1.

Bacillus cereus- organism patogen Recunoaterea patogenitaii lui Bacillus cereus s-a realizat intr-o perioada lunga de timp, de ani de zile, cercettorii care au ntlnit B. cereus au fost doar preocupati de asigurarea faptului ca imbolnavirea nu a fost produsa de B. anthracis. Contribuie, de asemenea la ncetinirea aceastei recunoateri starea de confuzie a taxonomiei n cadrul genului Bacillus, inainte ca Smith i asociaii (1952) sa impuna o anumit ordinein cadrul genului.

Cu toate acestea, exist dovezi ample c, sub pretextul unor nume variate pn la 1952 si, de atunci, dup denumirea de B. cereus, acest organism a fost asociat ct mai devreme de 1898 cu formarea de abcese, bacteriemie si septicemie, celulita, infecii ale urechii i ochi, endocardita, gastroenterit, meningita, rinichi si infectii ale tractului urinar, osteomielita, infecii pulmonare, i ranu infectate, uneori gangrenoase (Goepfert et al, 1972.;Gilbert, 1979; Tuazon et al, 1979;. Turnbull et al, 1979.;O'Day et al, 1981a, 1981b;. Turnbull i Kramer, 1983). B. cereus, de asemenea, a fost adus n atenie datorita faptului ca in jurul anului 1960, a fost asociat n contextul unei intoxicaii alimentare. Iniial, interesul a fost n ceea ce este acum descris pentru convenien. Astfel sindromul diareic este caracterizat de simptome precum diaree i crampe abdominale , 8-16 ore dup consumul de alimente incriminate. Tipuri de alimente implicate in declansarea sindromului diareic au variat foarte mult de la carne i mncruri legume la paste, deserturi, prajituri, sosuri, i produse lactate (Gilbert, 1979; Granum, 1997; Batt 2000a).

Boala diareica tip sindrom a fost recunoscuta pentru prima data la un spital denumit focar, cauza fiind consumul unui de sos de vanilie contaminat n Oslo, Norvegia, n 1948 (Hauge, 1950, 1955). Mai recent, a devenit acceptat faptul c B. cereus este agent etiologic al unui tip distinct de intoxicaie alimentara, mentionat ca sindromul vomitiv, caracterizat n special de vrsturi dup o perioad de incubaie scurta cuprinsa intre 1 - 5 ore. Un numr mic de incidente nregistrate au fost asociate cu mncruri din orez. Studiile cu privire la factorii ce fac agentul B. cereus responsabil pentru aceste dou forme de intoxicaii alimentare sunt relevante din punctul de vedere al condiiilor de cretere care le ofer. n Statele Unite, intoxicatiile cu B. cereus este relativ rare si de multe ori a fost limitate la alimente bogate in amidon cum ar fi orezul prjit i fiert, cartofi rmasi in urma consumului, fasole, varz, carne i mncruri. n schimb, literatura de specialitate europeana de la nceputul secolului 20 conine numeroase cazuri de intoxicatii cu B.cereus. Unul dintre cele mai vechi episoade de intoxicatie inregistrate au aprut n 1906, atunci cnd a descris Lebenau un focar la un spital ,care implic 300 de pacieni i personal cu experien care prezentau simptome de gastroenterita acuta la scurt timp dup ce mancau cina. Elementul principal de pe meniul a fost chiftelutele, rmie din care au fost extrem de contaminate cu un spor facultative aerob de bacterie. Prin standardele actuale epidemiologice, rapoartele de la nceputul anului legate de intoxicaii alimentare asociate cu specii de Bacillus au fost oarecum vagi. Hauge (1950, 1955) a reuit n cele din urm introducerea lui B. cereus pe harta organismelor patogene, fiind astfel recunoscut pentru contributia lui la toxiinfectiile alimentare . Organism care o data cu publicarea investigaiilor sale meticuloase n patru focare mari n Norvegia, a fost clasat pe locul trei n rndul toxiinfecie alimentar boli n Ungaria ntre 1960 i 1968 (Ormay i Novotny,1970). Focarele n aceast ar au fost asociate cu utilizarea de condimente n bucatele din carne, au fost puin frecvente, in locurile unde disponibilitatea de refrigerare la domiciliu este limitata si o constituie un factor al intoxicatiei(Goepfert et al., 1972)

