REGLAREA EXPRIMRII GENELOR LA EUCARIOTE

La eucariote reglarea genetic are un caracter mult mai complex deoarece:

- materialul genetic este complexat cu histone, pentru a forma fibra de cromatin;
- reglajul genetic la eucariote este mai complex din cauza existenei genelor n mozaic, astfel
c sinteza ARN se realizeaz n mai multe etape prin care se elimin intronii;
- reglajul genetic la eucariote este afectat de faptul c sinteza proteic se realizeaz n
citoplasm, iar ARNm trebuie s migreze din nucleu n citoplasm, la locul sintezei
proteice;
- reglajul genetic la eucariote are un caracter mai complex din cauza unei cantiti foarte mari
de ADN n nucleu, din care ns numai o parte este informaional.
La eucariote, genele nu sunt organizate n operoni, motiv pentru care reglajul genetic se
realizeaz la nivelul genelor individuale. Ca urmare, fiecare molecul de ARNm poart
mesajul genetic pentru o singur caten polipeptidic el fiind monocistronic.
ADN de la eucariote este permanent complexat de histone care, pe lng rolul lor structural de
a asigura stabilitatea fibrei de cromatin, joac i rol de represori nespecifici generalizai, astfel c
genele se afl ntr-o permanent stare represat.
Pentru a funciona, genele trebuie s fie induse s funcioneze, atunci cnd necesitile celulei o
cer. Activarea genelor se realizeaz cu ajutorul proteinelor nonhistonice. Deoarece la eucariote
majoritatea genelor sunt inactivate n orice moment, reglajul genetic se realizeaz nu prin blocarea
activitii lor (represie) ci prin activarea unor anumite gene (inducie), activarea i inactivarea avnd un
caracter reversibil.
La eucariote se poate spune c exist dou tipuri de reglare a activitii genelor:
reglare pe termen scurt- se bazeaz pe mecanime moleculare reversibile, reprezentate
de modificri n activitatea unor gene, i
reglare pe termen lung- care este de regul ireversibil i implic fenomene legate de
diferenierea celular ce au loc n cursul dezvoltrii ontogenetice.

1
 REGLAJ PE TERMEN SCURT

Reglarea activitii genelor se poate realiza la mai multe nivele, evidente n cursul
citodiferenierii:

- la nivel transcripional
- la nivelul maturrii ARNm
- la nivelul transportului ARNm n citoplasm
- la nivelul translaiei mesajului genetic.
- la nivelul degradrii ARNm
- Reglaj prin intermediul hormonilor

