Spectroscopia H RM a creierului-cuantificare absoluta a metabolitilor

In RMN experimentele se realizeaz pe nucleii atomilor i nu pe electronii acestora, astfel incat informaia furnizat se refer la poziionarea spaial a acestor nuclei n compusul chimic studiat. Aceti nuclei au o proprietate intrinsec numit spin . Spectroscopia RM folosind nucleul 1H face posibilla cuantificarea neinvaziva, in vivo a metabolitilor creierului. In RM nucleara, aria totala privind rezonanta unui metabolit in spectrul 1H RM este direct proportional cu concentratia metabolitului. Concentratia metabolitilor se imparte in 2 categorii: ratii, sau cuantificarea relativa si cuantificarea absoluta. Exista diverse opinii care afirma superioritatea unei categorii fata de cealalta dar exista avantaje si dezavantaje in ambele. Unul din avantajele cuantificarii relative este faptul ca a fost aplicat cu success in diagnosticul cancerului, leucemiei, epilepsiei, dementei si screlozei multiple. Un alt avantaj este faptul ca este usor de implementat deoarece nu necesita timp in plus fata de timpul necesar imagisticii sau pentru post procesare. Ratiile reprezinta concentratiile metabolitilor relative la creatinina. Tinand cont de avatjele acetseti metode de cunatificare si cum se obtin acestea, primele dezavantaje ce apar tinand cont de cele enumerate mai sus sunt reprezentate de ambiguitatea rezultatelor obtinute. In anumite cazuri ratiile sunt sensibile in a determina schimbarile, de exemplu atunci cand un metabolit creste si un altul descreste, ramanand incert concentratia carui metabolit este diferita si in ce directive, crescatoare sau descrescatoare. Asteft de informatii pot fi obtinute doar utilizand AQ, cuaificarea absoluta a metabolitilor. Cuantificarile absolute sunt exprimate in unitati biologice, cum ar fi mimimoli per kg. Acest imp de cuntificare a fost folosit cu success in studiile pacientilor cu Alzheimer, epilepsie, screloza multipla, leukoencefalopathy si cancer. Procedura AQ este impartita in 2 pasi: (a) determinarea unui maxim, peak prcis a metabolitilor , (b) conversia regiunii de maxim in concentratie folosind o tehnica de procedura. Unul din dezavantajele AQ este faptul ca este time comsuming comparativ cu cuantificarea relativa. Studiile pe pacienti sanatosi au aratat ca, cuantificarea relativa a metabolitilor expune variatii mai mari a concentratiilor , fata de concentratiile AQ a metabolitilor individuali. Principalii metabolite MRS: NAA- marker al pierderii/disfunctiei neuronale; scade in toate bolile SNC.

Creatina marker al statusului energetic neuronal/glial; semnal constant; ceilalati metabolite se raporteaza la cretina; Cholina precursor al membranei celulare neuronale si gliale; creste in procesele cu distructie a membranei celulare si in proliferarile celulare. Mioinozitol- marker astrocitar.

