EXPLORAREA

ACTIVITAII ENZIMATICE
DR GLIGOR RAMONA

GENERALITI

Enzimele sunt biocatalizatori de origine

citoplasmatic sau microsomial.
Enzimele nu influeneaz echilibrul unor
reacii biochimice, dar grbete instalarea
acestui echilibru.
Enzimele catalizeaz reacii n sistemele
biologice, reacii care n lipsa enzimelor ar
decurge foarte lent.
Cunoaterea localizrii intracelulare a
enzimelor are valoare diagnostic.

ORIGINE PLASMATICA

Originea plasmatic a enzimelor poate fi:

enzime plasmatice funcionale, care sunt secretate activ
i i desfoar activitatea n snge: factori de
coagulare, lecitin-colesterol-acil-transferaza (LCAT),
pseudocolinesteraza.
Enzime care sunt secretate activ n alte compartimente produi de secreie ai glandelor exocrine i pancreas,
acioneaz la nivel digestiv: amilaza, lipaza, tripsina.
Enzime localizate strict intracelular, care au locul de
aciune n interiorul celulei de unde provin i unde se
gsesc n concentraii crescute, prezena lor n plasm
este absenta sau minim, dar n condiii patologice de
lezare a membranei celulare sau a diverselor organite
celulare se observ o cretere a valorii acestora n
plasm.: CPK, TGO, TGP, LDH.

IZOENZIME
enzime

care catalizeaz acelai tip

de reacie, dar se deosebesc ntre ele
prin proprieti fizico-chimice
(migrarea electroforetic).
FAL, CPK, LDH

ENZIME DE CITOLIZ

Alanin aminotransferaza (ALAT) transaminaza glutamicopiruvic (TGP)

Enzima se gsete n cantiti mari n special n celulele hepatice,

catiti reduse de enzim se ntlnesc i n celulele musculare,
miocardice i renale.
Localizarea celular este la nivelul citoplasmei.

Metoda de lucru folosit este metoda fotometric, reacia are

loc la o temperatur de 37C.
Principiul metodei este bazat pe reacia de transfer a gruprii
aminice de la L-alanin la 2-oxoglutarat, n prezena alanin
aminotransferazei i oxidarea NADH la NAD+

Valori normale: sub 50U/l

Valori crescute: hepatita acuta viral (creterea activitii
enzimatice este direct proporional cu masa de esut lezat),
necroza toxic a ficatului, ciroze active, hepatita cronic,
metastaze hepatice, mononucleoz infecioas.
Valori crescute al TGP pot apare n urma tratamentelor cu:
barbiturice, fenitoin, salicilai, tetracicline, morfin, codein,
tuberculostatice

ENZIME DE CITOLIZ

Aspartat aminotransferaza (ASAT) transaminaza glutamicooxalacetic (TGO)

Enzima se gsete n special n esuturi cu activitate metabolic

intens: miocard, ficat, muchi scheletic, rinichi, pancreas.
La nivelul ficatului enzima are provenien 60% citoplasmatic i 40%
mitocondrial.
n urma leziunilor celulare enzima este eliberat n snge, proporional
cu numrul celulelor distruse.

Metoda de lucru este metoda fotometric.

Principiul metodei este bazat reacia dintre L-aspartat i 2-oxo-glutarat

cu formarea oxalacetatului, care duce la oxidarea NADH la NAD+.
Viteza de oxidare a NADH este proporional cu activitatea enzimei.

Valori normale: sub 50 U/L

Valori crescute: infarct miocardic acut, n crizele severe de angin
pectoral, dup cateterism cardiac, hepatite acute virale, necroz
toxic a ficatului, ciroz hepatic, mononucleoz infecioas,
distrofie muscular, dermatomiozit.
Dintre medicamentele care cresc nivelul seric al TGO aminitim:
salicilai, eritromicin, codein, metildopa, tuberculostatice.

ENZIME DE COLESTAZ

Fosfataza alcalin

alctuit din trei forme izoenzimatice cu origine n os, canalicule

biliare intrahepatice i intestin. n timpul sarcinii apare o form
tranzitorie, izoenzima de origine placentar.

Activitatea enzimei este util n patologie hepatic i n

patologia osoas.

Fosfataza alcalin osoas este produs de ctre osteoblati.

Metod: tehnica cu paranitrofenilfosfat - 37C (colorimetric

prin metod standardizat internaional, i bazat pe
hidroliza paranitrofenilfosfatului).

