UNIVERSITATEA BABE-BOLYAI CLUJ-NAPOCA

FACULTATEA DE BIOLOGIE I GEOLOGIE

STUDIUL EFECTELOR FIZIOLOGICE ALE

BIOMASEI DE ARTHROSPIRA (SPIRULINA) PE
MODELE EXPERIMENTALE ANIMALE

REZUMATUL TEZEI DE DOCTORAT

CONDUCTOR TIINIFIC:
Prof. Dr. CORNELIU TARBA

DOCTORAND:
RODICA BERLEAN

CLUJ-NAPOCA
2014

CUPRINS
Cuvinte-cheie..................................................................................................................... 3
Lista de abrevieri.............................................................................................................. 3
1.
Introducere ............................................................................................................4
2.
Aciunea biologic a Arthrospirei (Spirulina) platensis.......................................4
3.
Scopul cercetrilor experimentale .......................................................................6
4.
Material i Metode.................................................................................................7
4.1. Material biologic.............................................................................................7
4.2. Metode i tehnici de determinare..................................................................7
5.
Efectul administrrii de Arthrospira (Spirulina) timp de dou sptmni
asupra metabolismului i parametrilor hematologici la oareci.......................8
6.
Efectele fiziologice ale tulpinii slbatice autohtone de Arthrospira (Spirulina),
administrat la oareci timp de dou luni...........................................................9
7.
Efectul Arthrospirei (Spirulina) asupra hematopoiezei la obolani................11
8.
Efectele administrrii Arthrospirei (Spirulina) asupra funciei tiroidiene....13
9.
Proprietile imunostimulatoare ale unei tulpini autohtone de Arthrospira
(Spirulina)............................................................................................................15
10.
Efectul hepatoprotector al cianobacteriei Arthrospira (Spirulina) n
intoxicaia cronic cu etanol la obolani..........................................................16
11.
Studii ultrastructurale asupra efectelor administrrii cianobacteriei
Arthrospira (Spirulina) n intoxicaia cronic cu etanol la
obolani................................................................................................................18
12.
Efectele administrrii cianobacteriei Arthrospira (Spirulina) la obolani
intoxicai cronic cu etanol asupra mitocondriilor hepatice; monitorizarea
tranziiei de permeabilitate i a fenomenelor asociate (umflarea
mitocondrial, colapsul i efluxul de calciu) .............................................21
Concluzii .............................................................................................................25
Bibliografie selectiv ..........26

CUVINTE-CHEIE: Arthrospira (Spirulina) platensis, oareci Mus musculus, obolani

Wistar, hepatoprotector, antioxidant, hematopoiez, imunostimulator, tiroid, ficat
alcoolic

LISTA DE ABREVIERI

ALAT alanin-aminotransferaz
ALD boala hepatic alcoolic (alcoholic liver disease)
ASAT aspartat-aminotransferaz
CCl4 tetraclorura de carbon
DIT diiodtirozin
Epo - eritropoietin
HDL lipoproteine cu densitate mare
LDL lipoproteine cu densitate mic
MIT monoiodtirozina
NADH nicotinamid adenin dinucleotid redus
PHA fitohemaglutinin
REG reticul endoplasmatic granular
REN reticul endoplasmatic neted
ROS specii de oxigen reactiv
SOD superoxid-dismutaza
TAG triacilglicerol
VEM volum eritrocitar mediu
VLDL lipoproteine cu densitate foarte mic

1. Introducere
Cianobacteriile genului Spirulina sunt de mult vreme utilizate ca adaosuri n
hrana populaiilor umane, ca i supliment n hrana animalelor, datorit coninutului lor
ridicat de proteine, vitamine, aminoacizi eseniali, minerale, acizi grai eseniali (ca
acidul -linolenic, un precursor al eicosanoizilor) i ageni antioxidani din gama
carotenoizilor (Belay i colab., 1996).
Pornind de la faptul potrivit cruia activitatea biologic a cianobacteriilor depinde
n mare msur de condiiile de mediu, scopul acestei teze este de a investiga, sub
aspectul toxicitii, o tulpin slbatic autohton de Arthrospira (Spirulina), dar mai ales
de a evalua poteniale efecte benefice la nivel fiziologic, asupra organismului de mamifer
(oarece, obolan).
Au fost determinai mai muli parametri sangvini (hematologici, biochimici i
enzimatici) i hepatici. n urma experimentelor realizate, n care am urmrit evidenierea
aciunii hepatoprotectoare, hematopoietice, de stimulare a funciei tiroidiene,
imunostimulatoare a Arthrospirei (Spirulina) s-au utilizat ca metode de studiu i anumite
tehnici de microscopie electronic i msurtori spectrofotometrice ale unor parametri
bioenergetici (potenial de membran, fluxuri de calciu i umflare mitocondrial).

2. Aciunea biologic a Arthrospirei (Spirulina) platensis

Una din preocuprile majore ale tiinelor biomedicale moderne este punerea n
valoare a unor surse noi de materie prim pentru obinerea i producerea unor preparate
medicamentoase. n ultimele decenii se acord o deosebit atenie studierii
cianobacteriilor. Studierea cianobacteriilor capt o importan din ce n ce mai mare n
legtur cu obinerea i selectarea de noi materiale cu rol nutritiv sau tehnic (Hills, 1985,
Belay i colab., 1993, cit. de Rudic i colab., 1995). n centrul ateniei specialitilor din
domeniu este cianobacteria Arthrospira (Spirulina) platensis, care prin valoarea
compuilor biochimici depete toate speciile de plante studiate (Hendrickson, 1989).
Evaluri toxicologice i nutriionale atest c biomasa de Arthrospira (Spirulina)
poate fi utilizat ca supliment nutritiv. Efectele fiziologice pozitive ale cianobacteriilor
se datoreaz i coninutului ridicat de vitamine, minerale i acizi grai eseniali,
mbuntind rspunsul imun i fertilitatea, greutatea corporal, aspectul exterior
(Certik i Shimizu, 1999).
Proprietile antioxidante ale Arthrospirei (Spirulina) i extractelor sale au atras
atenia cercettorilor. ntr-unul dintre studiile lor, Manoj i colab. (1992) arat c
extractul alcoolic de Arthrospira (Spirulina) inhib peroxidarea lipidelor ntr-o msur
mai mare (65%) dect antioxidanii chimici, cum ar fi: -tocoferolul (35%) i -carotenul
(45%). Extractul apos de Arthrospira (Spirulina) a avut de asemenea un efect antioxidant
mai mare (76%) dect cel al acidului galic (54%) i cel al acidului clorogenic. Un aspect
interesant al concluziilor acestora a fost c extractul apos are un efect antioxidant
semnificativ chiar i dup ndeprtarea polifenolilor.

Proprietatea antioxidant i antiinflamatoare a Arthrospirei (Spirulina) a fost

studiat i de Dartsch (2008), care a utilizat patru preparate pe baz de Spirulina
platensis: (1) BioSpirulina, (2) SpiruComplex, un preparat cu seleniu (0,006%), crom
(0,003%) i zinc (0,115%), (3) SpiruZink, un preparat cu zinc natural (0,25%), (4)
Zinkspirulina + Acerola (viin de Barbados sau viin tropical) un preparat cu zinc
(0,125%) i pulbere de Acerola (conine 5,5% acid ascorbic). Toate preparatele cu
Spirulina au fost capabile s inactiveze radicalii liberi de oxigen generai de superoxidul
de potasiu ntr-o manier dependent de doz. Cel mai puternic inactivator al radicalilor
liberi de oxigen a fost ZinkSpirulina + Acerola, cu o inhibare semnificativ la
concentraii de 100 g/ml.
Pentru a demonstra efectul hepatoprotector al Arthrospirei (Spirulina) au fost
realizate mai multe cercetri experimentale. Vadiraja i colab. (1998) au studiat efectul
ficocianinei c din Arthrospira (Spirulina) n prezena tetraclorurii de carbon (CCl4), ce
induce hepatoxicitate la obolani. n acest studiu, o doz unic de 200 mg/kg corp de
ficocianin a fost administrat intraperitoneal obolanilor, la una sau trei ore dup
administrarea CCl4 (0,6 ml/kg). Ficocianina reduce semnificativ hepatotoxicitatea
provocat de aceast substan chimic, cunoscut ca generatoare de radicali liberi.
Studiile de laborator realizate pe oareci, hamsteri, pui, pisici, peti, au artat c
Arthrospira (Spirulina) intervine n stimularea imunitii i n sinteza elementelor
figurate ale sngelui (Kozlenko i Henson, 1997). Cercettorii arat c aceast
cianobacterie permite multiplicarea i activarea macrofagelor pentru a fi apte s distrug
microorganismele. Arthrospira (Spirulina) accelereaz producerea de anticorpi,
asigurnd cea mai bun protecie mpotriva microorganismelor invadatoare. Creterea
nivelului IgA n saliv este corelat cu suplimentarea dietei cu Arthrospira (Spirulina).
Aceast cianobacterie are un rol deosebit n restabilirea funciilor celulelor i organelor
cheie (ficat, timus, splin, ganglioni limfatici, amigdale, mduv osoas), mbuntind
posibilitatea de funcionare a acestora n ciuda agresiunilor provenite de la toxinele din
mediul nconjurtor i de la agenii infecioi. Rasool i Sabina (2009) au realizat un
studiu pentru a investiga efectul imunomodulator al Arthrospirei (Spirulina) fusiformis
la oareci. Este bine cunoscut faptul c limfocitele T rspund la stimularea activatorilor
policlonali nespecifici - mitogeni cum sunt fitohemaglutinina (PHA), concanavalina A i
intr n diviziune celular. n consecin, mitogenul acioneaz mai nti prin legarea de
receptori la suprafaa celulelor, care la rndul lor iniiaz o cascad de reacii biochimice
care s conduc la proliferarea celulelor. n studiul de fa s-a observat c Spirulina
inhib proliferarea celulelor stimulate de PHA, acest lucru indicnd faptul c Spirulina
poate inhiba rspunsul imun mediat celular.
Multe din studiile recente au pus n eviden capacitatea Arthrospirei (Spirulina)
de a inhiba replicarea viral. n 1996, Laboratorul de Patologie viral a Institutului de
Oncologie Dana-Farber (ataat Facultii de Medicin a Universitii Harvard), n urma
unui studiu asupra extractului apos de Arthrospira (Spirulina), a constatat c aceasta
inhib replicarea HIV-1 (aflat la originea SIDA) n limfocitele T de origine uman,
mononuclearele periferice i celulele Langerhans.
Unul dintre primele studii de reducere a colesterolului seric cu ajutorul
Arthrospirei (Spirulina) a fost cel realizat pe obolani, de ctre Devi i Venkataraman,
1983 (cit. de Belay, 2002). De atunci, mai multe studii i-au confirmat rezultatele pe
animale i om. Bertolin i colab., 2009 au realizat un studiu pentru a evalua profilul