Reglarea activitii genelor se poate realiza la mai multe nivele, evidente n cursul
citodiferenierii:
1. Reglaj genetic la nivel transcripional. La eucariote ca i la procariote, acesta este nivelul cel
mai important la care se realizeaz controlul activitii genelor. Controlul transcripional
determin care dintre gene este transcris la un moment dat i rata cu care se realizeaz
procesul de transcriere. Genele de la eucariote conin secvena promotor i , de cele mai multe
ori o secven activatoare (enhancer), ele reprezentnd elemente reglatoare majore.
Majoritatea genelor de la eucariote sunt inactive (tcute) pn n momentul n care sunt activate
n mod specific. O prim condiie pentru ca procesul de transcriere s poat fi iniiat este ca
nucleosomii s poat fi ndeprtai de la nivelul regiunii de interes.
Histonele, la rndul lor, pot s influeneze proprietile de transcriere ale ADN prin modificri
chimice (fosforilare, acetilare, metilare) afectnd astfel interaciunea ADN- histone. Proteinele
nonhistonice ndeplinesc rolul unor activatori specifici ai genelor asigurnd transcrierea
difereniat a genelor , ele interacionnd cu histonele pe care le ndeprteaz de la nivelul
genelor ce rmeaz a fi transcrise.
Reglarea transcrierii genelor la eucariote se mai poate realiza i prin procesul de
metilare al ADN. Astfel, imediat dup replicare, o parte din bazele azotate (n special citozina)
sufer un proces de metilare (prin intervenia unei metil transferaze). Gradul de metilare al
citozinei variaz n funcie de specie. Astfel, la mamifere de exemplu, 70 % din ADN este
metilat.. S- a constatat c ADN-ul genelor inactivate este mai puternic metilat dect cel al
genelor active. Metilarea citozinei poate marca macromolecula de ADN n mod stabil, el fiind
transmis celulelor fiice la fiecare diviziune i poate ndeplini funcii multiple, incluznd
2
 meninerea structurii cromosomului, controlul transcripiei, transformarea oncogenic etc.
Metilarea unor anumite secvene de ADN este asociat cu inhibiia transcripiei, genele
respective fiind ns inactivate n mod reversibil.
2. Reglajul genetic la nivelul maturrii ARNm. Acest tip de reglare funcioneaz n procesul de
maturare al ARNm. Dou evenimente reglatoare exemplific acest nivel de reglare: alegerea
situsului de poliadenilare (adugarea cozii poliA) i a celui de eliminare a intronilor i
asamblare a exonilor.
Datorit structurii discontinue a genelor (exoni + introni), se sintetizeaz ARNm precursor
(premesager) ce conine att secvene informaionale ct i secvene non-informaionale.
Prelucrarea acestei molecule (splicing) pentru a obine ARNm matur, funcional presupune
parcurgerea mai multor etape n care sunt implicate molecule de ARNsn precum i anumii
factori proteici.
S-a evideniat faptul c n anumite situaii prelucrarea ARNm se poate realiza ntr-o asemenea
manier nct permite o asortare variat a ezonilor din aceeai gen, proces denumit prelucrare
alternativ (alternative splicing).
3. Reglajul genetic la nivelul transportului ARNm n citoplasm. Odat prelucrat, ARNm
migreaz din nucleu n citoplasm, la nivelul porilor din membrana nuclear. Cercetrile au artat c
numai o mic parte din ARNm sintetizat n nucleu, migreaz n citoplasm, cea mai mare parte din
ARNm fiind degradat n nucleu cu ajutorul unor enzime. Reglajul genetic este acela care decide ce
secvene de ARNm vor fi degradate n nucleu i care vor fi exportate n citoplasm, acolo unde se
realizeaz sinteza proteic. Este vorba de enzime diferite ce opereaz n tipuri variate de celule, fapt ce
determin ce sinteze proteice caracteristice vor realiza celulele respective.
4. Reglajul genetic la nivelul translaiei mesajului genetic. Const n faptul c nu toate moleculele
de ARNm matur migrate n citoplasm vor fi utilizate n procesul sintezei proteice.
5. Rglajul genetic la nivelul degradrii ARNm are rolul de a selecta moleculele de ARNm matur
migrate n citoplasm care vor fi degradate. n cazul genelor hemogobinei, de exemplu, ARNm are o
mare stabilitate n timp, astfel c el servete repetat pentru sinteza proteic.
La eucariotele superioare, reglarea pe termen scurt (la nivelul transcrierii genetice), este
n mare parte mediat de hormoni.
Un anumit hormon poate avea drept int una sau mai multe tipuri de celule, fiecare tip
rspunznd diferit la acelai hormon. Unii hormoni regleaz activitatea genelor influennd
transcrierea, traducerea sau funcionarea unor enzime cum este adenilat ciclaza.
De exemplu, cei mai muli hormoni polipeptidici i exercit efectele lor iniiale la nivelul
membranei celulelor int, stimulnd activitatea adenilat- ciclazei. Aceasta convertete ATP la AMPc
3
capabil s stimuleze sinteza genelor, ca i n cazul procariotelor. Hormonii steroizi acioneaz direct la
nivelul transcrierii genetice, fr intervenia AMPc, n timp ce ali hormoni pot afecta histonele
stimulnd astfel procesul de transcriere.
In cazul plantelor au fost identificate numeroase substane care au diferite roluri n controlul
creterii i dezvoltrii, ele fiind denumite hormoni vegetali.
Hormonii vegetali sunt de cinci tipuri:
-etilena,
-acid abscizic,
-auxine,
- citokinine i
-gibereline.
Ei sunt responsabili de realizarea unor activiti variate: de exemplu,
etilena induce coacerea fructelor, maturarea florilor i senescena plantelor, pe lng alte
activiti.
Giberelinele- la fel ca i hormonii steroizi animali, stimuleaz transcrierea i, n acest fel,
determin creterea cantitativ a anumitor proteine specifice implicate n anumite procese
majore de formare i difereniere celular.
Atunci cnd sunt aplicate plantelor giberelinele produc o serie de efecte, aa cum sunt cele
observate n cazul plantelor pitice(dwarf) la care determin creterea n nlime.
De asemenea, aceti hormoni stimuleaz procesul de germinare al anumitor tipuri de
semine.
Dei aciunea giberelinelor a fost intens studiat, pn n prezent nu s-au evideniat receptori
pentru aceti hormoni iar mecanismul molecular nu este pe deplin clarificat

