Enzime

-REFERAT-

Arad
2012

Reaciile chimice din organismele vii au loc datorit aciunii catalizatorilor biologici numii
enzime. Acestea reprezint instrumentul prin intermediul cruia se realizeaz totalitatea
transformrilor chimice din organismul viu, transformri ce alctuiesc metabolismul substanelor i
energiei. Substana asupra creia acioneaz enzima se numete substrat iar compusul chimic
rezultat n urma aciunii enzimei se numete produs de reacie. Toate enzimele fr nici o excepie
sunt proteine. n funcie de structura lor chimic ele pot fi enzime monocomponente i enzime
bicomponente.
Enzimele monocomponente sunt proteine simple (holoproteine) cu moleculele alctuite
numai din radicali de aminoacizi legai ntre ei prin legturi peptidice, iar enzimele bicomponente
fac parte din clasa proteinelor complexe (heteroproteine) i au molecula alctuit dintr-o
component proteinic numit apoenzim i o grupare de natur neproteic numit cofactor
enzimatic. Cofactorii legai puternic cu apoenzimele lor se numesc grupri prostetice iar cei uor
disociabili se numesc coenzime. Aciunea catalitic a enzimelor este condiionat de existena n
moleculele lor a unor regiuni distincte, denumite situsuri (centre) active sau catalitice. Aminoacizii
participani la formarea centrului activ sunt grupai ntr-o geometrie spaial, la nivelul creia se afl
grupele funcionale implicate n legarea direct a substratului i n transformarea catalitic a
acestuia. Situsurile active ale enzimelor bicomponente cuprind pe lng aminoacizii respectivi de
asemenea coenzima sau gruparea prostetic, care interacioneaz cu substratul i faciliteaz
desfurarea reaciei enzimatice.
O alt clasificare a enzimelor se poate face n funcie de natura reaciei catalizate. Dup
acest criteriu enzimele se grupeaz n 6 clase:
1. oxidoreductaze
2. transferaze
3. hidrolaze
4. liaze
5. izomeraze
6. ligaze (sintetaze)
Fiecare clas se subdivide n subclase i subsubclase. n acest sistem (elaborat de Comisia
de Enzimologie a Uniunii Internaionale de Biochimie) o enzim este definit printr-o denumire i un
cod de patru cifre. Prima cifr indic clasa la care aparine enzima, a doua cifr subclasa i
precizeaz natura grupelor chimice sau a legturilor chimice din molecula substratului, a treia cifr
natura chimic a substratului, a acceptorului etc., iar a patra cifr indic numrul de ordine al
enzimei n cadrul subsubclasei date. De regul naintea codului enzimei se nscriu literele EC
(Enzyme Commission).
Coenzime
n funcie de natura lor chimic se mpart n patru clase:
coenzime cu structur alifatic
coenzime cu structur alifatic
coenzime cu structur heterociclic
coenzime cu structur nucleozidic
1. Coenzime cu structur alifatic. Din aceast grup fac parte acidul lipoic, glutationul i
acidul ascorbic (vit. C).
Acidul lipoic poate exista sub o form aciclic i una ciclic:

forma oxidat

forma redus

Datorit capacitii sale de a trece uor i reversibil din forma disulfidic (oxidat) n forma
ditiolic (redus), acidul lipoic este implicat n diferite procese metabolice legate de oxidarea
biologic:
dehidrogenarea -cetoacizilor
biosinteza i degradarea glicocolului
biosinteza prostaglandinelor
Glutationul este o tripeptid:

HOOC

CH CH2 CH2 C N
NH2
O

CH C N
CH2 O
SH

CH2 COOH

glutation (glutamil-cisteinil-glicina)
Rolul coenzimatic al glutationului este asigurat prin prezena gruprii SH n molecul care
se poate oxida reversibil:

2 G SH

_ 2 + _ 2 eH ;

G S S G

+ 2 H+ ; + 2e-

glutation
redus

glutation
oxidat

Glutationul redus (G-SH) poate fi oxidat enzimatic sub aciunea glutation-dehidrogenazei n

prezena acidului ascorbic. Datorit acestei proprieti glutationul este coenzim pentru o serie de
dehidrogenaze importante.