lipidic la obolanii cu hipercolesterolemie indus timp de 60 zile. La lotul control nu au

existat diferene semnificative ale colesterolului total, LDL, VLDL i TAG
(triacilglicerol), n timp ce nivelul HDL a sczut semnificativ pe durata tratamentului.
La lotul cu diet hipercolesterolemiant i suplimentat cu Spirulina s-a constatat
apariia hipercolesterolemiei, sugernd c asocierea acestei cianobacterii cu dieta
hipercolesterolemiant nu modific nivelul lipididelor.
Administrarea biomasei de Spirulina ntr-o modalitate terapeutic (cianobacteria a
fost administrat la 30 de zile dup inducerea hipercolesterolemiei) a condus la o
reducere semnificativ a nivelului de colesterol total, comparativ cu valorile iniiale
induse de dieta hiperlipidic.
Rezultatele studiilor amintite creeaz premisele unei poteniale utilizri a
Spirulinei, alturi de alte abordri convenionale, ntr-o strategie de suplimentare a
alimentelor focalizat ctre prevenirea i reducerea unor probleme de sntate precum
cancerul, bolile cardiovasculare (Riss i colab., 2007), bolile degenerative ale
sistemului nervos central precum Alzheimer i Parkinson (Stromberg i colab., 2005),
intoxicaiile cu metale grele (Sharma i colab., 2002), procesele inflamatorii ce implic
participarea NADPH oxidazei (Riss i colab., 2007), care sunt asociate cu alterrile
induse de radicalii liberi.

3. Scopul cercetrilor experimentale

Prin cercetrile experimentale prezentate n aceast tez de doctorat am urmrit
obinerea unor rezultate n ceea ce privete efectele induse de administrarea Arthrospirei
(Spirulina) platensis. Problemele propuse spre rezolvare vizeaz urmtoarele aspecte ale
proprietilor funcionale ale cianobacteriei: testarea efectelor protectoare, antioxidante
ale tulpinii autohtone de Arthrospira (Spirulina) pe modele experimentale cu oareci
fiziologic normali ct i asupra ficatului de mamifer intoxicat cu etanol; studierea
proprietilor hematopoietice, pe modele experimentale cu obolani anemiai i cu
obolani fiziologic normali; cercetarea rolului pulberii de Arthrospira (Spirulina) n
stimularea funciei tiroidiene; investigarea aciunii imunostimulatoare a cianobacteriei
utiliznd un model experimental cu animale imunosupresate.
Dei se cunosc proprietile antioxidante ale Arthrospirei (Spirulina), nu s-a
abordat pn n prezent valoarea ei profilactic i curativ n patologia ficatului alcoolic.
Modelul experimental in vivo propus presupune intoxicarea etilic i administrarea n
paralel, ca supliment alimentar, a cianobacteriei.
Am ales s investigm n primul rnd ficatul obolanilor Wistar, n dou condiii
experimentale (normal i cu etanol), cu scopul de a surprinde eventualele proprieti
stimulatoare ale acestei cianobacterii asupra ficatului normal sau hepatoprotectoare n
urma administrrii de etanol. n acest sens, datele din literatura de specialitate ne relev
faptul c etanolul afecteaz n primul rnd fagocitoza i producerea de citokine (Enomoto
i colab., 2001).
Preparatele mitocondriale permit cuantificarea unor parametri biochimici i
biofizici la nivel de organit celular. De asemenea, datele biochimice sunt sprijinite de
rezultate imagistice (microscopie electronic) ceea ce confer sigurana c rezultatele
obinute reflect realitatea.
Studiile experimentale efectuate i prezentate n capitolele urmtoare ale
tezei, au fost realizate pentru descifrarea efectelor induse de aciunea Arthrospirei
6

(Spirulina) asupra organismului de mamifer. n urma acestor investigaii

experimentale, considerm c avem suficiente dovezi experimentale pentru o
potenial aciune hepatoprotectoare, hematopoietic, imunostimulatoare,
hipoglicemiant i hipocolesterolemiant.

4. Material i metode
4.1. Material biologic
Pulberea de Spirulina
Arthrospira (Spirulina) este n mod normal produs n condiii controlate de
temperatur, salinitate, oxigenare i nu se dezvolt spontan n climate temperate. Cu toate
acestea, n ara noastr exist medii naturale unde cianobacteria crete n mod spontan,
producnd cantiti mari de biomas. Apele termominerale din vestul Romniei ofer
condiiile de temperatur, precum i sursa de carbon i de minerale necesare cultivrii pe
scar larg a Spirulinei, la un cost cu 80% mai redus dect n sistemul clasic (Drago,
2000).
n experimentele noastre am utilizat o tulpin slbatic autohton de Arthrospira
(Spirulina). Cianobacteria splat, uscat i mcinat, sub form de pulbere, a provenit de
la S.C. Eden-Vet S.R.L. Oradea, fiind produs n colaborare cu Institutului de Cercetri
Biologice Cluj-Napoca. Concentraia Spirulinei i modul de administrare sunt prezentate
n cadrul protocoalelor experimentale.
Animalele de experien
Experimentele au fost efectuate pe obolani Wistar aduli, femele, cu greutatea de
15020 g i pe oareci din rasa Mus musculus var. albicans, cu greutatea medie de 20 g.
Animalele au fost meninute, pe tot parcursul experimentului n biobaza Catedrei de
Biologie Molecular i Biotehnologie a Facultii de Biologie i Geologie. Condiiile
zooigienice au fost corespunztoare speciei i vrstei animalelor: temperatur constant
de 18oC, umiditate constant, regim de iluminare 12 ore/zi, acces liber la hran i ap.
Hrana a constat din furaj complex (diet Larsen, cu sau fr adaos de Spirulina).
Manipularea animalelor s-a efectuat cu blndee, fr a le produce stres sau durere, iar
sacrificarea s-a fcut sub anestezie.
4.2. Metode i tehnici de determinare
Metode i tehnici utilizate pentru determinarea parametrilor hematologici i
tisulari hepatici. Totalitatea parametrilor determinai a fost schematizat n Tabelul 4.1,
acetia fiind grupai n 3 categorii: hematologici morfologici, hematologici biochimici
i tisulari hepatici.
Urmrirea parametrilor hematologici morfologici din sngele periferic al
animalelor a fost necesar pentru a putea stabili dac cianobacteria testat posed caliti
hematopoietice i/sau imunostimulatoare. Numrul de hematii, hemoglobina i
hematocritul ne indic modul n care este afectat sau stimulat metabolismul fierului,
tiindu-se c Spirulina conine fier. Cercetrile experimentale au cuprins i investigarea
unor parametri biochimici sanguini i hepatici. Pentru determinarea efectului
hipoglicemiant i hipocolesteroleminat a fost monitorizat glicemia i colesterolemia.

