2014 07 C Asigurarea Calitatii

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA
Conf. Dr. Cecilia ARSENE Notie curs 07

Conf. Dr. Romeo Iulian OLARIU 1

C7.

6 Asigurarea calitii i controlul de calitate n analizele chimice ......................................... 2
6.1 Criterii de selectare a unei metode adecvate de analiz ..................................................... 2
6.2 Validarea metodelor............................................................................................................... 3
6.3 Proceduri de control a calitii ................................................................................................. 5
6.4 Rolul participrii la exerciii de comparare inter-laboratoare................................................ 6
6.5 Calibrarea echipamentelor i folosirea diagramelor de control (Shewart diagram) ............ 6
6.6 Calibrarea instrumentelor i analiza relaiei de dependen concentraie-rspuns .......... 11
6.7 Calibrarea uni-punctual. Calibrarea multi-punctual. Calibrri cu standard intern sau
standard extern .......................................................................................................................... 12
6.7.1 Calibrarea uni-punctual................................................................................................ 12
6.7.2 Metoda standardului extern............................................................................................ 13
6.7.3 Metoda standardului intern............................................................................................. 14
6.8 Metoda adiiei de standard n regim uni-punctual sau multi-punctual ............................... 15
6.8.1 Adiie de standard n regim uni-punctual........................................................................ 16
6.8.2 Adiie de standard n regim multi-punctual ..................................................................... 17




6 Asigurarea calitii i controlul de calitate n analizele chimice
6.1 Criterii de selectare a unei metode adecvate de analiz
n selectarea unei metode analitice se ine seama de considerente specifice tipurilor de metode
folosite.
Metode puse la punct/dezvoltate de laborator
- introducerea de metode puse la punct ntr-un laborator de analiz trebuie s fie planificat i
efectuat de personal calificat i cu resurse corespunztoare;
- aceast planificare trebuie cunoscut/adus la cunotina ntregului personal implicat n
efectuarea de ncercri/etalonri;
- aceast planificare trebuie actualizat i trebuie, n acelai timp, s asigure comunicare eficace
ntre persoanele implicate.
Metode nestandardizate
- folosirea de metode nestandardizate trebuie s se fac cu acordul clientului;
- aceste metode nestandardizate trebuie s fie corespunztoare cerinelor clientului i scopului
propus;
- trebuie validate nainte de aplicare;
- trebuie documentate i implementate proceduri pentru aceste metode noi i trebuie s conin
cel puin:
o identificarea/denumirea metodei;
o scopul i domeniul de aplicare al metodei;
o tipul de probe supuse ncercrii/etalonrii prin aceast metod;
o parametri care se determin i intervalul de aplicabilitate;
o aparatura i echipamentele necesare;
o parametri de performan care trebuie asigurai;
o standardele de referin/etaloanele i materialele de referin necesare;
o condiiile de mediu ce trebuie asigurate;
o descrierea procedurii propriu-zise
modul de prelevare, manipulare, transport, pstrare i preparare a
probelor; verificri care se impun nainte de nceperea ncercrii;
verificri privind funcionarea corect a echipamentelor i reglarea
acestora, dac e cazul; modul de nregistrare al observaiilor i
rezultatelor; msuri de precauie/securitate;
o criterii i/sau cerine de aplicare/neaplicare;
o datele ce trebuie nregistrate i metoda de analiz inclusiv prezentarea detaliat;
o incertitudinea sau procedura de estimare a incertitudinii.



6.2 Validarea metodelor
nainte ca o procedur care furnizeaz informaii analitice utile s fie folosit ntr-un laborator de
analiz este necesar s se demonstreze c procedura este capabil s furnizeze rezultate
acceptabile. Validarea este un proces de evaluare a faptului dac precizia i acurateea atinse prin
urmarea unei proceduri, sunt apropriate pentru rezolvarea problemei de interes. Prin validare se
asigur faptul c procedura scris conine suficient de multe detalii n aa fel nct la folosirea
procedurii de ctre operatori diferii din laboratoare diferite s se obin rezultate comparabile.
Validarea se poate realiza i n baza folosirii unei probe standard a crei compoziie este similar
cu a probei de analizat. Compararea rezultatelor obinute la analizele n regim replicat poate fi
folosit pentru evaluarea preciziei i acurateei procedurii. De asemeni se pot estima i diferenele
intra- i inter-laboratoare. n absena unor standarde corespunztoare, acurateea poate fi evaluat
prin compararea rezultatelor obinute cu o nou metod n raport cu acelea obinute printr-o
metod de acuratee cunoscut.
Pentru validarea metodelor analitice, se au n vedere aspectele legate de limitele de detecie,
de cuantificare, decizie i domeniul liniar care fac parte din categoria parametrilor de performan
ai metodelor. Profunzimea validrii depinde de maturitatea metodei i de scopul metodei (sntate,
mediu). De obicei se face o distincie clar ntre metodele noi, metodele folosite de cteva
laboratoare, metodele stabilite/validate deja dar la care s-au fcut modificri i metodele
standardizate.
Oricum, metodele supuse validrii trebuie s corespund scopului pentru care au fost propuse.
Validarea implic o serie de pai interdependeni printre care capacitatea metodei de a rezolva
problema/cerinele clientului i demonstrarea capabilitii tehnice a metodei n interiorul domeniului
su de aplicabilitate. Profunzimea procesului de validare depinde de necesiti, costuri, posibiliti
i riscuri.
Diferitele posibiliti de validare in cont de:
- utilizarea i importana crucial a etalonrii;
- intercomparri inclusiv folosirea de MR i metode de referin;
- analiza surselor de eroare sistematic i ntmpltoare;
- personal bine calificat i cu judecat profesional corespunztoare;
- simulare i modelare.
Procedurile de validare pot fi clasificate n:
- abordare tiinific prin care se evalueaz reprezentativitatea, repetabilitatea i reproductibilitatea
pe baza datelor de literatur sau investigaiilor ad-hoc. Trebuie demonstrat c s-a studiat
influena diferiilor factori i c acestea sunt inute sub control.
- abordarea comparativ prin care metoda este evaluat prin compararea rezultatelor obinute prin
metoda supus validrii cu cele obinute printr-o metod deja validat care a fost dezvoltat
pentru acelai scop. Dac nu este posibil se aplic comparrile interlaboratoare.
Acceptarea procedurii de validare este:



