MICROBIOLOGIA I

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR
AL INFECIILOR STAFILO- I
STREPTOCOCICE

CARACTERISTICA GENERAL
A GRUPULUI COCILOR PIOGENI
Familia Staphylococcaceae
Genuri: Staphylococcus
Gamella
Macrococcus
Salinicoccus
Familia Streptococcaceae
Genuri: Streptococcus
Lactococcus
Familia Neisseriaceae
Genul Neisseria
Caracter comun capacitatea de a condiiona procese
supurative-distructive.
Morfologic reprezint coci (sferici, lanceolai, riniformi),
imobili, nesporogeni, unele specii formeaz capsule.

1.

2.

n funcie de caracterele tinctoriale se

disting:
Coci gram pozitivi
(Staphylococcaceae,
Streptococcaceae)
Coci gram negativi (Neisseriaceae)

Cocii piogeni se deosebesc prin:

Caractere de cultur (exigene

nutritive, tipul de respiraie, etc)

Caractere biochimice

Factori de patogenitate

Rolul n patologia uman

Infecii nespecifice
Infecii specifice (gonoreea,
scarlatina, etc)

GENUL STAPHYLOCOCCUS
Se disting 2 grupuri (varieti):
1.
Stafilococi coagulazo-pozitivi - SCP foarte
viruleni (S.aureus, S.intermedius)
2.
Stafilococi coagulazo-negativi SCN
potenial-patogeni (aproximativ 30 specii:
S.epidermidis, S. saprophyticus, S. capitis,
S.haemolyticus, S.hominis, etc)
Habitat: 20-70% din populaie sunt purttori:
S.aureus - cavitatea nazal, intestin,
S.epidermidis narine, tegument,
S.saprophyticus - tegument.

Staphylococcus aureus
Caracterele morfobiologice
Caractere morfo-tinctoriale: coci gram+, n
frotiu se aranjeaz n grmezi neregulate
(greac: staphylos-ciorchine, kokkos
grunte), n perechi sau izolat . Imobili,
nesporogeni, necapsulai (uneori
microcapsule)

Caractere de cultur: facultativ

anaerobi, nepretenioi la cultivare,
cresc pe medii uzuale. Temperatura
optima 37C, pH-7,07,5.
- n BP turbiditate uniform
- Geloza salin cu glbenu de ou -GGO
(3 % NaCl)
- Mediul Chapman (7,5 % NaCl,
manitol)
- Geloz-snge

Colonii S, opace, pigmentate (auriu, citric, alb),

pe geloz-snge cauzeaz hemoliz. Pe GGO
coloniile sunt nconjurate cu un halou opac
(aciunea lecitinazei).

Caractere biochimice: catalazo-pozitivi,

fermenteaz manitolul

Factori de patogenitate
I.
Factori structurali:
peptidoglicanul (induce secreia citokinelor
de ctre celulele limfocitare, responsabile de
starea de oc)
acizii lipoteichoici (induc o
hipersensibilitate tardiv)
proteina A (asigur fixarea Fc al IgG,
mpiedic opsonizarea i fagocitoza)

a)

b)

c)

adezine, care permit fixarea S.aureus pe

diverse molecule plasmatice ale gazdei:
Fibronectin i laminin. Fibronectina este
prezent pe suprafee epiteliale i
endoteliale, precum i n chiaguri
sanguine.
Fibrinogen. Fixarea de fibrinogen asigur
aderarea la chiaguri i esuturi lezate.
Colagen. Tulpinile ce posed astfel de
adezine cauzeaz osteomielite i artrite
septice
Microcapsula, rol antifagocitar

II. Toxine
- Alfa-toxina (alfa-hemolizina). Efect citolitic fa de
trombocite, monocite, hematii, cu eliminarea
citokinelor, care pot fi cauza ocului septic
stafilococic.
- Beta-toxina (sfingomielinaza). Prezent la tulpinile
izolate de la bovine cu mastit.
- Gamma i delta-toxine. Efect leuco- i hemolitic.
- Leucocidina, efect litic fa de leucocite i macrofage,
factor important n procese dermonecrotice
- Exfoliatine (epidermolizine) A i B. Manifest tropism
cutanat.
Mecanism: se fixeaz de unele proteine cutanate
(profilagrin i filagrin), inducnd desprinderea
intra-epidermic dintre stratum granulosum i
stratum spinosum, cu formarea leziunilor buloase
(impetigo bulos, sindromul pielii oprite).