Valori normale:

copii i femei gravide n ultimul trimestru de sarcin 110 480U/l

aduli sub 115 U/l

FAL (ALP)

Valori crescute n patologia hepatic: ictere

obstructive, ciroze, tumori hepatice, ulcer
duodenal
Valori crescute n patologia osoas: boala
Paget, osteita deformant, metastaze osoase
(mai frecvent metastazele osoase cu puncte
de plecare din carcinomul de prostat),
rahitism (creterea fosfatazei alcaline peste
400U/l este considerat un criteriu sigur de
diagnostic, scade dup tratament cu vitamina
D2), osteomalacie

ENZIME DE COLESTAZ

Gama-glutamil transpeptidaza
Se gsete in ficat, rinichi i intestin
se utilizeaz pentru determinarea disfunciei
celulare hepatice i pentru detectarea bolilor
hepatice alcoolice
V.N. <40 U/L
Valori crescute: hepatite acute i cronice, ciroz
hepatic, metastaze hepatice, cancer hepatic,
colestaz, alcoolism, pancreatit, carcinom de
prostat, carcinom de sn si plmn, LES

Creatinfosfokinaza (CPK,
CK)

Este o enzim prezent ntr-un numr

restrns de esuturi, localizat n
musculatura scheletic, miocard, creier.
Se gsete sub forma a trei izoenzime:

CK-MB pentru miocard,

CK-MM pentru musculatura striat,
CK- BB pentru creier.

Metoda de lucru:

colorimetric, bazat pe reacie de culoare a

acidului fosforic eliberat din reacie, (creatinin
creatin + acid fosforic).
fotometric, metoda cu fosfoenol piruvat.

Creatinfosfokinaza (CPK,
CK)

Valori normale:
CK-total < 170 U/l
CK-MB < 20 U/l

Valori crescute: infarct miocardic (apar n

primele 4-6 ore de la debut cu un maxim la 24
de ore), distrofie muscular progresiv,
sindrom Crush, accidente vasculare cerebrale,
stri de oc, tetanos, dup injecii
intramusculare.
Valori crescute a enzimei pot apare n urma
ingestie de alcool, precum i a unor
medicamente ca: salicilai n doze mari, litiu.

Determinarea lactat
dehidrogenaza (LDH)

Este o enzim cu localizare intracelular,

rspndit n organism n mai multe
organe: muchi, miocard, ficat, plmn,
rinichi, creier i n eritrocite.
Se disting 5 izoenzime:

LDH1
LDH2
LDH3
LDH4
LDH5

Este util n diagnosticul leziunii de organ.

Determinarea lactat
dehidrogenaza (LDH)

n infarctul miocardic creterile LDH apar mai

trziu (24 48 ore de la debut) dect n cazul
CK i ASAT dar persist timp mai ndelungat.
Datorit acestui motiv determinrile LDH
(izoenzimele LDH1 i LDH2 ) i gsesc
utilitatea n cazurile n care, din diverse
motive, ajung s fie investigate la cteva zile
de la instalarea leziunilor miocardice.
Este enzima care catalizeaz conversia
acidului lactic n prezena NAD rezultnd acid
piruvic + NADH + H+.

Determinarea lactat
dehidrogenaza (LDH)
Metod

de lucru: enzimatic/fotometric
Valori normale: 230 460 U/l
Valori crescute: infarct miocardic( cresc
izoenzomele rapide LDH1 i LDH2),
leziuni toxice ale ficatului (izoenzime
lente LDH4 i LDH5), anemie
megaloblastic, boli musculare,
hemoliz, sindrom mieloproliferativ.

Amilaza

Enzim de secreie exocrin, cu rol n

descompunerea amidonului i produilor
intermediari de degradare ai acestuia, produs de
ctre, glandele salivare, pancreas, trompe
uterine. Este prezent n saliv, pancreas, suc
duodenal, intestin subire.

Activitatea enzimei este util pentru diagnosticul

i monitorizarea tratamentului pancreatitelor.

Metode de lucru.
colorimetric
enzimatic-fotometric.

Amilaza

Pentru metoda cinetic la 37C valoarea

normal a amilazei serice este de 30- 220 U/l.
Valori crescute: pancreatita acut i cronic,
intoxicaii cu alcool, cancer de cap de
pancreas, parotidit epidemic, colecistite
acute, salpingit, sarcini tubare, ocluzie
intestinal.
Creteri ale amilazei serice se pot ntlni i n
afeciuni renale prin diminuarea filtrrii
glomerulare.
Unele medicamente pot crete nivelul seric al
enzimei: corticosteroizi, diureticele tiazidice i
diureticele de ans, azatioprina, rifampicina.

Pseudocolinesteraza

Este o enzim secretat activ de ctre

hepatocite, fiind un marker al funciei
proteosintetice a ficatului. Intoxicaia cu
organofosforice inactiveaz ireversibil
enzima.
Metoda de lucru: fotometric,
pseudocolinesteraza elibereaz prin
hidroliza butiriltiocolinei, tiocolina, care
reacioneaz cu acid 5,5-ditio-2-nitrobenzoic
i d un compus colorat n galben.
Valori normale: 4900 11000U/l

Pseudocolinesteraza

Valori crescute: enteropatie exudativ, sindrom

nefrotic, hiperlipoproteinemia de tip IV, obezitate,
diabet zaharat.
Valori sczute: ciroz hepatic, hepatit cronic
evolutiv, staz hepatic, anemii severe de tip
Biermer, dup infarctul de miocard, malnutriie,
intoxicaii cu organofosforice.

Activitatea enzimei este complet i ireversibil

inhibat n intoxicaia cu organofosforice.

Activitatea enzimei poate fi sczut de ctre unele

medicamente: barbiturice, morfin, codein,
succinilcolin, vitamina K, contraceptive orale.