Acidul ascorbic Din grupa coenzimelor de natur alifatic face parte i acidul L-ascorbic,
dei mecanismul de aciune prin care acesta este implicat n diferite procese metabolice nu justific
pe deplin apartenena vitaminei C la clasa coenzimelor.
O C
HO C
O
HO C
H C

O C

O C
_ H+ _ e;
+ H+; + e-

HO C H

_ H+ _ e;

O C
O
HO C

+ H+; + e-

H C
CH2 OH

acid L-ascorbic

H C
HO C H

HO C H

CH2 OH

O C
O
O C

radical ascorbic
liber

CH2 OH
acid L-dehidroascorbic

2. Coenzime cu structur aromatic

Din aceast categorie fac parte ubichinonele, compui naturali ce conin n molecula lor un
inel derivat de la hidrochinon i
mai multe uniti izoprenice:
O

H3C O
H3C O

CH3
O

CH3

(CH2 CH C CH2)n H

ubichinonele ( coenzimele Q )

Ubichinonele sau coenzimele Q apar n esuturile animalelor i plantelor superioare, n

special n mitocondrii unde sunt componente ale catenei respiratorii.
3. Coenzime de natur heterociclic
a) coenzime derivate de la tiamin
Tiamina (aneurina sau vitamina B1)este un factor nutritiv foarte important. Forma n care vit.
B1 ndeplinete funcie coenzimatic este tiamin-pirofosfatul. Aceast coenzim este implicat in
reaciile de decarboxilare a -cetoacizilor, reaciile de dismutare a acidului piruvic i reaciile de
decarboxilare oxidativ:

b) coenzime derivate de la biotin

Biotina (vit. H) se prezint sub 3 forme din care doar -biotina joac rol coenzimatic:
O
HN

O
NH

HN
CH2 CH2 CH2 CH2 COOH

NH
S

-biotina

CH2 CH2 CH CH3

COOH
-biotina

O
HN

NH
S

(CH2)4 CO NH (CH2)4 CH COOH

NH2
biocitina

Rolul coenzimatic al biotinei este jucat n reaciile enzimatice n care se realizeaz o activare
urmat de un transfer de CO2, adic reaciile de decarboxilare i carboxilare. n aceste reacii se
formeaz ntotdeauna un intermediar carboxilat al coenzimei. O astfel de reacie enzimatic n care
este implicat biotina este reacia de carboxilare a acidului piruvic cu formare de acid oxalil-acetic.
c) coenzime derivate de la piridoxin
Numeroase reacii enzimatice sunt catalizate de enzime ce conin n calitate de cofactor
piridoxal-fosfatul, un derivat al formei aldehidice a vitaminei B6:

HO
H3C

CH2 OH
CH2 OH
N

C
HO
H3C

Piridoxol

O
H

CH2 OH

HO
H3C

CH2 NH2
CH2 OH
N

Piridoxamina

Piridoxal

Aceast
coenzim este implicat ntr-o serie de reacii extrem de importante ale metabolismului
aminoacizilor cum ar fi O
transaminarea, decarboxilarea i
C H
racemizarea acestora.
CH2 NH2
HO

H3C

CH2 O PO3H2

Piridoxal-5-fosfat
(PALP)

HO
H3C

CH2 O-PO3H2
N
Piridoxamin-5-fosfat
(PAMP)

d) coenzime derivate de la acidul folic. Acidul folic a fost extras prima dat din
frunzele de spanac dup care a fost descoperit n ficat i alte organe i esuturi. Acidul folic
(vitamina M) conine n molecul un rest de pteridin, un rest de acid p-aminobenzoic i unul de acid
glutamic:

OH
N

N
H2N

CH2 NH

CO NH CH CH2 CH2 COOH

COOH

N
Acid folic

OH

N
H2N

CHO

CH2 NH

CO NH CH CH2 CH2 COOH

COOH

N
H
Acid formil-tetrahidrofolic

n stare liber, acidul folic se ntlnete foarte rar, fiind de obicei prezent sub forma unor
derivai care ndeplinesc acelai rol biochimic. Cel mai adesea se ntlnete sub form parial
redus care este acidul tetrahidro-folic sau acid folinic FH 4 care ndeplinete rol de transfer a unor
grupri C1 (metil, formil, hidroximetil etc.)
4. Coenzime cu structur nucleozidic i nucleotidic. Exist mai multe coenzime de
natur nucleozidic i nucleotidic, cele mai importante fiind urmtoarele:
a) adenozintrifosfatul este principalul compus macroergic al organismelor vii i, n
acelai timp, principalul transportor de grupri fosfat.
Legturile dintre radicalii fosfat ale moleculei de ATP au o energie liber cu mult mai mare dect n
cazul altor esteri fosforici din care cauz ele se numesc legturi macroergice.
NH2
N