Enterotoxine: A, B, C1, C2, C3, D, E, G.

Termostabile, rezistente la aciunea enzimelor
proteolitice ale tubului digestiv. Determin
intoxicaii alimentare (enterotoxina B poate
cauza oc toxic).
- Toxina sindromului toxic stafilococic
(TSST-1). Determin stare de oc stafilococic.
-

Toate toxinele sunt imunogene.

Enterotoxinele, TSST-1 reprezint
superantigene, activnd 20% de limfocite T
(particip la declanarea strii de oc)

III. Coagulazele
- Coagulaza liber - protein extracelular care
se leag de protrombina gazdei cu formarea
unui complex. Astfel activat, trombina
determin conversia fibrinogenului n fibrin
cu coagularea plasmei. Reprezint cauza
tromboflebitelor septice i protejeaz cocii de
fagocitoz.
- Coagulaza legat (clumping factor) este un
determinant superficial al S.aureus fixator de
fibrinogen. Antifagocitar. Provoac fenomenul
de aglutinare a stafilococilor n prezena
fibrinogenului.

IV. Stafilokinaza (fibrinolizina) activator al

plasminogenului (asociat cu bacteriofagi lizogeni).
Complexul stafilokinaz-plasminogen manifest
activitate proteolitic, cauznd dizolvarea
trombilor (responsabil de localizri septice
secundare).
V. Enzime de patogenitate:
- Hialuronidaza faciliteaz diseminarea bacteriilor
- Alte enzime: proteaze, lipaze (inclusiv lecitinaza),
ADN-aze, fosfataze, etc.
Rol n diseminarea infeciei i producerea leziunilor.
Se disting multiple serotipuri de S.aureus, iar
receptorii pentru bacteriofagi permit clasificarea
n lizotipuri (fago-variante)

Epidemiologia infeciilor stafilococice

Sursa de infecie : omul bolnav sau
purttori sntoi de germeni.
Rareori bovinele bolnave de mastit.
Mecanismele i cile de transmitere :
- Contact direct sau diseminare
manuportat
- Contact indirect (alimente, praf,
mbrcminte, etc)
Factori favorizani: diabet, tratament
imunosupresiv, arsuri, plgi, etc

Formele clinice ale infeciilor cu

S.aureus
Infecii supurative
- infecii cutanate: foliculite, furuncule,
carbuncule, abcese, panariiu, infecie
de plag (frecvent de origine
nosocomial).
Exfoliatina determin sindromul pielii
oprite (sindromul Lyel) la copii,
pemfigus epidemic la nou-nscui
(boala Ritter) i impetigo bulos la
maturi.

Infecii ale mucoaselor: mastoidite, sinusite,

otite, angine...
Infecii ale seroaselor: artrite, pleurezie,
peritonit, meningit...
Infecii osoase: osteomielit, spondilodiscit,
infecie de protez
Infecii viscerale: abces pulmonar, cerebral,
flegmon perirenal, pielonefrite, etc
Septicemii i endocardite. Cauzate i
ntreinute de un focar infecios primar
complicat de tromboflebit. n mediu
spitalicesc au caracter nosocomial (catetere
intravasculare, proteze valvulare cardiace,
articulare, stimulatoare cardiace...)

Manifestri digestive
- Intoxicaii alimentare (doza toxic - 1g la
100 g aliment). Vome, diaree, deshidratare,
absena febrei
- Enterocolite consecutive unei antibioterapii
Sindromul ocului toxic stafilococic :
febr, hipotensiune arterial, erupie cutanat
scarlatiniform, stare de oc, leziuni viscerale
(cerebrale, renale, hepatice, musculare).
Descris n 1978 n SUA la femei care utilizau
tampoane periodice i sufereau de vaginit cu
S. aureus. Tulpini responsabile de acest
sindrom pot fi izolate din diverse leziuni
stafilococice.

