate fi expresia unor izoforme ale canalelor de calciu sensibile la
IP
3
din membrana RE sau poate reflecta coninutul diferit de Ca
2+
din RE.
La mai puin de o secund dup generarea sa, IP
3
este hidrolizat la
inozitol 4,5-bifosfat (PIP
2
), care nu mai stimuleaz eliberarea Ca
2+
din RE.
n plus, intr n aciune Ca
2+
-ATPazele, care pompeaz calciul n afara
celulei sau napoi n lumenul RE. Celula posed anumite mecanisme care-i
permit s refac stocurile de Ca
2+
. n lipsa acestor mecanisme, semnalizarea
prin creterea nivelului Ca
2+
citosolic nu ar fi posibil. Astfel, n membrana
plasmatic exist anumite canale de Ca
2+
, numite canale comandate de
depozit (SOC, store operated channels), care se deschid ca rspuns la
scderea rezervelor intracelulare de calciu (Fig. 4.29).


Fig. 4.29 Semnalizarea prin intermediul ionilor de calciu
103
n celulele musculare i n neuroni, pe lng canalele de calciu
activate de IP
3
exist i altele, cunoscute drept receptori rianodinici (RYR),
deoarece sunt sensibile la un alcaloid vegetal rianodina. Aceti receptori
sunt localizai la nivelul membranei RE i sunt cuplai cu domeniul
citoplasmatic al unui receptor dihidropiridinic, activat de voltaj, din
membrana plasmatic. Variaiile de potenial la nivelul membranei
plasmatice determin modificri conformaionale ale RYR, astfel c ionii de
Ca
2+
sunt eliberai n citosol. Creterea concentraiei citosolice a Ca
2+
nu
inhib aceti receptori, ei fiind inactivai numai prin repolarizarea
membranei. Studii recente au identificat, la nivelul neuronilor, o molecul
de semnalizare intracelular ciclic ADP riboza care determin eliberarea
Ca
2+
din depozite pe calea RYR (Fig. 4.30).


Fig. 4.30 Receptorii rianodinici (Dup Berridge, 1993)

Ca mesager secundar, creterea nivelului Ca
2+
citosolic are o serie de
efecte fiziologice. De exemplu, n celulele ale pancreasului endocrin
declaneaz exocitoza veziculelor secretorii i eliberarea insulinei; n
celulele musculare striate determin contracia, n schimb, n celulele
musculare netede arteriale induce relaxarea, prin deschiderea canalelor
membranare de potasiu, urmat de ieirea ionilor K
+
i hiperpolarizarea
membranei; n celulele hepatice i musculare activeaz degradarea
glicogenului n glucozo 1-fosfat.
104
105
Calciul acioneaz n colaborare cu o mic protein citosolic
calmodulina care se afl n toate celulele eucariote. Fiecare molecul de
calmodulin se ataeaz la patru ioni de Ca
2+
, formnd un complex care
activeaz, la rndul su, alte enzime, cum este kinaza lanului uor al
miozinei, ce regleaz activitatea miozinei. O alt enzim activat de
complexul Ca
2+
-calmodulin este cAMP fosfodiesteraza, care degradeaz i
inactiveaz AMPc. De asemenea, complexul Ca
2+
-calmodulin modific
activitatea unor protein kinaze, care fosforileaz factori de transcripie i
regleaz astfel expresia genelor.
Un alt mesager secundar este diacil glicerolul (DAG), care, dup ce
se sintetizeaz din PIP
2
, rmne ataat la membran. Rolul su principal
const n activarea unei familii de protein kinaze, generic denumite protein
kinaza C (PKC). n absena stimulrii hormonale, PKC este solubil n
citosol i catalitic inactiv. Creterea Ca
2+
citosolic induce ataarea PKC la
suprafaa citoplasmatic a membranei. La acest nivel, PKC este activat de
ctre DAG i declaneaz o serie de rspunsuri celulare, privind creterea i
metabolismul (fosforilarea glicogen sintazei). De asemenea, PKC
fosforileaz anumii factori de transcripie, cu inducerea sau represarea
consecutiv a ARNm.