- fie determinat intern n laborator;
- convenit prin acord ntre client i laborator;
- acceptat de autoriti/organismul de acreditare.
nainte ca o metod s fie supus validrii prin experimente n cooperare cu alte laboratoare
ea trebuie validat n cadrul unui laborator, de obicei laboratorul care a pus-o la punct/dezvoltat-o
ceea ce se numete validarea in-house.
Validarea in-house (intern) prezint urmtoarele caracteristici:
- garanteaz validitatea metodei nainte de a o supune unui experiment prin cooperare care
implic costuri importante;
- garanteaz c metoda validat este aplicat corespunztor de analiti nainte de a o supune
unui studiu complex;
- furnizeaz evidena privind corectitudinea metodei n condiiile n care nu exist date dintr-un
experiment n cooperare sau organizarea acestuia implic costuri pe care laboratorul nu i le
poate permite sau nu se justific;
presupune identificarea i evaluarea tuturor parametrilor i cuantificarea incertitudinii.
- validarea este confirmarea prin examinare i furnizare de dovezi obiective c anumite cerine
specifice pentru o utilizare intenionat sunt ndeplinite;
- laboratorul trebuie s valideze metode pentru a demonstra capacitatea sa n utilizarea
intenionat a metodelor nestandardizate, metodelor puse la punct n laborator, metodelor
standardizate aplicate pentru alt scop/domeniu dect cel prevzut sau metodele standardizate
optimizate sau modificate;
- validarea trebuie s fie att de cuprinztoare ct este necesar pentru a ndeplini necesitile
aplicrii i domeniul de aplicare;
- activitatea de validare trebuie s fie corespunztoare scopului dorit;
- validarea poate include aspectele de: prelevare, manipulare i transport al probelor;
- tehnicile folosite pentru determinarea performanelor unei metode ar trebui s fie una dintre
sau o combinaie a urmtoarelor:
o etalonarea folosind etaloane sau materiale de referin;
o compararea rezultatelor obinute prin alte metode;
o comparri interlaboratoare;
o evaluarea sistematic a factorilor care influeneaz rezultatul;
o evaluarea incertitudinii rezultatelor bazat pe nelegerea tiinific a principiilor teoretice
ale metodei i pe experiena practic.
- se menin nregistrri referitoare la rezultatele obinute, metoda/procedura de validare aplicat
i declaraia care confirm faptul c metoda corespunde scopului propus;
- dac se fac modificri n metodele nestandardizate validate, trebuie documentat influena
acestor modificri i efectuat o nou validare;



- intervalul de aplicabilitate i exactitatea (incertitudinea rezultatelor, limita de detecie,
selectivitatea, linearitatea, limita de repetabilitate i/sau reproductibilitate, robusteea fa de
influene externe i/sau sensibilitatea ncruciat fa de interferenele matricei, influena
condiiilor de mediu) metodelor validate trebuie s fie relevante pentru satisfacerea
necesitilor clientului;
- validarea este ntotdeauna un echilibru ntre costuri, riscuri i posibiliti tehnice. Datorit lipsei
de informaii pot fi cazuri n care domeniul i incertitudinea valorilor (exactitate, limita de
detecie, selectivitatea, liniaritatea, limita de repetabilitate i/sau reproductibilitate, robusteea
sau sensibilitatea ncruciat) pot fi prezentate numai ntr-o form simplificat.
n cadrul unui laborator de analize fizico-chimice dup selectarea metodei de analiz adeseori
este necesar s se dezvolte o procedur care va conduce la atingerea obiectivelor propuse. n
dezvoltarea acestor proceduri atenie deosebit se acord proceselor de compensare a
interferenilor, selectare i calibrare a echipamentului, standardizarea metodei, achiziia de probe
reprezentative i validarea metodei. Determinarea propriu-zis a elementelor de interes va depinde
de procesul de calibrare a instrumentului, metodei de analiz folosite (validat), caractersiticilor
analitului i de prezena zgomotului de fond a instrumentului de lucru.
Metodele de analiz dezvoltate, nainte de a fi utilizate, trebuie s fie validate n mod
corespunztor, documentate i autorizate. O metod analitic poate fi caracterizat prin
intermediul criteriilor de calitate a rezultatelor analitice dar i al criteriilor de natur economic dup
cum se poate observa din Tabelul 6.1.
Tabelul 6.1: Criterii n caracterizarea metodelor analitice.
Criterii raportate la calitatea
rezultatelor analitice
Criterii raportate aspectelor economice
- sensibilitatea
- precizia
- bias-ul
- acurateea
- limita de detecie
- limita de determinare
- selectivitatea
- domeniul dinamic
- costul investiiei
- durata analizei i costurile pentru personalul care
deservete laboratorul de analiz
- precauii speciale de siguran
- costuri de instalare
- cursuri de specializare a personalului
- costuri pentru realizarea sampling-ului
- costul reactivilor
n general, dup elaborarea procedurilor de lucru i validarea metodelor se ntocmesc
protocoale n baza crora s se obin rezultate care s fie acceptate la nivelul ageniilor
interesate. n aceste protocoale sunt incluse i procedurile de asigurarea calitii/control de calitate
(QA/QC). Procedurile QA/QC pot fi la nivel intern (cuprind toi paii specifici pentru obinerea de
rezultate acurate i precise) sau la nivel extern (cuprind procesele prin care laboratoarele sunt
acreditate de agenii externe).
6.3 Proceduri de control a calitii
Controlul calitii unui rezultat poate fi asigurat prin folosirea unui proces de validare a metodelor
care se realizeaz prin compararea rezultatelor n raport cu rezultatele obinute prin metode



