Capitolul 8

125

Capitolul 8

8
GENA
Prima ipotez despre structura i funcia materialului
genetic a fost formulat de Gregor Mendel (1865). Pentru a
explica geneza unor caractere fenotipice ereditare i modul lor
de transmitere la descendeni, el a presupus existena unor
factori ereditari. Aceste elemente, care iniial erau pur
ipotetice, au devenit, n timp, structuri reale, materiale. Dup
descoperirea i descrierea cromozomilor (Waldeyer, 1988)
Boveri i n special Sutton (1902) au emis i susinut ipoteza c
factorii ereditari sau genele (dup termenul introdus de Wilhelm
Johansen, 1903) sunt pri din cromozomi. Aceast idee a fost
confirmat de Thomas Hunt Morgan i colaboratorii si (19101925). n felul acesta, gena nceteaz s mai fie o supoziie
logic, abstract, a geniului mendelian i capt un coninut
concret, material. Cercetrile ulterioare au demonstrat natura
chimic a cromozomilor i genelor. n 1944 Oswald Avery i
colaboratorii si au demonstrat c materialul genetic este
reprezentat de molecula de ADN. n 1953 Francis Crick i
James Watson au descoperit organizarea molecular a ADN i
au determinat c succesiunea de baze azotate (A, G, C, T)
reprezint codul genetic. Informaia genetic perpetueaz
datorit replicrii moleculelor de ADN i se realizeaz prin
transcripia ARN i sinteza de proteine.
n concluzie, gena reprezint un fragment din molecula
de ADN care conine informaia genetic despre sinteza unui
126

Capitolul 8

anumit tip de protein sau a unei molecule de ARN. Grupul de

gene alturate, localizate ntr-un cromozom formeaz un grup
de nlnuire (grup lincaj). n cadrul acestor grupri, gena
ocup o poziie delimitat de genele vecine. Gena nu este
delimitat de granie morfologice sau grupri chimice
particulare. Ea are o delimitare funcional, relevat de
semnificaia mesajului genetic nscris.
Funcia genei
Gena deine secvena de nucleotide ce controleaz
sintez diferitor molecule de ARN (ARNm, ARNr, ARNt,
ARNsn)
i
a
diferitor molecule
de
proteine.
Fiecare gen are o
succesiune
specific de baze,
de regul de pe ea
se sintetizeaz un
singur tip de ARN.
Complexitatea structurii i funciei organismelor vii este
determinat de spectrul proteinelor pe care le conine. De aceea,
organismele simple (de ex., bacteriile) conin cteva sute de
gene, iar organismele mai complexe - cteva zeci de mii de
gene. n setul diploid de cromozomi umani se conin circa
125000 de gene diferite.
Genele care codific ARNm, tradus n lanuri
polipeptidice specifice, sunt denumite gene structurale. Pentru
acestea se utilizeaz frecvent termenul de cistron. Genele care
se transcriu independent poart denumirea de uniti
transcripionale
monocistronice
(caracteristice
pentru
eucariote), iar mai multe gene ce se transcriu n comun uniti
transcripionale policistronice (caracteristice procariotelor).
127

Capitolul 8

Prin sinteza diferitor tipuri de proteine genele

controleaz structurile, funciile i proprietile celulei i a
organismului n ntregime. Produii genelor, interacionnd cu
factorii de mediu, pot modula activitatea organismului pentru
adaptarea lui n condiiile schimbtoare ale ambiantului.
Sub aciunea factorilor de mediu genele i pot modifica
structura chimic (apar gene mutante). Mutaiile determin
apariia diferitor variante alelice ale uneia i aceleai gene care
pot avea asupra fenotipului diferite efecte:
- neutre apar variaii individuale ale unuia i aceluiai
caracter (grupele sanguine i serice la om);
- folositoare gene de rezisten la anumite noxe;
- defavorabile apar caractere patologice letale sau
semiletale (de ex., deficiene enzimatice i blocarea unor
lanuri metabolice).
Totalitatea genelor din setul diploid de cromozomi al
unui individ se numete genotip. Totalitatea caracterelor i
proprietilor individului controlate de genotip n interaciune cu
mediul se numete fenotip.
Organizarea molecular a genelor
Genele sunt formate din regiunile transcrise i regiunile
reglatoare (fig. 8.1).

