1 Diagnosticul de laborator n infeciile produse de bacilii Gramnegativi - Fam.

Enterobacteriaceae
Cuprinde organismele patogene pentru om cum ar fi: Salmonella,
Shigella, Yersinia i condiionat patogene Esherichia colii (E. coli), Proteus,
Klebsiella.
Enterobacteriile sunt definite ca o grupare de bacili G (-), mobile sau
imobili (Klebsiella, Shigella, Yersinia la 37 0C), aerobe i facultativ anaerobe,
nesporulate, necapsulate (exceptie Klebsiella in vivo)
Metabolismul este de tip respirator (aerob) i fermentative (facultative
anaerob) producnd acid din glucoz sau alte zaharuri, cu producere sau nu
de gaz. Majoritatea sunt catalazo (+), oxidazo (+), reduce nitraii la nitriti.
Mobilitatea datorat cililor peritrihi.
Invazivitatea este o caracteristic a tupinilor de Proteus i Klebsiella.
Este inhibat de anumite substane tensioactive (acizii biliari, detergenti) i
colorani (verde brilliant, cristal violet).

8.1. Diagnosticul de laborator n infeciile cu E.coli

E. coli cuprinde tulpini condiionat patogene (saprofite) i patogene
(E.coli enteropatogena, E. coli enterohemoragica, E. coli enterotoxigena, E.
coli enteroinvaziv, etc.)
Recoltarea i transportul produselor patogene:
-Materiile fecale (n coprocultoare cu mediu de transport ex. Blair) se
recolteaz din mai multe zone i poriuni edificatoare;

- Lichid de vrstur (n plcii Petrii sterile);

- Urina n urocultoare dimineaa dup toaletarea zonei, se recolteaz
jetul mijlociu.
Transportul se face n maxim 2 ore de la recoltare, la temperature
camerei.
Examenul direct de laborator:
Macroscopic: - materiile fecale pot avea urme de mucus, uneori
sanghinolente, cu lambouri de mucoas epitelial,
- urina estetulbureopalescent cu sediment i cu miros de
varzacr, uneori pot fi prezenteiurmesanghinolente.
Microscopic: Pe frotiul colorat Gram se observ prezena bacililor subiri cu
capete rotunjite G (-), leucocite PMN, celule EK de diferite tipuri, mucus,
resturi obinute din digestie. Pe frotiul din sedimentul urinar se observ
bacilii, cellule inflamatorii PMN-urile.
n practica curent se fac i frotiuri native lama/lamel
pentruaobservahematiilei PMN-le.
nsmnarea:
Se face pemedii slab selective MacConkey (coninesruribiliareicristal
violet) i ADCL (agar, dezoxicolat, citrate, lactoza) ipeGelozsnge.
ncazulurinii se face o uroculturcantitativ (nr. de bacteria /ml de
urin). Se nsmnteazastfel 0,1 ml urindiluat (diluie de 1/1000),
incubmdupapariiacoloniilor se numr, se nmulesc cu 10 i cu 1000
pentru a aflanumrul de bacterii /ml. Astfeldacnumrul de bacterii /ml
estemai mare de 100.000 uroculturaestepozitiv. Dacnumrul de
coloniiestemai mic de 10.000 sau absent rezultatulestenegativ.

Dacrezultatulestepozitiv se trece la etapa de

identificareirespectivantibiogram.
Identificarea:
Macroscopic: coloniile nepatogene sunt mari, de culoare roz pemediul
MacConkey i galbenepe ADCL.
Tulpinilepatogenesuntmariiincolore, iarpegelozasngesuntmari de
culoaregrinchisidauhemoliza de tip .
Microscopic: bacilisubiricapeterotunjitedispuialeatorpetoatsuprafata (Fig.
8.1.)

Fig. 8.1. Frotiucolorat Gram, bacili

G (-) dispui
aleator(fotoC.Defta)

Biochimic: se facpemediile de identificare TSI, MILF, MIU, saungaleriile de

identificare a testului ID (Bio Meriux)
- fermenteazglucoza cu producere de gaz;
nmediulichidvizualizatprindeplasareatuburilor Durham.
- tulpinilenepatogenesuntlatozo (+), celepatogenesuntlactozo (-);
- nuproduchidrogensulfurat, pot produce indol, ureazo (+) isunt mobile.