Metabolismul glucidic a fost urmrit prin cuantificarea: glicogenului, glucozei

tisulare, precum i prin msurarea activitii enzimelor ASAT, ALAT i LDH din esutul
hepatic. Posibila fluidizare a membranelor, precum i creterea permeabilitii
membranare poate fi confirmat sau nu de prezena n ser a enzimelor: LDH, ALAT, a
cror activitate a fost de asemenea determinat.
Tabelul 4.1. Parametri hematologici i tisulari hepatici
Hematologici
morfologici
biochimici
Nr. de hematii
Glicemia
Nr. de leucocite
Colesterolemia
Formula leucocitar
ASAT, ALAT
Hematocritul
LDH
Hemoglobina

Tisulari hepatici
Glicogenul
Glucoza
Colesterolul total
ASAT, ALAT
LDH

5. Efectul administrrii de Arthrospira (Spirulina) timp de dou

sptmni asupra metabolismului i parametrilor hematologici la
oareci
Protocol experimental
Experimentul a fost efectuat pe oareci de laborator (Mus musculus, var.
albicans), provenind din biobaza Universitii de Medicin i Farmacie Cluj-Napoca.
Animalele au fost grupate n 3 loturi: lotul martor (M) a consumat o diet echilibrat din
punct de vedere nutritiv i energetic, coninnd glucide, lipide i proteine vegetale i
animale, minerale i un premix de vitamine, lotul F1 (fina de pete a fost nlocuit cu
pulbere de Arthrospira (Spirulina) n proporie de 3%), lotul F2 (fina de pete i rotul
de soia au fost nlocuite cu pulbere de Arthrospira (Spirulina), n proporia de 8%).
Durata acestui experiment a fost de 14 zile, dup care animalele au fost sacrificate i s-au
recoltat probe de snge i esut hepatic, pentru determinri morfologice i biochimice.
Parametrii hematologici
Introducerea n dieta animalelor a Arthrospirei (Spirulina) a determinat creterea
numrului de elemente figurate (hematii i leucocite), proporional cu concentraia
utilizat (Fig. 5.1). Din totalul hematiilor s-a remarcat un procent crescut de
reticulocite, ceea ce denot o intensificare a hematopoiezei, contribuind la creterile
observate n cazul hematocritului i hemoglobinei. La toate cele trei loturi, procentul de
reticulocite din totalul globulelor roii se ncadreaz n valorile raportate pentru oarecii
aduli (32-80%) (Uray, 1992).
Creterea numrului de leucocite la loturile a cror diet a coninut Spirulina se
coreleaz cu datele din literatur care semnaleaz efectul imunostimulator al acesteia
(Qureshi i colab., 1996).
Hematocritul nu a suferit modificri semnificative statistic, dei se remarc o
cretere a acestui parametru, mai accentuat n cazul lotului care a consumat furaj cu
concentraie de 8% Arthrospira (Spirulina). Aceast cretere poate avea drept cauz fie o
sporire a numrului de hematii, fie o cretere a VEM (volumul eritrocitar mediu). Datele
noastre nregistreaz o reducere a VEM i o cretere a concentraiei totale de
hemoglobin, ceea ce atest faptul c modificrile hematocritului se datoreaz creterii
numrului de hematii (Fig. 5.2).
8

60

12
Hematocritul (%) i hemoglobina (g%)

Nr. hematii (x 106 /mm 3 ) i leucocite (x 103/mm 3)

14

10
M

F1
F2

50

40
M
F1
F2

30

20

10

0
Hematii

Hematocrit

Leucocite

Fig. 5.1. Variaia numrului de hematii i

leucocite la oarecii martor i hrnii (timp de
dou sptmni) cu diete coninnd
Arthrospira (Spirulina)

Hemoglobina

Fig. 5.2. Hematocritul i hemoglobina la

oarecii martor i hrnii (timp de dou
sptmni) cu diete coninnd Arthrospira
(Spirulina)

Parametrii biochimici
n experimentul nostru glicemia a crescut semnificativ la loturile F1 i F2,
comparativ cu oarecii martor. Babaev i colab. (1979) au evideniat cromatografic
prezena n extractul alcoolic de Arthrospira (Spirulina) platensis a unor analogi vegetali
ai hormonilor tiroidieni. Civa ani mai trziu, Naliandian i Babaev (1988) au
demonstrat prezena n extracte de la aceeai specie i a precursorilor acestor hormoni:
monoiodtirozina (MIT) i diiodtirozina (DIT), precum i a iodului liber.
De asemenea se remarc o scdere a colesterolemiei, proporional cu cantitatea
de Arthrospira (Spirulina) coninut n diet. Prin efectul su hipocolesterolemiant,
adaosul acestei cianobacterii previne dezvoltarea ficatului gras, dovedind caliti
hepatoprotectoare n diferite intoxicaii (Torres-Duran i colab., 1998; Ble-Castillo i
colab., 2002; Gonzalez de Rivera i colab., 2003).
Rezultatele noastre se suprapun ntr-o anumit msur peste rezultatele altor
cercetri experimentale realizate tot n scopul demonstrrii unor caliti terapeutice ale
Arthrospirei (Spirulina). Este de remarcat c aceast cianobacterie nu manifest efecte
toxice dac este administrat n doze optime, adaptate particularitilor fiziologice ale
organismului.

6. Efectele fiziologice ale tulpinii slbatice autohtone de Arthrospira

(Spirulina), administrat la oareci timp de dou luni
Protocol experimental
Aceast variant experimental (similar cu cea descris anterior) a avut scopul
de a investiga poteniale efecte benefice ale administrrii de Arthrospira (Spirulina), la
oareci. Spre deosebire de experimentul precedent, perioada tratamentului a fost de lung
durat (dou luni).
Experimentul a fost efectuat tot pe un model experimental in vivo, n care
animalele de experien (oareci Mus musculus, var. albicans) au fost grupate n trei
loturi: M (martor), F1 (fina de pete din furaj a fost nlocuit cu pulbere de Arthrospira

(Spirulina) n proporie de 3%), i F2 (fina de pete i rotul de soia au fost nlocuite cu

Arthrospira (Spirulina), n proporie de 8%).
Parametrii hematologici i biochimici
Administrarea n dieta animalelor a Arthrospirei (Spirulina) a determinat
creterea numrului de hematii i leucocite, proporional cu concentraia utilizat (Fig.
6.1). Reticulocitele, n cazul oarecilor hrnii cu dieta mai bogat n Arthrospira
(Spirulina), au manifestat de asemenea o cretere, dar mai mic dect la dieta cu 3%
pulbere de Spirulina.
60
*

16
***

14

12
M
F1
F2

10
8
6
4

Hem atocritul (% ) i hem oglobina (g% )

N r. de hem atii (x 10 6 /m m 3 ) i leucocite (x 10 3 /m m 3 )

18

50

40
M
F1
F2

30
***
*

20

10
2
0

0
Hematii

Hematocrit

Leucocite

Hemoglobin

Fig. 6.1. Variaia numrului de hematii i Fig. 6.2. Hematocritul i hemoglobina la

leucocite la oarecii martor i la cei hrnii oarecii martor i la cei hrnii 2 luni cu
2 luni cu diete coninnd Arthrospira diete coninnd Arthrospira (Spirulina)
(Spirulina)
*- marcheaz diferene semnificative statistic fa de lotul martor.
Din totalul hematiilor se remarc un procent crescut de reticulocite, ceea ce
denot o intensificare a hematopoiezei, contribuind la creterile observate n cazul
hemoglobinei. oarecii din lotul martor au avut o valoare relativ mic, la limita
fiziologic inferioar a reticulocitelor, ceea ce justific i efectul de puternic stimulare a
eritropoiezei i creterea numrului de celule tinere, la lotul F1, care a primit 3%
Spirulina n diet. La lotul F2, cu procent mai mare de Spirulina, eritropoieza s-a
desfurat de asemenea cu intensitate mare, dar la cote mai puin ridicate dect la lotul
F1. Credem c, pe msur ce numrul hematiilor mature a crescut (este cel mai mare la
F2), a avut loc o stabilizare a vitezei de formare a celulelor noi.
Hematocritul a suferit o cretere semnificativ statistic, la lotul care a consumat
furaj cu o concentraie mai mare (8%) de Arthrospira (Spirulina). Aceast cretere poate
avea drept cauz sporirea numrului de hematii nregistrat la lotul F2, iar datele obinute
atest acest fapt (Fig. 6.2).
Numrul crescut de leucocite este relevat i de formula leucocitar, care indic o
cretere a ponderii monocitelor i limfocitelor la oarecii care au avut n diet o
concentraie mai sczut de Arthrospira (Spirulina), fa de lotul martor. La lotul cu o
concentraie mai ridicat, creterea numeric a limfocitelor a fost mai puin accentuat. A
fost remarcat, la lotul care a primit o concentraie mai redus de Arthrospira (Spirulina),
o reducere semnificativ a procentului neutrofilelor.

10

n cazul neutrofilelor, efectul Arthrospirei (Spirulina) este invers fa de primele

dou tipuri leucocitare. Se pare c o concentraie de 3% Arthrospira (Spirulina) n furaj a
determinat o stimulare a imunitii specifice (rspunsul limfocitelor), n timp ce
concentraia de 8% a stimulat preponderent imunitatea nespecific (leucocitele
fagocitare). Ca o compensare a creterii procentuale a monocitelor i limfocitelor,
ponderea neutrofilelor, eozinofilelor i bazofilelor a sczut la loturile care au primit
Arthrospira (Spirulina), fa de lotul martor.
Glicemia nu a suferit modificri asigurate statistic, n timp ce concentraia
sangvin a colesterolului a sczut semnificativ numai la lotul F1, care a primit 3%
Arthrospira (Spirulina) n furaj.
Experimentul nostru a demonstrat c Arthrospira (Spirulina) are un efect pozitiv
n anemii, datorit densitii ridicate de nutrieni i n special a urmtoarelor elemente:
vitamina B12, acid folic, aminoacizi eseniali, fier cu biodisponibilitate ridicat.
S-a remarcat, de asemenea, efectul hipocolesterolemiant al acestei cianobacterii,
deja recomandat pentru reducerea riscului de boli cardiovasculare (Belay, 2002; JuarezOperoza i colab., 2009).