Fig. 8.1. Structura general a genei

Fiecare gen (unitate de transcriere) conine promotorul

secvena recunoscut de ARN-polimeraza, care realizeaz
transcrierea genei, sau a setului de gene. Promotorul este o
secven obligatorie i se gsete n aval de regiunea transcris
128

Capitolul 8

(la captul 5) (gene pentru ARNm i ARNr) sau se conine n

interiorul secvenei transcrise (gene pentru ARNt). Primul
nucleotid incorporat n molecula de ARN este notat cu +1;
nucleotidele din gen situate n faa punctului de iniiere a
transcripiei se noteaz cu (-), iar cele ce se gsesc spre captul
3' cu (+). Promotorul conine unele secvene consens care se
deosebesc la procariote i eucariote.
Terminatorul
este plasat la sfritul unitii
transcripionale i reprezint o secven de nucleotide invertate,
urmat de secvena TTTT. Secvena invertat copiat n
molecula de ARN va condiiona formarea unei bucle, care
stopeaz naintarea ARN-polimerazei i determin terminarea
procesului de transcripie. Terminatorul are o structur
asemntoare la procariote i eucariote (fig. 8.2).

Fig. 8.2. Organizarea secvenei terminatorului genelor

129

Capitolul 8

Particularitile organizrii genelor

structurale la eucariote
Promotorul genelor eucariotelor const dintr-un segment
de cteva sute de nucleotide situate la extremitatea 5' a genei.
Aceast regiune conine o combinaie de secvene consens ce
constituie situsuri pentru factorii de transcripie (tab. 8.1).
Promotorul genelor structurale, recunoscut de ARN-polimeraza
II, prezint la distana de -20 -30 nucleotide de la situsul de
iniiere (+1) boxa Goldberg-Hogness sau boxa TATA la nivelul
creia se gsete secvena 5' TATA ATAAA-3'. Aceast
secven direcioneaz enzima ARN-polimeraza II spre situsul
de iniiere al transcripiei.
n poziia -75 se gsete boxa CAAT, caracterizat prin
secvena 5'-GGCCAATCT-3'. Boxa CAAT controleaz legarea
proteinelor de iniiere a transcripiei i eficiena acestui proces.
Mai proximal, la -90 nucleotide se gsete o alt
secven conservat boxa GC cu succesiunea 5'-GGGCGG-3'.
Boxa GC poate avea mai multe copii n promotor i intervine n
direcionarea procesului de transcripie.

Fig. 8.3. Organizarea promotorilor diferitor gene ce

activeaz n celulele eucariote

130

Capitolul 8

n afar de aceste boxe mai sunt i alte secvene consens,

ce se leag de proteine reglatoare specifice pentru gena dat (fig.
8.3). Acestea sunt necesare pentru o expresie difereniat a
genelor n celule diferite i perioade diferite ale ciclului celular
(de ex., genele pentru globin se transcriu doar n celulele
precursoare ale eritrocitelor, gena pentru miozin n celulele
musculare, iar gena pentru insulin - n celulele specializate ale
pancreasului etc.).
Tabelul 8.1. Caracteristica secvenelor consens din promotorii
genelor structurale la eucariote

Boxa
TATA-box
CAAT-box
GC-box
Octamer

Secvena

Poziia

TATAAAA
GGCCAATC
T
GGGCGG
ATTTGCAT

- 30
- 75
- 90

Fragmentu
l de ADN
acoperit
10 p.n.
22 p.n.

Factorii de
transcripie
corespunztori
TBP
CTF/NF1

20 p.n.
20 p.n.