Teste de identificareantigenicaprinreacii de aglutinaresau latex aglutinare

(vezireacia Ag-Ac).
Antibiogramaobligatorie.

8.2. Diagnosticul de laboratorninfecia cu Klebsiella

Recoltareaitransporulproduselorpatologice
- Alimenteleresponsabile de toxinfeciilealimentare (TIA) de tip infecios,
produsulpatologic se
recolteazntr-un recipient steril cu capac.
-ninfeciileurinare se recolteazurin (nurocultoareincondiiileprezentate
anterior).
-ninfeciiletractului respirator se recolteaz sputa (nplci Petri)
Examenul direct de laborator
Macroscopic: Urinaestetulbureopalescent, sputa estemucoid de
culoarerounchis njeleu de coacze.
Microscopic: pefrotiul gram se observbacilul G (-) sub form de picot cu
capsul, prezenacelulelorinflamatorii PMN, macrofage, celule EK.
nsmntarea
PeMacConkey, pemediiobinuite, pegelozasnge, incubarea se face la 37 0C
timp de 28 de ore.
Identificare

Macroscopic: coloniimari 2-3 mm la 24 de ore peste 4 mm la 48 de ore, de

tip M, bombate, lucioase, vscoase, cu aspect de curgerepemediu, extreme
de aderente, cremoase de culoaregripemediugelozsnge.
Microscopic: bacilisubiriasemntoriunuipicot cu capeterotunjite G (-).
Biochimic: - degradeazglucoza cu producere de gaz, lactozo (+), nu
produce H2S, ureazo (+), indol (-), citrat (+), citratulesteunicasurs de
carbon.
- Teste de identificareantigenice: aglutinareapelam, latex
aglutinarea
- Testareasensibilitatii la bacteriofagi.
Antibiogramaobligatorie

8.3. Diagnosticul de laboratorninfecia cu Proteus

Recoltareaitransporulproduselorpatologice:
- ninfeciileurinareprodusulpatologicesteurina
(recoltatnurocultoreincondiiilediscutate anterior),
transportul se face n maxim 30 de la recoltare;
- n TIA produsulpatologicsuntalimenteleimateriilefecale.
- ninfeciilenosocomialeprodusulpatologicesterecoltatnfuncie de
sediulinfecieincondiiile
corespunztoare.
Examenul direct de laborator

Macroscopic: urinaestetulbure, purulent cu miros fetid.

Microscopic: edificatorestefrotiullam - lameln care se observmicrile
active ale bacteriei. Pefrotiul gram prezintfenomenul de polimorfism de la
bacili, cocobacili la formefilamentoase, PMN-re, celule EK.
nsmntarea
Se face pemedii simple de cultur.
Identificare
Macroscopic: Colonia prezintfenomenul de invazienvaluriconcentrice,
succesivecuprinzndntreagasuprafan 24 - 48 de ore, prezintifenomenul
de crare. ncazul a
doutulpinidiferitensmnatepeaceiaiplacelecreeazlinia de demarcaie.
Microscopic: bacilisubiripoliformi G (-) cu
capeterotunjiteaezaioarecumhaotic (Fig. 8.2).
Biochimic: lactozo (-), glucozo (+), produc H2S, mobile, ureazo (+), citrate
(+) se pot dezvoltavndcitratul ca unicsurs de C.
Antibiogramaobligatorie

Fig. 8.2. Frotiu din cultur, colorat

Gram prezentandbaciliG(-) de
dimensiunidiferite. (fotoC.Defta)