2. Clasificarea genului Bacillus Membrii din genul Bacillus au un mediu omniprezent de distribuie i poat fi izolati din sol, ap i cele mai multe tipuri de vegetaie. Este raspandit pe produsele alimentare uscate cum ar fi cartofii, lapte, fin, amidon i. n contrast cu alte genuri bacteriene, Bacillus genul cuprinde un mare diversitate de specii i tulpini. Exist mai mult de 50 de specii diferite de Bacillus; B. anthracis i B. cereus sunt cele dou agenii patogeni cel mai important om. Alte dou membri ai acestui grup, B. thuringiensis i mycoides B.,sunt, de asemenea, strns legate intre ele. 3. Conditii de dezvoltare ale bacteriilor din genul Bacillus. Speciile de Bacillus produc spori, care sunt metabolic inactivi i rezistenti la cldur i substane chimice. Membrii de acest gen sunt bacterii gram-pozitive . Sporii, dac sunt prezenti, apar ca "guri" n interiorul culturii bacteriene de celule sau sunt refractile. Bacillus specii sunt aerobe sau facultative anerobe, de obicei, cresc la un interval de temperatur de 10 C-48 C, cu o temperatura optim de cretere de 35 C-45 C. De ngrijorare n ultimii ani, a fost constatarea ca variantele psihrotrofe de B. cereus sunt capabile de cretere i producie a toxinelor la temperaturi de pn la 4 C . Bacteria, este imposibil s fie eliminata din produsele alimentare prin orice proces de scurt sterilizare. Este foarte activ att fiziologic i biochimic dar este foarte variabil n ceea ce priveste proprietile sale.

Procedurile cunoscut culturale disting tulpinile toxicogene de tulpinile nontoxicogenice de B. cereus. Tulpinile toxicogene sunt detectate de ctre oricare dintre metode, inclusiv Evans albastru sau de ncercare a permeabilitatii vasculare, testarea mouse-ului pentru sugari i esutului de cultur.

4. Toxinele produse de Bacillus cereus Exist cel puin apte tipuri diferite de toxine produse de B. cereus . Principalii metabolii toxici de cereus B. sunt obiectul unei examinari aprofundate i detaliate de catre Turnbull (1986). Printre aceste toxine diferite, numai toxina vomitiva i enterotoxina diareica sunt implicate n intoxicaii alimentare (Granum, 1994; Batt,2000a). Toxina vomitiva este gasita n produsele alimentare, dar este inactivata de incalzirea la 90 de minute la temperatura de 126 C (Melling i Capel, 1978). Enterotoxina diareica este secretata de bacterie n produsele alimentare n timpul creterii logaritmice. Acesta este relativ sensibila la cldur i este distrusa n 30 de minute la 56oC (Goepfert et al, 1973.). Tulpini diferite fie produc, aceste dou toxine, n funcie de capacitatea (enterotoxinei) sau incapacitatea (toxina emetic) la hidroliza amidonului. Se cunosc puine despre structura i funcia vomitiv toxinei. Avnd n vedere c majoritatea incidentelor au fost associate cu mncruri cu orez, cele mai multe studii au folosit o pasta de orez mediu pentru elucidarea mecanismelor patogenice implicate in acest sindrom (Melling et al, 1976;. Melling i Capel, 1978). Aceste studii au indicat faptul c toxina vomitiva este stabila la cldur are greutate moleculara <10000Da, compus, care a fost diferit speculat poate s fie o peptida (Kramer i Gilbert, 1989) sau un lipide (Shinagawa et al., 1992). Ea poate suporta de nclzire la 121 C timp de 90 de minute. Toxina este rezistenta la proteoliza i este stabil la valori pH cuprins ntre 2 i 11 (Kramer i Gilbert, 1989;Granum, 1994). Temperatura optima pentru producia toxine vomitive a fost raportat pentru a fi de 25 C la 30 C n cultura orezului (Melling i Capel, 1978). Aceste studii timpurii cu privire la natura toxinei vomitive au fost impiedicate din cauza metodei de detectare disponibile numai pe primatele implicate (Hughes et al, 1988;.

Kramer i Gilbert, 1989). Observaia c toxina ar putea fi detectate n HEP-2 celule (activitate vacuolizare) a condus la izolarea acesteia si caracterizarea (Agata et al., 1994). Dei au existat anumite incertitudini n ceea ce privete relaia ntre toxina antiemetica i factorului vacuolar.