Infecii cauzate de SCN

S.epidermidis determin infecii asociate
cu proteze i catetere, frecvent de origine
nosocomial (endocardite, endoftalmii,
peritonite la pacieni cu dializ peritoneal,
bacteriemii). S.epidermidis produce un
polizaharid de adeziune, care-l fixeaz pe
implante din plastic.
S.saprophyticus i S.haemolyticus pot
cauza infecii ale tractului urinar
S.lugdunensis infecii de plag,
endocardite

Imunitatea antistafilococic este mixt:

celular i umoral

Diagnostic de laborator
Materiale de examinat n funcie de forma
clinic
1.
Diagnostic direct
Examen microscopic direct (Gram, RIF)

Examen bacteriologic. La interpretare se ine

cont de datele clinice. n caz de infecii
nosocomiale sau otrvire alimentar se
identific markerii epidemiologici (lizotip,
serotip, antibiotip). Determinarea
antibiogramei este obligatorie (tulpini
multirezistente).
(Diferenierea speciilor de stafilococi n
Ghid)
- Identificarea acizilor nucleici prin tehnici de
biologie molecular
- n cazuri particulare se caut prezena
toxinelor (reacia de latex-aglutinare, ELISA)
-

2. Diagnostic indirect (serologic)

Se examineaz seruri sanguine pentru depistarea
anticorpilor anti-stafilolizine-alfa (titru > 2 UI/ml)
n caz de infecii profunde sau cronice, sau antiacizi teichoici (titru> 1:16) n caz de endocardite
sau focare inaccesibile.
Tratamentul specific al infeciilor stafilococice:
autovaccinuri, vaccinuri inactivate, seruri imune (n
infecii cronice)
Antibiotice: peniciline semi-sintetice (oxacilin),
augmentin, imipenem, aminoside, macrolide,
fluorochinolone, glicopeptide (vancomicin,
teicoplanin) cotrimoxazol, fosfomicin,
rifampicin, acidul fuzidic, etc
Profilaxia specific : plasm antistafilococic, Ig
anti-stafilococic, ser hiperimun, anatoxin
stafilococic

FAMILIA STREPTOCOCCACEAE

Genul Streptococcus (fragili i

exigeni la cultivare)
Genul Lactococcus (anterior
streptococi din grupul N)

Genul Streptococcus
Reunete specii facultativ anaerobe caracterizate
prin morfologie tipic (coci gram+ n lanuri,
imobili, nesporogeni, capsulai), metabolism
fermentativ i lipsa catalazei.
Clasificarea streptococilor
1.
Dup aspectul hemolizei pe geloz-snge
Streptococi beta-hemolitici (hemoliz
complet, zon clar n jurul coloniilor)
Streptococi alfa-hemolitici (hemoliz
incomplet, zon verzuie n jurul coloniilor)
Streptococi nehemolitici (gamma-hemoliz)

2. Clasificarea imunologic Lancefield

Dup antigenul polizaharidic C din peretele
celular se disting 20 grupe serologice (A H, K
W). Streptococii care nu posed acest Ag nu
se ncadreaz n clasificarea Lancefield (ex.:
S.pneumoniae). Ei se identific dup caractere
de cultur i biochimice.
3.Dup habitat i patogenitate
- Streptococi piogeni, viruleni, beta-hemolitici
(aparin grupurilor A,B,C,G)
- Streptococi orali, comensali, nehemolitici sau
alfa-hemolitici, negrupabili dup Lancefield
- Streptococi fecali, specii comensale sau
condiionat patogene ale tractului digestiv
uman i animal
- Streptococi lactici, reprezint flora laptelui i
produselor lactate

Diferenierea streptococilor patogeni de cei

saprofii se efectueaz de asemenea n
baza criteriilor Cherman:
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.