SP1
Oct1, Oct2

Secvene codificatoare
S-a demonstrat c la eucariote structura genei este
discontinu. Paradoxul valorii C confirm c din totalul ADNului genomic doar o parte (10-15%) particip la sinteza
proteinelor. Secvenele neinformaionale au rol diferit:
separ genele (spacieri);
se conin n gene, dar nu sunt reprezentate n secvenele de
aminoacizi (introni);
au rol structural propriu-zis (telomeri, centromeri, satelii).
S-a constatat o discordan ntre dimensiune moleculei
de ARNm, cu cea a ARN precursor (transcript primar) i
dimensiunea secvenei de ADN care a servit ca matri pentru
transcripia ARN respectiv. P. Sharp (1977) a emis ipoteza
structurii discontinue, sau n mozaic, a genei la eucariote.
131

Capitolul 8

Fig. 8.4. Structura discontinu (exon intron) a secvenei

codificatoare n genele eucariotelor

Fig. 8.5. Structura exon-intron a genei -globinei i relaia cu

structura proteinei corespunztoare

132

Capitolul 8

Regiunea transcriptibil a genelor la eucariote cuprinde secvene

codificatoare denumite exoni i secvene necodificatoare
introni (fig. 8.4). Numrul de exoni i introni
este variabil i depinde de complexitatea proteinei pe care o
codific:
- gena -globinei conine 3 exoni i 2 introni (fig. 8.5);
- gena pentru precolagen conine 51 exoni i 50 introni;
- gena pentru Hemofilia A conine 26 exoni i 25 introni
(secvena de ADN const din 180000 p.b., iar molecula
ARNm respectiv are o lungime de doar 9000 b. i constituie
0,2%);
- gena care codific distrofina conine mai mult de 25000000
pb, iar ARNm - doar 14000 b.
Exonii
Exonii reprezint secvene codificatoare ale genei ce se
transcriu, sunt prezeni n ARN precursor, n ARNm i se
regsesc n secvena de aminoacizi a proteinei (fig. 8.4). La
captul 5 al primului exon este o secven scurt de cteva zeci
de nucleotide (secvena lider) cu rol de iniiere a translaiei care
este urmat de codonul universal de iniiere a translaiei ATG.
La captul 3 al ultimului exon se afl unul din cei trei codoni de
STOP informaional (TAA, TAG, TGA) ce determin
terminarea sintezei proteinei i o secven scurt netranslat.

Fig. 8.6. Numrul exonilor la diferite gene ale vertebratelor

133

Capitolul 8

Fig. 8.7.

Lungimea exonilor i intronilor la diferite gene ale

mamiferelor

Numrul exonilor la diferite gene este diferit. n fig. 8.6.

este reprezentat dependena dintre numrul de exoni i
frecvena lor n genomul vertebratelor.
Intronii
Intronii reprezint secvene necodificatoare ale genei ce
se transcriu, sunt prezeni n ARN-precursor, dar nu sunt
prezeni n ARNm (fig. 8.4). n timpul maturizrii ARNm
(splicing) intronii sunt eliminai din ARN-precursor.
Intronii au o lungime cuprins ntre 100 i 10000 pb i,
de regul, sunt mai lungi dect exonii (fig. 8.7). Majoritatea
intronilor prezint la extremitatea 5' secvena dinucleotidic GT
iar la 3' AG, astfel sunt recunoscui de enzimele ce i nltur n
timpul splicing-ului.
Tabelul 8.2. Funciile intronilor

Conceptul clasic
Spaiatori ai exonilor
Reziduuri ale evoluiei ADN

Conceptul contemporan
Codific biopolimeri
Realizeaz autoclivarea ADN
Particip la realizarea expresiei genelor

134

Capitolul 8

Particularitile organizrii genelor

pentru ARNr i ARNt la eucariote
Genele pentru ARNr (5,8S; 18S; 28S) sunt organizate
ntr-o unitate de transcripie ce se repet n tandem de cteva
sute de ori i formeaz organizatorul nucleolar (fig. 8.8).

