Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
Interactiunile dintre variatele sisteme celulare precum si interactiunile dintre diferitele tipuri de
ADN, ARN si biosinteza proteinelor;
Tehnicile moleculare cu larga aplicabilitate, in practic toate domeniile biologiei,sunt printre altele:
Istoric
Anul
Autorul (autorii)
1868 Fredrich Miescher
1875
O.Hertwig
18821885
1902
1909
E.Strasburger,
W.Flemming
Archibald Garrod
W.Johannsen
Edward M.East
1910
1911
1912
1927
Alfred Sturtevant
Herman J.Muller
1928
Frederick Griffith
1931
1941
1944
1946
1950
Harriet Creighton,
Barbara McClintock
George Beadle, Edward
Tatum
Oswald Avery, Collin
MacLeod, Maclyn
McCarthy
Joshua Lederberg,
E.Tatum
Barbara McClintock
Evenimentul tiinific
Izoleaz nucleina din nuclei
Arat c nucleul este necesar pentru fecundare i pentru diviziunea
celular, el coninnd astfel informaia necesar pentru aceste fenomene
Arat c nucleii conin cromosomi
Identific prima boal genetic uman
Introduce noiunea de gen
Elucideaz rolul reproducerii sexuate n evoluie
Identific prima gen sex-linkat, white, care determin culoarea alb a
ochilor de Drosophila melanogaster
Propune explicaia linkage-ul genetic: genele sunt plasate pe acelai
cromosom
Realizeaz prima hart genetic
Evideniaz faptul c radiaiile X produc mutaii
Descoper transformarea genetic la bacterii i numete agentul
responsabil drept principiu transformant
Arat c recombinarea genetic la porumb se datoreaz unor schimbri
fizice la nivelul cromosomilor omologi
Propun ipoteza o gen o enzim
Demonstreaz c principiul transformat al lui Griffith este reprezentat de
ADN
Descoper procesul de conjugare la bacterii
Explic rezultatele obinute n experimentele la porumb prin intervenia
unor elemente genetice transpozabile
1952
1953
1957
1958
1959
1961
1965
1966
1972
1973
1975
1977
1983
1986
1989
1990
1994
1995
1996
1997
1997
1998
1999
2000
2001
Proiectul Genomului
Uman
2002
K.Wuthrich
2002
2007
2009
2011
S.Brenner, R.H.Horvitz,
J.E.Sulston
Mario R. Capecchi, Sir
Martin J. Evans i Oliver
Smithies
Elizabeth H. Blackburn
Carol W. Greider i Jack
W. Szostak
Bruce Beutler (SUA),
Jules Hoffmann
(Luxemburg)
organizare simpl (959 celule somatice dintre care 302 sunt neuroni grupai n 118 tipuri)
un numr total de 131 celule sufer un proces de apoptoz (moarte celular programat) n
cursul dezvoltrii C.elegans ceea ce permite identificarea genelor de controleaz acest proces
precum i evidenierea consecinelor mutaiilor acestor gene, datele obinute putnd fi apoi
comparate cu cele obinute la animalele superioare.
Drosophila melanogaster
-
Organism eucariot de dimensiune mica (3,5-4 mm) care este folosit ca sistem biologic model
Numar mare de musculite care se formeaza intr-o perioada scurta de timp: 10-14 zile (timpul n
Ofer numeroase avantaje pentru evidentierea si studierea modului n care are loc
diferentiere celulara,
Mus musculus
Este un mamifer
3
Se crete uor n laborator, se reproduce rapid obinndu-se mai muli descendeni de la acelai
cuplu ceea ce permite studiul apariiei i transmiterii anumitor nsuiri
Prezint un grad nalt de omologie cu organismul uman, multe dintre genele murine avnd
omologie structural i funcional cu gene umane
n prezent exist numeroase organisme mutante, obinute prin tehnici clasice de ameliorare (de ex.