primare de analiz, analiza de materiale de referin certificate, participarea la exerciii de
comparare inter-laboratoare i determinarea factorului de recuperare. Tipurile de probe care pot fi
supuse validrii includ probe oarbe de reactivi sau probe propriu-zise, probe curente,
materiale/soluii mbogite, materiale caracterizate n activiti anterioare, etaloane, materiale de
referin (reference material), materiale de referin certificate (certified reference material, CRM)
i tehnicile statistice folosite n analiza sistemelor multiple.
Ca instrumente de control a calitii se pot folosi:
- compararea cu metode primare de analiz
- analiza de materiale de referin
- participarea la exerciii de comparare interlaborator
- determinarrea factorului de recuperare
- utilizarea de tehnici alternative de analiz a rezultatelor
o confirmarea identificrii i selectivitii/specificitii
o estimarea limitelor de decizie, detecie i cuantificare
o intervalul de lucru i liniaritatea
o exactitatea
o justeea
o fidelitatea (repetabilitatea i reproductibilitatea).
6.4 Rolul participrii la exerciii de comparare inter-laboratoare
Un exerciiu de comparare inter-laboratoare este n general un studiu n care un grup de
laboratoare analizeaz una sau mai multe poriuni dintr-un material omogen i stabil, de regul
obinut n condiii bine documentate. Un astfel de studiu are loc pentru verificarea unei anumite
metode analitice (caz n care toate laboratoarele trebuie s foloseasc aceeai metod) sau a
performanei unuia sau mai multor laboratoare (caz n care fiecare laborator trebuie s
foloseasc metoda proprie de analiz). IUPAC recomand participarea a cel puin 10
laboratoare pentru un studiu de validare a metodei. De asemenea, astfel de studii sunt realizate
uneori ca un exerciiu preliminar pentru scopuri de certificare. n general, dac un astfel de
exerciiu nu produce rezultate satisfctoare, nu mai este nceput procesul de certificare.
6.5 Calibrarea echipamentelor i folosirea diagramelor de control (Shewart diagram)
Toate laboratoarele de analiz ar trebui s aib proceduri de control a calitii pentru validarea
testelor i a calibrrilor efectuate. n toate laboratoarele, rezultatele obinute ar trebui nregistrate n
aa manier nct eventualele tendine s fie uor detectabile iar tehnicile statistice s poat fi
aplicate pentru verificarea rezultatelor.
O metoda odat validat va permite folosirea aa numitelor grafice cunoscute sub numele de
hari de control. Acestea permit detectarea introducerii oricror erori sistematice noi i
monitorizarea preciziei atunci cnd sunt efectuate mai multe msurtori. Hrile de control sunt



dezvoltate pentru monitorizarea per ansamblu ca un mijloc al controlului statistic al procesului. Se
folosesc n procesele de monitorizare a calitii unui sistem. Uneori, acestea sunt adaptate pentru
analiz ca i control statistic de calitate unde servesc ca semnale de avertizare pentru laborator.
Acest proces de monitorizare se planific n mod adecvat i ar trebui s cuprind cel puin
urmtoarele:
- folosirea sistematic a materialelor de referin certificate;
- participarea la scheme de comparare interlaborator i n cadrul programelor de testare a
profesionalismului;
- msurtori replicate i calibrri prin aceeai metod sau metode diferite;
- retestarea sau recalibrarea parametrilor reinui;
- corelarea rezultatelor pentru caracteristici diferite de la un item.
Hrile de control sunt tehnici uor de folosit n cazul msurtorilor de rutin. Indiferent de
varianta aleas pentru asigurarea calitii rezultatelor analizelor cea mai convenabil form este
folosirea diagramelor de control. O metod analitic odat validat va permite folosirea aa
numitelor grafice cunoscute sub numele de hri de control sau Shewart diagram. Acestea permit
detectarea introducerii oricror erori sistematice noi i monitorizarea preciziei atunci cnd sunt
efectuate mai multe msurtori.
Hrile de control sunt dezvoltate pentru monitorizarea per ansamblu ca un mijloc al controlului
statistic al procesului. Se folosesc n procesele de monitorizare a calitii unui sistem. Uneori,
acestea sunt adaptate pentru analiz ca i control statistic de calitate unde servesc ca semnale de
avertizare pentru laborator.
Pentru obinerea hrilor de control analistul trebuie s determine valoarea medie i deviaia
standard a mai multor determinri care de fapt reprezint reproductibilitatea metodei. Limitele
acceptate sunt cele de avertizare i alarm (aciune).
Calitatea nu mai este asigurat dac o msurtoare depete limitele de alarm. Dac limita
de avertizare este depit o singur dat aceasta va alerta analistul dar nu va conduce la aciuni
imediate. O depire de dou ori n mod consecutiv va duce la aplicarea unei investigaii iar o
depire de 10 ori va indica apariia unei erori sistematice.
Principiul diagramelor de control const n reprezentarea vizual a calitii msurtorilor
pornind de la cantitatea dorit (valoarea ateptat a rezultatelor analizei probelor de control) i
limitele impuse, cnd se face diferena ntre limitele de atenie i cele de control. La limitele de
atenie, chiar dac sunt depite o dat, rezultatele sunt n continuare acceptabile. La limitele de
control (sau de aciune), care chiar dac sunt depite o singur dat, se impun msuri/aciuni
corective urgente.
Diagramele de control sunt de mai multe tipuri, funcie de mrimea i natura probei de control,
iar variabilitatea acesteia se reprezint funcie de timp. De fapt, diagramele de control a calitii au
fost introduse pentru prima oar de ctre Shewart n 1931, pentru controlul produselor industriale
care trebuiau s aib mereu aceleai limite bine stabilite (Fischbacher, 2000).