O
O
O
CH2 O P O~ P O ~ P OH
O
OH
OH
OH

b) coenzima A este un agent de activare i transport a radicalului acetil i n

general a radicalilor acil.
CH3

CH2 C
O

CH C N CH2 CH2 C N CH2 CH2

CH3 OH
H
H

HO P O
O

N
HO P O
O
N
CH2
O

SH

NH2
N
N

O
O P OH
OH

Din punct de vedere structural, coenzima A este format dintr-un rest de acid adenilic, un
rest de ribozo-3-fosfat, un rest de pirofosfat, unul de acid pantotenic i unul de tioetanolamin:

Gruparea funcional SH reprezint partea activ a moleculei din care cauz notarea
prescurtat este CoA-SH. Atomul de sulf al grupei SH poate forma legturi macroergice cu radicalii
acil. Din aceast cauz, CoA-SH este implicat n reaciile n care se realizeaz transfer de radicali
acil.
c) coenzime piridin-nucleotidice
Majoritatea organismelor animale precum i numeroase microorganisme necesit un aport
zilnic de acid nicotinic sau nicotinamid (vit. PP).
n afar de rolul vitaminic jucat de acidul nicotinic i amida sa, acesta intr n structura a
dou
coenzime
importante:
nicotinamidadenindinucleotid
(NAD+)
i
nicotinamidadenindinucleotidfosfat (NADP+)
NH2

O
C NH2
N

N
N
O
O
CH2 O P O P O CH2
O
O
OH OH

OH OH

OH OX
+

X=H

NAD

X = PO3H2

NADP

NAD+ i NADP+ sunt coenzime ale unor oxidoreductaze, deoarece au capacitatea de da

reacii redox reversibile:
O
C NH2

O
C NH2
+

+ DH2

N
R

+D+H

N
R

sau :
+

NAD(P) + S

NAD(P)H+ P + H

d) coenzime flavinice: flavinmononucleotid (FMN) i flavinadenindinucleotid (FAD):

O
CH2 O P OH
HO C H
HO C H

O
O
CH2 O P O P

OH

H3C

HO C H
CH2
N
N

H3C

HO C H
HO C H

O
NH

OH

H3C

HO C H
CH2
N
N

H3C

O
flavinmononucleotidul (FMN)

OH

NH2

CH2
O

N
N

OH OH

NH
O

flavinadenindinucleotidul (FAD)

i coenzimele flavinice sunt cofactori ai unor oxidoreductaze. Acestea au capacitatea de a

da reacii redox reversibile la nivelul nucleului izoaloxazinic:

H3C
H3C

R
N

O
NH

H3C

H
N

+ DH2
H3C

O
FMN (FAD)

R
N

Donor de
hidrogen

N
H

O
NH

+ D

FMNH2 (FADH2)

Proprietile enzimelor
Datorit naturii lor proteice, enzimele posed toate proprietile fizic-chimice specifice
acestor macromolecule (solubilitate, proprieti osmotice, sarcin electric net, denaturare termic,
reacii chimice etc.).
Enzimele sunt catalizatori i respect legile catalizei: catalizeaz reacii posibile din punct de
vedere termodinamic, scad energia liber a sistemului accelernd reacia, sunt necesari n cantiti
mult mai mici comparativ cu substratul, se regsesc nemodificai din punct de vedere cantitativ i
calitativ la sfritul reaciei.
Cataliza enzimatic prezint o serie de particulariti care o deosebesc net de cataliza
chimic: vitez de reacie mult mai mare dect n cazul reaciilor chimice, acioneaz n condiii
blnde de reacie care sunt condiiile fiziologic normale de pH, temperatur, presiune osmotic etc.,
cea mai important particularitate este nalta specificitate de aciune concretizat n capacitatea
enzimelor de a cataliza transformarea unui grup de substrate, nrudite structural.
Cinetica reaciilor enzimatice studiaz dependena vitezei reaciilor enzimatice de natura
chimic a enzimei i substratului, de pH-ul i temperatura mediului de incubare, de concentraia
substratului etc.
Influena concentraiei enzimei asupra vitezei de reacie. Viteza reaciei enzimatice
depinde de concentraia enzimei. Dac concentraia substratului este constant, se observ o
proporionalitate direct ntre viteza de reacie iniial(cnd numai o cantitate foarte mic de S se
transform n P) i concentraiile crescnde ale enzimei. Aceast dependen liniar este
caracteristic pentru majoritatea enzimelor.
Influena pH-ului mediului. Aciunea tuturor enzimelor depinde de pH-ul mediului n care au
loc reaciile enzimatice. Fiecare enzim manifest o activitate maxim ntr-un domeniu determinat al
concentraiei ionilor de hidrogen, care se numete pH optim de aciune. Valoarea sa variaz cu
natura i originea enzimei, natura chimic a substratului, sistemul tampon etc. pentru majoritatea
enzimelor pH-ul optim se situeaz n domeniul neutru sau slab acid (fig. I.7.).
v

