MICROBIOLOGIA SI

DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL
INFECTIILOR MENINGO- SI
GONOCOCICE

Clasificarea (Bergey's 2001) :

Familia Neisseriaceae
Genurile - Neisseria, Kingella, Chromobacterium,
Aquaspirillum
Genul Neisseria include dou specii patogene
umane importante N. gonorrhoeae i
N.meningitidis (neisserii pretenioase).
Specii comensale, gzduite pe mucoasele
tractului respirator i digestiv, conjunctiv,
vagin, uretra distal (neisserii
nepretenioase): Neisseria flava; Neisseria
flavescens; Neisseria subflava; Neisseria
perflava; Neisseria lactamica; Neisseria mucosa;
Neisseria pharyngis; Neisseria polysaccharea;
Neisseria sicca; Neisseria sp. In unele condiii se
pot comporta ca patogeni oportuniti.

 Caractere
-

generale ale genului

Neisseria
Coci gramnegativi, asociai n diplococi,
uneori tetrade, imobili
Bacterii carboxifile, cu metabolism
respirator
Catalazo- i oxidazo-pozitive
Sunt gzduite pe mucoasele omului i
animalelor
Speciile patogene sunt exigente la
cultivare

Neisseria meningitidis
1884 - Marchiafava si Celli observ diplococi
gramnegativi n LCR al unui pacient cu meningit
1887 - Weichselbaum izoleaz bacteria din LCR i
demonstreaz rolul ei etiologic
Bacterie strict uman care colonizeaz rinofaringele la
un numar mare de purttori sntoi (5-30%). Portajul
poate avea o durat de la cteva zile la cteva luni. In
unele cazuri i cu frecven redus este capabil s
provoace septicemie i/sau o meningit
cerebrospinal.
Caractere morfobiologice
N.meningitidis se prezint sub form de coci imobili,
gram-, in frotiu se aranjeaz in diplococi cu
suprafeele adiacente aplatizate sau puin concave
(aspect riniform, de boabe de cafea). Posed
capsul i fimbrii.

Structura antigenic a N.meningitidis

1. Ag polizaharidice capsulare permit
caracterizarea a 13 serogrupe: A, B, C, D, X,
Y, Z, 29E, W135, H, I, K et L. Mai frecvent
intlnite sunt serogrupele A, B, C, Y i W135.
2. Ag proteice din membrana extern (cinci
proteine majore) permit distincia tipurilor
serologice
3. Ag lipo-oligozaharidice (serotipuri)
Aceste antigene servesc n calitate de markeri
epidemiologici.

Caractere de cultur
N.meningitidis este un mi/o carboxifil, foarte
exigent la cultivare. Se cultiv doar pe
medii mbogite cu snge sau ser: gelozser, geloz-snge, geloz-ciocolat, mediul
Mueller-Hinton i prenclzite n termostat.
Coloniile S, mici (1-2 mm), cu marginile
netede, bombate, translucide apar peste
24-48 ore de incubare la 37 C n atmosfer
umed mbogit cu 5-10% CO2.

Activitate biochimic
N.meningitidis posed catalaz i
oxidaz, scindeaza glucoza i maltoza
fr a produce gaz.
Rezistena n mediul extern:
N.meningitidis este o bacterie
deosebit de fragil, sensibil n special
la desicare, radiaii solare, variaii de
pH i refrigerare; temperaturi sub 37
C determin autoliza bacteriilor.

1.
2.
3.
4.
5.

Factorii de patogenitate
Adezine (fimbriile i proteine ale ME)
Capsula rol antifagocitar
sIg A-proteaza descompune sIg A de pe
mucoase
Endotoxina declaneaza secreia
diferitor citokine
Receptori i captatori de Fe (receptori
membranari pentru transferin i
lactoferin, care permit captarea directa
a Fe din aceste substane, precum i
extragerea lui direct din hemoglobin)

 Epidemiologia

infectiilor meningococice
Sursa de infecie bolnavii cu meningit sau
rinofaringit meningococic sau purttorii de
germeni
Transmiterea aerogen, prin picturi Pflugge,
prin obiecte contaminate (jucrii) exceptional
Patogeneza infectiilor meningococice
Meningococul ader la epiteliul rinofaringelui,
provocnd sau o infecie local (rinofaringita),
sau o infectie inaparent. In caz de diminuare
a rezistenei organismului, bacteria trece n
submucoas i apoi n circulaia sanguin
general (meningococcemia). Aceast
translocaie este favorizat de inflamaii
rinofaringiene, n special virale.