Caracteristicile bobinei RF Bobinele RF sunt folosite in transmiterea campului de inductie magnetica RF(B1) si de a detecta semnalul rezultat. In spectroscopia RM folosind nucleul 1H a creierului, capul pacientului este aezat in interiorul capului de bobina, ce este folosit ca bobina de receptive, in timp ce oricare dintre capul dau masa bobinei functioneaza ca o bobina de transmitere. Cu o secventa de puls dedicate cum ar fi PRESS(point resolved spatially localized) sau STEAM(stimulated echo acquisition). Bobina de transmitere ar trebui sa genereze pulsuri de radiofrecventa suficiente de puternice pentru patrunde in toate regiunile tesuturilor vizate. Patrunderea pulsurilor RF a bobinei de transmitere si SNR(signal to noise) din bobina de receptive sunt dependente de incarcarea bobinei ce este determinata de conductivitatea electrica a bobinei si de volumul obiectului din apropierea bobinei. Caracteristicile electrice ale bobinei RF sunt calibrate anterior masurarii deoarece in functie de volumul de interes sunt necesare pulsuri RF de diferite valori pentru a putea obtine rezulate cat mai exacte. Caracteristicile MRS Un spectru al creierului 1H arata un numar de semnale ce corespund mai mutor metaboliti ai creierului, fiind caracterizate de unul sau mai multe maxime cu o anumita frecventa de rezonanta, lungimea liniei sau forma liniei(Gauss, Lorentzian), faza si suprafata. Separareapeak-urilor este data de diferenta in mediul chimic al diversilor nuclei. Structura moleculara pentru un metabolit in mod particular este data de un anumit pattern al peak-ului. Procesul de cunatificare este divizat in 2 parti: Sunt determinate ariile maximelor precise pentru metabolitii relevanti. Folosirea calibrarii in conversia ariilor maximelor in concentratia metabolitilor.

Metode AQ 1.Referinta Externa Un flacon cu o solutie de referinta, cunoscuta, la fel si proprietatile sale de relaxare,este pozitionat in apropierea sau inauntrul unei bobine RF. Imediat dupa achizitia spectrului in vivo, un spectru de referinta, din mostra de calibrare este obtinuta, cat timp capul pacientului, inca este in interiorul bobinei. Ambele spectre pot fi obtinute In acelasi timp. Minus - distorsiune a campului magnetic. 2.Replace and Match In cadrul acestei metode, subiectul uman este inlocuit cu o proba falsa(phantom) ce simuleaza tesutul uman pe cat de mult posibil, si potrivirea incarcarii bobinei cu incarcarea anterior obtinuta in vivo. Minus- Potrivirea prin manevrarea probei false nu este intodeauna potrivita, si poate fi time consuming, iar distributia continutului probei false poate fi destul de diferita fata de capul uman. 3.Referinta semnalului apei Prima data este efectuata masurarea in vivo, apoi din acelasi voxel, semnalul din tesutul apos nesuprimat este inregistrat ce serveste ca concentratie de referinta endogena. Minus Folosirea CSF(inregistrat dintr-un voxel ce contine doar CSF) ca o referinta de apa pentru a obtine concentratia molara nu este sugerata deoarece in mod usual este imposibil in a pozitiona un voxel suficient de mare ce ar putea contine doar CSF. 4.Principiul reciprocitatii Voltajul extern necesar producerii unui camp magnetic B1, la o anumita locatie este invers relative cu voltajul indus in aceieasi bobina RF de un cam predefinit B1. Stategia de calibrare (phantom replacement strategy) implica determinarea lui B1 local pentru volumul de interes, ce este realizat prin masurarea amplitudinii voltajului cerut pentru obtinerea semnalulul maxim(Vmax). Unitatile standard absolute pot fi obtinute prin impartirea semnalelor MR in vivo obtinute la Vmax. Principilu reciprocitatii se aplica numai la bobinele de trimitere-receptie.

5.Unitati institutionale In aceasta metoda una din metodele de referinta absolute, anterior definite sunt folosite, dar calibrarea finala la unitati standard nu este efectuata. Minus- folositoare doar in cazul compararii diagnosticului intr-u institutie.

