Sunteți pe pagina 1din 19

Capitolul 9

145

Capitolul 9

9
TRANSCRIPIA I
PROCESSINGUL ARN
ADN deine, sub form codificat, informaia ereditar
necesar edificrii i funcionrii structurilor ce alctuiesc fiina
vie, precum i realizrii proceselor metabolice care
caracterizeaz viaa. Sinteza proteinelor este realizat pe baza
genelor de structur i are loc n citoplasm, pe ribozomi.
Informaia ereditar necesar secvenializriii aminoacizilor din
protein se gsete n ADN nuclear. Aceast molecul nu poate
prsi nucleul i de aceea mesajul genetic ce corespunde unei
proteine va fi mai nti copiat, transcris, sub forma unei
molecule mai mici, ARNm, care va putea trece prin porii
membranei nucleare i transmite informaia n citoplasm.
Astfel, sinteza proteinelor se realizeaz n dou etape majore:
transcripia i translaia.
Prima etap este transcripia sau copierea mesajului
codificat n ADN, sub forma unei secvene specifice
complementare de nucleotide, intr-o molecul de ARNm. A
doua etap const n: translaia (descifrarea) informaiei copiat
de ARNm de ctre moleculele de ANRt (care fixeaz specific un
aminoacid), aezarea aminoacizilor n secvena indicat de
ARNm i legarea lor peptidic.
Sinteza proteinelor este precis controlat n funcie de
programul ontogenetic al organismului sau de necesitile sale,
impuse de anumite condiii metabolice sau de mediu.
146

Capitolul 9

Transcripia este realizat de enzimele numite ARN-polimeraze. Sinteza ARN pe baza matriei ADN se
desfoar n direcia 5'3' dup principiul complementaritii
(A=U; T=A; GC; CG). Procesul decurge n mai multe etape
(iniierea, elongarea, terminarea) cu participarea mai multor
componente. Transcripia este reglat de secvene de ADN
specifice ale promotorului, terminatorului i alte secvene
modulatoare (enhancer, silencer, operator). Secvenele consens
sunt recunoscute de proteine specifice reglatoare, ce
interacioneaz cu ARN-polimeraza, direcionnd, accelernd
sau ncetinind procesul.
Transcripia la eucariote
n funcie de ARN-polimeraza care realizeaz
transcrierea, la eucariote genele se mpart n trei clase:
Gene de clasa I gene ce codific ARNr 5,8S, 18S, 28S i
sunt transcrise de ARN-polimeraza I. ARN-polimeraza I
reprezint activitatea sintetic cea mai mare - aproximativ
50-70%.
Gene de clasa II gene ce codific sinteza lanurilor
polipeptidice, transcrise de ARN-polimeraza II (gene
structurale). Se apreciaz c 10% din ADN uman este
transcris n ARNm. Enzima mai transcrie cteva gene care
codific molecule mici de ARN nuclear (snRNA= smal
nuclear RNA). Activitatea relativ a ARN-polimerazei II
este egal cu 20-40%.
Gene de clasa III gene ce codific ARNr 5S i ARNt,
transcrise de ARN-polimeraza III. Activitatea relativ a
enzimei respective este egal cu aproximativ 10% din total.

147

Capitolul 9

Transcrierea genelor de clasa


II
Aparatul de transcriere:
Gena cu secvene codificatoare i reglatoare (promotor,
terminator):
- regiunea promotorului include secvene consens:
boxa TATA, boxa CAAT, boxa CG, octamer etc.,
care sunt recunoscute de proteine reglatoare;
- secvena transcris a moleculei de ADN include: +1,
secvena lider, exonii, intronii, terminatorul (fig. 9.1).
Poziia secvenelor consens din promotor determin care din
cele dou catene de ADN va servi drept matri n sinteza
moleculei de ARN. Catena 5'3' poart denumirea de catena
codogen, netranscris. Catena 3'5' poart denumirea de
catena anticodogen, este transcris, deci servete drept matri
pentru activitatea ARN-polimerazei.