Exist mai multe tipuri de diagrame de control utilizate n asigurarea calitii n chimia analitic
dintre care cele mai cunoscute sunt diagramele Shewart, diagramele R i cele ale abaterii
standard.
n diagramele Shewart se presupune, de la nceput, c rezultatele se supun unei distribuii
normale/Gaussiene.
La trasarea/meninerea/supravegherea calitii rezultatelor ncercrilor cu diagrame de control
exist mai multe etape:
a) etapa preliminar cnd se efectueaz analiza multipl a probelor de control i se stabilesc
limitele de atenie i de control.
b) etapa de rutin, cnd simultan cu probele curente, se efectueaz i analiza simpl sau dubl a
probelor de control caracterizate n perioada preliminar.
Probele de control folosite pot fi:
- probe martor de reactivi sau aa numit prob oarb,
- soluii etalon (una de concentraie sczut i alta de concentraie ridicat, funcie de domeniul
de aplicabilitate al metodei sau intervalul de linearitate al acesteia),
- probe naturale n care se regsesc i matricile ntlnite n unele probe curente, i
- probe naturale fortificate/cu adaosuri n poluantul/indicatorul supus ncercrii.
n Tabelul 6.2 sunt prezentate caracteristicile de performan care pot fi monitorizate cu diferite
probe de control. Probele de control trebuie s fie analizate periodic iar frecvena folosirii lor
depinde de nivelul de ncredere cerut pentru analize i, de asemeni, de performanele metodei.
Proba martor de reactivi se folosete pentru a determina/verifica limita de detecie i
identificarea schimbrilor n calitatea reactivilor sau n parametrii echipamentului de msurare.
Efectuate la nceputul i sfritul unei serii de ncercri, msurtorile din diagramele de control
ajut la identificarea tendinelor sistematice ale rezultatelor.
Folosirea soluiilor etalon, ca obiectiv primar al asigurrii calitii, permite verificarea
calibrrii/etalonrii i a condiiilor aferente acesteia.
Folosirea probelor naturale care implic i matricile existente n unele probe curente, prin
analiza n dublu, calculul diferenei ntre rezultate permite reprezentarea prin diagrame de tip R,
pentru fiecare tip de matrice. Din aceste diagrame de control se pot trage concluzii imediate privind
fidelitatea msurtorilor.
Tabelul 6.2: Controlul caracteristicilor de performan prin folosirea probelor i a diagramelor de control.
Control
Proba de control
Diagrama de
control Precizie Acuratee
Prob standard de calibrare X
med
+ -
Prob blank X
med
(blank) + +
Prob real s sau R + -
Prob real contaminat X
med
(recuperare) - +
Prob sintetic de matrice potrivit X
med
, R i s + +
Material de referin certificat X
med
, R i s + +
n diagramele de control se reprezint grafic valoarea concentraiei obinute funcie de
data/timpul efecturii ncercrii.



n perioada preliminar (pregtitoare) de obinere a diagramei de control, se analizeaz timp
de 20 zile succesive de lucru, n dublu, probele de control selectate, ale cror tipuri au fost anterior
menionate. Dup cele 20 zile, cu valorile obinute se calculeaz:
- media aritmetic a rezultatelor, X
med;
- abaterea standard, s, dublul acesteia, 2s i triplul acesteia, 3s;
- limitele X
med
1 s, X
med
2 s i X
med
3 s;
Aceste valori se reprezint grafic i se obine diagrama de control.
Limitele de atenie i de control sunt intervalele 2s i 3s, respectiv:
- limita superioar de control (upper control limit): LSC = X
med
+ 3 s;
- limita inferioar de control (lower control limit): LIC = X
med
- 3 s;
- limita superioar de atenie (upper warning limit): LSA = X
med
+ 2 s;
- limita inferioar de atenie (lower warning limit): LIA = X
med
- 2 s.
Dac rezultatele se supun unei distribuii normale/Gaussiene atunci 95,4% din date sunt n
intervalul X
med
2 s.
Hrile de control pot fi de tip X i R.
Diagramele Shewart se aplic la asigurarea calitii rezultatelor analitice n trei forme:
- diagrame de tip X
med
;
- diagrame de tip prob martor de reactivi;
- diagrame de tip factor de recuperare;
Hrile de tip R pot fi folosite la controlul modificrii preciziei i pentru atribuirea gradului de
distribuie a valorilor determinrilor.
n diagramele de tip X
med
se pot folosi ca probe de control soluiile etalon/materiale de referin
(altele dect cele folosite la trasarea curbei de etalonare), probele sintetice, probele de referin
(care au fost analizate/caracterizate prin alte metode sau proceduri de ncercare) i materiale de
referin certificate. Figurile 6.1ab prezint diagrame Shewart tip X i R.
Xmed
1.540
1.560
1.580
1.600
1.620
1.640
1.660
1.680
1.700
Xmed+s
Xmed+2s
Xmed+3s
Xmed- s
Xmed- 2s
Xmed- 3s