 In

circulaia general, graie capsulei,

bacteria este protejat de mijloacele de
rezisten a organismului. Prin tropism
pentru celulele plexului choroid,
meningococul ader la acest nivel i, prin
translocaie, trece n spaiul meningean,
inducnd meningita cerebrospinal.
Odat cu dispariia anticorpilor materni,
N. meningitidis devine principala bacterie
responsabil de meningite la nou-nscui.
Ulterior, imunitatea antimeningococic se
instaleaz progresiv i frecvena
meningitelor meningococice diminueaz.

Formele clinice de infectii

meningococice
1. Rinofaringita (forma clinic cea mai
frecvent, deseori asimptomatic)
2. Septicemia (meningococcemia).
Reprezint etapa a doua a maladiei.
Complicaii: meningococcemie
fulminant (sindromul WaterhouseFriderichsen) n 10 - 20 % de cazuri (oc
endotoxinic, purpur extensiv indus
de coagulopatie de consumare
(coagulare intra-vascular diseminat)).

3. Meningita cerebrospinal epidemic.

Este precedat de o faringit i nsoit de
bacteriemie. Este caracterizat prin febr
nalt, cefalee, vom, fotofobie,
hiperestezie cutanat. Poate fi prezent
poziia caracteristic n "coco de puc"
dat de sindromul de contractur. Frecvent
se ntlnete herpesul labial, peteii
cutanate sau artralgii. Afectarea sistemului
nervos se face n grade variabile, cu delir,
agitaie psihomotorie, somnolen, uneori
com, pareze i paralizii, convulsii.
Evoluia n absena tratamentului se face
spre deces n 80-90% din cazuri, restul
prezentnd sechele grave.

4. Alte forme: infecii bronhopulmonare,

endocardite, pericardite, osteomielite,
artrite (determinate de formarea de
complexe imune), conjunctivite, angine.
Diagnosticul de laborator al
infectiilor meningococice
Prelevate: in funcie de forma clinic se prelev
exsudatul nasofaringean, snge pentru
hemocultur, LCR, lichidul articular, etc.
Probele se prelev nainte de a se administra
antibiotice i se transport rapid la laborator,
ferite de variaii de temperatur i lumin. La
necesitate se utilizeaz mediul de transport
Stuart

Diagnosticul direct
Examenul LCR este primordial pentru diagnosticul
meningitei. Prelevat n condiii aseptice prin
puncie lombar, n volum de 4-6 ml n 2 eprubete
de centrifug.
LCR este tulbure, conine mii sau zeci de mii de
elemente celulare, cu predominana de 95-100% a
neutrofilelor. Aceast reacie celular este insoit
de hipoglicorahie, de hiperalbuminorahie i pH
acid prin acumularea de acid piruvic i lactic.
I. Examenul microscopic al sedimentului LCR

a) Frotiuri colorate cu albastru de metilen sau

Gram: diplococi Gram-negativi riniformi n pozitie
intra i extracelular, dar densitatea bacterian
este sczut, i examenul este negativ n 1/3
cazuri. Prezena leucocitelor n numr mare
pledeaz pentru un prognostic favorabil. b) RIF

II. Examenul bacteriologic

Sedimentul din LCR se nsemneaz pe medii de
cultur mbogite, cum sunt geloza-snge, gelozaciocolat, mediul Mueller-Hinton prenclzite la 37 C.
Exsudatul nazofaringean se nsemneaz
imediat dup recoltare pe medii cu adaos de
antibiotice (lincomicin, vancomicin, ristomicin)
pentru inhibarea altor specii microbiene existente n
exsudat.
Sngele pentru hemocultur se nsemneaz
direct pe medii de cultur lichide (bulion glucozat 2%
respectnd proporia de 5 % snge). Examinrile se
fac zilnic timp de 5-7 zile prin subculturi.
Identificarea i diferenierea de neisseriile comensale
se bazeaz pe aspectul morfologic pe frotiuri
colorate Gram, prin testul oxidazei care este pozitiv,
scindarea numai a glucozei i maltozei, identificarea
serologic prin RA cu seruri imune specifice de grup.