Reglarea pe termen lung (Reglajul genetic la nivelul cromatinei)

Se realizeaz prin heterocromatinizarea sau condensarea mai pronunat a cromatinei
ceea ce conduce la o reducere sau chiar o blocare a funcionrii ADN ca matri pentru sinteza
ARN. Heterocromatina, puternic condensat, este prezent mai ales n celulele nalt difereniate care
sintetizeaz foarte puine proteine comparativ cu celulele nedifereniate.
La nivelul cromosomilor eucariotelor exist dou tipuri de heterocromatin, constitutiv
i facultativ, care sunt implicate n activitatea genelor.
Astfel heterocromatina constitutiv se gsete la nivelul regiunilor care nu sunt niciodat
exprimate (transcrise); acestea includ sateliii i au un rol structural pentru cromosom. Deseori,

4
secvenele condensate sunt concentrate la nivelul unor regiuni specifice, de obicei n jurul
centromerului, ele pstrnd aceeai configuraie n toate celulele organismului respectiv.
Heterocromatina facultativ reprezint cromatina condensat doar n anumite celule, n timp
ce n alte tipuri de celule regiunile corespunztoare sunt decondensate.
S-a dovedit faptul c, n celulele embrionare cantitatea de heterocromatin facultativ este mic n
timp ce n celulele specializate proporia sa crete foarte mult.
Aceasta nseamn c n cursul procesului de dezvoltare individual (ontogenetic) are loc
inactivarea prin heterocromatinizare a unui numr mare de gene.
Cel mai cunoscut exemplu de reglare prin heterocromatinizare de tip facultativ este
cromatina sexual ce reprezint unul dintre cromosomii X de la femelele de mamifere care se
inactiveaz la ntmplare (fie cel de origine matern, fie cel de origine patern), n mod definitiv.
Astfel, organismul femel poate fi considerat ca fiind un mozaic de clone celulare, fenomenul fiind
evident n cazul unor gene mutante localizate pe cromosomul X:
n cazul unor celule gena mutant se manifest fenotipic, n timp ce n altele nu (cele ce conin
cromosomul X heterocromatinizat).
Un exemplu este cel al pisicilor calico la care femelele au blana cu pete galbene i negre,
fiind heterozigote (Cy/CB), genele pentru culoarea blnii fiind localizate pe cromosomii X.
In cursul dezvoltrii ontogenetice n unele celule este inactivat cromosomul X pe care se
gsete gena Cy n timp ce n alte celule se inactiveaz cromosomul X ce conine gena CB.
Rezultatul este apariia unor pisici cu blana cu pete galbene i negre.
La masculi, din cauz c exist un singur cromosom X, fenomenul nu se realizeaz, ei fiind fie
complet negri fie galbeni
Ex de mai sus este un tip de Reglare pe termen lung care se realizeaz prin heterocromatinizarea
sau condensarea mai pronunat a cromatinei ceea ce conduce la o reducere sau chiar o blocare a
funcionrii ADN ca matri pentru sinteza ARN.
Heterocromatina, puternic condensat, este prezent mai ales n celulele nalt difereniate care
sintetizeaz foarte puine proteine comparativ cu celulele nedifereniate.
De exemplu, n leucocitele normale apar mase mari de heterocromatin sub forma unor blocuri
puternic condensate la periferia nucleului, n timp ce n cazul leucemiilor aceste aspecte sunt
absente, celulele trecnd n starea nedifereniat cu sinteze proteice intense i capabile de
diviziuni celulare rapide.
Heterocromatinizarea poate avea loc:
- la nivelul unor segmente cromosomale,
- a unor cromosomi ntregi (X de la femelele de mamifere) i
5
 - chiar a ntregului genom (ex. La Planococcus citri), cnd cromosomii de origine patern sunt
inactivi, formarea spermatozoizilor realizndu-se n urma diviziunii mitotice, ei fiind de 2
tipuri: unii funcionali i alii nefuncionali (conin cromosomii paterni inactivi).
-
CITODIFERENIEREA
Procesul de difereniere celular sau citodiferenierea este specific organismelor eucariote
pluricelulare, el referindu-se la modificrile structurale i funcionale pe care le sufer celulele ce
rezult (n urma unor diviziuni mitotice repetate) din celula-ou sau zigot.
La organismele eucariote, coninutul n ADN este acelai, indiferent de tipul celular, ceea ce nseamn
c diferenierea celular i dezvoltarea organismului reprezint rezultatul unor evenimente programate
genetic ce determin activarea sau represia genelor.