Immunodeficient nude mice, fr pr i timus ceea ce nseamn cu el nu produce limfocite T i nu
manifest rspuns celular imun sunt utili pentru cercetri n imunologie i transplant;
Severe combined immunodeficient (SCID) la care sistemul imunitar lipsete aproape complet) sau
prin tehnici de inginerie genetic: oareci de dimensiuni foarte mari ca urmare a integrrii n
genomul lor a genei pentru hormonul de cretere de la obolan;
Oncomice la care a fost activat o oncogen ceea ce determin o inciden crescut a apariiei
cancerului;
knockout mice la care o gen specific a fost inactivat animalele sunt utilizate n studiile legate
de stabilirea funciilor unei gene sau a produsului codificat de aceasta sau pentru simularea unei
boli umane)
oule fertilizate sunt transparente, iar dezvoltarea embrionar se face rapid, primordiile
organelor aprnd n primele 36 ore dup fertilizare;
dungarea apare dup 48-72 ore de la fertilizare i depinde de temperatura mediului ambiant
Arabidopsis thaliana
Este o planta cu genom de dimensiuni mici (27.000 gene), secveniat n anul 2000
Poate fi uor transformat genetic cu diverse gene, inclusiv gene marker, care permit studii legate
de localizarea i funciile unor componente celulare
Escherichia coli
Constituie sistem model pentru stabilirea interaciunilor dintre diferii compu i chimici (de
ex.antibiotice) i componentele celulare etc
s conin ntr-o form stabil informaia necesar pentru determinarea structurii celulare a
organismului, pentru realizarea funciilor, a dezvoltrii i reproducerii;
s se replice cu mare acuratee astfel nct celulele fiice rezultate n urma diviziunii s conin
aceeai informaie ca i celula parental;
Pentru stabilirea faptului ca ADN este substanta ereditara responsabil pentru caracteristicile ce
sunt transmise de la o generaie la alta, au fost necesare mai multe experimente dintre care 2 au fost
mai semnificative:
1. Experientele medicului englez Frederick Griffith, efectuate n 1928 cu
Diplococcus
Unul virulent notat cu S deoarece pe medii cu agar formeaza colonii netede (smooth) celula sa
fiind inconjurata de o capsula formata din polizaharide astfel ca pot aparea diferite tipuri de
pneumococi notate SI, SII si SIII;
Tipul tipul nevirulent- nu prezinta capsula formand colonii rugoase si a fost notat cu R
(rough=aspru, rugos).
In mod spontan, prin mutatie, tipul virulent S poate deveni cu o frecventa mica tipul avirulent R (SI- RI,
SII RII, SIII - RIII)
Urmarind sa obtina noi tipuri de vaccinuri prin injectare de pneumococi la soareci, Griffith a realizat
diferite variante experimentale in care a injectat cultura de pneumococi in plamanii soarecilor.
Infectarea oarecilor cu pneumococi s-a realizat n diferite variante:
cu un amestec de bacterii de tip RII cu suspensie bacterian de tip SIII inactivat prin fierberesoarecii mor.
In ultima variant experimental rezultatul a fost: moartea oarecilor inoculai i detectarea bacteriilor
virulente de tip S alturi de cele de tip R , desi fiecare in parte nu determina moartea animalelor.
Acest fapt a condus la concluzia c
6
anumite proprieti ale bacteriilor de tip S omorte prin tratament termic au fost transferate
bacteriilor avirulente de tip R, acestea devenind capabile de a produce polizaharide capsulare.
Griffith descoperea astfel un fenomen biologic nou acela de transformare bacteriana pe care nu l-a
putut explica cauzal. El a realizat doar ca intr-un fel sau altul in prezenta resturilor de pneumococilor
virulenti de tip SIII, omorati prin fierbere, pneumococii vii nevirulenti RII se transforma in pneumococi
de tip SIII.
Iniial, componenta bacterian responsabil de transformare a fost denumit principiu transformant
2. Experimentele decisive in elucidarea naturii agentului transformant au fost cele realizate
efectuate n 1944 de grupul de cercettori condus de Avery (Oswald Avery, Collin MacLeod i
Maclyn McCarty), s-a demonstrat, fr echivoc, natura acestuia: acidul dezoxiribonucleic (ADN).
In acest caz, cercettorii au utilizat un lizat celular de la pneumococi viruleni de tip SIII pe care
l-au tratat cu diferite tipuri de enzime care au degradat:
fie proteinele,
fie polizaharidele,
fie lipidele,
fie acizii nucleici.
Lizatul tratat cu cte un tip de enzim a fost amestecat cu pneumococi aviruleni de tip RII iar
amestecul a fost plasat pe un mediu de cultur corespunztor.
In urma cultivrii diferitelor variante experimentale au fost obinui pneumococi viruleni de tip SIII,
excepie fcnd situaia n care lizatul a fost tratat cu enzimele ce degradeaz n mod specific ADN.