1.540
1.560
1.580
1.600
1.620
1.640
1.660
1.680
1.700
Numarul seriilor de masuratori
D
if
e
r
e
n
t
a
a
d
o
u
a
m
a
s
u
r
a
r
e
p
e
t
a
t
e

X = valoarea obinut la fiecare analiz
X
med
media unor citiri succesive
Avertizarea - 2s i Alarma - 3s corespund unui
risc de 5 i, respectiv, 1% ca rezultatul s nu
aparin populaiei rezultatelor
Figura 6.1a: Diagram tip X
Diferena ntre dou determinri repetate (R)
Acest tip de hart d indicaii asupra repetabilitii
metodei

Figura 6.1b: Diagram tip R.



n intervalul de atenie, probabilitatea unei alarme false este de 4,6% i o singur depire a
acestor limite de atenie este admis. Probabilitatea de apariie a unei valori care depete 3s
este de 0,3% i nregistrarea unei astfel de valori nsemn c situaia a scpat de sub control i se
impun msuri imediate. Literatura indic urmtoarele situaii n care se consider c situaia a fost
scpat de sub control:
- o valoare peste limitele de control;
- dou din trei valori succesive peste limitele de control;
- 7 valori consecutive situate de aceeai parte a liniei centrale;
- 7 valori consecutive care indic tendinele de cretere a concentraiei;
- 7 valori consecutive care indic tendinele de scdere a concentraiei;
- 2 din trei valori consecutive peste limitele de atenie;
- 10 din 11 valori consecutive situate de aceeai parte a liniei centrale.
Exemplele prezentate n Tabelul 6.3 reliefeaz foarte bine maniera n care diagramele de
control pot fi folosite n urmrirea calitii ntr-un laborator de analiz.
La diagramele de control tip prob martor de reactivi limitele se determin folosind deviaia
standard experimental a mediei. Se pot folosi diagrame de control de tip X
med
i tip prob martor
de reactivi.
Tabelul 6.3: Exemple de profile pentru diagramele tip X
med
.
Hri de tip X mediu Observaii Cauze (exemple)

Media prezint o
anumit tendin
Modificarea condiiilor de operare ale
instrumentului, temperatur, contaminarea
reactivilor, efectul de memorie

Modificarea brusc a
dispersiei valorilor
medii
Personal nou, metoda instrumental

Variaii ciclice ale
mediei
Variaiile temperaturii de la zi la noapte
Se pot trasa pentru aceeai ncercare, mai multe diagrame de control folosind probe de control
de concentraii apropiate celor din probele curente, fie egale sau apropiate cu limitele stabilite prin
acte normative de mediu. Oricum, dup perioada preliminar aferent celor 20 zile consecutive, de
fiecare dat sau cu frecvena stabilit de coordonatorul din laborator, se lucreaz n paralel cu



probele curente i proba de control care s-a folosit la trasarea diagramei. Coordonatorul
desemneaz totodat persoanele care vor efectua ncercrile din perioada preliminar pentru
fiecare poluant/indicator. Frecvena cu care se completeaz, dup perioada preliminar
(pregtitoare), diagrama de control este stabilit de coordonatorul laboratorului i poate fi:
- n fiecare zi n care se efectueaz probe curente;
- o dat sau de dou ori pe lun, funcie de costuri i mai ales n cazul n care se folosesc ca
probe de control soluii de material de referin de poluani/indicatori instabili n timp (de ex.
sulfuri, sulfii, etc.).
Cu aceeai frecven este recomandat a se ine nregistrri i prin diagrame de control de tip
prob martor de reactivi care semnaleaz imediat situaii aberante n calitatea reactivilor sau a
echipamentului de msurare.
n cazul probelor de control constituite din soluii de materiale de referin instabile n timp, s-ar
putea s se obin mai mult de o valoare peste limitele de atenie, deoarece de fiecare dat soluia
de material de referin se prepar proaspt. De aceea, n cazul probelor de control constituite
din soluii de material de referin instabile n timp se admite obinerea a maxim 3 valori
consecutive situate peste limitele de atenie i abia apoi luarea msurilor care se impun, respectiv
identificarea cauzei i soluionarea acesteia. Oricum rezultatele obinute n perioada preliminar n
cele 20 zile consecutive pe soluii de materiale de referin proaspete apreciem c va caracteriza
i va include erorile ce se pot nregistra uzual.
Unde exist material de referin certificat i folosirea unui asemenea material nu implic
costuri deosebite, se recomand utilizarea acestora ca probe de control. Dac rezultatul ncercrii
pe proba de control depete limitele stabilite, atunci probabil calitatea rezultatelor ncercrilor
curente este necorespunztoare. n aceast situaie analistul va trebui s identifice cauza i s o
nlture.
6.6 Calibrarea instrumentelor i analiza relaiei de dependen concentraie-rspuns
n analizele cantitative, metodele de analiz primare (metode de analiz chimic absolute care nu
necesit calibrare), ntotdeauna, intr n competiie direct cu metodele instrumentale de analiz
care necesit operaii de calibrare cu standarde sigure. n aceste condiii este necesar efectuarea
operaiei de calibrare a sistemului de msurare fapt care are drept rezultat generarea unei relaii
de legtur funcionale ntre intensitatea semnalului msurat i concentraia analitului sau
cantitatea de substan din matrice.
Calibrarea reprezint operaia de nregistrare a valorilor observate pentru semnalul
caracteristic metodei folosite funcie de o caracteristic a analitului (concentraie sau coninut)
dintr-un anumit numr de probe (n) solide, lichide sau gazoase. De fapt, calibrarea (numit uneori
i standardizare) reprezint setul de operaii care stabilete sub condiii specifice relaia de
legtur ntre valoare indicat de un instrument de msur sau sistemul de msurare i valoarea
corespunztoare cunoscut a unui sistem de msurat.