Fig. 8.8. Organizarea genelor pentru ARNr 5,8S, 18S, 28S

Fiecare unitate de transcripie este separat de unitile

vecine prin secvene netranscriptibile - spaceri. Unitatea
repetabil conine ~12000 pb. Genele pentru ARNr de regul nu
conin introni, excepie fcnd genele protozoarelor. Promotorii
genelor pentru ARNr au o varietate mic i sunt recunoscui de
enzima ARN-polimeraza I. Promotorii au o structur bipartit: o
secven de baz localizat n regiunea -45 +20 ce controleaz
iniierea transcripiei i un element de control proximal n
regiunea -180 -107 (UCE upstream control element).
Genele pentru ARNr 5S sunt localizate n afara
nucleolului i sunt transcrise de enzima ARN-polimeraza III.
Aceste gene formeaz uniti transcripionale n care gena pentru
ARNr 5S se repet n tandem. Promotorul este localizat n
interiorul genelor n limitele +55 +80.
Genele pentru ARNt, de asemenea, sunt organizate n
uniti transcripionale n care secvenele codificatoare sunt
separate prin succesiuni necodificatoare. La drojdii genele
pentru ARNt pot conine introni de 10-30 pb. Genele pentru
ARNt sunt transcrise de ARN-polimeraza III, iar promotorul are
o structur similar cu cea a genelor ARNr 5S.
135

Capitolul 8

Particularitile organizrii
genelor la procariote
Aparatul genetic al procariotelor este reprezentat de
molecule circulare de ADN (nucleoid i plasmide). Genomul
procariotelor conine puine secvene necodificatoare. Genele se
caracterizeaz printr-o structur mai simpl i sunt lipsite de
introni. Deoarece metabolismul este intens i necesit modificri
rapide n dependen de condiiile de moment ale mediului,
majoritatea genelor implicate ntr-un lan metabolic formeaz
uniti transcripionale numite operoni.
Operonul conine un singur promotor la captul 5, mai
multe gene structurale (numrul de gene structurale este egal cu
numrul proteinelor implicate n procesul metabolic dat), iar la
captul 3 se afl terminatorul (fig. 8.9). Unii operoni pot conine
i alte secvene reglatoare (secvene operatoare, secvene
atenuatoare etc.).

Fig. 8.9. Organizarea unui operon cu patru gene structurale

Promotorul la procariote conine secvenele specifice

caracterizate prin boxa Pribnow n poziia -10, responsabil de
iniierea denaturrii locale a ADN-ului i boxa TTGACA n
poziia -35, la care are loc asocierea primar a ARNpolimerazei (fig. 8.10).
136

Capitolul 8

Fig. 8.10. Structura promotorului la procariote

Celelalte clase de gene (pentru ARNr, ARNt) sunt

organizate n uniti transcripionale mixte, separate prin
spaceri. n fig. 8.11 este prezentat schema unui astfel de cluster
de gene.

Fig. 8.11. Operonii genelor ARNt i ARNr la procariote

Particularitile organizrii
genomului uman
Genomul uman const din ADN nuclear (98%) i ADN
mitocondrial (2%). Genele acestor dou sisteme interacioneaz
ntre ele i controleaz activitatea organismului uman prin
controlul sintezei proteinelor de structur, enzimelor i
proteinelor reglatoare.
Genomul nuclear
Genomul nuclear al celulelor somatice este reprezentat
de 46 molecule de ADN, ce corespund celor 46 de cromozomi
monocromatidieni din setul diploid. n nucleul celulelor umane
se conin circa 125000 de gene. Acestea sunt repartizate de-a
lungul cromozomului. ntre gene sunt secvene necodificatoare,
reprezentate de spaceri, ADN-satelit. Fiecare cromozom conine
137