Consideratii imporante ale AQ Timpul de raspuns si timpul de repetitie Atunci cand timpul de repetitive a unei secvente de puls este relative scurt, magnetizarea nuisi poate reveni in totalitate inaintea urmatoarea excitatii, ceea ce duce la o reducere a semnalului(saturarea semnalului) La 1,5 T, in mod usual timpul de relaxare T1 pentru cativa metabolite sunt: 1430 msec +-165 pentru NAA, 1330 msec +-pentru choline, 1460msec +- 270 pentru creatina, si 1140
msec +- 308 pentru myoinozitol. Tinand cont de aceste date un timp de relaxare de 2000 de msec va duce la o descrestere a semnalului pentru NAA cu aproximativ 25%, pe cand un timp de relaxare de 7000 de msec va produce o reducere a semnalului de doar 0.7%. Acesta se datoreaza faptului ca valorile T1 pentru majoritatea metabolitilor nu sunt aceleasi. La T2 este invers. Pentru NAA reducerea semnalului va fi de aproximativ 21% pentru timpul de raspuns de 100 de msc, pe cand la un timp de raspuns de 20 msec se va pierde doar 5% din semnal. In contrast cu aceasta =, pentru macromoleculeau un timp de relaxare T2 foarte scurt(<50 msec), astfel incat folosirea unui timp si mai scurt de raspuns va duce la o scadere serioasa a semnalului. De exemplu un timp de raspuns de 20 msec va duce la o reducere a smenalului de raspuns macromolecular de aproximativ 30%. In concluzie determinarea precisa a timpilor de relaxare T1 si T2 este foarte time consuming pentru a fi efectuata pentru fiecare pacient.

Instabilitea castigului receptorului In orice strategie de cuantificare ce necesita calibrare aditionala a masuratorilor probei false. Aceste masuratori ar trebui inregistrate cu excat acelasi setari folosite pentru masurarile in vivo. Nivelul zgomotului din background ar trebui sa arate variatii minime daca spectometrul are stabilitate pe termen lung.

Compartimentarea Deoarece RM in vivo este perfomata pe tesut la un nivel macroscopic, diferite component ale creierului cu concentratii ale metabolitilor diferite pot contrinui la masurarea semnalului. Este greude determinat concentratia reala. Vizibilitatea RM Nu toate moleculele metabolitilor contribuie in mod egal la semnalul RM pentru un anumit VOI. Cei mai multi metabolite nu sunt susceptibili la efectele transferului magnetizarii doar foarte aproape desupra limitelor erorilor experimentale. In majoritatea metodelor de masurare efectele transferului pot fi in mod general evitate.

Analiza datelor Semnalul dependent de timp poate fi convertit in reprezentarea echivalenta a frecventei aplicand transformare Fourier. Operatorul allege un interval de frecvente, ce preferabil contin numai un maxim si apoi aplica integrarea numerica. Peak fit este efectuata folosind algoritmul de optimizare least squares, care in mod iterativ potriveste toate maximele la o functie line shaped model astfel incat spectrul potrivit este asemanator spectrului experimental pe cat de mult posibil. Profilul Voigt in comparative cu profilul Gaussinan si Lorentzian intreoduce grade de libertate mai mari in procedura de potrivire, ce pot duce la rezultate ambigue. Metoda prior knowledge. Toti parametrii cunoscuti semnalelor, cum ar fi frecventele relative, amplitudinea ratiilor, cuplarea scalaa, si fazele de rezonanata ce sunt cacarteristice unui anumit metabolit, poate fi implementat ca si constrangere in procedura de fitting. Cunoasterea anterioara este singura cale sigura, prin reducerea gradelor de libertate, acuratetea parametrilor modelului de fit pentru un anumit set. De asemenea este redus si timpul de calcul. A fost luat in considerare: - tipul imaginatorului, B0, secventa de puls, timpul de raspuns, timpul de repetitive, pH, compozitia ionilor si temperature solutiei in care au fost dizolvati metabolitii in mod individual. Rezultatele obtinute se potrivesc masuratorilor in vivo. Sunt doua cai de obtinere: simulare si masurarea in vitro. T1 si/sau T2 u in vivo si in vitro timpi de relaxare diferiti pentru aceiasi metabolit in unele situatii