Tabelul. 1. Criterii pentru diferenierea cele patru specii de Bacillus Criteriul Caracteristici morfologice ale coloniei Hemoliza Motilitate Susceptibilitatea la penicilin Includerea in cristalul Parasporal Natura instabil a moleculei toxinei determina: susceptibilitatea sa la enzime proteolitice; atenuare de toxicitatii care a avut loc n tulpini de productori, pe subculturi repetate; problemele puse de metodologia de separare,coproducia de ali metabolii si la partajarea similara a proprietilor moleculare; Experimentele cu diverse noi abordari biochimice la aceste probleme au dus n cele din urm la cercetarea mai multor grupuri independente si de raportarea cu privire la purificarea i caracterizarea enterotoxinei, precum i dezvoltarea de tehnici de imunizare (Ezepchuk i Fluer, 1973;Gorina et al, 1975, 1976;. Kramer et al, 1978;. Ezepchuk et al, 1979;. Kramer, 1984; Thompson et al, 1984;. Shinagawa et al., 1985). 5 _ _ + _ + + _ _ _ + + + _ (+) _ _ B. cereus Alb B. anthracis Alb B. thuringiensis B. mycoides Alb/Gri Rizoid

Enterotoxina diareica produsa de B. cereus are o cretere vegetativ logaritmica. Ea are o greutate molecular de aproximativ 40, 000 Da (Granum et al., 1993) i este un proteina termolabila inactivata prin nclzire la 56 C, timp de 5 minute. Enterotoxina este instabil de mai jos pH =4 i pH-ul de mai sus 11 i este degradat de enzime digestive, inclusive pepsina, tripsina i chemotripsina, astfel se pune sub semnul ntrebrii capacitatea toxinei din alimentele de a provoca boal (Kramer i Gilbert, 1989;. Miller et al, 1998). Temperatura optima pentru producia de toxina este de 32 C-37 C i este produs aproape de sfritul fazei de crestere logaritmice (Kramer i Gilbert, 1989). Fiziologic, cerina pentru un aport de nutrieni este ideal i labilitatea moderat, chiar la temperatura i in prezenta enzimelor digestive ceea ce poate explica de ce B. cereus nu este mai frecvent implicate n intoxicaii alimentare. Glatz i Goepfert (1976) ridic ntrebarea dac intoxicaiile alimentare sunt produse de B.cereus datorit aportului de toxine preformate n produsele alimentare, cu respectarea numrului de celule a crescut n bucle (Spira i Goepfert, 1972) . In cazul n care un numr mare de organisme sunt consumate n alimentele administrat gresit, ele pot avea timp suficient pentru a se multiplica si produce toxina nainte de inhibarea competitiva a microflorei intestinale. Preformate enterotoxinele diareice de B.cereus a fost detectate n produsele alimentare ntr-un studiu 1997 (Tan et al., 1997). Lund (1990) prevede c enterotoxina de B. cereus este att preformata n alimente cat i formata de ctre organism n intestin. Dac toxina preformata este suficient de stabil pentru a provoca boli dup ingestie rmne incert (Granum, 1994; Miller et al, 1998).

5. Simptome i diagnostic

n prezent, este larg recunoscut faptul c diferite forme clinice de gastroenterita poate rezulta din ingerarea de alimente puternic contaminate cu B. cereus. Semnele de produse de enterotoxinei (sindrom diareic) sunt similare cu cele de C. perfringens infecii, dar sunt mult mai usoara. Sindromul diareic este, de obicei asociat cu proteine din alimente, vegetale, sosuri si budinci. Debutul de diaree apoasa, crampe abdominale, dureri i apare 6-12 ore dup consumul de alimente contaminate. Grea poate nsoi diaree, dar vrsturi (vrsturi) apar foarte rar. Simptomele persist, n general, pentru 24 de ore n cele mai multe cazuri. Enterotoxina a fost gsita pentru a exercita efectul su aciune prin perturbarea membranelor celulare, ducnd la scurgeri de celul (Granum et al, 1993;.. Miller et al, 1998). Aceast form de boala a fost raportat n mai multe ri europene, Statele Unite ale Americii, i Canada. Sindromul forma vomitiva determinat de B. cereus induce o intoxicaie aproape exclusiv asociat cu alimente finoase, fierte n special de orez. Semnele de produse de vomitiv toxina (sindrom emetic) sunt similare cu cele ale S. aureus intoxicatii, inclusiv debut brusc de grea i vrsturi 30 minute la 6 ore dup consumul de contaminate alimente. Ocazional, crampe abdominale i / sau diareea poate s apar, de asemenea. Durata este scurt, deoarece simptomele de obicei, dureaz mai puin de 24 de ore (Kramer i Gilbert,1989; Granum, 1994; Miller et al, 1998). Modul de aciune din aceast toxin rmne evaziv. Aceast form a bolii a fost semnalat pentru prima dat n Regatul Unit n 1971; ntruct apoi, incidente similare au fost raportate n alte pri ale lume (Gilbert, 1979).