Concluzia acestor experimente a fost aceea c ADN este purttorul informaiei genetice.
Descoperirea acizilor nucleici dateaz din anul 1868 cnd chimistul elveian Friedrik Miescher a
izolat din nuclei o substan cu caracter acid pe care a denumit-o nuclein.
ADN i ARN sunt molecule complexe, polinucleotidice, formate prin unirea unui numr mare de
uniti monomere, numite nucleotide.
O nucleotid reprezint unitatea structural fundamental a acizilor nucleici, fiind alctuit din
trei componente:
Fiecare tip de acid nucleic conine patru tipuri de nucleotide, care se deosebesc dup natura bazelor
azotate care intr n compoziia lor:
adenina (A), guanina (G), timina (T) i citozina (C), n structura ADN, respectiv
adenin (A), guanin (G), uracil (U) si citozina (C), n structura ARN.
n afara acestor baze comune sau obinuite n structura ADN al unor bacteriofagi au mai fost
semnalate baze azotate modificate cum ar fi: 2-aminoadenina, 5-hidroximetilcitozina, 5hidroximetiluracil, 5-hidroxipentiluracil, 5-metilcitozina i altele.
Denumirea celor dou tipuri de acizi nucleici reflect de fapt natura pentozei prezent n structura
lor.
In mod convenional, pentru a desemna nucleotidele ce alctuiesc acizii nucleici, se utilizeaz prima
liter a fiecrei baze azotate specifice: A, T, C, G pentru ADN, respectiv A, U, C, G pentru ARN.
Combinarea dintre o baz azotat i pentoz se realizeaz ntre carbonul 1' al pentozei i atomul de
azot din poziia 9 sau 1 din structura bazelor purinice, respectiv pirimidinice prin legatura
denumit -N-glucozidic. In urma acestei legturi se formeaz nucleozidele.
Acidul fosforic se afl sub form de ortofosfat conferind moleculei caracterul acid i numeroase sarcini
negative.
In vivo, la eucariote sarcinile negative sunt neutralizate de histone n timp ce la procariote neutralizarea
se face cu ajutorul unor proteine asemntoare histonelor (histone-like proteins).
Radicalul fosforic se ataeaz la nivelul carbonului 5 al pentozei din nucleozide ceea ce are ca
rezultat formarea nucleotidelor.
10
Rezult din succesiunea celor patru deoxinucleotide specifice care intr n alctuirea lui i
stabilesc legturi fosfodiesterice covalente 3'-5'.
Aceste legturi se stabilesc ntre gruparea OH din poziia 3' a moleculei de deoxiriboz a unei
nucleotide i gruparea OH din poziia 5' a deoxiribozei din nucleotida adiacent, prin intermediul
gruprii fosfat
11
Rezult din asamblarea coaxial a dou catene polinucleotidice prin nfurarea lor, una n jurul
celeilalte i cu orientare spre dreapta.
Elaborarea modelului structurii secundare a ADN de ctre James Watson i Francis Crick (1953)
este considerat ca unul dintre cele mai importante evenimente care au stat la baza evoluiei
biologiei moleculare.
Imaginile obinute de Franklin cu diferite tipuri de ADN erau foarte asemntoare, indiferent de
proveniena lor, n felul acesta demonstrndu-se existena unui model molecular unic pentru
macromoleculele de ADN.
Datele obinute a aceasta au reprezentat dovada experimental necesar modelului de structur al
ADN elaborat de Watson i Crick.
12
Cteva date experimentale anterioare au susinut elaborarea modelului de structur secundar, dintre care
sunt de amintit aa numitele legi ale lui Chargaff:
http://www.youtube.com/watch?v=qy8dk5iS1f0
STRUCTURA ARN
In cazul ARN, majoritatea moleculelor de acest tip sunt monocatenare, prezentnd structur primar
rezultat prin asamblarea ribonucleotidelor prin legturi fosfodiesterice.
Structura primar a ARN este reprezentat de ordinea ribonucleotidelor din monocatena sa.
13
In anumite cazuri, moleculele de ARN pot prezenta i structur secundar (ex. ARNt- vezi figura de
mai jos) care se refer la formarea unor duplexuri n interiorul monocatenei ca urmare a stabilirii de
legturi de hidrogen ntre regiuni complementare ale acesteia.
14