7. Efectul Arthrospirei (Spirulina) asupra hematopoiezei la obolani

Scopul acestui experiment a fost testarea efectelor hematopoietice ale tulpinii
slbatice autohtone de Arthrospira (Spirulina), pe obolani. n vederea realizrii acestui
scop, ne-am propus s investigm aciunea stimulatoare a cianobacteriei la obolani
anemiai i s testm aceleai aciuni la obolani fiziologic normali.
Studii anterioare au raportat deja c Arthrospira (Spirulina) poate reduce
severitatea anemiei determinnd o cretere a parametrilor hematologici i a concentraiei
de hemoglobin (Kostic i colab., 1993; Zikic i colab., 1997; Simsek i colab., 2009).
Spirulina conine ficocianin care stimuleaz hematopoieza i imit efectul eritropoietinei
(Epo). Rolul Epo const n stimularea proliferrii, creterii i diferenierii precursorilor
eritroizi, avnd drept consecin creterea numrului de eritrocite.
Protocol experimental
n varianta noastr experimental, animalele au fost grupate n 3 loturi: lotul M
(martor), care a consumat o diet alctuit iniial numai din pine, lapte, la care s-a
adugat n ultimele dou sptmni pulbere de Arthrospira (Spirulina) 3 g; lotul An
(anemic), care a consumat aceeai diet ca i lotul M, dar fr Spirulina; lotul An-Sp
(anemic i tratat cu Spirulina), care a avut aceeai alimentaie ca i lotul martor. n prima
sptmn animalelor din loturile An i An-Sp li s-a indus anemia prin 3 prize de snge,
luate n zilele 1, 2 i 4.
Parametrii hematologici
La recoltarea final, n urma administrrii cianobacteriei, s-a nregistrat o
cretere semnificativ statistic a numrului de hematii la lotul An-Sp comparativ cu
lotul An care ntre recoltri nu a primit Spirulina, iar dieta lui a fost bazat numai pe lapte
i pine. Rezult c aceast modificare nu se datoreaz numai activrii secreiei Epo
endogene, ci i efectului Arthrospirei (Spirulina).
Hematocritul nu a suferit modificri evidente pe parcursul experimentului.
Diferene procentuale ntre loturi s-au putut observa la determinrile primei recoltri unde
lotul An prezint o valoare mai sczut, dei valorile obinute se ncadreaz, toate, n
limitele normalitii.
11

Refacerea concentraiei de hemoglobin la lotul An-Sp, consecutiv anemierii,

este evident i apare ca o sumare a efectului cianobacteriei (ca la lotul M) i a Epo
endogene (ca la lotul An). Dup administrarea Spirulinei la lotul An-Sp concentraia
hemoglobinei a crescut comparativ cu prima recoltare, creterea nefiind asigurat
statistic.
Evoluia parametrilor sangvini. La lotul martor s-a constatat un procent
semnificativ crescut al reticulocitelor comparativ cu prima i cea de-a doua recoltare. La
recoltarea final (dup administrarea Spirulinei), la lotul M se poate observa o cretere
semnificativ a numrului de hematii i a hematocritului, comparativ cu primele dou
recoltri.
4.5

18
+++

3.5

H em a tii x 1 0 6 /m m 3

14
12

+++

10

***

***

M
An

An-Sp

6
4

Reticulocite/100 eritrocite

16

+++

***

An

2.5

An-Sp

+++
**

1.5

+++
***

0.5

2
0

Prima recoltare

Recoltarea naintea
administrrii Spirulinei

Prima recoltare

Recoltarea final

Recoltarea naintea
administrrii Spirulinei

Recoltarea final

Fig. 7.1. Evoluia numrului de hematii la Fig. 7.2. Evoluia numrului de reticulocite
cele 3 loturi experimentale
la cele 3 loturi experimentale
- marcheaz diferene semnificative statistic ale recoltrii naintea administrrii Spirulinei fa
de recoltarea iniial; * - marcheaz diferene semnificative statistic ale recoltrii ntre recoltarea
final i cea iniial; + - marcheaz diferene semnificative statistic ntre recoltarea final i
recoltarea naintea administrrii Spirulinei.

La a doua recoltare (dup anemiere) ct i la recoltarea final lotul An a

nregistrat o scdere semnificativ statistic a numrului de hematii comparativ cu prima
recoltare. La reticulocite, hematocrit i hemoglobin s-au observat creteri semnificative
statistic comparativ cu recoltarea iniial i cea de-a doua recoltare. Pe fondul unei
scderi semnificative a numrului de globule roii, creterea procentului de reticulocite,
ca mecanism fiziologic normal al eritropoiezei stimulat de anemiere, a compensat
deficitul de hemoglobin i a crescut hematocritul. Datele obinute demonstreaz
capacitatea de refacere a funciei hematogene dup o anemiere moderat.
n cadrul lotului An-Sp toi parametri investigai au nregistrat creteri
semnificative statistic, comparativ cu recoltarea naintea administrrii Spirulinei.
Numrul hematiilor nregistrat n recoltarea final prezint o diferen procentual
semnificativ de 89% fa de a doua recoltare. Concentraia hemoglobinei a nregistrat de
cretere semnificativ, cu o diferen procentual de aproape 28% fa de recoltarea
naintea administrrii cianobacteriei. Putem spune c, aceste modificri nu se datoreaz
numai activrii secreiei Epo endogene, ci i efectului Arthrospirei (Spirulina).
La animalele din lotul An, dup 14 zile de la anemiere, parametrii modificai s-au
restaurat parial, ca urmare a intensificrii eritropoiezei sub aciunea Epo endogen.
12

Animalele din lotul An-Sp au fost mai eficiente n restaurarea parametrilor

afectai, comparativ cu lotul An, deoarece la reacia normal a organismului fa de
anemie s-a adugat i efectul ficocianinei coninut n aceast cianobacterie.

8. Efectele administrrii Arthrospirei (Spirulina) asupra funciei

tiroidiene la obolani
Protocol experimental
Scopul experimentului a fost verificarea ipotezei potrivit creia cianobacteria,
prin coninutul su de iod i de compui asemntori hormonilor tiroidieni, poate stimula
funcia tiroidian. Pentru experiment au fost utilizate femele de obolan Wistar, mature,
aflate la a doua perioad de gestaie i pui obinui de la aceste femele.
Femelele gestante au fost grupate n trei loturi: lotul M (martor), animalele care
nu au suferit nici un tratament; lotul T, la care tiroida a fost inhibat cu tiouree pulbere,
ncepnd cu ziua a 15-a de gestaie i pn la nrcarea puilor; lotul TS, la care s-a
administrat tiouree ca la lotul T, dar mamele au primit din ziua naterii furaj cu un adaos
de 5% pulbere de Spirulina.
Puii de obolan luai n studiu au fost grupai astfel: lotul M (martor), provenit de
la femelele din lotul M; lotul T, pui ai cror mame au primit tiouree n zilele 15-22 de
gestaie i n perioada alptrii; lotul TS, cu tiroida inhibat ca la lotul T, dar care au
beneficiat de adaosul de Spirulina indirect, prin laptele matern i apoi direct, prin furaj.
Greutatea puilor la loturile tratate, comparativ cu lotul martor, a prezentat
variaii importante, att la natere, ct i n cursul evoluiei ontogenetice postnatale. Dac
puii nscui de mamele martor se ncadreaz n limita valorilor normale, pentru ambele
vrste, puii mamelor care au primit inhibitorul tiroidian sunt cu 25% mai mici, iar
evoluia lor ulterioar este mai slab. Puii rezultai din mame care au avut tiroida
inhibat, dar au primit Spirulina au nregistrat nc de la nceput diferene de greutate mai
mici fa de lotul de control dect lotul T, totui diferenele sunt semnificative. Aceti pui
au consumat i ei Spirulina n ultimele dou sptmni nainte de sacrificare, ceea ce a
determinat o tendin de reducere a diferenelor fa de lotul martor.
Evaluarea performanelor memoriei spaiale prin testul labirintului
Puii de obolan au pornit cu abiliti de nvare diferite, lotul cu tiroida supresat
fiind net inferior lotului martor. Un asemenea rezultat era de ateptat, avnd n vedere
implicarea profund a hormonilor tiroidieni n procesele de neurogenez, formare a
sinapselor, mielinizare axonal i stabilirea reelelor neuronale. Este surprinztor la prima
vedere faptul c lotul TS a pornit n test cu un timp aproape la fel de bun ca lotul martor.
Arthrospira (Spirulina) aduce, pe lng iod i substane asemntoare hormonilor
tiroidieni (Babaev i colab., 1979; Naliandian i Babaev, 1988), o cantitate mare de acizi
grai eseniali, foarte necesari n aceast perioad pentru sinteza mielinei (Falch i colab.,
1995).
Pe parcursul perioadei de nvare, puii din toate loturile i-au mbuntit
performanele, dar n mod diferit. Puii din lotul T au redus timpul de parcurgere a
labirintului cu 47%, cei din lotul TS cu 78%, iar puii din lotul control cu 94%. Aceste
rezultate atest poziia deosebit pe care o dein hormonii tiroidieni n evoluia
ontogenetic a sistemului nervos, dar i capacitatea Spirulinei de a suplini parial