Confirmarea de B. cereus ca agent etiologic n cadrul unui focar de toxiinfecie alimentar necesit : izolarea tulpinii de acelai serotip din alimente suspecte i fecale sau din voma a pacientului;

 izolarea unui numr mare de B. cereus serotip cunoscut de a provoca toxiinfecie alimentar, izolarea se face din produsele alimentare suspecte , din materiile fecale sau din vom; izolarea lui B.cereus din alimente si determinarea enterotoxicitii prin test serologice i biologice. n cele mai multe cazuri un numr mare de germeni mai exact ntre 105 i 108 pe gram, se izoleaz din alimentele incriminate Tabel 2. Proprietile fizico-chimice i biologice ale celulidei, toxina vomitiv din Bacillus cereus Parametrii Masa molecular Structura Punctul izoelectric Antigenitatea Activitate biologic pe primate n via Receptori Citotoxicitatea Stabilitatea la cldur Stabilitatea la pH
Efectul de proteoliza (tripsin, pepsin)

Proprieti sau activitate 1.2 kDa form de inel neacoperit nu vrsturi 5-HT3 nu 90 min la 121 C stabil la pH 2-11 nu n orez i lapte de la 25 C-32 C de producie necunoscut, probabil

Toxin produs n alimente Producere

Sursa: Compilat din Agata et al. (1994, 1995), Kramer i Gilbert (1989), Shinagawa (1993), i Shinagawa et al. (1995).

6. Alimente asociate cu intoxicaia determinat de Bacillus cereus. B.cereus este adesea ntlnit n ap i n sol, dar sporii si precum i formele vegetative pot fi isolate de pe un numr mare de plante comestibile. Se pot gsi n preparatele pe baz de cereale, cartofi, legume i supe din legume. Aceste mncaruri impreuna cu preparate pe baza de carne sunt responsabile pentru bolile diareice declansate 8

n cteva ri din Europa. Sunt adesea asociate cu mancarurile bazate pe carne asezonata cu condimente. Condimentele contin un numar mare de spori aerobi, printer care si spori de Bacillus cereus. Gatirea inadecvata a acestor mancaruri determina supravietuirea sporilor, dupa care are loc germinarea sporilor la temperatura optima si cresterea celulelor vegetative. De cele mai multe ori imbolnavirea survine in urma consumului de orez gatit in conditii neigenice in cadrul restaurantelor chinezesti. Boala diareica determinata de B.cereus este determinata si de consumarea altor alimente precum: curry, risotto, salata de orez, deserturi pe baza de vanilie, smantana, budinca, lapte pentru sugari, pui, paste gatite. In cele mai multe cazuri, depozitarea alimentelor in conditii improprii, la temperaturi ridicate, determina dezvoltarea sporilor, a formelor vegetative care la randul lor produc toxinele ce duc la intoxicatia consumatorilor.

7. Prevenire Alimentele gatite proaspat si mancate calde sunt sigure. Dar daca alimentele sunt mentinute la temperatri cuprinse intre 10 si 600C acestea devin un mediu favorabil pentru dezvoltarea formelor vegetative ale bacteriilor. Masurile de control efective depind de prevenirea germinarii sporilor, de prevenirea producerii toxinelor in alimentele deja pregatite termic.

Gilbert si alti asociati ai sai propun urmatoarele masuri pentru a prevenii imbolnavirea consumatorilor de manacruri pe baza de orez: orezul trebuie fiert in cantitati mici, de mai multe ori pe zi, reducandu-se timpul stationarii lui inainte de gaturea propriu-zisa; dupa fierbere orezul trebuie mentinut la temperature inalta nu mai jos de temperature de 63oC sau racit foarte repede si depozitat la temperature de refrigerare; orezul gatit ( fiert sau prajit) nu trebuie depozitat de tempetauri crescute si niciodata temperatura de depozitare nu trebuie sa fie cuprinsa intre 15-50oC. Sub nici o forma orezul gatit nu trebuie sa stea la temperatura din bucattarie mai mult de 2 ore; oul batut folosit la prepararea orezului prajit trebuie sa fie proaspat spart; In general exista cercetari limitate in ceea ce priveste preventia intoxicatiei cu Bacillus cereus. Potrivit lui Miller si colegilor lui (1998) se poate datora acest lucru faptului ca aceasta boala dureaza o perioada relative scurta de timp.

10