Fig. 9.1. Organizarea genelor structurale la eucariote

ARN-polimeraza II o enzim nucleoplasmatic,


responsabil pentru transcripia ARNm. n structura ei se disting
10 subuniti funcionale responsabile de recunoaterea
148

Capitolul 9

factorilor generali de transcripie, denaturarea i


renaturarea ADN-ului, catalizarea mperecherii bazelor azotate
din ADN i ARN. Polimerizeaz ribonucleotidele n direcia
5'3' dup principiul complementaritii pe baza catenei 3'5'
a moleculei de ADN. Aceast enzim nu poate recunoate direct
promotorul i, respectiv, nu poate iniia transcrierea, de aceea
activeaz n complex cu proteinele reglatoare. Spre deosebire de
ADN-polimeraze, ARN-polimerazele pot iniia sinteza ARN pe
loc gol, n lipsa primerului (fig. 9.2). Ca uniti de polimerizare
utilizeaz ribonucleozid trifosfai NTP: ATP, GTP, CTP,
UTP;
Factori proteici de transcriere:
A. Factori de transcriere generali proteine care recunosc
secvenele consens ale promotorului, punctul de iniiere a

Fig. 9.2. Activitatea ARN-polimerazei

transcripiei (+1) i interacioneaz cu ARN-polimeraza II.


Aceste proteine sunt implicate n iniierea i direcionarea,
elongarea i terminarea procesului la toate genele de clasa II.
B. Factori de transcriere specifici proteine care recunosc
secvene specifice ale promotorilor genelor ce se exprim n
anumite esuturi (de ex., receptorii hormonali steroidici, care
transport hormonii ce regleaz sinteza anumitor tipuri de
proteine). Sunt implicai n activarea anumitor gene
(decondensarea cromatinei, eliberarea promotorului i
activarea factorilor de transcriere generali).
149

Capitolul 9

Secvene ADN modulatoare ale transctipiei


ce regleaz rata i viteza de transcriere prin intermediul unor
proteine reglatoare: secvene intensificatoare (enhanceri) i
secvene atenuatoare (silenceri). Aceste secvene pot fi
localizate n regiunea promotorului sau n afara genei, chiar la o
distan considerabil.
Mecanismul transcrierii
Transcripia este un proces ce se desfoar n mai multe
etape: iniierea, elongarea, terminarea. Produsul primar al
transcripiei este o molecul de ARNm-precursor. Aceast
molecul este rezultatul polimerizrii ribonucleotidelor dup
principiul complementaritii de pe catena 3'5' (catena
anticodogen) a moleculei de ADN.
Iniierea. Un factor decisiv pentru iniierea procesului de
sintez a ARN este recunoaterea primului nucleotid care va fi
citit (+1). Punctul de start al transcripiei este determinat de
poziia secvenelor consens ale promotorului, iar ARNpolimeraza este responsabil doar de sinteza ARN. Promotorul
i punctul de start al transcripiei sunt recunoscute de factorii
proteici de transcripie (pentru iniierea transctipiei se formeaz
un complex din circa 20 proteine diferite). Pentru recunoaterea
promotorului genei care va fi transcris este necesar
decompactizarea secvenelor respective de ADN, care este
nrulat n jurul unor octamere de histone formnd nucleozomul.
Pentru a se realiza transcripia unei catene de ADN, aceste
structuri se modific, lund o dispoziie liniar, prin desfacerea
celor dou uniti simetrice ale miezului nucleozomului.
Moleculele histonice rmn ataate numai la una din catene,
permind desfacerea local a celeilalte catene de ADN i, deci,
producerea transcripiei. Aceasta se realizeaz cu ajutorul
factorilor specifici de transcripie.
Iniierea transcripiei se caracterizeaz prin succesiunea
urmtoarelor evenimente (fig. 9.3).
150

Capitolul 9

1. Formarea complexului de iniiere a transcripiei:


ataarea la promotor a factorilor specifici de transcriere;
legarea factorului de transcripie TFIID (TBP) la boxa
TATA (TF Transcription Factor, II gene clasa II;
TBP TATA Binding Protein);
legarea factorului de transcripie TFIIA proximal, care
stabilizeaz complexul TBP-boxa TATA;
n faa factorului TBP se ataeaz factorul TFIIB, care
avnd activitate ATP-azic, ajut la denaturarea ADN
fcnd posibil citirea matriei de ctre ARN-polimeraza
II;
pentru meninerea complexului de iniiere n stare activ
TBP interacioneaz
cu o protein intensificatoare
aducnd enhancerul lng promotor (fig.9.4).