Creterea la 10 i 45 C
Creterea n bulion cu 6,5% NaCl
Creterea n mediu cu pH 9,6
Hidroliza esculinei pe mediu cu 40% bil
Liza culturii n bulion biliat
Sensibilitatea la bacitracin i optochin
Hidroliza hipuratului de sodiu

Streptococcus pyogenes (gr. A)

Bacterie strict uman, posibil portaj oro- i
nasofaringean (20%).
Caractere morfologice: lanuri scurte sau
perechi de coci sferici gram+, imobili,
capsulai, nesporogeni.
Caractere de cultur: facultativ-anaerobi,
cultiv pe medii elective. Pe geloz-snge,
dup 18-24 ore incubare la 37 C colonii S
mici, cu zon de -hemoliz. n bulion
glucozat, bulion-ser formeaz depozit la
fundul i pe pereii tubului.
S.pyogenes este sensibil la bacitracin.

Structura antigenic a S.pyogenes (Lancefield-Griffith):

1.
Polizaharidul C din peretele celular, specific pentru
grupul A (dup Lancefield). Poate fi identificat n RP,
latexaglutinare, co-aglutinare.
2.
Proteinele de suprafa: M (fimbriale), R i T
(uneori asociate cu acizii lipo-teicoici), care permit
diferenierea n 90 serotipuri (dup Griffith). Proteina
M manifest reactivitate imunologic ncruciat
(mimicrie antigenic) cu constitueni normali ai
organismului (miozin, sarcolem, sinoviale),
determinnd procese imunopatologice (manifestri
post-streptococice).
Ag proteice de tip se identific prin RP (Ag M) i
RA (Ag T).
3. n MCP exist Ag comun cu membrana bazal a
glomerulilor renali

Factori de patogenitate
1.
Factori de structur
Capsula din acid hialuronic, neimunogen.
Efect antifagocitar
Proteina M, adeziune, antifagocitar
Acizii lipoteichoici, adeziune la celule
epiteliale
Proteina F, receptor de fibronectin
2. Toxine
- Streptolizinele O (oxigen-labil) i S (oxigenstabil). Sunt toxine citolitice. SLO
manifest efect cardiotoxic, hemolitic.
Inhib chimiotactismul PMN i reduce
activitatea celulelor imunocompetente.

Induce formarea Ac neutralizani

antistreptolizine (ASLO).
SLS nu este imunogen. Manifest activitate
citolitic i leucotoxic.
- Toxinele eritrogene (pirogene) A, B i C sunt
determinate de fagi moderai. Au activitate de
superantigen, producnd inflamaie asociat
cu stare de oc. Mitogene i imunosupresive.
Tulpinile lizogene determin scarlatina.
3. Enzime de patogenitate: hialuronidaza,
streptodornaza B (ADNaza), lipoproteinaza,
streptokinaza (fibrinolizina)

Epidemiologia infeciilor provocate de

S.pyogenes
Sursa de infecie: bolnavii i
purttorii sntoi (faringe i
amigdale, mai rar anus, vagin,
tegument).
Mecanismele i cile de transmitere :
- Aerogen (picturi Pflugge)
- Contact direct (leziuni cutanate)

Patogenia i formele clinice ale infeciilor

provocate de S.pyogenes
Infecii ale mucoaselor
Sfera ORL: rinite, faringite, angine
eritematoase (risc de reumatism articular
acut), abcese periamigdaliene, adenite
cervicale, sinusite, otite, mastoidite.
Scarlatina (angin streptococic nsoit de
erupie cutanat).
Infecii cutanate i subcutanate: erizipel,
impetigo, celulit, fasciit necrozant,
mionecroz (sindromul Meleney), eritemul
nodos, infecii ale plgilor i arsurilor

Septicemii
Sindromul ocului toxic streptococic,
secundar unei infecii locale, n special
subcutanat
Alte infecii: endometrite, pneumonii
Infecii post-streptococice
- RAA (reumatismul articular acut), mai
frecvent la copii de vrst colar. Apare
dup infecii faringiene i este determinat de
aciunea direct a streptolizinei, depozite de
complexe imune (RHS III), precum i prin
interaciunea autoAc i al Ac antistreptococici cu autoantigene din miofibrile,
valvule cardice i sinoviale (RHS II).