III. Decelarea direct n snge i LCR a

antigenelor polizaharidice capsulare, utiliznd
reaciile de contraimunoelectroforez, ELISA, latex
i coaglutinare cu antiseruri specifice de grup.
IV. Detectarea acizilor nucleici
Diagnosticul indirect
Diagnosticul serologic. Pot fi titrai Ac
antimeningococici utiliznd RA sau RHAI. Are
valoare diagnostic redus
Tratamentul trebuie instituit extrem de urgent,
imediat dup internare i efectuarea punciei
lombare.
Tratamentul etiotrop const n administrarea de
antibiotice timp de 7-10 zile: Penicilin, Ampicilin ,
Cloramfenicol, Cefalosporine.

Profilaxia specific: imunizare activ cu

vaccin polizaharidic antimeningococic monovalent
sau polivalent (A, C, Y, W), care se poate
administra intradermic sau subcutanat, dup
vrsta de 3 luni (pentru grupul A), oferind
protecie de 95-100% pentru o durat de 2-3 ani;
polizaharidul capsular de grup B este un
homopolimer al acidului sialic i nu este imunogen
pentru oameni.
Contacii vor fi supravegheai clinic timp de 10 zile.
Chimioprofilaxia cu Penicilin V, timp de 7 zile, sau
cu Rifampicin, 3 zile, se aplic n familii sau n
colectiviti de precolari
Purttorii, depistai n focar, vor fi tratai timp de 710 zile cu Penicilin V.
Cazurile de meningit sau meningococcemie vor fi
declarate n 24 de ore de la depistare

MICROBIOLOGIA I DIAGNOSTICUL DE
LABORATOR AL GONOREEI
Gonoreea este o uretrit specific, cu eliminare masiv
de puroi, mai aparent la barbati dec t la femei.
Termenul "gonoreea", a fost utilizat prima data de
Galen n secolul II i nseamn scurgerea seminei".
Multe secole gonoreea i sifilisul erau confundate.
Paracelsus (1530) credea ca gonoreea este un
simptom precoce al sifilisului. Aceasta confu zie a fost
ntrit de medicul englez John Hunter, n 1767.
Hunter intenionat i-a inoculat puroi de la un bolnav
cu simptome de gonoree, mbolnavindu-se de sifilis!
Agentul cauzal al gonoreei, Neisseria gonorrhoeae, a
fost descris pentru prima oar de A. Neisser n 1879
n puroi de la un bolnav de gonoree.
Mi/o a fost izolat n cultur pur n 1882 de ctre
Loeffler pe ser coagulat i rolul su etiologic a fost
stabilit ulterior pe voluntari umani (conform
postulatelor lui Koch).

Neisseria gonorrhoeae
Caractere morfobiologice
Neisseria gonorrhoeae este un coc gramnegativ, cu diametrul de 0.6 - 1.0 m,
uzual observat n perechi cu suprafeele
concave alturate. In prelevate
patologice (puroi, exsudate) se
localizeaz frecvent intracelular n
leucocite polimorfonucleare (neutrofile).
Imobil, posed fimbrii cu lungimea de
civa micrometri. n funcie de prezena
fimbriilor se cunosc patru tipuri de N.
gonorrhoeae : T1, T2, T3, T4

Caractere de cultura
Gonococul este exigent la cultivare. Pentru
izolarea lui se utilizeaz medii mbogite cu
ser sangvin, extract de drojdii, lichid ascitic,
etc (mediul HYL, Thayer-Martin, gelozciocolat). Culturile cresc la 35-36 C n
atmosfer umed cu 5-10 % CO2. Peste 24-48
ore apar colonii mici (0,5-1mm), netede,
translucide.
Dup aspectul coloniilor pot fi descrise 4 tipuri:
- Colonii de tipul I i II apar la izolare, corespund
tulpinilor virulente, purttoare de pili (fimbrii),
- Colonii de tipul III i IV, apar la repicare, mai
mari, corespund tulpinilor fr pili