Fig. 9.4. Interaciunea dintre enhancer i complexul de


iniiere

2. Ataarea la complexul proteic a enzimei ARN polimeraza


II, care este activat de factorul TFIIF. TFIIF ndeplinete
i funcia de helicaz ATP-dependent, denaturnd local
ADN-ul;
transcripia ncepe dup ataarea factorilor TFIIE i
TFIIH, care permite ARN-polimerazei s alunece de-a
lungul matriei;
are loc citirea primului nucleotid (+1) i incorporarea
primului ribonucleotid, care de regul este un ATP
151

Capitolul 9

3. Iniierea se termin prin formarea primei legturi


fosfodiesterice n molecula de ARN.
Regiunea de ADN denaturat formeaz complexul deschis
(fig. 9.2).

Fig. 9.3. Complexul de iniiere a translaiei

152

Capitolul 9

Elongarea. Primul eveniment al acestei etape


const n modificarea configuraiei complexului proteic de
transcripie. Astfel, se elibereaz de la ARN-polimeraza II
factorii TFIIB i TFIIE rmnnd ataat TFIIF i FTIIH.
Factorul TFIIH este considerat factor de elongare, avnd
activitate de helicaz ATP-dependent, kinaz i poate fi
implicat n repararea ADN.
ARN polimeraza II citete catena de ADN 3'5' i
polimeraz n direcia 5'3' cu o rat de 30 nucleotide/sec.
La nceputul fazei de elongare la ARN- polimeraz se
ataeaz TFIIS care deine rol n prevenirea eliberrii premature
a ARN-polimerazei. n spatele ARN-polimerazei, de-a lungul
catenei de ARN se deplaseaz un factor proteic de eliberare.
La promotor rmn ataate urmtoarele proteine: FTIID,
FTIIA i proteina intensificatoare. Acestea sunt necesare pentru
ataarea altor molecule de ARN-polimeraz II care vor sintetiza
alte lanuri de ARN, pn la recepionarea semnalelor reglatoare
care blocheaz transcripia.
Terminarea transcripiei. Cnd ARN-polimeraza ajunge
la secvena terminatorului transcrie i secvena palindromic.
Molecula de ARN imediat formeaz o bucl care ncetinete
deplasarea ARN-polimerazei (fig. 8.2). n consecin,
polimeraza este ajuns de factorul de eliberare ceea ce
condiioneaz disocierea complexului ADN, ARN, ARNpolimeraz.
Processingul ARN
Produsul primar al transcripiei nu poate fi imediat
transportat n citoplasm. n primul rnd, ARNm precursor
conine secvene necodificatoare (introni), n al doilea rnd
poate fi uor scindat de ARN-aze. Pentru a preveni degradarea,
are loc prelucrarea capetelor moleculei, iar intronii sunt
nlturai. Totalitatea reaciilor de modificare a ARNm precursor
poart denumirea de maturizarea ARNm sau processing.
153

Capitolul 9

Aceste procese se desfoar n nucleu i sunt


catalizate de enzime specifice. Etapele processing-ului sunt
urmtoarele: prelucrarea captului 5' (cap-are), prelucrarea
captului 3' (poliadenilare), nlturarea intronilor (splicing) (fig.
9.5).

Fig. 9.5. Etapele processing-ului genelor de clasa II

Modificarea capetelor moleculei de ARNm precursor


Prelucrarea captului 5'. Captul 5' al transcriptului
primar este modificat n timpul transcripiei. Dup sinteza unui
fragment de ARN cu lungimea 30 baze enzima guanilat
transferaza adaug o Guanin (GTP) metilat prin legtur 5'-5'
la primul nucleotid din ARN (de regul o adenin). Structura
7MeG5ppp5 N poart denumirea de CAP. De asemenea, pot fi
metilate i ultimele dou riboze n poziia 2' (fig. 9.6).
Funciile CAP-ului:
asigur
stabilitate moleculei de ARN datorit
legturii nespecifice 5' - 5';
reprezint un situs de recunoatere pentru ribozomi n
iniierea translaiei.
Prelucrarea captului 3'
Captul 3' al moleculei de ARNm precursor conine
secvena palindromic n form de bucl. La 11-30 baze de la
154

Capitolul 9

situsul AAUAAA
molecula este clivat de o
endonucleaz. O alt enzima poli(A)-polimeraza adaug 100200 resturi de acid adenilic. ARNm ce codific histonele nu
este supus poliadenilrii.
Funciile secvenei poli-A:
asigur stabilitatea captului 3' al moleculei de
ARNm;
controleaz pasajul moleculei de ARNm din nucleu
n citoplazm.