Glomerulonefrita acut (GNA)

Maladie a copilului de vrst precolar. Survine
dup 10-20 zile de la o infecie cutanat, mai
rar faringean. Se caracterizeaz prin
perturbarea funciei renale, edem i
hipertensiune arterial.
Patogenie: efect toxic direct, reacii autoimune,
bazate pe asemnarea unor Ag streptococice
din MCP i membrana bazal glomerular
(RHS II i III), persistena formelor L.
-

Imunitatea antistreptococic este specific de

tip, asigurat de Ac anti-proteina M. Ac antieritrotoxin protejeaz de eritemul
scarlatinos.

Streptococcus agalactiae (gr. B)

Alfa-hemolitic. Streptococ piogen animal
(bovidee), ocazional gzduit de om n
orofaringe, vagin i intestin.
Rol n patologie:
- La gravide: infecie urinar, infecie de plag,
amniotite, endometrite, avort sau natere
prematur
- La nou-nscut: infecie precoce (septicemie,
pneumopatie n primele 10 zile de via) sau
tardiv (meningit)
- La adult: infecie de plag, osteo-artrite,
infecii uro-genitale, septicemii, endocardite,
meningite.

Streptococi din grupul C

(S.equisimilis, S.equi) i din grupul G
Beta-hemolitici cu rezervor animal i
uman (tegument, mucoase).
Responsabili de infecii cutanate,
faringite, septicemii post-partum,
infecii osteo-articulare, meningite,
pneumopatii. Rareori urmate de
GNA. Excepional pot cauza
scarlatin.

Streptococii din grupul D (S.bovis,

S.equinus)
Fac parte din flora comensal a tubului
digestiv al omului i animalelor.
Rolul n patologia uman: endocardite,
infecii neonatale, cholecistite,
peritonite, infecii urinare, septicemii.

1.

2.

Streptococii negrupabili (lipsii de

antigene de perete)
Streptococcus pneumoniae (prezent
pe mucoasele omului i ale unor
mamifere, n special n nasofaringe)
Ali streptococi negrupabili (S.mitis,
S.mutans, S.oralis, S.sanguis).
Prezeni n cavitatea bucal, joac
rol n geneza cariei dentare, n
infecii materno-fetale, bacteriemii i
endocardite

Streptococcus pneumoniae
Caractere morfo-tinctoriale: diplococi ovoizi
sau lanceolai, gram+, imobili, nesporogeni,
capsulai.
Caractere de cultur: cultiv pe medii elective
(geloz-snge, geloz-ser, bulion-ser), pH
optimal 7,8. Pe geloz-snge, peste 18-24
ore de incubare la 35-37 C n atmosfer cu
5-10% CO2, formeaz colonii S mici, cu o
zon de hemoliz alfa (verzuie). Din cauza
autolizei pneumococilor centrul coloniilor se
deprim. Tulpinile necapsulate formeaz
colonii R.

1.

2.

3.

Structura antigenic
Antigene capsulare, de origine
polizaharidic. Permit clasificarea
pneumococilor n 90 serotipuri.
Antigenul proteic R, mascat de Ag
capsulare
Antigenul proteic M, specific de tip

1.
2.
3.
4.

5.
6.

7.
8.