V max

pHoptim

pH

Fig. I.7. Influena pH-ului mediului de incubare asupra vitezei reaciilor enzimatice

Influena temperaturii mediului

Viteza reaciilor enzimatice crete cu ridicarea temperaturii pe un interval mic de temperatur
(fig. I.8.).

V max

t2

toptim

t1

oC

Fig. I.8. Dependena vitezei reaciilor enzimatice de temperatura mediului de incubare

Valoarea maxim a vitezei de reacie corespunde la temperatura optim de aciune a

enzimei. Dac temperatura se mrete n continuare are loc o diminuare rapid a vitezei de reacie
prin denaturarea termic a enzimei. n general majoritatea enzimelor de origine animal prezint o
eficien catalitic maxim ntre 35 i 40 oC iar enzimele vegetale n domeniul de temperatur 45 i
60oC. La temperaturi mai mari de 70oC majoritatea enzimelor se inactiveaz. Funcia catalitic a
enzimelor este anulat reversibil la temperaturi sub 0oC.
Influena concentraiei substratului
Pentru majoritatea enzimelor, la concentraii mici de substrat, viteza de reacie este direct
proporional cu concentraia substratului. Pentru a gsi o dependen matematic ntre aceti doi
parametri, Michaelis, Menten i Haldane au luat n considerare reacia enzimatic cea mai simpl,
adic cea cu un singur substrat i cu un singur complex enzim-substrat.

E + S

K+1
K-1

ES

K+2

E + P

Conform teoriei acestor autori, viteza de reacie enzimatic este de fapt viteza cu care
complexul ES se descompune pentru a forma produsul de reacie. Totodat autorii iau n
considerare i conceptul de stare staionar conform cruia n sistem se instaleaz un echilibru
atunci cnd viteza de formare (Vf) a complexului ES devine egal cu viteza de descompunere (Vd) a
acestuia.
Vf = k1[E] . [S] = k1([Et] [ES]) . [S]
unde Et reprezint cantitatea total de enzim iar diferena reprezint enzima liber
Vd = k2 [ES] + k3[ES] = (k2+ k3) [ES]
La echilibru:
Vf = Vd
Rezult:
k1([Et] [ES]) . [S] = (k2+ k3) [ES]
Sau:
([Et] [ES]) . [S]
(k2+ k3)
=
= const. = KM
[ES]
k1
Constanta Km poart numele de constanta Michaelis i are o semnificaie concret,
identificndu-se cu acea concentraie a substratului la care v=1/2 V max. Din relaia de mai sus KM
este egal cu concentraia molar a substratului la care jumtate din enzim se gsete legat cu
substratul, iar cealalt jumtate se afl n stare liber. Constanta KM se poate determina
experimental prin trasarea curbei de vitez funcie de concentraia substratului. Pentru construirea
graficului se determin viteza de reacie la diferite valori ale concentraiei substratului. Pentru

evaluarea mai precis a KM i Vmax ecuaia M. M. se prelucreaz n urmtoarea ecuaie liniar,

numit ecuaia Lineweaver-Burck (fig. I.9.)
1
v

1
V max

_ 1
KM

1/[s]