Fig. 9.6. Structura CAP-ului ARNm

Splicing-ul
nlturarea intronilor din ARNm precursor i unirea
exonilor are loc n nucleu, cu participarea unui complex
enzimatic denumit splicesom. Componentele acestui complex
sunt reprezentate de moleculele mici de ribonucleoproteide
155

Capitolul 9

nucleare (snRNP), notate U1 U6. Intronii sunt


recunoscui dup secvena GU la captul 5' i secvena AG la
extremitatea 3'. Procesul se desfoar n mai multe etape (fig.
9.7):
la situsul GU a intronului se leag ribonucleoproteida U1;
ribonucleoproteida U2 se unete la nivelul unei adenine din
interiorul intronului (situsul buclei);
ribonucleoproteidele U4,U5,U6 se asociaz cu U1, i U2
formnd o bucl. Bucla se formeaz prin unirea captului 5'
al intronului cu adenina printr-o legtur nespecific 5'2';
eliberarea ribonucleoproteidei U4 din complex duce la
clivarea captului 3' al intronului. Intronul este nlturat sub
form de lasou mpreun cu proteinele U2, U5, U6;
formarea legturilor fosfodiesterice 3' 5' ntre capetele
exonilor.

156 splicing-ului ARNm


Fig. 9.7. Mecanismul

Capitolul 9

Ca rezultat al splicing-ului se formeaz un


ARNm, ulterior va fi transferat n citoplasm i va servi matri
pentru sinteza proteinei.
La eucariote exist mai multe tipuri de splicing.
Splicing constitutiv prin care se nltur toi intronii, iar
exonii sunt unii n ordinea n care erau dispui n gen.
Splicing alternativ are loc prin selecia exonilor i/sau
eliminarea difereniat a intronilor. Astfel, de pe un ARNm
precursor pot fi obinute mai multe variante de ARNm i
respectiv mai multe tipuri de proteine. n diferite esuturi
i/sau la diferite perioade de dezvoltare pot fi sintetizate
proteine diferite de pe aceeai gen (fig. 9.8).

Fig. 9.8. Splicing-ul alternativ al ARN pentru tropomiozine

157

Capitolul 9

Splicing prin amestec de exoni (exon shuffling)


moleculele de ARNm se pot forma prin schimbarea ordinii
exonilor. Se ntlnete foarte rar.
Trans-splicing formarea unei molecule de ARNm din
cteva molecule de ARNm precursor, sintetizate de pe gene
diferite. Se ntlnete la tripanosome, la unele nematode i
trematode.
Editarea ARN
n urma processing-ului n ARNm pot fi adugate,
nlocuite sau nlturate unele nucleotide. Acest fenomen decurge
n nucleu cu participarea unor enzime specifice. Ca rezultat
informaia din molecula de ARNm nu coincide cu cea
corespunztoare din ADN. Procesul de modificare a secvenei
codificatoare din ARNm poart denumirea de editarea ARN.
Particularitile transcripiei genelor de
clasa I i clasa III
Genele de clasa I codific sinteza ARNr. Ele formeaz
uniti transcripionale repetate de mai multe ori n tandem cu
localizare n diferii cromozomi (vezi fig. 8.8). Aceste gene
formeaz organizatorii nucleolari. ARN-polimeraza I transcrie
o molecul de ARNr precursor cu coeficientul de sedimentare
45S. Ca rezultat al autosplicing-ului se formeaz trei fracii de
ARNr: 5,8S, 18S, 28S.
Genele de clasa III codific pentru sinteza ARNt i
ARNr 5S. La fel ca i genele de clasa I sunt organizate n uniti
transcripionale mari. Ca rezultat al processing-ului
transcriptului primar se obin molecule de ARNt i ARNr 5S.
Reglarea transcripiei la eucariote
Controlul transcripional determin posibilitatea de a fi
sau a nu fi transcris o gen. Pentru nelegerea mecanismelor de
control ale transcripiei genelor eucariote este necesar s se
cunoasc cteva particulariti ale genomului eucariot.
158