Rezultatul calibrrii l reprezint generarea unei funcii de rspuns de tipul S = f(C) n care S
reprezint semnalul net msurat care este funcie de concentraia dat a analitului (C) n matricea
probei analizate. Modalitatea de prezentare a funciei este un indicator direct al gradului de
nelegere al sistemului chimic investigat (de obicei liniar).
Echipamentele i instrumentele calibrate n mod corespunztor sunt folosite pentru a msura
semnale, S
mas
, care sunt libere de erorile determinate. Operaia de calibrare se realizeaz n raport
cu un standard, prin care semnalul S
mas
este ajustat pn cnd acesta este n acord cu semnalul
cunoscut al standardului.
6.7 Calibrarea uni-punctual. Calibrarea multi-punctual. Calibrri cu standard intern sau
standard extern
6.7.1 Calibrarea uni-punctual
Calibrarea printr-un singur punct reprezint cea mai simpl cale de a determina sensibilitatea (k)
unei metode pentru care exist relaia de dependen
S
mas
= kC
A
+ S
reactiv

unde C
A
este concentraia analitului, S
mas
este semnalul msurat i S
reactiv
este contribuia adus la
semnalul msurat de ctre erorile constante aduse de reactivii folosii n analiz. ntr-o astfel de
standardizare se prepar un singur standard de concentraie cunoscut, C
s
, pentru care se
msoar semnalul S
stand
. Valoarea lui k se calculeaz n baza relaiei:
s
stand
C
S
k =
Standardizarea printr-un singur punct este cel mai puin indicat pentru a standardiza o metod
deoarece valoarea lui k este puternic afectat de erorile determinate i nedeterminate. Creterea
incertitudinii la determinarea lui k va conduce la creterea incertitudinii n determinarea
concentraiei analitului. De asemeni, ecuaia anterior prezentat stabilete relaia de standardizare
pentru o singur concentraie a analitului. Folosirea acestei ecuaii la probe de concentraii diferite
fa de acelea ale standardului presupune n mod eronat faptul c valoarea lui k este constant.
Dei standardizarea uni-punctual are multe limitri, ca i metod se folosete nc n multe
laboratoare n care se ateapt ca domeniul concentraiilor analitului s fie foarte limitat.
Din Figura 6.2 se observ cum, pornind de la premisa c valoarea lui k este constant, se
poate ajunge la influene importante din partea erorilor identificate i cuantificate la determinarea
concentraiei analitului. Metoda preferat pentru standardizare este de a prepara o serie de
standarde, fiecare de concentraii diferite de analit, ceea ce conduce la o calibrare multi-punctual.
Acest tip de calibrare trebuie s conin cel puin trei puncte i se obine prin reprezentarea grafic
a semnalului nregistrat funcie de concentraia analitului. Curbele de calibrare pot fi liniare sau
neliniare. Relaia de legtur n astfel de standardizri se determin n baza unui algoritm
matematic de fitare a curbei de distribuie.



Concentratie reala
Relatie de legatura
presupusa
S
stand
C
s
Relatie de legatura
reala
Concentratie raportata
C
A

Figura 6.2: Exemplu care arat cum la folosirea necorespunztoare a calibrrii uni-punctuale poate conduce
la eroare determinat important n raportarea concentraiei analitului.
6.7.2 Metoda standardului extern
Una dintre cele mai folosite metode de standardizare folosete standardul extern care conine
concentraii cunoscute de analit. Standardele sunt considerate a fi externe deoarece sunt
preparate i analizate separat fa de prob. Dup standardizare se poate determina concentraia
analitului n baza relaiei:
k
S
C
proba
A
=
O standardizare extern multipunctual este nsoit de o reprezentare grafic a curbei de
calibrare care poate fi de tip liniar sau neliniar (Figura 6.3) i care poart numele de curbe de
calibrare normale. La curbele liniare, pantele acestora dau sensibilitatea k. Dac aceste curbe de
calibrare nu sunt liniare, sensibilitatea metodei va fi funcie de concentraia analitului.

C
A
C
A
(a)
(b)

Figura 6.3: Exemple de curbe de calibrare liniare (a) i neliniare (b).
Conform Figurii 6.3, anterior prezentate, la dependena neliniar, valoarea lui k este mai mare
atunci cnd concentraia analitului este mai mic i scade continuu la creterea concentraiei
analitului.