Studiile efectuate asupra dezvoltrii ontogenetice la Drosophila melanogaster i la nematodul

Caenorhabditis elegans au permis elucidarea unor aspecte legate de genetica dezvoltrii.
Fenomenul diferenierii celulare se realizeaz ntr-o ordine cronologic strict, dup un program
extrem de riguros a crui nerespectare conduce la modificri anormale ale organismului.
De exemplu, la om unde exist aproximativ 1013 celule, n cursul dezvoltrii ontogenetice are loc
diferenierea a peste 150 tipuri diferite de celule, deosebite ca form, mrime, structur sau
funcie.
Studiul diferenierii celulare la mamifere este dificil, motiv pentru care cercettorii au ales un sistem
model la care dezvoltarea embrionar s poat fi urmrit cu uurin, este reprezentat de cel de la
Drosophila melanogaster,

Avantajele alegerii datorndu-se urmtoarelor caracteristici:

genom de dimensiuni mici
numr mic de cromosomi (patru perechi) i existena cromosomilor politeni
prezint mai multe stadii larvare, dezvoltarea fiind prin metamorfoz (ou-larv-pup-
adult), ntregul proces de metamorfoz (dezvoltarea de la ou la adult- vezi figura)
dureaz aproximativ nou zile.

6
 Procesul de metamorfoz (ou-larv-pup-adult) la Drosophila

Reglarea procesului de citodifereniere, se realizeaz la niveluri diferite:

la nivelul cantitii de ADN i a replicrii materialului genetic,
al transcrierii i traducerii la nivel cromosomal sau al ntregului genom.

Astfel, dei se consider c toate celulele unui organism conin aceeai cantitate de ADN, s-a dovedit
c exist unele variaii ce se datoreaz unor procese de replicare difereniat:
suprareplicare a anumitor regiuni cromosomale i
subreplicarea altora (mai ales a regiunilor heterocromatice).

7
 In aceea ce privete genele implicate n controlul dezvoltrii la D.melanogaster, acestea au fost
identificate i studiate pe baza mutaiilor produse la nivelul lor, care au condus fie la apariia unor
structuri anormale fie la moartea organismului.
Aceste gene pot fi incluse n cel puin trei grupuri
- gene de origine matern: se exprim n cursul ovogenezei i sunt responsabile de gradientul
de proteine ce apare la nivelul oului i care sunt implicate organizarea spaial a embrionului
timpuriu
gene de segmentare: sunt exprimate dup fecundare la nivelul zigotului i determin
numrul i organizarea segmentelor corpului.
genele homeotice: se exprim dup genele segmentare i determin identitatea
fiecrui segment individual.
La plante
-exist diferene ntre cantitatea de ADN din meristeme i cea din diferite organe:
Astfel, la nivelul celulelor meristematice cantitatea de ADN este mai mic n timp ce n alte
organe, cum sunt cotiledoanele care sunt alctuite din celule nalt difereniate, cantitatea de ADN este
mai mare.
Diferenierea celular ce apare n cazul organismelor multicelulare se datoreaz nu numai interveniei
genelor menionate ci i unor mecanisme specifice de comunicare i semnalizare ce se realizeaz ntre
celule.
In aceste mecanisme sunt implicate o serie de proteine ce interacioneaz cu receptori caracteristici
aflai la suprafaa celulelor int.
In urma interaciunii dintre semnalul molecular i receptorul su specific sunt generate alte
semnale intracelulare care informeaz nucleul asupra necesitii stimulrii proliferrii celulare,
fenomen numit proces de transducie a semnalelor.
In realizarea acestui proces particip o serie de factori cu funcii distincte:
factori de cretere celular (de exemplu, factorul de cretere epidermic),
receptori membranari proteici,
transmitori citoplasmatici fosforilani,
factori nucleari de transcriere.
O mare parte a acestor factori este determinat de o categorie aparte de gene denumite proto-oncogene.