13

necesitile unui organism carenat fapt ce devine deosebit de important pentru copii ce
triesc n zone geografice cu deficit de iod, ct i pentru cei subnutrii.
Evoluia tiroidei i concentraiile hormonilor tiroidieni
Inhibarea tiroidei are de obicei efecte multiple i uneori de sens contrar. La
animalele adulte, blocarea sintezei hormonilor tiroidieni are drept prim consecin
stimularea secreiei de TRH, printr-un feed-back negativ la nivel hipotalamic, dar mai
ales stimularea adenohipofizei i intensificarea secreiei de TSH.
La animalele de experien s-a observat c, dac administrarea inhibitorului
tiroidian depsete 30 de zile, se instaleaz un fenomen de compensare, via TSH, care
reduce parial consecinele supresrii tiroidei. n experimentul nostru, am ncercat s
evitm fenomenul de compensare, prin faptul c tioureea a fost administrat n furaj, n
concentraie redus i numai pentru 30 de zile. Inhibitorul a ajuns n organismul puilor
indirect, iniial prin circulaia fetal i apoi prin lapte.
Greutatea tiroidei la vrsta de 30 de zile a puilor a fost semnificativ sczut
numai la lotul T, nu i la cel care a primit tiouree i Spirulina (Fig. 8.1). Cu toate acestea,
concentraiile hormonilor tiroidieni se menin sczute sub valoarea martorului i la acest
din urm lot, mai ales n cazul formei active a hormonilor - T3. O tendin de revenire
spre valorile de control s-a remarcat n cazul T4, dup administrarea Spirulinei (Fig. 8.2).
RIA T4

Greutatea tiroidei la sacrificare

14

18
16

12

14

**

***
10

12

mg

nm oli/l

10
8

8
***

6
4

4
2

2
0

TS

TS

Fig. 8.1. Greutatea tiroidei la sacrificare Fig. 8.2. Concentraia seric a tiroxinei la
(30 de zile)
puii de 30 de zile
Testele realizate n cadrul acestui experiment evideniaz att aciunea tiroidstimulant a Arthrospirei (Spirulina), ct i consecinele pe care le pot avea, la nivel
glandular i organismic, pesticidele, insecticidele i ali poluani din mediu care au
potenial de inhibare a funciei tiroidiene.

9. Proprietile imunostimulatoare ale unei tulpini autohtone de

Arthrospira (Spirulina)
Protocol experimental
Lund n considerare i lucrrile cercettorilor rui (Loseva i Dardynskaya,
1993) privind efectul radioprotector al Arthrospirei (Spirulina), ne-am propus studierea

14

proprietilor imunostimulatoare ale tulpinii slbatice autohtone de Arthrospira

(Spirulina), pe un model experimental cu animale imunosupresate. S-a utilizat un
amestec de elemente imunosupresoare care a inclus: Prednison (comprimate substana
activ: acetatul de prednison), Cell Cept (capsule substana activ: mycofenolat
mofetil), Sandimmun neoral (capsule substana activ: ciclosporina).
Animalele de experien (oareci) au fost mprite n 4 loturi, fiecare primind un
regim diferit, dup cum urmeaz: lotul M (martor); lotul Im (imunosupresat), care a
consumat aceeai hran ca i lotul M, dar n fiecare zi li s-a injectat intraperitoneal o doz
de 20 l de amestec imunosupresor; lotul Im-Sp (imunosupresat i tratat cu Spirulina) a
primit hran suplimentat cu 8% pulbere de Spirulina; de asemenea, zilnic li s-a injectat
animalelor aceeai doz de amestec cu activitate imunosupresoare; lotul Sp (Spirulina) a
primit hrana suplimentat cu 8% pulbere de Spirulina dar fr tratament imunosupresor.
Parametrii hematologici i biochimici
A fost remarcat, la toate loturile experimentale (Im, Im-Sp, Sp), o cretere a
numrului hematiilor fa de lotul martor, semnificativ din punct de vedere statistic
fiind modificarea valorilor nregistrate la lotul care a primit doar Spirulina (Fig. 9.1).
n ceea ce privete leucocitele, s-au nregistrat scderi semnificative statistic la
lotul Im, fa de oarecii din lotul M. La lotul Im-Sp, numrul de leucocite a sczut att
fa de martor, ct i fa de lotul cu imunosupresor, scderea fiind mai accentuat (-50%)
i asigurat statistic doar fa de lotul Im. Scderile nregistrate la aceste dou loturi
crora li s-au administrat imunosupresori sunt explicabile prin prisma aciunii acestor
substane. Stimularea eritropoiezei poate fi consecina biodisponibilitii crescute a
fierului coninut n Spirulina, comparativ cu celelalte surse de hran (Qishen i colab.,
1988). Comparnd valorile acestui parametru, de la lotul Im-Sp, cu cele de la lotul Im,
am constatat o cretere cu 60% a numrului de leucocite, statistic semnificativ, ce atest
capacitatea Spirulinei de a stimula sistemul imunitar.
Glicemia

Numrul de hematii
250

**

**

200

8
7
6

mg/100 m l

N um rul de hem atii (x 10 6 /m m 3 )

10

5
4

150

*
100

3
2

50

1
0

Im

Im-Sp

Sp

Im

Im-Sp

Sp

Fig. 9.1. Variaia numrului de hematii la Fig. 9.2. Variaia glicemiei la oarecii
oarecii martor, imunosupresai i la cei martor, imunosupresai i la cei hrnii cu
hrnii cu Arthrospira (Spirulina)
Arthrospira (Spirulina)
Glicemia a nregistrat o cretere semnificativ statistic la lotul Im, comparativ cu
lotul M. La lotul Im-Sp s-a remarcat o tendin de revenire a glicemiei spre valorile de la
lotul M. Comparnd valorile glicemiei, de la lotul Im-Sp, cu cele de la lotul Im, am
15

observat o scdere cu 40% a acesteia, statistic semnificativ, ceea ce atest efectul

hipoglicemiant al Spirulinei (Fig. 9.2).
Numrul leucocitelor, semnificativ diminuat la lotul Im, fa de lotul M, a fost
restaurat prin adugarea de Spirulina n dieta animalelor. De asemenea, Spirulina a
determinat o cretere a numrului de hematii, printr-o mai bun economie a fierului.
Imunosupresia a diminuat procentul de neutrofile, dar cu o pronunat tendin de
revenire la lotul Im-Sp.
La lotul tratat cu Spirulina, activitatea fagocitar a macrofagelor a fost intens,
ceea ce poate nsemna c cianobacteria stimuleaz semnalizarea intercelular la nivel de
celul macrofagic i celul prezentatoare de antigen.
Corobornd datele noastre cu cele existente n literatur, putem afirma c
Spirulina mbuntete funciile macrofagelor i asigur creterea capacitii de aprare
natural a organismului n cazul imunitii sczute.

10. Efectul hepatoprotector al cianobacteriei Arthrospira (Spirulina) n

intoxicaia cronic cu etanol la obolani
Protocol experimental
n vederea investigrii posibilelor efecte hepatoprotectoare ale cianobacteriei, au
fost determinai civa parametri hematologici i biochimici (serici i hepatici) la
obolanii care au primit un supliment de pulbere de Spirulina n hran, pe fondul
intoxicaiei etilice.
ntr-un experiment derulat pe parcursul a ase sptmni, animalele de experien
(obolani Wistar) au fost mprite n patru loturi: lotul martor (M) a primit dieta standard
(glucide, lipide, proteine vegetale i animale, minerale i un premix de vitamine); lotul
etanol, (EtOH) a consumat dieta standard i etanol (6 g/kg corp); lotul etanol-Spirulina,
(EtOH-Sp) a consumat dieta test (cu un coninut de 8% Spirulina), dar i etanol, la fel ca
i lotul EtOH; lotul Spirulina, (Sp) a consumat dieta test, fr adaos de etanol.
Parametrii hematologici i biochimici
Se tie c etanolul determin liza hematiilor, ca o consecin a agresivitii
radicalilor liberi generai n concentraii crescute (Ballard, 1997). Ca urmare, n
experimentul nostru numrul hematiilor a sczut semnificativ la lotul cruia i s-a
administrat etanol. Lotul tratat cu Spirulina a nregistrat valori similare cu cele ale lotului
martor, cu o uoar tendin de cretere, dat de proprietatea de stocare a fierului i
creterea hematopoiezei. Administrarea cianobacteriei pe fondul intoxicaiei etilice (lotul
EtOH-Sp) a condus la revenirea acestui paramentru spre valorile de control.
Numrul leucocitelor a sczut semnificativ numai n cazul lotului EtOH; o
caracteristic a patologiei alcoolice este deprimarea sistemului imunitar, motiv pentru
care alcoolicii sunt predispui la infecii (Ballard, 1997). Numrul total de leucocite a
crescut semnificativ la animalele care au primit doar Spirulina, pe cnd la cele cu EtOHSp valorile au fost foarte apropiate de cele ale lotului martor. Deci, putem afirma c
imunosupresia determinat de etanol a fost n ntregime nlturat de Spirulina.
Hematocritul a nregistrat o uoar scdere la lotul cu EtOH, ce a nsoit scderea
numrului de hematii. n schimb, administrarea pulberii de Spirulina n paralel cu
etanolul a determinat creterea semnificativ a hematocritului. Hemoglobina nu a
prezentat modificri semnificative la loturile tratate, comparativ cu lotul M.
16

Introducerea etanolului n alimentaie a determinat o hiperglicemie semnificativ

crescut (cu 35%), semnalat i de ali autori, ca rezultat al metabolizrii alcoolului la
acetaldehid i devierii raportului redox celular spre o stare mai redus (Lieber, 1993). Pe
fondul hiperglicemiei alcoolice, adaosul de Spirulina n alimentaia animalelor a readus
glicemia la valori aproape identice cu cele de la lotul martor. Aciunea hipoglicemiant sa evideniat cu claritate i la grupul de animale care a primit n hran numai
cianobacteria, fr alcool (Sp).
Concentraiile glucozei i glicogenului hepatic au avut o evoluie paralel:
ambele au sczut semnificativ sub influena etanolului, pentru a se apropia de valorile
martor la lotul EtOH-Sp, dar atunci cnd Spirulina a acionat singur, au fost de
asemenea sczute.
Proteinele serice, semnificativ reduse la lotul EtOH, au fost readuse la valoarea
de control n prezena adaosului de Spirulina, odat cu intensificarea sintezei proteinelor
hepatice (Fig. 10.1).
Proteine serice