Standardul extern permite analiza unei serii cu un numr mare de probe n baza unei singure
curbe de calibrare (metod avantajoas mai ales pentru laboratoarele n care se analizeaz foarte
multe probe). Limitrile acestei metode deriv din faptul ca la o asemenea calibrare se face
presupunerea c nu exist diferene ntre matricile probelor i cele ale standardelor.
Figura 6.4 arat faptul c relaia de legtur ntre semnal i concentraia analitului poate diferi
funcie de natura matricii standardului i a probei de analizat. n acest exemplu, n baza unei curbe
de calibrare normale, se observ c se va obine un rezultat afectat de o eroare determinat
negativ. n determinrile practice se ncearc minimizarea diferenei dintre cele dou matrici.
Procedeul poart numele de ajustarea matricii i n cazul n care matricea probei nu este
cunoscut trebuiesc gsite metode care s minimizeze acest efect.
Raportat Real
Curba de calibrare obtinuta
in matricea standardului
Curba de calibrare obtinuta
in matricea probei

Figura 6.4: Tipuri de relaii ntre semnal i concentraia analitului.
6.7.3 Metoda standardului intern
Un standard intern este o cantitate cunoscut dintr-un compus, diferit de analit, care este adugat
n proba de analizat. Semnalul analitului este comparat cu semnalul standardului intern pentru a
determina ct analit este prezent n proba de analizat.
n adiia de standard, standardul este aceeai substan ca i analitul n timp ce n standardul
intern, standardul este o substan diferit de analit.
La prelucrarea oricror probe, analitul i standardul intern beneficiaz de acelai tratament,
ceea ce nseamn c raportul semnalelor lor nu va fi afectat n cazul prezenei unei
nereproductibiliti la analiz.
Dac o soluie conine un analit A de concentraie C
A
, i un standard intern de concentraie C
SI
,
atunci semnalale acestora sunt descrise de ecuaiile:
S
A
= k
A
C
A

S
SI
= k
SI
C
SI

Raportul celor dou semnale conduce la relaia:
SI
A
SI
A
SI
A
IS
A
C
C
K
C
C
k
k
S
S
= =
La standardizarea unipunctual cu standard intern se determin K n baza relaiei anterioare



stand
IS
A
A
SI
S
S
C
C
K

=
urmnd ca ulterior s se determine concentraia analitului
proba
IS
A SI
A
S
S
K
C
C

=
6.8 Metoda adiiei de standard n regim uni-punctual sau multi-punctual
O alt posibilitate de realizare a unei calibrri directe o reprezint metoda adugrii de standard.
Metoda poate fi de un real folos n cazul n care se cunoate faptul c proba conine o cantitate
destul de mare dintr-un analit cu un potenial interferent aflat n concentraii destul de ridicate. n
metoda adugrii de standard, la reprezentarea grafic, curba de calibrare nu mai trece prin zero.
Scopul acestei metode este de a nltura efectul matricei i ca atare soluiile standard de lucru vor
conine n acest caz acelai volum de prob (acelai volum de prob este introdus ntr-o
succesiune de soluii standard de lucru. Fiecreia din soluiile de lucru, coninnd acelai volum de
prob, i se va msura valoarea semnalului care ulterior va fi notat n tabel. n orice caz,
reprezentarea grafic a rspunsului semnalului (absorbana) funcie de concentraia analitului va fi
complet diferit fa de cazul prezentat n cazul curbei de etalonare. n aceast situaie, dreapta de
regresie liniar nu mai trece prin punctul de zero al nici uneia dintre axele x sau y, dar dac
aceasta va fi realizat corect, va fi posibil extrapolarea sa ctre axa x pn cnd o va intersecta.
Din intersecia cu axa x poate fi determinat concentraia necunoscut a probei n cazul n care
aceasta a fost meninut constant n soluiile probelor de lucru.
Important: Dreapta de regresie trebuie s fie liniar n ntregul domeniu de lucru. Dac nu se
respect aceast premis pot fi introduse erori foarte mari la determinarea rezultatelor finale.
De fapt, metoda adiiei de standard permite nlturarea necesitii de potrivire a matricilor
probei i a standardului. n metoda adiiei de standard, cantiti cunoscute de analit sunt adugate
unui anumit volum care conine analitul de concentraie cunoscut. Din creterea semnalului la
analiz se poate determina ct de mult analit a fost n proba iniial. Aceast metod necesit un
rspuns liniar fa de analit.
Aceast metod se folosete atunci cnd proba are compoziie cunoscut sau atunci cnd
matricea probei este complex. Matricea reprezint entitatea probei care include ali compui fa
de analit. Efectul de matrice reprezint modificarea intensitii semnalului datorat altor
constituieni ai probei fa de analit.
Pentru metoda adugrii de standard relaia care guverneaz procedeul este n forma:
finale solutiei semnalul
initiale solutiei semnalul
fianala solutia in standardul plus analitului ia concentrat
initiala solutia in analitului ia concentrat
=
sau



[ ]
[ ] [ ]
X S
X
f f
i
I
I
X S
X
+
=
+

Prin exprimarea concentraieie finale a lui X, X
f
, n termeni de concentraii iniiale ale analitului,
X
i
, se poate determina X
i
deoarece toi ceilali parametri sunt cunoscui.
I
X
= k[X]
i
, unde k este o constant de proporionalitate
I
S+X
= k([S]
f
+ [X]
f
), unde k are aceeai semnificaie ca mai sus.
[ ]
[ ] [ ] ( )
[ ]
[ ] [ ] ( )
f f
i
f f
i
X S
X
X S
X
X S k
X k
I
I
+
=
+
=
+

6.8.1 Adiie de standard n regim uni-punctual
n exemplul din Figura 6.5, un volum V
0
de prob este diluat la un volum final, V
f,
iar semnalul
obinut la msurtoare este S
proba
. Un al doilea aliquot identic de prob este tratat (spiked) cu un
volum de standard, V
S
, pentru care concentraia este C
S
. Proba tratat cu standard se dilueaz de
asemeni la cot i se nregistreaz semnalul S
spiked
.

f
S
S
f
0
A
V
V
C
V
V
C +
f
0
A
V
V
C
V
0
din analitul de
concentratie C
A
V
0
din analitul de
concentratie C
A
la care se adauga
V
S
din standardul de
concentratie C
S
Concentratia totala a
analitului
Concentratia totala a
analitului