Factori de patogenitate:
Capsula (rol antifagocitar)
Adezine
sIgA - proteaz
Acidul lipoteichoic (implicat n reacii
inflamatoare cu semne generale i leziuni
tisulare, posibil oc)
Autolizinele (eliberarea unor factori
bacterieni cu rol n virulen)
Pneumolizina (hemolizina). Efect citotoxic
asupra celulelor epiteliale i endoteliale.
Reduce activitatea bactericid a PMN.
Hialuronidaza
Neuraminidaza

S.pneumoniae se difereniaz de ali

streptococi prin:
Sensibilitatea la optochin
Liza culturii de pneumococi n
prezena srurilor biliare (activarea
autolizinelor) testul de solubilitate
n bil
Patogenitatea pneumococilor pentru
oarece
Prezena capsulei
Hidroliza inulinei

Epidemiologia infeciilor cu pneumococi

Sursa de infecie purttorii sntoi (nasofaringe) sau bolnavii

Calea de transmitere aerogen

Infeciile cauzate de S.pneumoniae

1.
Infecii respiratorii: pneumonia franc lobar
acut, broncho-pneumonii, bronite, otite,
sinusite, mastoidite.
2.
Meningite (n special la copii)
3.
Bacteriemii cu artrite, peritonit, pericardit,
endocardit.
Imunitatea antipneumococic este specific de
tip, prin Ac anti-capsulari.

1.
-

Diagnosticul de laborator al infeciilor

streptococice
Prelevate n funcie de forma clinic (tampon
faringean sau cutanat, puncie a esutului subcutanat, LCR, puroi, snge, etc)
Metodele de diagnostic
Diagnosticul direct
Examenul microscopic (frotiu Gram orientativ,
RIF)

- Examenul bacteriologic (de baz)

- Detectarea serologic a Ag specifice
- Identificarea ADN prin tehnici de biologie
molecular
- Diagnosticul indirect (util n infecii poststreptococice)
- Evidenierea Ac ASLO n cazul RAA (titru
diagnostic > 200 UA/ml)
- Ac antistreptodornaz B (titru diagnostic >
240 UA/ml) + ASLO n cazul GNA
- Dozarea Ac anti-hialuronidaz (titru
diagnostic > 350 UA/ml) i anti-streptokinaz
(titru diagnostic > 160 UA/ml)

Diagnosticul scarlatinei
- Pentru identificarea eritemului scarlatinos se
utilizeaz reacia Schultz-Charlton (antieritrotoxina inoculat n erupie determin
dispariia exantemului)
- Reacia Dick pentru depistarea Ac antieritrotoxin (determinarea receptivitii la
scarlatin). I/dermic se inoculeaz 0,1 ml
eritrotoxin.
Rezultat pozitiv: peste 24 ore eritem local peste
10 mm (lipsa anti-eritrotoxinei, receptivitate)
Rezultat negativ: absena eritemului (anticorpi
prezeni, persoan imun la scarlatin)

Profilaxia specific a infeciilor

streptococice
Vaccin contra S.pyogenes nu exist
(variabilitatea proteinei M, Ag
comune cu esuturile umane)
Femeile purttoare de S.agalactiae
sunt imunizate cu vaccin din
polizaharide capsulare
Exist un vaccin anti-pneumococic,
constituit din antigene capsulare mai
frecvent ntlnite n regiune

Tratamentul infeciilor streptococice

S.pyogenes este sensibil la penicilina G i
macrolide. Tratamentul anginelor
previne complicaiile poststreptococice.
S.pneumoniae este sensibil la peniciline
i cefalosporine. Exist tulpini
rezistente la tetraciclin, eritromicin,
macrolide.

Familia Enterococcaceae
Genul Enterococcus
Specii: E.faecalis, E.faecium, E.durans, etc
Caractere morfo-biologice: coci ovoizi,
gram+, dispui n perechi sau lanuri scurte.
Anaerobi facultativi.
Diferenierea de genul Streptococcus:
cresc la 10 i 45 grade C, se multiplic n
prezena a 6,5% NaCl, hidrolizeaz esculina
n mediu cu 40% bil i produc piridonil
arilamidaz.

Habitat: comensali ai intestinului

omului i animalelor, uneori se
ntlnesc pe mucoasa genital, n
orofaringe i pe tegument. Reprezint
markeri microbiologici de poluare
fecal a mediului. Rezisteni n mediul
extern i la antibiotice.
Rolul n patologia uman:
endocardite, infecii urinare,
meningite, infecii neonatale. Frecvent
infecii cu caracter nosocomial
(infecie de plag).