8.4. Diagnosticul de laboratorninfecia cu Salmonella

Produce TIA (salmonelozeleminore) cnddiagnosticuleste bacteriologic

iarnfebratifoid (salmonelozelemajore) diagnosticulesteatt bacteriologic
cti serologic.
Recoltareaitransporulproduselorpatologice
- Materiilefecalen TIA, nfebratifoid, ncazulpurttorilorsntoi se pot
recoltamateriilefecale a douazidupadministrareantimpulserii a unuipurgativ
(sare Epson).
-Sngelenfebratifoidn prima sptmna de boal.
-Secreiabiliarnfebratifoiddup prima sptmn de
boalincazulpurttorilorsntoiobinutprintubaj duodenal.
-Transportul cu medii de transport maxim 2 ore la temperature camerei.
Sngele se transportntuburi sterile, n maxim 30 .
Examenul direct de laborator
Microscopic: bacilisubiri cu capeterotunjite G (-), cu ciliperitrichi,
necapsulai, PMN, celule EK.

nsmntarea
Pemediilichide de mbogire (bulionselenit), pemediisolide selective
MacConkeyi ADCL.
Incubare la 18-24 de ore la 35-370C.
Identificare
Macroscopic: colonii de tip S necoloratepeMacConkey, pe ADCL
suntnecolorate cu saufrmijloculnegru.

Microscopic: bacilisubiri cu capeterotunjite G (-).

Biochimic: lactozo (-), produce H2S, utilizezcitratul ca unicsurs de C,
glucozo (+) cu producere de gaz.
Antibiogramaobligatorie
Diagnosticul serologic. VeziReaciaWidal de la reacia Ag-Ac.

8.5. Diagnosticul de laboratorninfecia cu Shigella

ngenulShigellaexist 4 subgrupe: A are 13 serotipuri, B are 6 serotipuri, C
cu 18 serotipuri, D unserotip. Diagnosticuleste direct itrebuie pus rapid.

Recoltareaitransporulproduselorpatologice
- Produselealimentare se recolteazn TIA de tip infecios;
- Materiilefecaledupapariiadizenteriei ca urmareaingestiei a unuinumr de
10-100 bacterii. Transportul se face de urgenpemediu Cary-Blair
Examenul direct de laborator
Macroscopic: materiilefecaleprezint mucus, snge, puroi.
Microscopic: bacili G (-) subiri cu capeterotunjite, numeroase PMNuriiardac PMN suntnprocent de 70% alturi de
hematiiacestaconstituieaspectulsugestivpentrudizenteriabacterian.
nsmntarea
Se face pemediimoderat selective ADCL iMacConkey, incubare 24 de ore la
370C.

Identificare
Macroscopic: colonii de tip S
micitransparenterourate cu
miroscaracteristic.
Microscopic: bacili G (-) (Fig. 8.3.)

Fig 8.3. Frotiu din culturacolorat gram, cu

bacilimicisubiri G (-)
(fotoC.Defta)

Biochimic: lactozo (-), aerobii facultative anaerobi, glucozo (+) fr

producer de gaz. Subgrupul A estemanito (-), restulsubgrupelorsuntmanito
(+), nu produc H2S, ureazo (-), indol (-).
Teste de identificare antigenic se utilizeazareacia de aglutinarepelam, cu
seruripolivalente anti-subgrup
Antibiogramaesteobligatorie

8.6. Diagnosticul de laboratorninfecia cu Yersinia

Prezintmaimultespeciidarpatogenepentruomsunt: Y.enterocolitica, Y. pestis
(agentul etiologic al ciumei), Y. pseudotuberculosis
Recoltareaitransporulproduselorpatologice

Materiilefecale se folosetemediul de transport Cary-Blair

Examenul direct de laborator
Microscopic: bacilisaucocobacili G (-) coloraibipolari, prezintpleomorfism,
prezint PMN icelule EK
nsmntarea
Se efectuazpemedii selective MacConkey, ADCL i CIN. Incubnd la
temperaturacamerei (22-290C)
Identificare
Macroscopic: colonii de tip S, 1- 1,5 mm sau 2-3 mm la 48 de ore,
transparente
Microscopic: bacilisaucocobacili G (-), pleomorfi.
Biochimic: lactozo (-), glucozo (+) frproducere de gaz, nu produce H 2S,
imobili la 370C i mobile la 220C, indol(-), ureazo (+).
Testeul de identificare antigenic utilizezserurile specific anti-Yersinia
Antibiogramaobligatorie.