Colesterolemia

12

80
10

60

m g/100m l

g/l

**

70

***

50

**

40
30
20

10

EtOH

EtOH-Sp

Sp

EtOH

EtOH-Sp

Sp

Fig. 10.1. Variaia concentraiei proteinelor Fig. 10.2. Variaia colesterolemiei la

serice la obolanii intoxicai cu etanol i obolanii intoxicai cu etanol i tratai cu
tratai cu Arthrospira (Spirulina)
Arthrospira (Spirulina)
Am verificat dac n condiiile noastre experimentale putem detecta o aciune
hipocolesterolemiant. S-au constatat modificri semnificative statistic la lotul cu EtOH
i la cel cu Spirulina, aceste modificri fiind n concordan cu datele cunoscute n
literatura de specialitate. Etanolul a determinat creterea colesterolului plasmatic,
asociat cu numeroasele modificri, cunoscute din literatur, ale metabolismului lipidic
(Lieber, 1993; Navder i colab., 1997). Este important de amintit c la lotul EtOH-Sp
efectul hipercolesterolemiant al etanolului a fost n totalitate reversat de administrarea
Spirulinei (Fig. 10.2).
n concluzie, putem afirma c, n experimentul nostru, att administrarea singur
a Spirulinei ct i n combinaie cu etanolul a determinat scderea semnificativ a
concentraiei glucozei hepatice i glicogenului. Efectul hipocolesterolemiant al Spirulinei
a fost evideniat n experimentul nostru. Testarea pulberii de Spirulina a avut ca efect o
cretere a nivelului de proteine serice, cu restaurarea, la lotul EtOH-Sp, a capacitii de
export a proteinelor hepatice. Administrarea etanolului a sczut semnificativ proteinemia,
fiind afectate att sinteza ct i exportul proteinelor.
17

11. Studii ultrastructurale asupra efectelor administrrii cianobacteriei

Arthrospira (Spirulina) n intoxicaia cronic cu etanol la obolani
Protocol experimental
Studiile de structur i ultrastructur s-au realizat n colaborare cu colectivul de
cercetare din cadrul Centrului de Microscopie Electronic, Universitatea Babe-Bolyai
Cluj-Napoca. Animalele de experien au fost femele de obolan Wistar, grupate n 4
loturi: lotul martor (M) a consumat o diet echilibrat din punct de vedere nutritiv i
energetic, coninnd glucide, lipide i proteine vegetale i animale, minerale i un premix
de vitamine; lotul Spirulina (Sp) a consumat aceeai hran cu lotul martor, dar
suplimentat cu 8% pulbere de Spirulina; lotul Etanol-Spirulina (EtOH-Sp) a consumat
aceeai diet ca i lotul cu Spirulina, dar i etanol (10% v/v n apa de but); lotul Etanol
(EtOH) a consumat dieta standard i aceeai concentraie de etanol ca i lotul EtOH-Sp.
Experimentul a durat zece sptmni, la sfritul experimentului, animalele au
fost sacrificate prin exsangvinare. Au fost luate probe de esut hepatic pentru determinri
de microscopie electronic. Restul de ficat a fost omogenizat pentru preparate
mitocondriale, pe care am efectuat msurtori spectrofotometrice ale unor parametri
bioenergetici (potenialul de membran, fluxurile de calciu i umflarea mitocondrial).
Studii ultrastructurale ale ficatului obolanilor din lotul martor
Examinarea esutului hepatic normal relev o structur parenchimal cu
hepatocitele dispuse n cordoane celulare regulate. Fiecare hepatocit prezint un nucleu
de form sferic sau ovalar cu diametrul de aproximativ 6-7 m, situat n centrul celulei
i care conine 1-3 nucleoli n cariolimf. Adesea, nucleolii sunt dispui n apropierea
membranei nucleare, sugernd o activitate intens nucleu - citoplasm. n apropierea
nucleului sunt vizibile numeroase mitocondrii normal electrodense (Fig. 11.1).
Reticulul endoplasmic este reprezentat n principal de profile nguste ale
reticulului endoplasmic granular (REG), dispus att n pachete de profile paralele ct i n
profile n jurul mitocondriilor.
Picturile de lipide sunt rare n citoplasm, datorit faptului c, n paralel cu
sinteza lor lipidele sunt transportate de la hepatocite n capilarele sangvine sau depozitate
n aa numitele celule de stocare a grsimilor sau celule Ito (Ito i Shibasaki, 1968).
Studii ultrastructurale ale ficatului obolanilor din lotul cu intoxicaie alcoolic

n citoplasma acestor hepatocite, aflate preponderent n apropierea zonei

centrolobulare, mitocondriile au matricea slab electrondens, rarefiat, sugernd o
diminuare a participrii lor la metabolismul energetic. Se mai evideniaz i faptul c
reticulul endoplasmic granular (REG) are canaliculele dilatate, la fel i spaiul
perinuclear, sugernd o diminuare a sintezelor proteice (Fig. 11.2). Celulele Kupffer,
respectiv macrofagele ficatului, prezint o relativ intens activitate pentru captarea i
distrugerea structurilor alterate de influena alcoolului. n lumenul capilarelor sinusoide sau observat neutrofile, prezena acestora indicnd clar un proces de inflamaie.

18

Fig. 11.1. Lot martor: hepatocit cu nucleu sferic,

eucromatic, cu 3 nucleoli (n). n citoplasm se
observ mitocondrii normal electrondense (M),
profile paralele de reticul endoplasmatic granular
(REG) i numeroase plaje de glicogen (G). Bara 2m.

Fig. 11.2. Lotul EtOH: hepatocit din zona

centrolobular. Nucleu (N) de form
neregulat, profile REG dilatate i
mitocondrii slab electrondense. Bara 2
m.

Fig. 11.3. Lotul EtOH-Sp: n hepatocite se disting

numeroi peroxizomi (Px) i rozete de glicogem
(RG). M mitocondrie; REG reticul
endoplasmatic rugos. Bara - 1m.

Fig. 11.4. Lotul Sp: hepatocite cu aspect

normal, cu nuclei (N) sferici, cu contur
regulat, mitocondrii normal electrondense i
profile REG paralele. Bara 5 m.

Studii ultrastructurale ale ficatului obolanilor din lotul cu intoxicaie alcoolic i

Spirulina

Administrarea consecutiv a alcoolului i Spirulinei indic o protejare fa de

aciunea nociv a alcoolului, imaginile ultrastructurale fiind foarte apropiate de
ultrastructura martorului. La acest lot se remarc prezena majoritii hepatocitelor
normal structurate, cu nuclei sferici ovalari, cu 1-2 nucleoli predominant eucromatici.
Mitocondriile sunt numeroase i normal structurate, fapt evident n toate imaginile
obinute. REG este prezent sub form de profile nguste cu dispunere paralel, n jurul
mitocondriilor, propice sintezelor proteice. Se remarc ns faptul c lipidele lipsesc din
19

celulele Ito, ceea ce indic o foarte bun metabolizare a lor, apropiat de starea normal.
Prezena microparticulelor de glicogen este de asemenea evident, n unele hepatocite
formnd chiar plaje de glicogen sau fiind prezent sub form de rozete.
Exist relativ numeroase centre de sintez a glicogenului i de asemenea numeroi
peroxisomi (Fig. 11.3). Proliferarea peroxizomal este unul dintre indicatorii creterii
capacitii celulelor de a se opune alterrilor cauzate de speciile reactive de oxigen. n
cazul experimentului nostru, creterea numrului de peroxizomi a fost consecina
introducerii suplimentului alimentar (pulberea de Spirulina) n dieta lotului EtOH-Sp.
Studii ultrastructurale ale ficatului obolanilor din lotul cu Spirulina
Aspectele ultrastructurale prezentate i descrise la ficatul martor, sunt n cea mai
mare parte regsite acum, indicnd efectul hepatoprotector al Spirulinei, comparativ cu
alterrile provocate hepatocitelor de obolan tratat numai cu alcool. n acest sens,
remarcm prezena hepatocitelor cu aspect normal, cu nuclei sferici, cu 1-2 nucleoli (Fig.
11.4), cu multe microparticule de glicogen n citoplasm. Spirulina a protejat prezena
glicogenului n hepatocite. De asemenea, picturile lipidice sunt n numr foarte mic n
majoritatea hepatocitelor. Se remarc faptul c lipidele lipsesc din hepatocite i se
acumuleaz n celulele Ito, ceea ce indic o foarte bun metabolizare a lor i un tranzit al
lipidelor din hepatocit.
Efectul hepatoprotector al Spirulinei este evideniat i prin abundena REG,
indicnd o intens activitate metabolic, n special pentru sinteza proteinelor.
Mitocondriile n marea majoritate sunt sferice, cu matricea dens, ceea ce denot c sunt
metabolic active. Canaliculii biliari sunt normal constituii, avnd diametrul ngust i
delimitat de microvili. n jurul canaliculilor biliari sunt prezeni lizozomi sub form de
corpusculi peribiliari, ducnd la sinteza i secreia de bil. Celulele Kupffer sunt active,
cu muli lizozomi gata s intre n activitate.