Capitolul 9

ADN are o structur supramolecular realizat


prin interaciunea puternic cu diferite tipuri de proteine. n
aceast stare transcripia este imposibil fiind blocat
nespecific de histone. Unele secvene sunt metilate, fenomen
asociat cu inactivarea ADN-ului.
La eucariote cea mai mare parte a genomului nu este
transcris. Majoritatea secvenelor ADN sunt repetitive,
necodificatoare (spaceri, ADN-satelit).
ntr-un organism eucariot pluricelular, celulele nu doar cresc
i se divid, dar i suport modificri morfologice, fiziologice
i metabolice, adic se difereniaz. Pentru aceasta este
necesar o expresie difereniat a genelor.
Programul general al dezvoltrii ontogenetice a unui
organism asigur desfurarea etapelor de baz ale vieii
pn la btrnee i moarte. Fiecare etap are anumite
particulariti i o anumit durat, iar existena unui individ
este limitat. Astfel, expresia genelor este difereniat i n
funcie de perioada de dezvoltare.
Transcrierea mesajului genetic se realizeaz n nucleu. De
aceea, ARNm pentru a fi transportat n citoplasm unde se
afl ribozomii necesit anumite modificri.
La eucariote ARNm poart informaia pentru sinteza unui
singur lan polipeptidic. Astfel, este necesar un mecanism de
reglare a expresiei genelor ce controleaz un lan metabolic.
Nivelele de reglare ale transcripiei
Controlul pretranscripional const n decondensarea
cromatinei,
modificarea
histonelor, ce permite accesul
factorilor transcripionali i denaturarea ADN. Au loc
demetilarea i schimbrile conformaionale n molecula de ADN
pentru asigurarea intreaciunii cu proteinele reglatoare.
Controlul iniierii transcripiei. Pentru iniierea
transcripiei este necesar activarea promotorului genei-int.
Elementele promotorului funcioneaz ca modul n reglarea
159

Capitolul 9

expresiei genei. Unele elemente promotoare (secvena


TATA) sunt absolut necesare pentru iniierea transcripiei. n
schimb, alte elemente stimuleaz sau mpiedic transcripia
genei. Acestea sunt secvene de ADN, de care se leag proteine
specifice reglatoare (fig. 9.9). Dac transcripia a fost activat de
legtura dat, elementul promotor se numete element de reglare
pozitiv, iar proteina este o protein reglatoare pozitiv. Dac
transcripia este blocat, elementul promotor se numete element
de reglare negativ.

Fig. 9.9. Elementele reglatoare i modulatoare implicate n


controlul transcripie

Elementul reglator al promotorului este specializat


pentru fiecare gen pe care o controleaz, pentru c se leag de o
molecul semnal. O gen particular poate avea unul sau mai
multe elemente promotoare deoarece, n condiii diferite, pot
exista una sau mai multe proteine reglatoare care controleaz
expresia acestei gene (fig. 8.3).
Un model prin care elementele stimulatoare (enhancerii)
influeneaz transcripia de la distan este urmtorul: o protein
specific reglatoare se leag de secvena stimulatoare. ADN-ul
formeaz apoi o bucl n aa fel, nct proteina reglatoare, legat
de stimulator, s poat interaciona cu proteinele reglatoare i cu
ali factori asociai elementelor promotoare. Aceast
160

Capitolul 9

interaciune dintre proteine determin activarea sau


supresia transcripiei (fig. 9.4; fig. 9.9).
De aceea, efectul unui element de reglare asupra
transcripiei depinde de combinaia diferitelor proteine legate.
Deci, combinaiile particulare dintre proteinele reglatorii
controleaz, n mod specific, transcripia genelor n diferite
tipuri de celule. Aceasta se numete reglare genic combinativ.
Genele care controleaz acelai proces i/sau lan
metabolic, de regul, conin secvene reglatoare similare i sunt
recunoscute de aceleai proteine reglatoare. De exemplu, genele
implicate n dezvoltarea embrionar conin o secven comun
numit homeobox. Astfel de gene sunt localizate pe acelai
cromozom n ordinea conectrii lor, formnd astfel o familie de
gene. Un al exemplu de expresie difereniat a genelor n timp i
spaiu este sinteza hemoglobinei la om (fig. 9.10). Hemoglobina
embrionar este format din dou polipeptide i dou i se
sintetizeaz iniial n sacul vitelin. Hemoglobina fetal ncepe s
se sintetizeze n ficat i n splin din dou polipeptide i dou
. La nou-nscut i adult sinteza hemoglobinei se transfer n
mduva osoas unde sunt sintetizate adevratele catene i ,
cu un % mic de polipeptide de tip .