Structura antigenic
- 3 proteine majore din ME (Por / PI,
Opa/PII, PIII) definesc multiple
serotipuri (variante). Opa prezint o
mare variabilitate antigenic, chiar n
interiorul unei tulpini.
- Lipopolizaharidul din ME
- Proteina fimbriilor, cu o mare
diversitate antigenic
Caractere biochimice: gonococii sunt
oxidazo-pozitivi, scindeaza doar
glucoza pna la acid, nu atac maltoza

Factorii de patogenitate
1. Adezinele (fimbriile, unele proteine din
membrana extern Opa). Opa de
asemenea induce transcitoza gonococilor
n celulele epiteliale. sIgA-proteaze, cu rol
in colonizarea mucoaselor
2. Proteine ale ME (Por), care inhib
formarea fagolizosomei (supravieuirea i
multiplicarea gonococilor n fagocite)
3. Endotoxina (rezisten la complement,
secreia citokinelor)
4. Sisteme de captare a Fe (receptori
membranari pentru transferin i
lactoferin)
5. Variaia antigenic rapid a fimbriilor de
adeziune i a proteinei Opa (conversie,
hipermutaie, transformare)

Designation

Location

Contribution

PilE

major fimbrial
protein

initial binding to epithelial cells

P.II (Opa)

outer membrane
protein

contributes to invasion

P.I (Por)

outer membrane
porin

may prevent phagolysosome formation in

neutrophils and/or reduce oxidative burst

LOS

outer membrane
lipooligosaccharide

elicits inflammatory response, triggers

release of TNF

P.III (Rmp)

outer membrane
protein

elicits formation of ineffective antibodies that

block bactercidal antibodies against P.I and LOS

Tbp1 and
Tbp2

outer membrane
receptors for
transferrin

iron acquisition for growth

Lbp

outer membrane
receptor for

iron acquisition for growth

Rezistena n mediul extern

N. gonorrhoeae este un mi/o fragil,
sensibil la variaii de temperatur,
desicare, raze UV i alte condiii ale
mediului extern.
Gonococul este inhibat de bumbacul
din tampoane (hipoclorit...). Pentru
prelevri sunt indicate tampoane cu
alginat de Ca sau din dacron.

 Epidemiologia

infeciei

gonococice
Sursa de infecie unica surs este
bolnavul cu gonoree, n special cu
infecie inaparent
Transmiterea
la maturi exclusiv prin contact
sexual;
- la nou-nscut la trecerea prin
canalul de natere al mamei bolnave

 Patogeneza

infeciilor cauzate de
N.gonorrhoeae
Infecia gonococic este n general limitat
la mucoasele cu epiteliu columnar. Mai
frecvent implicat este uretra, cervixul,
rectul, faringele i conjunctiva. Epiteliul
scuamos al vaginului nu este sensibil la
infecia cu N. gonorrhoeae. Totui, la fetie
gonococul poate provoca vulvovaginite.
Infeciile mucoaselor sunt caracterizate
uzual prin secreii purulente.
Patogeneza gonoreei
Prin intermediul fimbriilor i a unor proteine
din ME (Opa) gonococii ader la vilozitile
celulelor epiteliale columnare neciliate.

Urmeaz penetrarea lor n celul (prin

endocitoz), apoi vacuola este
transportat la baza celulei, unde bacteria
este eliberat prin exocitoz n esutul
subepitelial.

Pe parcursul infeciei, lipopolizaharidul

bacterian (LPZ/LOZ) i peptidoglicanul sunt
eliberate prin autoliza celulelor. Ambele
substane activeaz complementul pe
calea alternativ, LPZ de asemenea
stimuleaz producia factorului de necroz
a tumorilor (TNF), care provoac distugerea
celulelor. Neutrofilele sunt imediat atrase n
focar i inglobeaza bacteriile. Muli
gonococi sunt capabili s supravieuieasca
n interiorul fagocitelor pn la moartea lor,
cu eliberarea bacteriilor ingerate.