Figura 6.5: Metoda adiiei de standard cu un singur punct.
Dependenele dintre concentraii i semnalele aferente n cele dou cazuri sunt descrise prin
ecuaiile:
f
0
A proba
V
V
kC S =
+ =
f
S
S
f
0
A spiked
V
V
C
V
V
C k S
n care rapoartele V
0
/V
f
i V
S
/V
f
explic diluiile efectuate. Dac V
s
este mic n comparaie cu V
0
,
efectul adugarii de standard n matricea probei este nesemnificativ i cele dou matrici (prob i
spiked) pot fi considerate ca fiind identice. n aceste circumstane valorile pentru k din cele dou
ecuaii sunt aceleai, caz n care se va obine:



( ) ( ) ( )
f S S f o A
spiked
f 0 A
proba
V V C V V C
S
V V C
S
+
=
Ecuaia anterioar permite calculul concentraiei analitului n proba de analizat.
O alt posibilitate este de a efectua adiia de standard direct la proba de analizat dup
msurarea semnalului probei (S
proba
). n acest caz, volumul final dup adugarea de standard va fi
V
0
+V
S

S
proba
= kC
A

+
+
+
=
s 0
S
S
s 0
0
A spiked
V V
V
C
V V
V
C k S
( ) [ ] ( ) [ ]
S 0 S S S 0 0 A
spiked
A
proba
V V V C V V V C
S
C
S
+ + +
=
6.8.2 Adiie de standard n regim multi-punctual
n adiia de standard multi-
punctual se prepar o serie de
soluii de probe care vor conine
cantiti cresctoare de
standarde (Figura 6.6).
Figura 6.6: Metoda adiiei de
standard multi-punctual.
S presupunem c ntr-o serie
de 5 flacoane volumetrice de 50
mL se pipeteaz acelai volum
de prob de concentraie
necunoscut. Apoi n fiecare
flacon se adaug volume de
standard n ordine cresctoare.
n final, coninutul fiecrui flacon
se dilueaz cu ap distilat la
cot. n acest moment fiecare
flacon conine aceeai
concentraie din proba necunoscut dar concentraii diferite de standard.
Se analizeaz soluiile din fiecare flacon i se realizeaz graficul n care axa x este
concentraia standardului adugat. Interceptul cu axa x a liniei extrapolate este concentraia probei
necunoscute dup ce a fost diluat n prealabil la 50 mL. O curb de calibrare se obine prin
reprezentarea grafic a semnalului S
spiked
funcie de concentraia standardului adugat (Figura
6.7).

1 2 3 4 5
5 mL de proba de concentratie necunoscuta in fiecare flacon
1 2 3 4 5
Adaugare de 0, 5, 10, 15 .... mL de standard
1 2 3 4 5
Umplere flacon la 50 mL
V
0
din analitul de
concentratie C
A
V
0
din analitul de
concentratie C
A
la care se adauga
V
Si
din standardul de
concentratie C
S



Figura 6.7: Curb de calibrare obinut pe probe tip
spiked prin adugare de standarde n regim
multipunctual.
Ecuaia
+ =
f
S
S
f
0
A spiked
V
V
C
V
V
C k S
poate fi reorganizat sub forma
X panta intercept y Y + =
unde Y este S
spiked
i X este V
S
.
Panta dreptei de aceea este kC
S
/V
f
i interceptul cu axa y este kC
A
V
0
/V
f
. Interceptul cu axa X
este valoarea X atunci cnd Y este 0 sau
( ) intercept x
V
kC
V
V kC
0
f
S
f
0 A
+ =
( )
( )
S
0 A
f S
f 0 A
C
V C
V kC
V V kC
intercept x = =
De obicei, deoarece V
0
i C
S
sunt cunoscute, interceptul cu axa X poate fi folosit pentru
calcularea concentraiei analitului (Figura 6.8).
0
1
2
3
4
5
1 2 3 4 5

S
0 A
C
V C
intercept x

=

f
0 A
V
V kC
intercept y =

f
S
V
kC
Panta =
(a)
V
S
0
1
2
3
4
5
1 2 3 4 5

f
0 A
V
V C
intercept x

=

f
0 A
V
V kC
intercept y =
k Panta =

f
S
S
V
V
C
(b)

Figura 6.8: Exemple de curbe de calibrare pentru metoda adiiei de standard. (a) semnal funcie de volumul
standardului adugat i (b) semnal funcie de concentraia standardului adugat dup diluie.

Observaii: Metoda adaosului de standard, dei indicat, este o metod consumatoare de timp i
reactivi. De exemplu, la analiza a 10 probe prin metoda curbei de etalonare cu standard extern se
vor analiza doar 13 probe (10 probe i 3 standarde eventual) n timp ce la metoda adaosului se vor
analiza 30 soluii (fiecare din cele 10 probe vor fi analizate de cte 3 ori, nainte de tratare i de 2
ori dup adugri succesive de spiked).
01234567 12345678
Concentratia standardului adaugat
Concentratia
necunoscuta

2014 07 C Asigurarea Calitatii

Încărcat de

Informații document

Titlu original

Drepturi de autor

Formate disponibile

Partajați acest document

Partajați sau inserați document

Opțiuni de partajare

Vi se pare util acest document?

Este necorespunzător acest conținut?

Drepturi de autor:

Formate disponibile

2014 07 C Asigurarea Calitatii

Încărcat de

Drepturi de autor:

Formate disponibile

METODE DE CHIMIE ANALITICA APLICATE IN CERCETAREA CRIMINALISTICA

Conf. Dr. Cecilia ARSENE Notie curs 07

S-ar putea să vă placă și