12. Efectele administrrii cianobacteriei Arthrospira (Spirulina) la

obolani intoxicai cronic cu etanol asupra mitocondriilor hepatice;
monitorizarea tranziiei de permeabilitate i a fenomenelor asociate
(umflarea mitocondrial, colapsul i efluxul de calciu)
Scopul acestui experiment a fost de a stabili dac Spirulina are un efect protector
asupra mitocondriilor de la obolani normali i alcoolizai, n ceea ce privete tranziia de
permeabilitate i fenomenele asociate (umflarea mitocondrial, colapsul i efluxul de
calciu). Experimentul s-a realizat pe parcursul a zece sptmni, animalele de experien
au fost mprite n patru loturi: lotul martor, (M) a primit dieta standard (glucide, lipide,
proteine vegetale i animale, minerale i un premix de vitamine); lotul etanol, (E) a
consumat dieta standard i etanol (10% v/v n apa de but); lotul etanol-Spirulina, (ES) a
consumat dieta test (Spirulina 8%), dar i etanol, la fel ca i lotul EtOH; lotul Spirulina,
(S) a consumat dieta test.
Potenialul de membran (), fluxurile de calciu i umflarea mitocondrial
au fost monitorizate spectrofotometric, cu ajutorul unui spectrofotometru diode-array,
care permite nregistrri paralele ale mai multor parametri, sau folosind un
spectrofotometru Jasco V-530 pentru efectuarea de nregistrri individuale ale fiecrui

20

parametru n condiii identice. Respiraia i toate fenomenele asociate (, fluxurile de

Ca2+ i umflarea mitocondrial) au fost declanate prin adiia de succinat (2,5 mM).
Diferite concentraii de CaCl2 sau ali factori modulatori au fost adugate fie la nceput,
fie n pulsuri repetate, pn la atingerea concentraiei dorite. Sensibilitatea diferitelor
grupe de mitocondrii la calciu am apreciat-o prin considerarea numrului de pulsuri de
calciu (de 10 M fiecare) necesare pentru colapsul sau/i producera efluxului masiv
de calciu, servind astfel la comparaia ntre grupuri (Fig.12.1 i Fig.12.2).

Fig. 12.1. Membrane potential (upper Fig. 12.2. Calcium (Ca2+) fluxes (upper
trace) and mitochondrial swelling (lower trace) and matrix swelling (lower trace)
trace) in mitochondria of control (C) rats.
in mitochondria of C rats.
Mitocondriile de la obolanii din lotul martor (M). Fig. 12.3. prezint o
nregistrare a modificrilor de fluorescen (ex = 622 nm; em = 670 nm) asociate cu
generarea i colapsul potenialului de membran dup adiia de succinat i pulsuri
repetate de calciu. nregistrarea fluorescenei are avantajul de a nu fi sensibil la
modificrile spectrale asociate cu umflarea. Numrul "dinilor de calciu" corespunde
practic cu numrul adiiilor de calciu dup care colapseaz. Astfel, putem cuantifica
prin metoda fluorescenei capacitatea mitocondriilor de a rezista la stresul indus de calciu
doar prin nregistrri ale potenialului de membran.
Mitocondriile de la obolanii din grupul cu etanol (E). Fig. 12.4 arat cinetica
, se poate observa c mitocondriile din acest lot sunt mai sensibile la stresul indus de
calciu dect cele ale lotului M, aa cum demonstreaz numrul mic de pulsuri de calciu
(10 M) adugat pn la colapsul . Aceste rezultate indic faptul c membranele
mitocondriale ale obolanilor din lotul E i sistemele lor de transport sunt mai fragile,
gata s elibereze componentele spaiului intermembranar i ale matricei.
Mitocondriile de la obolanii din grupul cu etanol i Spirulina (ES).
Comportamentul reprezentativ al mitocondriilor izolate de la obolanii din lotul ES este
prezentat n Fig. 12.5 (). Comportamentul lor este similar cu cel al mitocondriilor din
lotul de control i este susinut de analiza statistic. Din nregistrrile noastre reiese c
Spirulina are un efect protector asupra ficatului la obolanii tratai cu etanol.

21

Fig. 12.3. nregistrarea spectrofluorimetric

a cineticii potenialului de membran dup
adiia de succinat i mai multe pulsuri de
10 M calciu.

Fig. 12.4. nregistrarea spectrofluorimetric

a potenialului de membran declanat de
succinat n mitocondriile obolanilor din
lotul cu etanol (E).

Mitocondriile obolanilor din grupul cu Spirulina (S). Mitocondriile acestui

grup acumuleaz n jur de 6-7 pulsuri de calciu (Fig. 12.6) nainte de inducerea tranziiei
de permeabilitate, totalul se ridic la 60-70 M, sau 60-70 nmoli/mg protein, valorile
individuale sunt cuprinse ntre 45 i 90 nmoli/mg, cu o medie de 66,1 nmoli/mg protein
mitocondrial. n condiiile folosite de noi, cnd fosfatul anorganic (Pi) are o concentraie
mai mare dect Mg, aceast performan este remarcabil, deoarece este cunoscut faptul
c Pi promoveaz tranziia de permeabilitate indus de calciu, n timp ce Mg2+ are un
efect opus (Bernardi i Pietrobon, 1982; Racay, 2008). Acest lucru nseamn c Spirulina
adugat ca supliment nutritiv crete rezistena mitocondriilor la stresul indus de calciu i
foarte probabil la stresul oxidativ, deoarece cei doi ageni sunt intercondiionai. De fapt,
o analiz a celorlalte rezultatelor biochimice ale studiului nostru merge n aceast
direcie.

Fig. 12.5. nregistrarea potenialului de

membran declanat de succinat n
mitocondriile obolanilor tratai cu etanol
i Spirulina (ES).

Fig. 12.6. nregistrarea spectrofluorimetric

a potenialului de membran generat de
succinat n mitocondriile obolanilor tratai
cu Spirulina (S).
22

Multe din studiile raportate n literatura de specialitate, cu relevan direct asupra

studiului nostru, se refer la ficatul perfuzat, culturi de esuturi sau celule hepatice, n
timp ce mai puine studii similare cu ale noastre au fost efectuate pe mitocondrii izolate.
Dei abordarea experimental nu a fost identic, concluziile generale au fost similare; de
exemplu, consumul chiar i moderat de alcool afecteaz producia de ATP i induce
alterri structurale i funcionale grave n mitocondriile organelor i esuturilor vitale.
Spirulina adugat ca supliment nutritiv crete rezistena mitocondriilor la stresul indus
de calciu i foarte probabil la stresul oxidativ, deoarece cei doi ageni sunt
intercondiionai.

23

Concluzii
Putem concluziona c majoritatea parametrilor investigai au fost modificai ntrun mod favorabil de administrarea pulberii de Arthrospira (Spirulina) pe fondul
anemierii, imunosupresiei, inducerii hipotiroidismului i intoxicaiei etilice.
1.
Aspectul animalelor pe tot parcursul experimentelor, aspectul organelor
interne la sacrificare, precum i valorile parametrilor determinai ne ndreptete s
afirmm c administrarea Arthrospirei (Spirulina), 3% i respectiv 8%, n dieta
animalelor de experien, att n regim subcronic (2 sptmni), ct i pentru o perioad
mai ndelungat (2 luni) nu a avut efecte toxice.
2.
Studiul nostru a demonstrat c Arthrospira (Spirulina) are un efect pozitiv
n anemii, datorit densitii ridicate de nutrieni i n special a urmtoarelor elemente:
vitamina B12, acid folic, aminoacizi eseniali, fier cu biodisponibilitate ridicat. La
animalele anemiate parametri modificai s-au restaurat parial, ca urmare a intensificrii
eritropoiezei sub aciunea Epo endogen. Animalele din lotul anemiat i tratat cu
Spirulina au fost mai eficiente n restaurarea parametrilor afectai, comparativ cu lotul
An.
3.
Testele realizate n verificarea ipotezei potrivit creia cianobacteria, prin
coninutul su de iod i de compui asemntori hormonilor tiroidieni, poate stimula
funcia tiroidian evideniaz att aciunea tiroid-stimulant a Arthrospirei (Spirulina),
ct i consecinele pe care le pot avea, la nivel glandular i organismic, pesticidele,
insecticidele i ali poluani din mediu care au potenial de inhibare a funciei tiroidiene.
4.
Putem afirma c Spirulina mbuntete funciile macrofagelor i asigur
creterea capacitii de aprare natural a organismului n cazul imunitii sczute.
5.
Administrarea Spirulinei, att singur, ct i n combinaie cu etanolul a
determinat scderea semnificativ a concentraiei glucozei hepatice i glicogenului. De
asemenea, efectul hipocolesterolemiant al Spirulinei a fost evideniat n experimentul
nostru. Dac administrarea etanolului a sczut semnificativ proteinemia, fiind afectate
att sinteza ct i exportul proteinelor, pulberea de Spirulina a avut ca efect o cretere a
nivelului de proteine serice, cu restaurarea, la lotul EtOH-Sp, a capacitii de export a
proteinelor hepatice.
6.
Studiile de microscopie electronic asupra ficatului arat c aspectele
ultrastructurale prezentate i descrise la ficatul martor, sunt n cea mai mare parte regsite
acum, indicnd efectul hepatoprotector al pulberii de Arthrospira (Spirulina), fa de
alterrile provocate hepatocitelor ficatului de obolan tratat numai cu alcool.
7.
Rezultatele noastre actuale confirm efectele benefice ale administrrii de
Spirulina la obolanii normali i tratai cu etanol. Am demonstrat c aceast cianobacterie
mbuntete rezistena mitocondriilor hepatice la stresul indus de calciu, amn
colapsul i tranziia de permeabilitate.

