1.

Notiuni generale despre microbiologie:

Microbiologie (mikros bios logos mic, viu, studiu). Microbiologia studiaz
microorganismele i activitile lor.
Microorganisme / microbi organisme microscopice, cu dimensiuni de ordinul m
(10-6 m) sau nm (10-9 m).
Mi/o reunesc bacteriile i alte tipuri de organisme: alge, ciuperci microscopice
(fungi, micete), protozoare, virusuri i agenti subvirali, de ex. prioni.

Studiaza
forma mi/o
structura
nutriia
metabolismul
creterea i multiplicarea mi/o (pentru a le
identifica)
urmrete
a)
b)
c)
d)
e)

relatia mi/o-gazda umana

capacitatile patogene mi/o
capacitatile antiinfectioase organism uman
metode de diagnostic etiologic al bolilor infectioase
metode de terapie/profilaxie antimicrobiana

Mi/o = organisme microscopice (micro-nano- metri) + alge, protozoare, virusuri, agenti subvirali
(prioni), cipuerci microscopice (fungi, micete)
Clasificari mi/o:
fenotipica (prima tentativa Carl von Linne)
genotipica
filogenetica (bazata pe studiul fosilelor sau al HLA)
Grupe taxonomice: domeniu regn increngatura clasa ordin familie gen specie
Taxoni infraspecifici din cadrul speciei, care prezinta anumite diferente:

biovar (activitate biochimica/fiziologica)

serovar (structura Ag)

patovar (grad de patogenitate)

lizovar (sensibilitate la bacteriofagi)

antibiovar (sensibilitate la AB)

Rolul taxonilor infraspecifici: markeri epidemiologici!
Clasificare mi/o:
forme acelulare (virusuri, viroizi, prioni)
forme celulare:

bacteria = procariote, eubct

1) G2) G+
3) micoplasme (lipsite de PC)

archaea = procariote, PC fara peptidoglican, habitat in conditii extremale

eucarya = eucariote (fungi, protozoare)

2 Tipurile de laboratoare microbiologice si sarcinile lor. Regimul si regulile de lucru in

laboratorul microbiologic. Clasificarea laboratoarelor in functie de exigenta sigurantei
antiinfectioase.

3 Reguli de protective a muncii in laboratorul de microbiologie

Este strict interzis accesul persoanelor strine n laborator

Intrarea n laborator i participarea la lucrrile practice se va face numai dup audierea i

nsuirea regulilor de protecie a muncii (dovedit prin semntur pe un proces verbal)

Intrarea n laboratorul de microbiologie necesit purtarea obligatorie a echipamentului de

protecie (halat cu mneci lungi). Se recomand ca echipamentul de protec ie s fie pstrat
separat de hainele utilizate n exterior.

Toate produsele biologice vor fi considerate ca potenial infectante

Consumarea de alimente i buturi, ducerea minilor la fa n timpul lucrului, fumatul n

laborator sunt strict interzise.

Este interzis introducerea n gur a oricrui obiect din laborator

Este interzis aducerea n laborator a obiectelor de uz personal

o

hainele, servietele, genile, vor fi lsate n vestiarul special amenajat

este permis aducerea n laborator a materialelor de scris i a lucrurilor de valoare,

acestea din urm fiind aezate n laborator n locuri special amenajate.

Este interzis intrarea n laborator n lipsa unui cadru didactic

Nu este permis fuga sau mersul rapid prin laborator

Lucrul n laboratorul de microbiologie implic contact cu material infec ios! Pentru a preveni
accidentele de lucru, este necesar urmarea strict a metodelor de lucru i a regulilor de
dezinfecie i antisepsie:
o

nsmnrile se fac la flacr, flambndu-se gtul recipientelor la deschidere i la

nchidere

ansa i acul de platin se sterilizeaz nainte i dup folosire prin nclzire la ro u, iar
portansa se va flamba

pipetele i lamele de sticl contaminate nu se vor decontamina la flacr, ci se

scufund dup folosire n recipiente cu solu ie dezinfectant existente la mijlocul
fiecrei mese. Tot n aceste recipiente se vor introduce lamele i lamelele de sticl
folosite

pipetarea cu gura este interzis. n vederea pipetrii se vor folosi dispozitive de

pipetare adecvate

cutiile Petri, eprubetele, sau alte recipiente i materialele contaminate se introduc

dup lucru n gleata de infecte care va fi autoclavat

manipularea aparatelor se va face respectnd instruciunile de folosire specifice

atenie la manipularea substanelor caustice i inflamabile

n cazul rspndirii accidentale a materialului infec ios, va fi anun at cadrul didactic

care conduce lucrrile i care va indica msurile de dezinfec ie

Dup terminarea lucrului minile se antiseptizeaz prin introducerea lor ntr-o substan
antiseptic (cloramin, bromocet) pentru cteva minute, apoi se spal cu ap cald i spun.