Des. 9.10. Organizarea familiilor de gene pentru -globine


(pe cromozomul 16) i -globine (pe cromozomul 11)

161

Capitolul 9

Controlul sintezei ARN. Dup formarea


complexului de iniiere a transcripiei ARN-polimeraza II
sintetizeaz molecula de ARN pn la situsul de terminare.
Viteza i rata de transcripie este determinat de configuraia
promotorului i de interaciunea cu proteinele reglatoare.
Sfritul procesului este semnificat prin secvena palindromic
i formarea buclei n molecula de ARN.
Controlul posttranscripional. Pentru prevenirea
degradrii ARN i transportul lui n citoplasm are loc CAP-area
i poliadenilarea capetelor. Varianta splicing-ului decide
structura proteinei ulterior sintetizate. Astfel de pe aceeai gen
pot fi sintetizate diferite proteine. n consecin o gen poate
controla diferite perioade ontogenetice sau diferenierea
celular.
Controlul transferului ARNm n citoplasm. ARNm
produsul processing-ului i splicing-ului se asociaz cu proteine
speciale, inracioneaz cu receptorii complexului porului nuclear
i se transfer din nucleu n carioplasm.
Transcripia la procariote
n capitolul 8 este descris structura i organizarea
molecular a genelor la procariote. Unitatea transcripional este
reprezentat de operon care este format din secvene reglatoare
(promotor/operator, terminator) i secvene codificatoare (gene
structurale) lipsite de introni(fig. 8.9).
La procariote exist o singur ARN-polimeraz care are
aceleai proprieti ca i ARN-polimerazele de la eucariote.
Structural, ARN-polimeraza procariotelor reprezint o
holoenzim format din mai multe subuniti funcionale. Astfel,
ea recunoate promotorul, este responsabil de denaturarea i
renaturarea ADN, catalizeaz polimerizarea ribonucleotidelor.
Moleculele de ARNm sunt policistronice i utilizate imediat ca
matri pentru sinteza proteinelor. Deoarece nu sunt protejate de
CAP, moleculele ARNm degradeaz rapid.
162

Capitolul 9

Transcripii de pe genele pentru ARNt i ARNr


sunt procesai, formnd molecule mature de ARNt i ARNr (fig.
8.11).
Reglarea transcripiei la procariote
Particularitile ciclului vital al organismelor procariote,
ct i organizarea simpl a aparatului genetic fac ca reaciile de
activare/inactivare a sintezei proteinelor s decurg rapid. Se
disting dou tipuri de control al genelor: control negativ i
control pozitiv.
Controlul negativ este mecanismul de inactivare a
genelor printr-o protein represor. Proteina represor este
controlat de o gen reglatoare, plasat n afara operonului. Ea
se unete la regiunea promotorului i mpiedic deplasarea
ARN-polimerazei. Proteina represor poate fi inactivat de un
inductor (factori de natur neproteic care poate fi substratul).
Controlul pozitiv reprezint mecanismul de activare a
genelor cu ajutorul unei proteine activator. De regul,
activatorul este n stare inactiv i nu are afinitate fa de
promotor. Inductorul condiioneaz legarea proteinei activator
la promotorul operonului ce va fi transcris. n aa mod ARNpolimeraza recunoate regiunea promotorului i efectueaz
transcripia.
Verificarea cunotinelor
1. Definii noiunile: expresia genei, transcripie, promotor,
exon, intron, factor de transcripie, boxa TATA, ARN
polimeraza II, transcript primar, ARN precursor, ARN
mesager, splicing, splicesom, enhancer, silencer, control
pozitiv, control negativ.
2. Care sunt etapele transcripiei genelor structurale?
3. Cum se formeaz complexul de iniiere a transcripiei?
4. Care sunt particularitile activitii ARN polimerazei II?
5. n ce const processingul ARNm-precursor?
6. Care sunt nivelele de control al transcripiei la eucariote?
163