24

Bibliografie selectiv
Babaev, T.A., Baraskina, Y.I., Kucikarova, M.A., Tuliaganov, A., Hodjcamedov, G.,
Turakulov, Y.H., 1979, Determinarea coninutului de iod n Spirulina platensis,
Akad. Nauk Uzbekskoi. 5, 6-8.
Ballard H.S., 1997, The hematological complications of alcoholism, Alcohol Health Res
World. 21(1), 42-52.
Belay, A., 2002, The Potential Application of Spirulina (Arthrospira) as a Nutritional and
Therapeutic Supplement in Health Management, J. Americ. Nutr. Assoc. 5(2), 2744.
Belay, A., Kato, T., Ota, Y., 1996, Spirulina (Arthrospira): potential application as an
animal feed supplement, J. Appl. Phycol. 8, 303-311.
Berlean, R., Tarba, C., 2011, Administration of Spirulina to ethanol-fed rats increases
the resistance of hepatic mitochondria to calcium-induced permeability transition
and loss of membrane potential, Studia Univ. Babes-Bolyai, Biol. 56(1): 69-90.
Bernardi, P., Pietrobon, D., 1982, On the nature of Pi-induced Mg2+-prevented Ca2+
release in rat liver mitochondria, FEBS Lett. 139, 9-12.
Bl-Castillo, J.L., Rodriguez-Hernandez, A., Miranda-Zamora, R., Juarez-Oropeza,
M.A., Diaz-Zagoya, J.C., 2002, Arthrospira maxima prevents the acute fatty
liver induced by the administration of simvastatin, alcohol and a
hypercholesterolemic diet to mice, Life Sci. 70(22), 2665-2673.
Certik, M., Shimizu, S., 1999, Biosynthesis and regulation of microbial polyunsaturated
fatty acid production, J. Biosci. Bioeng. 87, 1-14.
Dartsch, P.C., 2008, Antioxidant potential of selected Spirulina platensis preparations,
Phytother. Res. 22, 627-633.
Drago, N., 2000, Citologia i fiziologia creterii culturilor cianobacteriei Spirulina
platensis, (Gomont) Geitler, Tez de doctorat, Cluj-Napoca. 23-51.
Enomoto, N., Schemmer, P., Ikejima, K., Takei, Y., Sato, N., Brenner, D.A.,
Thurman, R.G., 2001, Long-term alcohol exposure changes sensitivity of rat
Kupffer cells to lipopolysaccharide, Alcohol Clin Exp Res, 25(9), 1360-7.
Falch, BS., Knig, GM., Wright, AD., Sticher, O., Angerhofer, CK., Pezzuto, JM.,
Bachmann, H., 1995, Biological activities of cyanobacteria: evaluation of
extracts and pure compounds, Planta Med., 61(4), 321-8.
Gonzlez, R., Gonzlez, A., Remirez, D., Romay, C., Rodriguez, S., Ancheta, O.,
Merino, N., 2003, Protective Effects of Phycocyanin on Galactosamine-induced
Hepatitis in Rats, Biotecnologa Aplicada. 20, 107-110.
Ito, T., Shibasaki, S., 1968, Electronomicroscopic study on the hepatic sinusoidal wall
and fat-storing cell in the human liver. Arch. Histol. Jpn., 29, 137-192.
Hayat, M.A., 2000, Principles and techniques of electron microscopy Biological
applications, Cambridge University Press, Cambridge.
Hendrickson, R., 1989, How this remarkable blue-green algae can transform your health
and our planet: Earthfood spirulina. Laguna-Reach: Ronore Enterprises. 180.
Juarez-Oropeza, M.A., Mascher, D., Torres-Duran, P.V., Farias, J.M., ParedesCarbajal, M.C., 2009, Effects of Spirulina on vascular reactivity, J. Med. Food.,
12(1), 15-20.

25

Kostic, M.M., Ognjanovic, B., Dimitrijevic, S., Zikic, R.V., Stajn, A., Rosic, G.L.,
Zivkovic, R.V., 1993, Cadmium-induced changes of antioxidant and metabolic
status in red blood cells of rats: in vivo effects, Eur. J. Haematol., 51(2), 86-92.
Kozlenko, R., Henson, R., 1997, Spirulina: Nutrition and Health Studies, Healthy &
Nat. J. (http://www.spirulina.com/SPLNews96.html).
Lieber, C.S., 1993, Herman Award Lecture, 1993: a personal perspective on alcohol,
nutrition, and the liver, Am J Clin Nutr., 58(3), 430-442.
Loseva, L.P., Dardynskaya, I.V., 1993, Spirulina - natural sorbent of radionucleides,
Research Institute of Radiation Medicine, Minsk, Belarus. 6th Int'l Congress of
Applied Algology, Czech Republic. Belarus.
Manoj, G., Venkataraman, L.V., Srinivas, L., 1992, Antioxidant properties of
Spirulina (Spirulina platensis). In: Seshadri and Bai, Spirulina. MCRC. 48-154.
Manzo-Avalos, S., Saavedra-Molina, A., 2010, Cellular and mitochondrial effects of
alcohol consumption, Int. J. Environ. Res. Public Health 7, 4281-4304.
Naliandian, A.A., Babaev, T.A., 1988, Estimarea coninutului de tiroxin din Spirulina
platensis, Biohim., Biofiz. i Molek. Biol. 5, 3-4.
Navder, K.P., Baraona, E., Lieber, C.S., 1997, Polyenylphosphatidylcholine attenuates
alcohol-induced fatty liver and hyperlipemia in rats, J Nutr., 127(9), 1800-6.
Qishen, P., Baojiang, G., Rhong, R., 1988, Enhancement of endonuclease activity and
repair of DNA sysntesis by polysaccharide of Spirulina platensis, Chinese
Genetics Journal (Acta Genetica Sinica), 15, 33374-33381.
Qureshi, M.A., Garlich, J., Kidd, M., 1996, Dietary Spirulina platensis enhances
humoral and cell-mediated immune function in chickens. Immunopharmacol
Immunotoxicol. 18, 465-476.
Qureshi, M.A., Kidd, M.T., Ali, R.A., 1995, Spirulina platensis extract enhances
chicken macrophage functions after in vitro exposure. J Nutr Immunol, 3, 35-44.
Racay, P., 2008, Effect of magnesium on calcium-induced depolarisation of
mitochondrial transmembrane potential, Cell Biol. Intnl. 32(1), 136-145.
Rasool, M., Sabina, E.P., 2009, Appraisal of immunomodulatory potential of Spirulina
fusiformis: an in vivo and in vitro study, J. Nat. Med. 63, 169-175.
Riss, J., Decorde, K., Sutra, T., Dealge, M., Buccon, J.C., Jouy, N., Brune, J.P.,
Oreal, H., Cristal, J.P., Rouanet, J.M., 2007, Phycobiliprotein C-phycocyanin
from Spirulina platensis is powerfully responsible for reducing oxidative stress
and NADH oxidase expression induced by an atherogenic diet in hamsters, J.
Agric. Food Chem. 55(10), 7962-7967.
Rudic, V.F., Gudumac V., Popovici M., 1995, Fotobiotehnologie - realizri noi n
biomedicin, Cuant, Chiinu, 207.
Sharma, M.K., Kumar, M., Kumar, A., 2002, Ocimum sanctum aqueous leaf extract
provides protection against mercury induced toxicity in Swiss albino mice, Indian
J. Exp. Biol. 40, 1079-1082.
Simsek, N., Karadeniz, A., Keles, O.N., Unal, B., 2009, Spirulina platensis feeding
inhibited the anemia- and leukopenia-induced lead and cadmium in rats, Journal
of Hazardous Materials, 164(2-3), 1304-1309.
Stromberg, I., Gemma, C., Vila, J., Bickford, P.C., 2005, Blueberry- and spirulinaenriched diets enhance striatal dopamine recovery and induce a rapid, transient

26

microglia activation after injury of the rat nigrostriatal dopamine system, Exp
Neurol., 196(2), 298307.
Torres-Duran, P.V., Miranda-Zamora, R., Paredes-Carbajal, M.C., Mascher, D.,
Castillo, B., Diaz-Zagoya, J.C., Juarez-Oropeza, M.A., 1998, Studies on the
preventive effect of Spirulina maxima on fatty liver development induced by
carbon tetrachloride, in the rat. J. Ethnopaharmacol. 64, 141-147.
Uray, Z., 1992, Ghid de date biologice i fiziologice ale animalelor de laborator, Cap. 5,
n: Biologia animalului de laborator i oncologie comparat, Chiricu, I., Bologa,
S., Ric, R., Ghergariu, S. (sub red.), Col. Enciclop. Oncol., vol. 19, Inst. Oncol.
Cluj-Napoca, 111-150.
Vadiraja, B., Gaikwad, N., Madyastha, K., 1998, Hepatoprotective effect of Cphycocyanin: protection for carbon tetrachloride and R-(+)-pulegone-mediated
hepatotoxicity in rats, Biochem. Biophys. Res. Commun. 428-431.
Zikic, V., Stajn, A.S., Ognjanovic, B.I., Pavlovic, S.Z., Saicic, Z.S., 1997, Activities of
superoxide dismutase and catalase in erythrocytes and transaminases in the
plasma of carps (Cyprinus carpio L.) exposed to cadmium, Physiol Res., 46(5),
391-396.

27