Capitolul 8

n mediu 3000 de gene (fig. 8.12). Sub aspect funcional genele

nucleare pot fi clasificate n gene eseniale (comune pentru toate
celulele organismului), gene ce intervin n specializarea
celulelor i gene ce codific proteinele reglatoare. De aceea, n
diverse esuturi sau etape ale ontogenezei se exprim (se
transcriu) un numr diferit de gene.
n genomul nuclear pot exista mai multe copii ale
aceleai gene. Grupul de gene, exonii crora sunt asemntori,
codific proteine cu secven i proprieti similare, derivate de
la o gen ancestral, se numete familie de gene. Familiile de
gene pot fi repetitive, nerepetitive i pseudogene.
Familiile de gene repetitive - reprezint repetri ale
uneia i aceleiai gene de mai multe ori per genom. Pot s
funcioneze n acelai esut simultan, sau n esuturi diferite
(genele pentru histone, ARNr, ARNt etc.).
Familiile de gene nerepetitive sunt repetiii ale unor
gene cu efect similar, dar care se deosebesc att prin structur,
ct i prin modul de aciune (gene pentru globine, HLA etc.).
n fig. 8.13 este prezentat organizarea clusterului pentru
-globine. Familia const din patru gene funcionale (, 1, 2,
) i trei pseudogene (, , ). Globina ntr n compoziia
hemoglobinei embrionare, iar globinele n compoziia
hemoglobinelor embrionare, fetale i la adult.

Fig. 8.13. Clusterul de gene al -globinei

Pseudogene sunt secvene rezultate prin duplicare, dar

care nu funcioneaz. Sunt genele care tac. Ele acumuleaz
mai multe mutaii i pot rezulta peste o perioad de timp ca
membru nou al familiei, cu proprieti distincte.
138

Capitolul 8

Fig. 8.12. Relaia dintre localizarea, structura i funcia

genelor n genomul uman

139

Capitolul 8

Genomul mitocondrial
Genomul mitocondrial este reprezentat de molecule
circulare de ADN cu lungimea de 16.6 kb. n fiecare
mitocondrie se conine un numr variabil de molecule n
dependen de necesitatea energetic a celulei. Aproape toate
nucleotidele aparin secvenelor codante, secvenele ADN cu
funcii reglatoare fiind foarte mici (ADN mitocondrial al
celulelor umane nu conine introni). Toate genele formeaz dou
uniti transcripionale: una pe catena grea cu promotorul HSP i
una pe catena uoar LSP (fig. 8.14). ADN mitocondrial deine
13 gene structurale, dou gene pentru ARNr i 22 gene pentru
ARNt.
Genele structurale codific enzimele implicate n
metabolismul energetic. O gen pentru citocromul b (cit b), trei
gene pentru subunitile 1-3 ale citocrom-c-oxidazei (COI-III),
ase gene pentru subunitile 1-6 i 4L ale NADH
dehidrogenazei (ND 1-6 i ND4L), dou gene pentru
subunitile 6 i 8 ale ATP-sintetazei (A6 i A8) (fig.8.14).
Genele pentru ARNr controleaz sinteza a dou tipuri de
molecule: ARNr 12S i 16S se asociaz cu proteinele importate
din citoplasm la formarea ribosomilor.
ADN mitocondrial codific doar 22 molecule de ARNt.
De regul, ARNt mitocondrial recunoate specific doar primele
dou baze ale codonului din molecula de ARNm. A treia poziie
a codonului poate fi ocupat de o alt baz din aceeai clas
(purinic sau pirimidinic).
Replicarea ADN mitocondrial nu este limitat la faza de
sintez a ciclului celular. Moleculele de ADN se replic
aleatoriu, unele de dou ori, iar altele - nici odat. Totui, n
fiecare ciclu celular, numrul moleculelor de ADN mitocondrial
se dubleaz, meninndu-se constant cantitatea de ADNmt per
celul. Genele mitocondriale se transmit pe linie matern.
140

Capitolul 8

Fig. 8.14. Genomul mitocondrial uman. Sgeile indic

direcia transcripiei i replicaiei. Segmentele haurate
reprezint genele ARNt

Cooperarea dintre genomul nuclear i cel mitocondrial

constituie un factor esenial att n funcia normal a celulei, ct
i a mitocondriei. Circa 90 gene nucleare codific proteine ce au
rolul de susinere a sistemului genetic mitocondrial: proteine
ribozomale, aminoacil-ARNt-sintetaze, ADN- i ARNpolimeraze, enzime implicate n procesarea i modificarea ARN,
etc. O serie de proteine codificate de gene nucleare intervin n
reglarea numrului de mitocondrii per celul i a cantitii de
141