Particularitaile gonoreei la
brbai
In majoritatea cazurilor decurge acut
(85-95%), fiind manifestat clinic:
1. Uretrita (secreie uretral alb
galbuie, durere i usturime la
mictiune, dizurie)
2. Prostatita
3. Orhita
4. Epididimita

Particularitile gonoreei la femei

In majoritatea cazurilor infecia decurge
asimptomatic (80% de cazuri), cu
evoluie spre cronicizare.
Formele clinice:
1. Cervicita (cu sau fr leucoree) forma
cea mai frecvent
2. Uretrita
3. Bartolinita
4. Salpingita (pericol de sterilitate,
graviditate extrauterin)
5. Ovarita
6. Endometrita
7. Peritonita

Alte forme clinice:

Faringita i proctita gonococic
Diseminarea infeciei gonococice (1-3%)
determin artrite, leziuni cutanate, septicemii,
endocardite, meningite.
Tulpinile de N. gonorrhoeae care cauzeaza
infecii diseminate sunt uzual rezistente la
complement i la reacia bactericid a serului.
La nou-nscut conjunctivita purulent cu
extinderea rapid a infeciei la globul ocular
(ophtalmia neonatorum) poate fi urmare a
contaminrii la trecerea prin canalul de
natere

 Diagnosticul

de laborator al gonoreei

Prelevate:
- La brbai - secreiile uretrale
- La femei - secreiile uretrale, vaginale, din
endocol sau orificiile glandelor vulvare
- Pot fi examinate coninutul leziunilor cutanate,
exsudat articular, nasofaringean, snge, puroi
din conjunctiv, LCR, tampon rectal.
Pentru recoltarea acestor secreii se foloseste un
tampon de alginat de Ca (sau ansa
bacteriologic), care este apoi trimis imediat n
laborator pentru testare (dupa necesitate se
foloseste mediul de transport Stuart cu
tioglicolat i crbune activat).

 Daca

eliminrile sunt srace, se procede la

stimularea secreiei (reactivare,
provocare):
Alimentar (cu bauturi alcoolice bere)
Chimic (instilaii cu nitrat de Ag sol. 1%
in uretr, 10% n colul uterin)
Biologic (inocularea gonovaccinului,
recoltarea secreiilor imediat dupa menstre
la femei)
Mecanic (masaj al prostatei)
Termic (diatermie sau inductotermie)

Metodele de diagnostic
1. Examenul microscopic (elocvent
doar n cazul uretritelor acute la
brbai).
In frotiuri din puroiul uretral colorate
Gram sau cu albastru de metilen se
observ diplococi gram- situai
intra- sau extracelular.
RIF

Examenul bacteriologic (este obligator n

forme asimptomatice sau cronice)
Gonococul fiind o bacterie foarte fragil, este
obligator de a nsmna imediat prelevatele sau
de a utiliza un mediu de transport adaptat.
Pentru izolare se folosesc medii mbogatite (ex.:
mediul Thayer-Martin, care este bogat n factori
de cretere i conine antibiotice (vancomicina,
colistina, amfotericina) care inhib alte bacterii
din prelevat, geloza-ciocolata). Coloniile apar
peste 18 - 24 h de incubare in atmosfer cu CO2.
Identificarea N.gonorrhoeae se efectueaz n baza
caracterelor morfotinctoriale, aspectul coloniilor
crescute pe medii selective, oxidaza +, scindarea
doar a glucozei pn la acid. Seroidentificarea cu
Ac monoclonali n reacia de Co-aglutinare

 Depistarea

direct a N. gonorrhoeae n
prelevate poate fi realizat prin tehnici
ELISA sau RIF
Detectarea acizilor nucleici prin
hibridare sau amplificare genic
Examenul serologic
(serodiagnosticul)
- RFC

 Tratamentul

gonoreei
Antibiograma este indispensabil unui
tratament eficient!
- Peniciline
- Cefalosporine de generaia III
- Fluorochinolone
- Cotrimoxazol
Profilaxia gonoreei
- Nespecifica (individual sau general)
- Prevenirea oftalmiei gonococice se
efectueaza prin instilarea intraconjunctival
la nou-nscui a soluiei 1% de nitrat de Ag