Acuratetea cuantificarii. Degradarea SNR si crestere lungimii liniei va duce la erori sistemative, ce nu sunt neaparat estimate de CRMVBs(Cramer-Rao minimum variance bounds) Macromoleculele. Macromoleculele sunt principalii contribuitorila fluctualia liniei de baza ce afecteaza in general cuantificarea precisa a metabolitilor mici. Rezonanta unor macromolecule suprascrie complet rezonanta unor metabolite. Cea mai buna metoda folosita pentru a evita astfel de problem este exploatarea timpilor de relaxare diferiti. LAternativ spectrul unui metabolit pur poate fi obtinut prin scaderea spectrului macromoleculelor. In timpul post procesarii

semnalul macromoleculelor poate fi estimate folosind o functie spline sau polinomiala. Recuperarea inversa si recuperarea saturarii au fost folosite pentru obtinerea spectrului de baza , facute medii de la diferiti subiecti si apoi parametrizate pentru a intra in setul de baza. Miscarea. Miscari mici al corpului in mod repetat sau miscarea pulsatile la nivel cerebral poate afecta in mod substantial caracteristicile semnalului RM. Efectele intruduse de aceasta pot include o crestere a lungimii liniei, reduceread intensitatii maximelor, o calitate diminuata ca supresiei apei, sau dublarea tuturor maximelor. Reducerea acestor efecte de miscare au fost obtinute in difeite studii folosing cardiac triggering sau post procesarea. Figura VOI si Locatie. Spatiul profilului voxelului ar putea devia de la profile perfect rectangular. Dimensiunile voxelilor sunt, in principiu identici pentru toate rezonantele, in orice caz, pozitia voxelului este dependent de shiftarea chimica a rezonantelor individuale. Artefactele aparute in urma shiftarii chimice pot fi reduse prin cresterea lungimii de banda a selectiei selective pulsurlor RF, pentru a pastra aceleasi dimensiuni ale voxelilor, prin cresterea puterii gradientilor.

Water Supression. Este recomandata eliminarea semnalului apei folosind un filtru trece sus sau un algoritm cum ar fi valorile singular ale filtrului de descompunere Hankel-Lanckzos inaintea analizarii datelor.

Asigurarea calitatii In general spectrul cu lungimeam mare a linie, SNR slab, si artifacte evident ar trebui eliminat. Pentru studiul anumitor schimbari patologice ar trebui sa fie stabilir limitele ce reprezinta anormalitati ale concentratiilor. Metodele de achizitie si metodele de procesare ar trebui luate in considerare pentru controlul calitatii. SNR poate fi folosit ca o masura in respingerea spectrului. In mod general SNR ar trebui sa fie cel putin 4.SNR poate fi imbunatatit prin cresterea marimei VOI-ului si numarul mediu de semnale achizitionate, dar aceasta crestere degradeaza forma liniei, creste lungimea liniei, si poate descreste sensibilitatea in a detecta anormalitati. Lungimea liniei este definit ca fiind lungimea totala a peak-ului, la jumatatea inaltimii maxime in domeniul de frecventa. O lungime scurta a liniei implica o rezolutie spectrala mare. Criteriile de respingere a datelor sunt: (a).Lungimea totala la jumatatea maximului metabolituluiar trebui sa fie mai mica de 0.1 ppm (b).LEgatura minima a variantei Cramer-Rao ar trebui sa fie mai mica de 50% (c)Reziduurile de fitting nu ar trebui sa contina feature-uri ineplicabile (d)Spectrul nu ar trebui sa contina artefacte(peak-uri duble sau forma liniilor asimetrice)

Concluzii Pentru a obtine valori absolute serioase, trebuiesc luati in considerea potentiali factori c ear putea complica masuratorile, avand in vedere atat metodele de achizitie a datelor cat si metodele de procesare a datelor. De exemplu efectele relaxarii in achizitia datelor pot fi corectate sau eliminate, unde potrivirea datelor este complicate de factori cum ar fi contributia macromoleculelor. AQ este disponibil si poate fi folosit pentru imbunatarirea diagnosticului utilizand procedure de spectroscopie RM 1H.