Fiecare student are obligaia de a-i supraveghea spaiul de lucru, pstrnd ordinea i
curenia:
o

fiecare student i va alege locul de lucru la nceputul primei lucrri practice, loc pe
care i-l va pstra pn la ncheierea semestrului/anului universitar

orice alterare a suprafeei de lucru sau a diferitelor obiecte adiacente spa iului de lucru
propriu produs exclusiv din vina studentului, va fi penalizat prin amend i/sau
absen nemotivat n ziua respectiv

orice alterare existent a zonei de lucru va fi consemnat cadrului didactic la nceputul

lucrrii practice

5. Amenajarea si utilarea laboratorului de microbiologie

Laboratorul de microbiologie trebuie sa cuprinda doua compartimente:
- o sala de pregatire a mediilor si obiectelor de lucru si de decontaminare, continnd
mese, un autoclav, o etuva, un congelator si un frigider (care va fi utilizat si pentru
pastrarea tulpinilor microbiene). Tot aici se poate stoca sticlaria, mediile de cultura
precum si reactivii.
- o sala de lucrari propriu-zise, de manipulare a culturilor microbiene, la adapost de
curentii de aer, dotata cu mese cu suprafata neteda, rezistenta, impermeabila, cu
conducte de gaz si prize electrice, un sistem de vid si de aer comprimat si o hota
sterilizabila, cu radiatii ultraviolete (eventual o hota cu flux laminar). n masura n
care este posibil, n legatura cu aceasta sala, ar trebui sa existe anexe prevazute cu
termostate la diferite temperaturi ( 250C, 300C, 370C, 440C, 550C).
Manipularile de culturi microbiene sau de produse susceptibile sa contina
microorganisme se efectueaza tinnd cont de unele tehnici particulare prin care sa
se evite cele doua tipuri de contaminare:
1. contaminarea culturii sau a produsului ce trebuie analizat datorita personalului
sau mediului inconjurator;
2. contaminarea personalului sau a mediului nconjurator de catre microorganismele
studiate.
In laboratorul de microbiologie, operatia de baza este transferul de microorganisme
dintr-un recipient n altul, lucrare ce se executa n zona sterila de protectie din jurul
flacarii becului de gaz.
Sticlaria cel mai des utilizata n laboratorul de microbiologie consta n eprubete de
diferite dimensiuni, flacoane Erlenmeyer, placi Petri, pipete Pasteur si pipete
gradate. n ultima perioada sunt din ce n ce mai mult utilizate recipientele si
pipetele din plastic, de unica folosinta. Pentru prelevarea si inocularea culturilor se
utilizeaza ansa sau firul metalic, fabricate din nicrom. Ustensilele de etalare permit
repartizarea uniforma a inoculului pe suprafata mediilor solidificate si pot fi
fabricate prin ndoirea unui tub sau a unei baghete din sticla. n afara acestor
ustensile curente de lucru, mai pot fi ntrebuintate o serie de alte instrumente, n
functie de operatia efectuata.
Laboratorul de microbiologie trebuie sa aiba n dotare urmatoarele aparate si
echipamente:
- robinet cu apa calda si rece, de preferinta actionat cu piciorul;
- hota cu flux laminar sau nisa sterilizabila, indispensabila lucrarilor de microbiologie
- bec de gaz tip Bunsen pentru lucrul n zona sterila din jurul flacarii cu con albastru
si pentru sterilizarea ansei
- etuva pentru sterilizarea sticlariei
- termostat bacteriologic pentru incubarea culturilor

- autoclav pentru sterilizarea mediilor de cultura si pentru decontaminarea

obiectelor
- baie de apa termostatata
- frigidere pentru conservarea mediilor si a culturilor
- balante
- pH-metru
- microscoape