Capitolul 8

proteine sintetizate de aceste organite. Studii efectuate asupra

complexelor enzimatice din membrana mitocondrial intern au
evideniat faptul c acestea conin subuniti esut-specifice ce
acioneaz ca reglatori ai transportului de electroni i care sunt
codificate de gene ce aparin genomului nuclear.
Transpozonii
Secvenele de ADN capabile s migreze de sine stttor
i ocupa o nou poziie n genom poart denumirea de elemente
genetice migratoare sau transpozoni.
Cei mai simpli
transpozoni au fost depistai la E.coli i constau din gena
transpozaza flancat de elemente repetitive invertate. Ele
formeaz o familie cu denumirea de IS (insertion sequences).
De obicei ele se insereaz n locuri int cu o secven specific
pentru fiecare transpozon (des. 8.15).

Fig. 8.15. Structrura transpozonului de tip IS

142

Capitolul 8

Unii transpozoni poart i alte gene, de exemplu gene de

rezisten la antibiotice sau alte preparate medicamentoase. Din
ei face parte familia Tn care conine o regiune central cu gene
specifice, iar regiunile periferice sunt reprezentate de elemente
IS (fig. 8.16).

Fig. 8.16. Structura transpozonului Tn

Retrotranspozonii (de ex: Ty, copia, Alu) utilizeaz n

mecanismul de transpoziie reverstranscriptaza, de aceea, n
mod obligatoriu conin gena pentru aceast enzim, ct i gena
integrazei, care particip la integrarea moleculei de cADN ntrun alt loc. La capete retrotranspozonii conin secvene repetitive
lungi LTR (long terminal repeat) care asigur inserarea
fragmentelor. Transpoziia poate fi de mai multe tipuri:
transpoziie nereplicativ, transpoziie replicativ, transpoziie
conservativ i retrotranspoziie (fig. 8.17).
Transpoziia nereplicativ const n transferarea n
ntregime a unui fragment de ADN din poziia veche n una
nou, ca rezultat, adesea apar rupturi bicatenare ale moleculei
iniiale. Cantitatea de ADN, totodat, nu se modific.
Transpoziia replicativ se caracterizeaz prin replicarea
transpozonului, dup care copia obinut se transfer n loc nou.
Ca rezultat cantitatea de ADN crete.
Transpoziia conservativ se caracterizeaz prin
migrarea fragmentelor de ADN n ntregime fr a cauza
modificri n cantitatea de ADN i fr a produce rupturi.
143

Capitolul 8

Retrotranspoziia are loc n dou etape. Mai nti

elementul migrator se transcrie, apoi de pe copia de ARN cu
ajutorul revertazei (ADN-polimeraz ARN-dependent) are loc
sinteza unei molecule complementare de ADN. Fragmentul nou
format se integreaz n locus nou. Ca efect are loc creterea
cantitii de material genetic.

Fig. 8.17. Schema diferitor mecanisme de transpoziie

144

Capitolul 8

Transpozonii pot cauza mai multe rearanjri genomice

dintre care cele mai importante sunt:
translocarea poate provoca deleii sau ntreruperi ale genelor,
ceea ce cauzeaz inactivarea genelor;
elementele migratoare servesc ca substrat pentru sistemele
de recombinare celular; dou copii ale aceluiai transpozon n
diferite poziii n cromozom pot cauza recunoaterea i
mperecherea incorect a cromozomilor pe parcursul crossingoverului.
Verificarea cunotinelor:
1. Definii noiunile: gen, gen structural, cistron, promotor,
exon, intron, operon, transpozon.
2. Care este structura general a genelor?
3. Care sunt funciile secvenelor promotorilor la eucariote?
4. n ce const structura mozaic a genelor?
5. Ce reprezint operonul?
6. Care sunt particularitile genomului mitocondrial?
7. Prin
ce se deosebesc transpozonii IS, Tn i
retrotranspozonii?

145