Fig.I.9. Reprezentarea grafic a ecuaiei Lineweaver-Burk

Graficul dependenei ntre 1/v i 1/[S] reprezint o linie dreapt a crei pant este egal cu
KM/Vmax i care intersecteaz ordonata n punctul 1/Vmax. din acest grafic se pot afla uor Vmax i KM.
Parametrul KM al unei enzime depinde de substrat i condiiile de reacie valorile sale variind
pentru diferite enzime n limite foarte largi. O constant K M mare indic o afinitate mic a enzimei
pentru substrat. Enzima cu KM mic va manifesta n organismul viu o activitate mare, posibil chiar
maxim.
Influena efectorilor asupra activitii enzimelor. Se numesc efectori (modulatori)
substanele chimice care modific viteza unor reacii enzimatice cnd sunt adugate n mediul de
incubare. n funcie de modul cum acioneaz efectorii pot fi activatori sau inhibitori.
Activatorii influeneaz pozitiv activitatea enzimelor pe care o intensific sau stimuleaz.
ntre activatorii enzimatici se numr numeroi ioni metalici (Na +, K+, Mg2+, Ca2+, Zn2+, Mn2+, Co2+
etc.), unii anioni (Cl etc.), diferii compui organici cum ar fi unii tioli (cisteina, glutationul etc.).
Inhibitorii sunt modulatori care diminueaz sau anuleaz activitatea enzimelor. n funcie de
modul de aciune al inhibitorilor asupra enzimelor inhibiia poate fi:
- inhibiie reversibil
- inhibiie ireversibil
Ultima conduce la pierderea definitiv a activitii enzimei, datorit denaturrii ei prin legarea
covalent a inhibitorului cu un aminoacid esenial pentru funcia catalitic. La rndul ei inhibiia
reversibil este de 2 tipuri, n funcie de mecanismul de aciune al inhibitorului, competitiv i
necompetitiv. Inhibitorii competitivi interacioneaz cu centrul activ al enzimei. Ei prezint o
analogie structural cu substratul i n consecin concureaz cu acesta pentru centrul activ al
enzimei. n inhibiia necompetitiv inhibitorul nu prezint analogie structural cu substratul i se
leag cu enzima ntr-o alt zon a moleculei, diferit de centrul activ. Inhibitorii necompetitivi pot
reaciona att cu enzima liber ct i cu complexul ES.
Reglarea activitii enzimelor se realizeaz prin mai multe mecanisme:
Conversia precursorilor inactivi n enzime active. Unele enzime care funcioneaz n
exteriorul celulei (n tractul digestiv sau n plasma sanguin) sunt sintetizate sub form de precursori
inactivi numii proenzime sau zimogene. Hidroliza unui numr limitat de legturi peptidice n
moleculele zimogenelor conduce la conversia lor n enzime active. Modificarea covalent a unor
enzime se poate realiza prin inseria de grupri micromoleculare n moleculele lor. Spre exemplu
activitatea enzimelor care catalizeaz sinteza i degradarea glicogenului este reglat prin
fosforilarea unui anumit radical de serin din moleculele acestor enzime.
Un mecanism de reglare mai rspndit dect modificarea covalent, este inhibiia de tip feed
back, cnd acumularea produsului final al unei ci metabolice cauzeaz inactivarea enzimelor
necesare pentru sinteza lui.
Cel mai rspndit mecanism de reglare a activitii enzimelor n lumea vie se consider
reglarea allosteric. Caracteristica esenial a enzimelor alosterice este susceptibilitatea lor de a fi
activate sau inhibate de ali metabolii dect substratele naturale. Aceti metabolii se numesc
efectori alosterici sau modulatori alosterici. Dac modulatorul induce creterea capacitii catalitice a
enzimei se numete activator sau modulator pozitiv, iar dac acesta provoac scderea eficienei ei
catalitice se numete inhibitor sau modulator negativ. Un alt mecanism este reglarea vitezei de
biosintez a enzimelor sau reglarea genetic.

Bibliografie
1.
2.
3.

Artenie, Vl. 1991, Biochimie, Ed. Univ. Al. I. Cuza Iai.

Cojocaru, D.C., Mariana Sandu 2004, Biochimia proteinelor i acizilor nucleici,
Ed. Pim, Iai
Gavril Ardelean 2001, Biochimia si energetica contractiei musculare, Ed. Bion,
Satul Mare